專利名稱：一種在水相中可高效分離柚皮苷的棒狀印跡聚合物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種在水相中高效分離柚皮苷的棒狀高分子印跡聚合物的制備方法。
背景技術(shù)：
柚皮苷(naringin，簡稱NG)是一種雙氫黃酮類化合物，多種中成藥的有效成分， 具有抗氧化性(抑制氧化酶活性)、抗炎鎮(zhèn)痛、抗病毒、抑菌及抑制眼醛糖還原酶等多種生 物學(xué)活性和藥理作用。黃酮類化合物具有抗氧化和促進(jìn)氧化的雙重作用。而柚皮苷是促進(jìn) 黃酮類化合物氧化作用最強(qiáng)的物質(zhì)之一，對(duì)人體基因具有誘導(dǎo)毒害作用。因此，制備柚皮苷 印跡聚合物對(duì)柚皮苷的分離提取及藥物質(zhì)量控制具有重要意義。環(huán)糊精(CD)分子具有“內(nèi)疏水，外親水”獨(dú)特的空間結(jié)構(gòu)，使其對(duì)許多的分子，特 別是藥物分子具有包合作用，是一種很有潛力的合成藥物類分子印跡聚合物的功能單體。 但得到的粉體聚合物需經(jīng)繁瑣的研磨、篩分處理且在實(shí)際的應(yīng)用過程中存在容易流失等缺 點(diǎn)。本發(fā)明用六亞甲基二異氰酸酯(HMDI)作為交聯(lián)劑，由于HMDI中的六亞甲基柔性很強(qiáng)， 柚皮苷(NG)分子上的苯環(huán)有利于形成橋式的環(huán)糊精多聚體，同時(shí)對(duì)空間構(gòu)型有控制作用， 有利于印跡分子周圍的聚合物穩(wěn)定地結(jié)合印跡分子，提高棒狀印跡聚合物(MIP)的選擇性 識(shí)別作用。去除印跡分子柚皮苷NG后，與印跡分子在大小和形狀上相匹配的孔穴被留在環(huán) 糊精的空穴中。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供在水相中高效分離柚皮苷的制備技術(shù)。本發(fā)明的另一目的還在于提供一種制備棒狀印跡聚合物(MIP)的方法。本發(fā)明的目的是通過如下方案實(shí)現(xiàn)的1、將lg 10g的反應(yīng)物功能體環(huán)糊精和0. 10g 5g印跡聚合物的底物于30°C下 溶于適量的含有10 30%有機(jī)溶劑的水溶液中，然后邊攪拌邊滴加5mL 10mL交聯(lián)劑， lOmin 30min 完成。2、反應(yīng)結(jié)束后，加入含0. 3g 0. 8g乳化劑的油相10g 30g，快速攪拌10 30min后升溫至24°C 100°C，同時(shí)降低攪拌速度并恒速攪拌反應(yīng)4h 10h得初產(chǎn)物。3、將產(chǎn)物過濾并用甲醇、蒸鎦水及丙酮依次進(jìn)行充分洗滌，以除去各種雜質(zhì)。最 后，洗滌液用紫外光度計(jì)檢測(cè)283nm處的NG吸收峰。洗滌結(jié)束后將產(chǎn)物真空干燥至恒重， 得到棒狀分子印跡環(huán)糊精聚合物。本發(fā)明所述的反應(yīng)物功能體環(huán)糊精是a-環(huán)糊精、環(huán)糊精、Y-環(huán)糊精、羥丙基 環(huán)糊精或羧甲基環(huán)糊精。本發(fā)明所述的底物是柚皮苷、橙皮苷、柚皮苷二氫查爾酮或槲皮素。本發(fā)明所述的交聯(lián)劑為六亞甲基二異氰酸酯、甲苯二異氰酸酯、甲基二異氰酸酯、 賴氨酸二異氰酸酯、環(huán)氧樹脂、二元醛或異氰酸酯。
