專利名稱：生物相容性可轉(zhuǎn)相蛋白質(zhì)組合物及其制備和使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
生物相容性可轉(zhuǎn)相(phase invertible)蛋白質(zhì)組合物及其制備和使用方法領(lǐng)域。已經(jīng)使用一些密封材料組合物來控制外科手術(shù)部位的液體滲露，以及其他應(yīng)用。 然而，現(xiàn)在可用的密封材料組合物在能夠使用它們的領(lǐng)域方面、以及它們的生物相容性及其物理性質(zhì)方面可能面臨嚴(yán)重的限制。諸如炎癥、創(chuàng)傷部位的急性纖維形成、毒性、不能用于流血區(qū)域、密封材料的較差的物理性質(zhì)，以及對外科手術(shù)部位的弱的粘附力的副作用可對患者造成嚴(yán)重影響，并且可由此在修復(fù)的長期效力中產(chǎn)生顯著作用。此外，有用的密封材料具有能夠使其對外科手術(shù)應(yīng)用更有效的性質(zhì)。諸如能夠定位于特定位置的能力、足夠長或短的聚合時(shí)間以及足夠的體內(nèi)再吸收特性的特征對成功完成密封步驟是必不可少的。因此，仍然亟需開發(fā)新的用作密封材料以及用于其他應(yīng)用的生物相容性組合物。
背景技術(shù)：
在第3，438，374、5，292，362、5，385，606、5，575，815、5，583，114、5，843，156、 6，162，241,6, 290，729,6, 310，036,6, 329，337,6, 371，975,6, 372，229,6, 423，333 和 6，458， 147 號美國專利，以及第 2002/0015724、2002/0022588、2002/0183244 和 2004/0081676號美國申請中報(bào)道了多種可轉(zhuǎn)相組合物和應(yīng)用。發(fā)明概述提供了生物相容性可轉(zhuǎn)相蛋白質(zhì)組合物及其制備和使用方法。通過混合交聯(lián)劑 (crosslinker)和底物來制備本發(fā)明的可轉(zhuǎn)相組合物。所述底物包括對底物組合物具有協(xié)同粘度增加效應(yīng)的重量比的蛋白質(zhì)材料和聚胺，并且至少在許多實(shí)施方案中，所述底物包括碳水化合物。所述蛋白質(zhì)材料包括一種或多種蛋白質(zhì)，例如白蛋白蛋白質(zhì)。聚胺為陽離子聚合胺，例如聚乙烯亞胺。在某些實(shí)施方案中，所述交聯(lián)劑為熱處理的二醛，例如熱處理的戊二醛。在某些實(shí)施方案中，所述交聯(lián)劑為大分子交聯(lián)作用劑(crosslinking agent)，例如交聯(lián)至生理可接受的聚合物(例如糖胺聚糖)的熱處理的二醛。在某些實(shí)施方案中，所述底物和交聯(lián)劑的運(yùn)動粘度接近相同。還提供了制備所述組合物的方法和用于制備所述組合物的試劑盒。所述組合物、方法、試劑盒和系統(tǒng)能夠用于多種不同應(yīng)用中。附圖簡述

圖1例示聚乙烯亞胺(PEI)對本發(fā)明代表性實(shí)施方案的多種生物相容性可轉(zhuǎn)相組合物的運(yùn)動粘度的協(xié)同效應(yīng)。發(fā)明詳述提供了生物相容性可轉(zhuǎn)相蛋白質(zhì)組合物及其制備和使用方法。通過混合交聯(lián)劑和底物來制備本發(fā)明的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述底物包括對底物組合物具有協(xié)同粘度增加效應(yīng)的重量比的蛋白質(zhì)材料和聚胺。在聚胺比蛋白質(zhì)材料的特定重量比下，意料之外的增加底物運(yùn)動粘度的協(xié)同效應(yīng)使得從應(yīng)用部位離開的流速顯著降低到期望水平，同時(shí)促進(jìn)了混合的交聯(lián)劑和底物組合物的高效混合和固化，由此增強(qiáng)了生物相容性可轉(zhuǎn)相蛋白質(zhì)組合物的效用。還提供了用于制備所述組合物的試劑盒。所述組合物、試劑盒和系統(tǒng)可用于多種不同應(yīng)用中。在更詳細(xì)描述本發(fā)明之前，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明不限于所述的特定實(shí)施方案，所述實(shí)施方案當(dāng)然可以變化。還應(yīng)當(dāng)理解本文所用的術(shù)語僅是為了描述特定實(shí)施方案的目的，而不是旨在限制，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍將僅由所附的權(quán)利要求書限定。