專利名稱：一種用聚乙二醇沉淀法從瓊脂中分離制備瓊脂糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用PEG法從瓊脂中分離制備瓊脂糖的工藝，尤其是制備一種高凝 膠強(qiáng)度，低硫酸根含量，低電內(nèi)滲的瓊脂糖。
背景技術(shù)：
瓊脂是從石花菜、江籬及紫菜等紅藻類植物中提取而制成的一種藻膠，它是由瓊 脂糖和瓊膠酯組成的長(zhǎng)鏈多糖復(fù)合體，其化學(xué)成分是聚半乳糖硫酸酯，屬于膠體性質(zhì)，具有 凝固性，穩(wěn)定性，在化學(xué)工業(yè)、醫(yī)學(xué)科研方面，可作培養(yǎng)基、藥膏基及其他用途。瓊脂中的瓊 脂糖是形成凝膠的組分，其主要成分是多聚半乳糖；而瓊膠酯是非凝膠部分，是帶有硫酸 酯、葡萄糖醛酸和丙酮醛酸的復(fù)雜多糖?，F(xiàn)有的這種含有瓊膠酯的瓊脂，其凝膠特性較差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用聚乙二醇沉淀法從瓊脂中分離制備瓊脂糖的方法， 其可分離出瓊脂中的瓊脂糖，從而改善瓊脂的凝膠特性。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種用聚乙二醇沉淀法從瓊脂中分離制備瓊脂糖的方法，包括如下步驟a.配制質(zhì)量百分比濃度為2.0 6.0%的瓊脂溶液，加熱攪拌溶解成半透明溶 液；b.將半透明的瓊脂溶液放入水浴鍋中保持70 90°C的溫度；c.配制質(zhì)量百分比濃度為20 60%的聚乙二醇溶液，水浴加熱攪拌使之完全溶 解并保持70 90°C的溫度，其中，聚乙二醇的分子量為2，000 10，000 ；d.將步驟b所得的瓊脂溶液與步驟c所得的聚乙二醇溶液按1 0.5 1 3的 體積比迅速混合，將所得的混合溶液置于水浴鍋中保持恒溫并不斷攪拌，出現(xiàn)大量白色絮 狀物沉淀，得到具有大量白色絮狀物沉淀的懸濁液；e.將步驟d所得的懸濁液從水浴鍋中取出，靜置待冷卻；f.將冷卻后的懸濁液進(jìn)行離心，得到白色沉淀；g.白色沉淀用大量蒸餾水反復(fù)洗滌，最后用丙酮洗滌；h.將白色沉淀干燥，得到白色瓊脂糖初產(chǎn)品；i.重復(fù)步驟a h，得到精制瓊脂糖。所述步驟d中攪拌過(guò)程持續(xù)2 3min后立即停止攪拌。所述步驟e在室溫下冷卻，溫度下降不少于10°C。所述步驟f中待離心的懸濁液的溫度為20 50°C。所述步驟g中白色沉淀用蒸餾水洗滌，直至無(wú)聚乙二醇?xì)埩?，最后用丙酮洗? 次。所述步驟i中重復(fù)步驟a h進(jìn)行3次可以得到精制瓊脂糖。本發(fā)明通過(guò)上述技術(shù)方案將瓊脂中的瓊膠酯除去，得到瓊脂糖部分，此瓊脂糖部
3分與原來(lái)的瓊脂相比具有更好的凝膠特性，對(duì)于高級(jí)生物化學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、現(xiàn)代 生物工程技術(shù)的發(fā)展具有重要的影響。而且，通過(guò)本發(fā)明方法從瓊脂中分離制備的瓊脂糖， 具有產(chǎn)率高、質(zhì)量好的特點(diǎn)，瓊脂糖的各項(xiàng)性能指標(biāo)均能接近西方國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明方法操 作簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，可提高企業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 本發(fā)明一種用聚乙二醇沉淀法從瓊脂中分離制備瓊脂糖的方法，通過(guò)如下步驟實(shí) 現(xiàn)1.