本發(fā)明所述的乳化劑為親油型乳化劑司班20、司班40、司班60或司班80與親水 型乳化劑吐溫20或吐溫80混合而成，親油型乳化劑親水型乳化劑=1 3 10。本發(fā)明所述的乳化劑還可以是阿拉伯膠、烷基苯磺酸鈉、山梨酸醇脂肪酸酯類、磷 脂類或糖脂類乳化劑。本發(fā)明所述的有機(jī)溶劑的水溶液是含有10 30%的二甲基亞砜、N，N-二甲基甲 酰胺或N，N- 二甲基乙酰胺水溶液。本發(fā)明所述的油相是液體石蠟、煤油或汽油，或他們?nèi)我獗壤幕旌衔?。本發(fā)明制備的棒狀分子印跡環(huán)糊精聚合物具有較大的比表面積和孔體積，有利于 底物和結(jié)合位點(diǎn)的接觸，以提高負(fù)載量。其電子掃描電鏡形貌觀測(cè)圖如下其長度在5 20 μ m，半徑為納米級(jí)(< lym)，具有大的比表面積。本發(fā)明以HMDI等作為交聯(lián)劑，由于HMDI中的氰酸酯活性很高，極易與環(huán)糊精上 的-OH基團(tuán)反應(yīng)形成聚合物。在特定結(jié)構(gòu)分子如柚皮苷(NG)的參與下，其分子上的苯環(huán)有 利于與CD形成橋式CD多聚體，同時(shí)對(duì)空間構(gòu)型有控制作用，有利于印跡分子周圍的聚合物 穩(wěn)定地結(jié)合印跡分子，提高RMIP的選擇性識(shí)別作用。去除印跡分子NG后，與印跡分子在大 小和形狀上相匹配的孔穴被留在CD的空穴中。本發(fā)明涉及的以環(huán)糊精(CD)為功能體具有 識(shí)別柚皮苷黃酮化合物的印跡作用，在水相中高效分離柚皮苷。對(duì)所制備的MIP(印跡)進(jìn)行了選擇性實(shí)驗(yàn)。由平衡結(jié)合法測(cè)定了 MIP(印跡)和 NIP (非印跡)對(duì)上述底物的結(jié)合量。聚合物的選擇性用靜態(tài)分配系數(shù)Kd (Kd = CP/CS，Cp表 示聚合物結(jié)合底物的濃度(ymol/g) ;CS表示溶液中底物的平衡濃度(μπιοΙ/L))；印跡效 率α (α = KD,MIP/KD,NIP，α越大表明印跡效果越好)及選擇因子β (β = KDi/KDJ, i和j分 別表示NG和對(duì)照物)來表征，結(jié)果見表1。表1不同印跡物在環(huán)糊精聚合物上的吸附
組分KD, MiPβιKd, nipβ2α柚皮苷4.382.861.53橙皮苷2.162.032.081.381.04柚皮苷二氫查爾酮2.451.792.401.191.02MIP(NIP) 100. Omg ；底物初始濃度0. 02mg/mL ；體積=IOOmL ；吸附時(shí)間:48h由表1可見，與其它底物相比，MIP對(duì)NG顯示了強(qiáng)的選擇性結(jié)合能力。這表明在 MIP印跡聚合物中產(chǎn)生了以NG的大小和形狀為基礎(chǔ)的結(jié)合位點(diǎn)(孔穴)，而在結(jié)合位點(diǎn)(孔 穴)中還同時(shí)存在可與NG的官能團(tuán)相互作用的功能基團(tuán)。正是由于孔穴形狀和功能基團(tuán) 的同時(shí)作用，使得MIP對(duì)NG展現(xiàn)了特異選擇性。而在OTP中，官能團(tuán)的分布是任意的，而且 在其聚合物基體中也沒有與NG的形狀和大小互補(bǔ)的結(jié)合位點(diǎn)，因此它對(duì)印跡分子NG不顯 示特異選擇性。本發(fā)明測(cè)定了 IOOmg MIP和NIP在各個(gè)不同時(shí)間對(duì)印跡分子NG的吸附量，如表2 所示。MIP在前24h的吸附速率較快，吸附量已經(jīng)占到總吸附量的71%。由于聚合物是由 交聯(lián)劑和功能單體所構(gòu)成的立體空穴，其分布不可能完全均勻，孔穴的深度也必然存在差異，而一旦淺孔被結(jié)合飽和后，印跡分子向MIP較深的孔穴傳質(zhì)有一定的位阻，導(dǎo)致結(jié)合速 度下降。NIP對(duì)印跡分子的吸附效果遜于MIP，吸附速率也較慢，表明其結(jié)構(gòu)中存在較大的 空間位阻。MIP和NIP吸附均在48h左右達(dá)到飽和。表2MIP和NIP在各個(gè)不同時(shí)間對(duì)印跡分子NG的吸附量
權(quán)利要求