在提供數(shù)值范圍時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明涵蓋該范圍的上下限間的每一中間值(除非本文另外明確指出，至下限單位的十分之一)和規(guī)定范圍內(nèi)的任何其他規(guī)定值或中間值。 這些較小范圍的上下限可被獨(dú)立包括在較小范圍內(nèi)，并且也被涵蓋在本發(fā)明內(nèi)，除非規(guī)定范圍內(nèi)的任何特別排除的限值。在規(guī)定范圍包括一個(gè)或兩個(gè)限值時(shí)，本發(fā)明也包括排除這些包括的限值中的一個(gè)或兩個(gè)的范圍。本文用前綴為術(shù)語“約”的數(shù)值給出了某些范圍。本文使用術(shù)語“約”是為了給其后面的精確數(shù)字以及接近或近似于該術(shù)語后面的數(shù)字的數(shù)字提供文字支持。在確定數(shù)字是否接近或近似于具體引用的數(shù)字時(shí)，接近或近似的未引用的數(shù)字可以是在其出現(xiàn)的上下文中與具體引用的數(shù)字基本等價(jià)的數(shù)字。除非另外指出，本文所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的含義相同的含義。雖然與本文所述的那些相似或等價(jià)的任何方法和材料也能夠用于本發(fā)明的實(shí)踐或試驗(yàn)，但是現(xiàn)在描述了典型的示例性方法和材料。本說明書所引用的所有的公開物和專利都通過引用的形式并入本文，好像每一單獨(dú)的公開物或?qū)＠急惶貏e地和單獨(dú)地通過引用的形式并入，并且它們通過引用的形式并入本文以公開和描述與公開物引用的方法和/或材料相關(guān)的方法和/或材料。任何公開物的引用是針對其申請日前的公開內(nèi)容，不應(yīng)被解釋為承認(rèn)本發(fā)明沒有資格基于先發(fā)明而占先于該公開物。此外，提供的
公開日期可能與實(shí)際
公開日期不同，實(shí)際
公開日期可能需要單獨(dú)確認(rèn)。應(yīng)當(dāng)注意，除非本文另外明確指出，如本文所用的和在所附權(quán)利要求書中的單數(shù)形式“一個(gè)”、“一種”和“該”包括指代物的復(fù)數(shù)形式。還應(yīng)當(dāng)注意可以將權(quán)利要求撰寫為排除任何可選的要素。因此，本聲明意在起到修改基礎(chǔ)的作用，使得可以對權(quán)利要求要素使用如“僅僅”、“只有”等這樣的排他性術(shù)語、或使用“消極”限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員閱讀該公開內(nèi)容時(shí)應(yīng)該明白，本文描述和例示的單獨(dú)的實(shí)施方案各自具有分離的部分和特征，這些部分和特征可容易地與任何其他若干實(shí)施方案的特征分離或與其組合而不背離本發(fā)明的范圍或精神。能夠以所述的事件順序或以任何其他邏輯上可能的順序?qū)嵤┤魏嗡龇椒?。在進(jìn)一步描述本發(fā)明時(shí)，首先更詳細(xì)地描述本發(fā)明的可轉(zhuǎn)相組合物，然后綜述可使用該組合物的典型應(yīng)用，以及綜述可用于制備或使用本發(fā)明可轉(zhuǎn)相組合物的試劑盒和系統(tǒng)。生物相容性可轉(zhuǎn)相蛋白質(zhì)組合物如上所述，本發(fā)明提供了生物相容性可轉(zhuǎn)相蛋白質(zhì)組合物，其隨時(shí)間的推移經(jīng)歷從第一流態(tài)到第二固態(tài)的相轉(zhuǎn)化。本發(fā)明可轉(zhuǎn)相組合物的特征為能夠在濕(例如血液)和干的環(huán)境中粘結(jié)組織，其中該組合物對組織的粘附力是異常強(qiáng)的。本發(fā)明組合物的其他特點(diǎn)為它們有很好的耐受性，并且不引起顯著的炎癥應(yīng)答(如果有任何炎性應(yīng)答的話)。通過將蛋白質(zhì)底物與交聯(lián)劑組合或混合來制備本發(fā)明的可轉(zhuǎn)相蛋白質(zhì)組合物。這些前體成分或組合物中的每一種現(xiàn)在分別更詳細(xì)地描述。蛋白質(zhì)底物用于制備本發(fā)明的可轉(zhuǎn)相組合物的底物為蛋白質(zhì)底物，并且通常為流體組合物， 例如至少由蛋白質(zhì)成分和聚胺成分以及(在許多實(shí)施方案中)碳水化合物成分構(gòu)成的水性組合物。所述蛋白質(zhì)底物可進(jìn)一步包括一種或多種另外的成分，其包括但不限于增粘劑 (tackifying agent)、增塑劑等。蛋白質(zhì)成分和聚胺成分以一定的重量比存在，該重量比提供了對蛋白質(zhì)底物的協(xié)同粘度增加效應(yīng)。“協(xié)同粘度增加效應(yīng)”的意思是兩種或多種成分的相互作用產(chǎn)生的粘度增加效應(yīng)，它比缺少另一成分時(shí)每一成分產(chǎn)生的粘度效應(yīng)的總和大。