配制質(zhì)量百分比濃度為4%的瓊脂溶液IOOmL,置電爐上攪拌加熱溶解成半透 明溶液；2.將完全溶解的瓊脂溶液放入水浴鍋中保持溫度80°C恒定；3.配制質(zhì)量百分比濃度為40%的聚乙二醇6000溶液IOOmL,水浴加熱使之完全溶 解并保持溫度80°C恒定；4.在水浴80°C下將聚乙二醇6000溶液按1 0. 5 1 3的體積比倒入瓊脂溶 液中迅速混合，不斷攪拌約2min，出現(xiàn)大量白色絮狀物沉淀，得到具有大量白色絮狀物沉淀 的懸濁液；聚乙二醇6000溶液與瓊脂溶液的最佳體積比可取1 1;5.立即停止攪拌，將懸濁液從水浴鍋中取出，室溫下靜置待冷卻；6.對(duì)冷卻至20 50°C的懸濁液進(jìn)行離心，得到白色沉淀；7.白色沉淀用大量蒸餾水反復(fù)洗滌至無(wú)聚乙二醇6000殘留，最后用丙酮洗滌3 次；8.將洗滌后的白色沉淀置真空干燥箱內(nèi)干燥，得到白色瓊脂糖初產(chǎn)品；9.重復(fù)步驟1 8三次，得到精制瓊脂糖。本實(shí)施例中，最后得到的精制瓊脂糖產(chǎn)品，含S042_(質(zhì)量百分比)為0. 35%，凝膠 強(qiáng)度為1019g cm—1 (含1.0%瓊脂糖)，產(chǎn)率為43.0%。實(shí)施例2 本發(fā)明一種用聚乙二醇沉淀法從瓊脂中分離制備瓊脂糖的方法，通過(guò)如下步驟實(shí) 現(xiàn)1.配制質(zhì)量百分比濃度為3%的瓊脂溶液IOOmL,置電爐上攪拌加熱溶解成半透 明溶液；2.將完全溶解的瓊脂溶液放入水浴鍋中保持溫度80°C恒定；3.配制質(zhì)量百分比濃度為40%的聚乙二醇6000溶液IOOmL,水浴加熱使之完全溶 解并保持溫度80°C恒定；4.在水浴80°C下將聚乙二醇6000溶液按1 0. 5 1 3的體積比倒入瓊脂溶 液中迅速混合，不斷攪拌約2min，出現(xiàn)大量白色絮狀物沉淀，得到具有大量白色絮狀物沉淀 的懸濁液；聚乙二醇6000溶液與瓊脂溶液的最佳體積比可取1 1;5.立即停止攪拌，將懸濁液從水浴鍋中取出，室溫下靜置待冷卻；6.對(duì)冷卻至20 50°C的懸濁液進(jìn)行離心，得到白色沉淀；7.白色沉淀用大量蒸餾水反復(fù)洗滌至無(wú)聚乙二醇6000殘留，最后用丙酮洗滌3次；8.將洗滌后的白色沉淀置真空干燥箱內(nèi)干燥，得到白色瓊脂糖初產(chǎn)品；9.重復(fù)步驟1 8三次，得到精制瓊脂糖。本實(shí)施例中，最后得到的精制瓊脂糖產(chǎn)品，含S042_(質(zhì)量百分比)為0. 31%，凝膠 強(qiáng)度為998g cm—1 (含1.0%瓊脂糖)，產(chǎn)率為49.0%。實(shí)施例31.配制質(zhì)量百分比濃度為4%的瓊脂溶液IOOmL,置電爐上攪拌加熱溶解成半透 明溶液；2.將完全溶解的瓊脂溶液放入水浴鍋中保持溫度90°C恒定；3.配制質(zhì)量百分比濃度為40%的聚乙二醇8000溶液IOOmL,水浴加熱使之完全溶 解并保持溫度90°C恒定；4.在水浴90°C下將聚乙二醇8000溶液按1 0. 5 1 3的體積比倒入瓊脂溶 液中迅速混合，不斷攪拌約2min，出現(xiàn)大量白色絮狀物沉淀，得到具有大量白色絮狀物沉淀 的懸濁液；聚乙二醇6000溶液與瓊脂溶液的最佳體積比可取1 1;5.立即停止攪拌，將懸濁液從水浴鍋中取出，室溫下靜置待冷卻；6.對(duì)冷卻至20 50°C的懸濁液進(jìn)行離心，得到白色沉淀；7.白色沉淀用大量蒸餾水反復(fù)洗滌至無(wú)聚乙二醇8000殘留，最后用丙酮洗滌3 次；8.將洗滌后的白色沉淀置真空干燥箱內(nèi)干燥，得到白色瓊脂糖初產(chǎn)品；9.重復(fù)步驟1 8三次，得到精制瓊脂糖。本實(shí)施例中，最后得到的精制瓊脂糖產(chǎn)品，含S042_(質(zhì)量百分比)為0. 37%，凝膠 強(qiáng)度為993g cm—1 (含1.0%瓊脂糖)，產(chǎn)率為61.3%。