1.一種在水相中可高效分離柚皮苷的棒狀印跡聚合物的制備方法，其特征在于1)將1 IOg的反應(yīng)物功能體環(huán)糊精和0.10 5g的底物柚皮苷、橙皮苷、柚皮苷二 氫查爾酮或槲皮素于30°C下溶于有機(jī)溶劑的水溶液中，在10 30min內(nèi)邊攪拌邊滴加5 IOmL交聯(lián)劑，在該溫度下保持反應(yīng)1 5h ；2)反應(yīng)結(jié)束后，加入含0.3 0. 8g乳化劑的油相10 30g，快速攪拌10 30min后 升溫至24°C 100°C，同時(shí)降低攪拌速度并恒速攪拌反應(yīng)4 IOh得初產(chǎn)物；3)將產(chǎn)物過濾、洗滌，以除去各種雜質(zhì)，真空干燥至恒重，得到棒狀分子印跡環(huán)糊精聚 合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的在水相中可高效分離柚皮苷的棒狀印跡聚合物的制備方法， 其特征在于所述的反應(yīng)物功能體環(huán)糊精是α-環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、Y-環(huán)糊精、羥丙基環(huán)糊 精或羧甲基環(huán)糊精。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的在水相中可高效分離柚皮苷的棒狀印跡聚合物的制備方法， 其特征在于所述的交聯(lián)劑是六亞甲基二異氰酸酯、甲苯二異氰酸酯、甲基二異氰酸酯、賴氨 酸二異氰酸酯、環(huán)氧樹脂、二元醛或異氰酸酯。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的在水相中可高效分離柚皮苷的棒狀印跡聚合物的制備方法， 其特征在于所述的乳化劑是親油型乳化劑司班20、司班40、司班60或司班80與親水型乳 化劑吐溫20或吐溫80混合而成，親油型乳化劑親水型乳化劑=1 3 10。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的在水相中可高效分離柚皮苷的棒狀印跡聚合物的制備方法， 其特征在于所述的乳化劑還可以是阿拉伯膠、烷基苯磺酸鈉、山梨酸醇脂肪酸酯類、磷脂類 或糖脂類乳化劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的在水相中可高效分離柚皮苷的棒狀印跡聚合物的制備方法， 其特征在于所述的有機(jī)溶劑的水溶液是含有10 30 %的二甲基亞砜、N，N-二甲基甲酰胺， N，N-二甲基乙酰胺水溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的在水相中可高效分離柚皮苷的棒狀印跡聚合物的制備方法， 其特征在于所述的油相是液體石蠟、煤油或汽油，或他們?nèi)我獗壤幕旌衔铩?br> 全文摘要
本發(fā)明涉及一種在水相中高效分離柚皮苷的棒狀高分子印跡聚合物的制備方法。本發(fā)明以柚皮苷、橙皮苷、柚皮苷或二氫查爾酮為印跡分子，環(huán)糊精為功能體，六亞甲基二異氰酸酯為交聯(lián)劑，采用乳液聚合法制備了對(duì)柚皮苷類具有＝O、-OH基團(tuán)的有機(jī)分子藥物有著特定識(shí)別能力的吸附材料棒狀印跡聚合物。本發(fā)明制備的棒狀分子印跡環(huán)糊精聚合物具有較大的比表面積和孔體積，有利于底物和結(jié)合位點(diǎn)的接觸，提高了負(fù)載量。棒狀印跡聚合物(RMIP)對(duì)NG具有高的親和性和選擇性。當(dāng)NG濃度為0.02mg/mL時(shí)，印跡因子α達(dá)1.53。
文檔編號(hào)C08B37/16GK102002169SQ20101028962
公開日2011年4月6日 申請(qǐng)日期2010年9月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月21日
發(fā)明者鄭曦, 陳日耀, 陳曉, 陳震, 馬秀玲 申請(qǐng)人:福建師范大學(xué)