通常，蛋白質(zhì)和聚胺成分的重量比為聚胺比蛋白質(zhì)材料的重量比為約1 4至1 400。聚胺比蛋白質(zhì)材料的某些比例產(chǎn)生了表現(xiàn)出特別感興趣的協(xié)同粘度效應(yīng)的底物組合物。例如，在包含協(xié)同粘度增加量的諸如白蛋白的蛋白質(zhì)材料和諸如聚乙烯亞胺的高陽離子聚胺的可轉(zhuǎn)相組合物中，聚胺比蛋白質(zhì)材料的重量比一般為約1 5至1 100，通常為約1 8至1 80，并且更通常為約1 10至1 40。在許多實(shí)施方案中，當(dāng)在蛋白質(zhì)底物中包括碳水化合物時(shí)，碳水化合物和蛋白質(zhì)成分的重量比為碳水化合物比蛋白質(zhì)材料的重量比為約1 8至1 800。碳水化合物比蛋白質(zhì)材料的某些比例產(chǎn)生了特別感興趣的底物組合物。例如，在包含協(xié)同粘度增加量的諸如白蛋白的蛋白質(zhì)材料和諸如聚乙烯亞胺的高陽離子聚胺的可轉(zhuǎn)相組合物中，碳水化合物比蛋白質(zhì)材料的重量比為約1 130至1 400，通常為約1 150至1 ；350，并且在某些實(shí)施方案中為約1 200至1 300。蛋白質(zhì)成分底物的蛋白質(zhì)成分由一種或多種不同的蛋白質(zhì)構(gòu)成。該成分的蛋白質(zhì)可以為合成的或天然存在的蛋白質(zhì)，其中該蛋白質(zhì)可以使用任何方便的方式獲得/制備，例如從天然存在的來源純化、重組生產(chǎn)、合成生產(chǎn)等，其中在某些實(shí)施方案中，從諸如?；蛉说奶烊淮嬖诘膩碓传@得該蛋白質(zhì)。具體的感興趣的蛋白質(zhì)包括但不限于白蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白、纖維蛋白等。底物組合物中蛋白質(zhì)的量可以改變，其中具體的濃度選擇取決于期望的應(yīng)用和由此期望的產(chǎn)品參數(shù)，例如韌性、硬度、彈性、再吸收特征和血小板聚集作用。在某些實(shí)施方案中，底物組合物中的總蛋白質(zhì)的總濃度的范圍為約(w/w)至75% (w/w)，例如(w/ w) -50% (w/w)，包括 5% (w/w) M 40% (w/w)。在某些實(shí)施方案中，該實(shí)施方案的底物組合物的主要蛋白質(zhì)是白蛋白，其中白蛋白可以為天然存在的白蛋白，例如人白蛋白、牛白蛋白等，或其變體。如本領(lǐng)域所知，可以購買粉末形式的白蛋白，然后將其溶解為水懸浮液，或者可以購買含水形式的白蛋白。可以根據(jù)熟知的方法(例如Cohn等人，J. Amer. Chem. Soc. 69 :1753)從包括牛、綿羊、馬、人或鳥類在內(nèi)的許多不同來源中的任何一種得到純化的白蛋白，或者可以從諸如Aldrich Chemical (St. Louis,MO)的供應(yīng)商處購買純化形式、凍干或含水形式的白蛋白。所述白蛋白可以衍生化以用作用于例如硫酸肝素、生長因子、抗生素的藥物的載體，或者可以改性以試圖調(diào)節(jié)(moderate)粘度或親水性。使用酰化劑(例如但不限于琥珀酸酐和月桂基氯)的衍生化用于產(chǎn)生用于添加有用分子的結(jié)合位點(diǎn)。在蛋白質(zhì)成分包括白蛋白的這些實(shí)施方案中，白蛋白的濃度可以為約10% (w/w)至約50% (w/w)，例如約30% (w/w)至約40% (w/
W) O在某些實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)成分也包括膠原蛋白，例如天然存在的膠原蛋白(人、 牛)或其合成變體。根據(jù)本發(fā)明，當(dāng)與白蛋白混合時(shí)，膠原蛋白可以為干形式或含水形式。 可以衍生化膠原蛋白以增加其效用。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)諸如酐或?；鹊孽；瘎┛梢援a(chǎn)生用于結(jié)合諸如生長因子和抗生素的分子的有用位點(diǎn)。當(dāng)存在時(shí)，膠原蛋白有時(shí)為約(w/w)至約 20% (w/w)，包括約 1% (w/w)至約 10% (w/w)，例如約 1% (w/w)至約 4% (w/w)，包括約 2% (w/w) M 4% (w/w) ο如上所述，該蛋白質(zhì)成分可以包括或可以不包括一種或多種活性劑，例如如果期望，存在于蛋白質(zhì)成分中的藥物。當(dāng)存在時(shí)，如果期望，該活性劑可以結(jié)合至聚合物。聚胺成分底物的聚胺成分為陽離子聚合胺。聚胺能夠?yàn)橹辨溁蛑Щ?、取代的或未取代的?