權(quán)利要求
一種用聚乙二醇沉淀法從瓊脂中分離制備瓊脂糖的方法，其特征在于包括如下步驟a.配制質(zhì)量百分比濃度為2.0～6.0％的瓊脂溶液，加熱攪拌溶解成半透明溶液；b.將半透明的瓊脂溶液放入水浴鍋中保持70～90℃的溫度；c.配制質(zhì)量百分比濃度為20～60％的聚乙二醇溶液，水浴加熱攪拌使之完全溶解并保持70～90℃的溫度，其中，聚乙二醇的分子量為2,000～10,000；d.將步驟b所得的瓊脂溶液與步驟c所得的聚乙二醇溶液按1∶0.5～1∶3的體積比迅速混合，將所得的混合溶液置于水浴鍋中保持恒溫并不斷攪拌，出現(xiàn)大量白色絮狀物沉淀，得到具有大量白色絮狀物沉淀的懸濁液；e.將步驟d所得的懸濁液從水浴鍋中取出，靜置待冷卻；f.將冷卻后的懸濁液進(jìn)行離心，得到白色沉淀；g.白色沉淀用大量蒸餾水反復(fù)洗滌，最后用丙酮洗滌；h.將白色沉淀干燥，得到白色瓊脂糖初產(chǎn)品；i.重復(fù)步驟a～h，得到精制瓊脂糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用聚乙二醇沉淀法從瓊脂中分離制備瓊脂糖的方法，其 特征在于所述步驟d中攪拌過(guò)程持續(xù)2 3min后立即停止攪拌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用聚乙二醇沉淀法從瓊脂中分離制備瓊脂糖的方法，其 特征在于所述步驟e在室溫下冷卻，溫度下降不少于10°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用聚乙二醇沉淀法從瓊脂中分離制備瓊脂糖的方法，其 特征在于所述步驟f中待離心的懸濁液的溫度為20 50°C。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用聚乙二醇沉淀法從瓊脂中分離制備瓊脂糖的方法，其 特征在于所述步驟g中白色沉淀用蒸餾水洗滌，直至無(wú)聚乙二醇?xì)埩?，最后用丙酮洗? 次。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用聚乙二醇沉淀法從瓊脂中分離制備瓊脂糖的方法，其 特征在于所述步驟i中重復(fù)步驟a h進(jìn)行三次可以得到精制瓊脂糖。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種用聚乙二醇沉淀法從瓊脂中分離制備瓊脂糖的方法，包括如下步驟1.配制適當(dāng)濃度的瓊脂溶液，加熱攪拌溶解成半透明溶液；2.瓊脂溶液放入水浴鍋中保持溫度恒定；3.配制一定濃度的PEG溶液，水浴加熱使之完全溶解并保持溫度恒定；4.將瓊脂溶液與PEG溶液迅速混合，不斷攪拌，出現(xiàn)大量白色絮狀物沉淀；5.將混合溶液從水浴鍋中取出，靜置待冷卻；6.取懸濁液離心，得到白色沉淀；7.沉淀用大量蒸餾水反復(fù)洗滌，最后用丙酮洗滌；8.將沉淀干燥，得到白色瓊脂糖初產(chǎn)品；9.重復(fù)步驟1～8，得到精制瓊脂糖。本發(fā)明通過(guò)使瓊脂粉進(jìn)一步純化制得瓊脂糖從而提高其凝膠強(qiáng)度，降低其電內(nèi)滲，對(duì)于推進(jìn)生物技術(shù)研究的發(fā)展十分必要。
文檔編號(hào)C08B37/00GK101891835SQ20101023829
公開(kāi)日2010年11月24日 申請(qǐng)日期2010年7月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月26日
發(fā)明者葉靜, 肖笛, 肖美添 申請(qǐng)人:華僑大學(xué)