并且包括陽離子聚亞烷基亞胺(polyalkylenimine)、聚乙烯亞胺(polyvinylimine)、聚氨基酸等的均聚物、雜聚物和共聚物。這樣的聚合物的分子量通常大于約500道爾頓，平均分子量為約500道爾頓至1，000, 000道爾頓，并且通常為約500道爾頓至約100，000道爾頓。 通常，底物的聚胺成分為高陽離子聚合胺，其具有使其緊密吸附在負(fù)電荷底物上的高電荷密度。這樣的聚胺的實(shí)例包括但不限于聚乙烯亞胺(PEI)、聚乙烯胺(PVA)、聚賴氨酸(PL) 及其衍生物，例如聚賴氨酸共聚物、聚乙烯胺共聚物、羧酸化-聚乙烯亞胺、磷酸化-聚乙烯亞胺、磺酸化-聚乙烯亞胺、酰化-聚乙烯亞胺、羥基化水溶性聚乙烯亞胺等。聚胺為可商購的,例如從 Sigma-Aldrich(St. Louis,MO,USA)或 BASF(Ludwigshafen，德國)購買，并且包括直鏈的或支化的、取代的或未取代的PEIs、PVAs和PLs，例如來自BASF的Lupasol PEI產(chǎn)品系列。聚胺可任選包括可降解的鍵，例如，與可降解的酯鍵交聯(lián)的支化的PEI是這種類型的PEI衍生物的實(shí)例。聚胺也可以衍生化以用作用于例如硫酸肝素、生長因子、抗生素的藥物的載體，或者可以改性以試圖調(diào)節(jié)粘性或親水性。使用?；瘎?例如但不限于琥珀酸酐、?；群驮鹿鸹?的衍生化用于產(chǎn)生用于添加有用分子的結(jié)合位點(diǎn)。特別感興趣的聚胺為支化的聚胺，例如具有至少一個(gè)伯氨基、至少一個(gè)仲胺基和至少一個(gè)叔氨基的支化的聚胺，例如支化的PEI。在某些實(shí)施方案中，底物組合物的聚胺成分為PEI，其中PEI可以為直鏈的、 支化的、取代的或未取代的，或其混合物。如本領(lǐng)域所知，可以根據(jù)熟知的方法(例如 “Encyclopedia of polymer science and technology,，，Jacqueline I.Kroschwitz, H.F. (Herman Francis)Mark, ffiley-Interscience, 2004；Murata 等人’ J Biochem. (2008) 144(4) :447-455 ；Ito 等人，J Control Release(2006) 112(3) :382-388 ；Brus 等 A, Eur J Pharm Biopharm. (2004)57(3) :427-430 ；Forrest 等 K, Bioconjug Chem. (2003) 14(5) :934-940 ；Petersen 等人，Bioconjug Chem. (2002) 13(4) :812-821 ；和 Sagara 等人，J Control Release. (2002)79(1-3) :271-281 ；和美國專利 Nos :4，187,256 ； 5，990，224 ；和6，652，886)合成PEI，或者可以從例如Sigma-Aldrich或BASF的供應(yīng)商處購買。特別感興趣的是包含伯胺、腫胺和叔胺的混合物、分子量為約50，000至100，000的支化的PEI，例如購自MP Biomedical, Inc.的PEI (目錄號195444)
聚胺在底物組合物中的量可以變化，其中具體的濃度選擇取決于期望的應(yīng)用和期望的產(chǎn)品參數(shù)，例如韌性、硬度、彈性、再吸收特征和血小板聚集作用。聚胺有時(shí)為約0. 1% (w/w)至約 10% (w/w)，包括約 0. 1% (w/w)至約 4% (w/w)，例如約 0. 5% (w/w)至約 4% (w/w)，包括約 0.5% (w/w)至 3 % (w/w)，約 1 % (w/w)至 3 % (w/w)，和約 1 % (w/w)至 2 % (w/w)O如上所述，聚胺比蛋白質(zhì)材料的某些比例產(chǎn)生表現(xiàn)出協(xié)同粘度效應(yīng)的底物組合物，并且在許多實(shí)施方案中，也包括碳水化合物成分。同樣地，選擇聚胺在底物組合物中的重量百分比以達(dá)到諸如在實(shí)驗(yàn)部分中描述的期望的比例和協(xié)同粘度效應(yīng)。如上所述，該聚胺成分可以包括或可以不包括一種或多種活性劑，例如，如果期望，存在于聚胺成分中的藥物。如果期望，所述活性劑在存在時(shí)可以結(jié)合至聚合物。仵詵的成分在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物的上述底物成分可以包括改變由底物和交聯(lián)劑產(chǎn)生的可轉(zhuǎn)相組合物的性質(zhì)的一種或多種任選成分。下面更詳細(xì)地討論感興趣的典型的任選成分。增粘劑還可以存在一種或多種增粘劑。增粘劑改善了密封材料對生物表面的粘附力。在許多實(shí)施方案中，粘附改良劑(adhesion modifier)為具有帶電荷官能團(tuán)例如胺等的聚合的化合物。可以使用許多粘附改良劑，而特別適用的一種是PEI，其促進(jìn)連接至生物表面。 另外，PEI在底物中的存在顯著增加了適于產(chǎn)生與交聯(lián)作用劑的交聯(lián)的胺末端的存在。當(dāng)包括PEI既作為增粘劑又作為聚胺成分時(shí)，選擇底物組合物中蛋白質(zhì)材料比PEI的比例以表現(xiàn)出諸如實(shí)驗(yàn)部分中描述的期望的協(xié)同粘度效應(yīng)。感興趣的另外的粘合改良劑包括但不限于明膠、羧甲基纖維素、丁基羥基甲苯等。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，增粘劑用于改變對生物底物的粘附力，與此同時(shí)產(chǎn)生促凝血?jiǎng)?procoagulant)。在某些實(shí)施方案中，增粘劑的濃度為約0. 1% (w/w)至約10% (w/w)，例如約 0. 1% (w/w)至約 4% (w/w)。增塑劑根據(jù)本發(fā)明，增塑劑可以存在于底物中。增塑劑提供許多功能，包括潤濕表面，或者增加材料的彈性模量，或者進(jìn)一步促進(jìn)材料的混合和應(yīng)用。存在許多增塑劑，包括諸如油酸、棕櫚酸等的脂肪酸、鄰苯二甲酸二辛酯、磷脂和磷脂酸。因?yàn)樵鏊軇┩ǔ樗蝗苄杂袡C(jī)物，并且不容易與水混溶，通過將適量的增塑劑與醇預(yù)混合以減少與溶液相關(guān)的表面張力有時(shí)有利于改善其與水的可混溶性。為此，可以使用任何醇。在本發(fā)明的一個(gè)典型實(shí)施方案中，油酸與乙醇混合以形成50% (w/w)溶液，然后在配制過程中，利用該溶液使蛋白質(zhì)底物塑化。增塑劑的類型和濃度取決于應(yīng)用，而在某些實(shí)施方案中，增塑劑的最終濃度為約 0.01% (w/w)至10% (w/w)，包括約2% (w/w)至約4% (w/w) 0感興趣的其他增塑劑包括但不限于聚乙二醇、甘油、丁基羥基甲苯等。碳水化合物促凝血?jiǎng)┰谀承?shí)施方案中，底物包括碳水化合物促凝血?jiǎng)?。殼聚糖和殼聚糖的衍生物為有效的血液凝結(jié)劑，并因此有利于形成能夠封閉血管損傷的密封材料。盡管實(shí)際上已經(jīng)證明所有的幾丁質(zhì)材料都具有一定的促凝血活性，但根據(jù)本發(fā)明，使用乙?；瘞锥≠|(zhì)作為用于配制旨在控制血液的密封材料的添加劑。能夠以許多不同方式實(shí)現(xiàn)分子的乙?；环N常用方法為用諸如琥珀酸酐的酸酐處理殼聚糖/乙酸混合物。該反應(yīng)容易在室溫下進(jìn)行。根據(jù)本發(fā)明，與蛋白質(zhì)底物混合并在原位交聯(lián)的以這種方式產(chǎn)生的凝膠有利于生物復(fù)合結(jié)構(gòu)部件的產(chǎn)生。同樣地，碳水化合物促凝血?jiǎng)┛梢詾闅ぞ厶?、低分子量殼聚糖、幾丁質(zhì)、 殼聚糖寡糖及其殼聚糖衍生物。根據(jù)本發(fā)明的教導(dǎo)，諸如殼聚糖的碳水化合物成分的濃度可以為約0%至約20%，例如約0. 1% (w/w)至約5% (w/w)。填充劑感興趣的填充劑包括補(bǔ)強(qiáng)填充劑和非補(bǔ)強(qiáng)填充劑?？梢园ㄑa(bǔ)強(qiáng)填充劑，例如切碎的纖維絲(chopped fibrous silk)、聚酯、PTFE、尼龍(NYLON)、碳纖維、聚丙烯、聚氨基甲酸酯、玻璃等。如果期望，纖維能夠被改性，例如以如上所述的用于其他成分的方式改性， 例如以便增強(qiáng)可濕性、可混性等。補(bǔ)強(qiáng)填充劑的含量可以為約0至40%，例如約10%至約 30%。也可以包括非補(bǔ)強(qiáng)填充劑，例如黏土、云母、羥磷灰石、硫酸鈣、骨碎片等。如果期望， 也可以改性這些填充劑，例如以如上所述的方式改性。非補(bǔ)強(qiáng)填充劑的含量可以為約0至 40%，例如約10%至約30%。牛物活件劑也可以包括生物活性劑，例如骨生長因子、組織活化劑、軟骨生長活化劑、小分子活性劑等。因此，生物活性劑可以包括肽、多肽、蛋白質(zhì)、糖類、多糖和碳水化合物、核酸和小分子有機(jī)和無機(jī)材料。具體的生物活性劑包括抗生素、抗病毒藥、留體和非留體抗炎藥、 抗腫瘤藥、鎮(zhèn)痙藥(包括通道阻滯劑)、細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)相互作用調(diào)節(jié)劑(包括細(xì)胞生長抑制劑和抗粘連分子)、酶和酶抑制劑、抗凝血?jiǎng)⑸L因子、DNA、RNA和蛋白質(zhì)合成抑制齊U、抗細(xì)胞遷移劑、血管擴(kuò)張劑和用于治療組織損傷的其他藥物。這些化合物的實(shí)例包括血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、抗血栓形成劑、前列環(huán)素、肝素、水楊酸鹽、溶栓劑、抗增生劑、硝酸鹽、鈣通道阻滯藥、鏈激酶、尿激酶、組織纖溶酶原激活物(TPA)和茴香酰纖溶酶原激活物和(PA)和茴香酰纖溶酶原-鏈激酶激活劑復(fù)合物(APSAC)、秋水仙堿和烷化劑、諸如白細(xì)胞介素、轉(zhuǎn)化生長因子P和血小板衍生生長因子同源物的生長調(diào)節(jié)因子、抗生長因子的單克隆抗體、修飾的細(xì)胞外基質(zhì)成分或其受體、脂質(zhì)和膽固醇螯合劑以及可以調(diào)節(jié)血管張力(vessel tone)、功能、動脈粥樣硬化和干預(yù)后對血管或器官損傷的愈合應(yīng)答的其他活性劑。發(fā)泡劑在某些實(shí)施方案中，底物可以包括發(fā)泡劑，所述發(fā)泡劑在與交聯(lián)劑組合物混合時(shí)產(chǎn)生發(fā)泡組合物，例如包括散布在四周的氣態(tài)氣泡的組合物?？梢源嬖谌魏魏线m的發(fā)泡劑， 其中發(fā)泡劑可以為在與交聯(lián)組合物接觸時(shí)產(chǎn)生提供氣泡產(chǎn)生的氣體并由此使組合物具有期望的發(fā)泡特征的試劑。例如，底物中可以含有約2% w/w至約5% w/w的量的諸如碳酸氫鈉的鹽。在底物與諸如PH為約5的酸性交聯(lián)劑組合物混合時(shí)產(chǎn)生發(fā)泡組合物。另外的改性劑也可以存在另外的改性劑。例如，可以存在諸如特氟隆(Teflon)、PET、尼龍 (NYLON)、水凝膠、聚丙烯等的一種或多種聚合物的混合物(例如高分子共混物)?？梢愿男愿叻肿庸不煳铮缫匀缟纤龅姆绞礁男?，以便提供期望的性質(zhì)。這些另外的改性劑的量可以為約0至50%，包括約10%至約30%。
交聯(lián)劑組合物如上所述，通過如上所述將交聯(lián)劑與蛋白質(zhì)底物混合來產(chǎn)生可轉(zhuǎn)相組合物，其中交聯(lián)劑例如通過在存在于蛋白質(zhì)底物的不同多肽鏈上的官能團(tuán)之間形成共價(jià)鍵穩(wěn)定了蛋白質(zhì)底物。交聯(lián)通常使組合物的分子較不易被化學(xué)降解，并且因此改變了組合物的再吸收特征以及由組合物的存在誘導(dǎo)的生物應(yīng)答。已經(jīng)確定了許多交聯(lián)作用劑。交聯(lián)作用劑的實(shí)例包括但不限于光氧化分子、碳二亞胺；含羰基的化合物，例如單羰基和二羰基化合物， 包括羧酸，諸如二羧酸，例如脂肪酸、戊二酸等，以及醛，包括單醛和二醛，例如戊二醛；等等。在某些實(shí)施方案中，使用的交聯(lián)劑為醛交聯(lián)劑。在這些實(shí)施方案中的某些中，預(yù)處理醛交聯(lián)劑以產(chǎn)生穩(wěn)定化的醛交聯(lián)劑，例如穩(wěn)定化的戊二醛交聯(lián)劑，例如，其中交聯(lián)劑為熱穩(wěn)定化的醛，例如熱穩(wěn)定化的戊二醛(例如第7，303，757號美國專利中描述的，該專利的公開內(nèi)容以引用的形式并入本文中)。交聯(lián)作用劑在組合物中的量可以變化，在某些實(shí)施方案中，交聯(lián)作用劑的量為 0. 1 % (ν/ν) M 20% (ν/ν)，例如 0. 5% (ν/ν) M 15% (ν/ν)，包括 1 % (ν/ν) M 10% (ν/ν)。在許多實(shí)施方案中，通過將包括大分子交聯(lián)作用劑的液體交聯(lián)劑組合物與如上所述的液體蛋白質(zhì)底物混合來制備可轉(zhuǎn)相組合物。通過將一定量的諸如糖胺聚糖的生理可接受的聚合物與過量的諸如熱處理二醛的交聯(lián)作用劑混合來制備大分子交聯(lián)作用劑。過量的交聯(lián)作用劑和生理可接受的聚合物反應(yīng)以產(chǎn)生大分子交聯(lián)作用劑。在將大分子交聯(lián)作用劑與蛋白質(zhì)底物混合時(shí)，大分子交聯(lián)作用劑與底物成分中的蛋白質(zhì)反應(yīng)以產(chǎn)生特征為存在互穿網(wǎng)絡(luò)的最終的組合物。這樣，交聯(lián)劑成分的大分子交聯(lián)作用劑是通過將過量交聯(lián)作用劑與一定量的生理可接受的聚合物混合產(chǎn)生的交聯(lián)劑。在該實(shí)施方案中，交聯(lián)作用劑以高于生理可接受的聚合物的量存在于交聯(lián)組合物中。在某些實(shí)施方案中，交聯(lián)作用劑的量為0. 1% (ν/ν)至20% (ν/ν)，例如為 0.5% (ν/ν) M 15% (ν/ν)，并且包括 (ν/ν) M 10% (ν/ν) 0 在某些實(shí)施方案中，生理可接受的聚合物的量構(gòu)成交聯(lián)組合物的0.01% (wt/v)至5% (wt/v)，例如 0. 05% (wt/v) M3% (wt/v)，包括 0. (wt/v) M 1% (wt/v)。生理可接受的聚合物可以為身體耐受并且與交聯(lián)作用劑反應(yīng)以產(chǎn)生預(yù)聚物大分子交聯(lián)產(chǎn)物的任何聚合物。預(yù)聚物產(chǎn)物為交聯(lián)作用劑和聚合物間的反應(yīng)產(chǎn)物，并且包括聚合物骨架，有一種或多種交聯(lián)分子與該聚合物骨架共價(jià)連接，使得聚合物骨架包括一種或多種交聯(lián)官能團(tuán)，其中所述交聯(lián)官能團(tuán)包括至少一個(gè)能夠共價(jià)連接至蛋白質(zhì)底物的蛋白質(zhì)成分的反應(yīng)性部分，例如醛部分。這樣，預(yù)聚物產(chǎn)物保留了在與蛋白質(zhì)底物接觸時(shí)交聯(lián)的能力。某些實(shí)施方案的預(yù)聚物產(chǎn)物為包括結(jié)合至交聯(lián)作用劑分子的聚合骨架分子的可溶性大分子，其中結(jié)合的交聯(lián)作用劑分子的至少一部分保留了能夠結(jié)合蛋白質(zhì)底物中的蛋白質(zhì)的自由交聯(lián)部分。該預(yù)聚物產(chǎn)物“大分子”交聯(lián)作用劑的平均分子量可以變化，并且在某些實(shí)施方案中其分子量可以為10，000至4，000, 000道爾頓，例如為500，000至2，000, 000道爾頓。在某些實(shí)施方案中，生理可接受的聚合物為糖胺聚糖(即黏多糖)。具體感興趣的糖胺聚糖包括但不限于硫酸軟骨素；硫酸皮膚素；硫酸角質(zhì)素；肝素；硫酸乙酰肝素；以及透明質(zhì)酸(hyaluronan)(即玻尿酸)。在某些實(shí)施方案中，糖胺聚糖成分為透明質(zhì)酸?？梢愿鶕?jù)任何方便的方式對諸如上述的那些的交聯(lián)成分滅菌，其中感興趣的滅菌方式包括但不限于Y、電子束等。通常，液體交聯(lián)成分為儲存穩(wěn)定的交聯(lián)成分。儲存穩(wěn)定的是指底物可以在儲存條件下保存，例如在室溫下保存至少3年或更長，例如5年或更長， 而不經(jīng)歷負(fù)面地影響底物功能的任何實(shí)質(zhì)變化使得其不再適合用于制備本發(fā)明的生物相容性可轉(zhuǎn)相組合物。交聯(lián)成分的粘度可以變化，但在某些實(shí)施方案中，其接近蛋白質(zhì)成分的粘度，以厘沲(cSt)表示的粘度在約25°C下為約IOcM至150cSt，例如為約30cM至70cSt。在某些實(shí)施方案中，交聯(lián)組合物的粘度接近蛋白質(zhì)底物組合物的粘度，以厘沲(cSt)表示的粘度在約25°C下例如為約IOcM至200(; ,包括約20dt至150cSt，并且通常為約30cM至 125cSt0在某些實(shí)施方案中，交聯(lián)劑組合物可以進(jìn)一步包括一定量的粘度改良劑。感興趣的粘度改良劑包括，但不限于聚氧乙烯或聚氧丙烯聚合物或其共聚物，例如聚乙二醇和聚丙二醇；非離子纖維素醚，例如甲基纖維素、乙基纖維素、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、羧乙基纖維素和羥丙基纖維素；另外的纖維素，例如羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、羧甲基淀粉；等等。在特別感興趣的某些實(shí)施方案中，乳化劑為纖維素醚，特別是非離子纖維素醚，例如羧甲基纖維素。羧甲基纖維素可從許多商業(yè)來源得到，所述來源包括但不限于Sigma、Hercules、Fluka和Noviant。在某些實(shí)施方案中，纖維素醚的平均分子量為至少約1000道爾頓，例如至少約5000道爾頓，其中平均分子量可以高達(dá)10，000道爾頓或更高，例如50，000道爾頓或更高，100, 000道爾頓或更高，并且在某些實(shí)施方案中為約 5，000道爾頓至約100，000道爾頓，例如約10，000道爾頓至約50，000道爾頓。在某些實(shí)施方案中，密封材料中的粘度改良劑的比例為0.01% (ν/ν) M 10% (ν/ν)，例如0. (ν/ν) Μ4% (ν/ν)，包括 0.5% (ν/ν) Μ2% (ν/ν) 0緩沖液在混合蛋白質(zhì)底物和交聯(lián)劑以制備本發(fā)明的可轉(zhuǎn)相組合物時(shí)，在某些實(shí)施方案中為了許多原因使用可轉(zhuǎn)相組合物的緩沖，例如，以使組合物對連接表面的粘連強(qiáng)度最優(yōu)化， 以使發(fā)生內(nèi)部交聯(lián)所需的條件最優(yōu)化等。例如，最佳的使用戊二醛交聯(lián)劑的蛋白質(zhì)交聯(lián)在 PH為約6至約8下發(fā)生。能夠保持這一范圍的緩沖液在本發(fā)明中是有用的，只要它們不干擾交聯(lián)劑的羰基末端或修飾氨基酸的胺末端。例如，磷酸鹽緩沖液具有在PH 7.0范圍內(nèi)的PKa值并且不干擾交聯(lián)過程，因?yàn)樗鼈儾话然虬饭倌軋F(tuán)。濃度最高達(dá)IM的磷酸鹽緩沖液適于用作本發(fā)明的緩沖液，其中在某些實(shí)施方案中，磷酸鹽緩沖液的濃度為約0. OlM 至約0. 3Μ。溶液的磷酸鹽緩沖對蛋白質(zhì)底物在需要高粘附力的應(yīng)用中的穩(wěn)定性是理想的， 但也可以使用酸性緩沖液。發(fā)現(xiàn)0. 1Μ-1Μ并且ρΗ為約4. 5至約6. 5的檸檬酸鹽緩沖液對本發(fā)明是有用的。如果期望，或者在起始的交聯(lián)劑成分中或者在起始的蛋白質(zhì)底物成分中可以存在緩沖液，或者在兩個(gè)成分中都可以存在緩沖液。混合底物和交聯(lián)劑以制備可轉(zhuǎn)相組合物如上所述，通過在足以制備可轉(zhuǎn)相組合物的條件下將適量的液體蛋白質(zhì)底物和液體交聯(lián)劑混合來制備本發(fā)明的可轉(zhuǎn)相組合物。在某些實(shí)施方案中，以約1/5至約5/1的比例(ν/ν)混合底物和交聯(lián)劑；使得產(chǎn)生所得的可轉(zhuǎn)相組合物，其中總蛋白質(zhì)濃度為約10% 至約60%，例如約20%至約50%，包括約30%至約40%，并且總交聯(lián)劑組合物為約0. 1%至約20%，例如約0. 5%至約15%，包括約至約10%。底物和交聯(lián)劑的混合通常發(fā)生在混合條件下，使得兩種液體成分充分互相組合或混合?？梢允褂萌魏畏奖愕姆绞竭M(jìn)行組合或混合，例如通過手工混合兩種成分，通過使用混合兩種成分的裝置等。組合或混合通常在約20°C至約40°C的溫度例如室溫下進(jìn)行。如上所述混合蛋白質(zhì)底物和交聯(lián)劑導(dǎo)致產(chǎn)生可轉(zhuǎn)相組合物。“可轉(zhuǎn)相組合物”是指從第一液態(tài)到第二非流體狀態(tài)例如凝膠或固態(tài)的組合物。在第二非流體狀態(tài)中，組合物基本一如果不是完全的話一不能進(jìn)行流體流動。在底物和交聯(lián)劑成分混合后，當(dāng)保持在約 15°C至約40°C，例如約20°C至約30°C的溫度時(shí)，可轉(zhuǎn)相組合物通常保持流體狀態(tài)約10秒至約10分鐘，例如約20秒至約5分鐘，包括約30秒至約120秒。具體的可轉(zhuǎn)相制劑包括下列成分(i)包含蛋白質(zhì)底物的第一組合物，該底物組合物包含支化的聚乙烯亞胺、約30%-50%的白蛋白和約0. -0.3%的殼聚糖，其中支化的聚乙烯亞胺比白蛋白的重量比為約1 5至約1 80;以及(ii)包含交聯(lián)組合物的第二組合物，其具有約3% -10%的熱處理的戊二醛，并任選具有一種或多種約0. -1%的透明質(zhì)酸和約0% -1.5%的高粘度羧甲基纖維素鈉鹽。在特定的實(shí)施方案中，提供包括下列成分的可轉(zhuǎn)相制劑(i)包含蛋白質(zhì)底物組合物的第一組合物，其具有支化的聚乙烯亞胺、約40%的白蛋白和約0. 16%的殼聚糖，其中支化的聚乙烯亞胺比白蛋白的重量比為約1 10至約1 40 ；和(ii)包含交聯(lián)組合物的第二組合物，其具有約4. 4% -7. 5%的熱處理的戊二醛，并任選具有一種或多種約0. 2% 的透明質(zhì)酸和約0% -0. 75%的高粘度羧甲基纖維素鈉鹽。還如上所述，能夠?qū)⒍喾N另外的材料并入所述可轉(zhuǎn)相組合物以滿足若干目的，例如以便改變組合物的物理性質(zhì)，和/或幫助修補(bǔ)應(yīng)用組合物的靶組織或生物材料。例如，能夠加入諸如肽、蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物分子、小分子等的生物活性劑以吸引和結(jié)合特定的細(xì)胞類型，例如白細(xì)胞和血小板，或能夠使用諸如纖連蛋白、波形蛋白和膠原蛋白的材料以通過非特異性結(jié)合增加愈合。也可以包括諸如鋇鹽、碘鹽或鉭鹽的示蹤材料以允許顯現(xiàn)和/或監(jiān)測可轉(zhuǎn)相組合物。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)區(qū)別使用一種或多種可轉(zhuǎn)相組合物時(shí)，能夠在不同的應(yīng)用或?qū)哟沃惺褂貌煌纳锘钚詣?。在某些?shí)施方案中，在使用組合物之前、期間和/或之后，也能夠向可轉(zhuǎn)相組合物中加入細(xì)胞或與可轉(zhuǎn)相組合物一起使用細(xì)胞。當(dāng)使用時(shí)，通常在蛋白質(zhì)底物組合物中包括細(xì)胞，或以使其粘附在使用部位的方式連同可轉(zhuǎn)相組合物使用細(xì)胞或與可轉(zhuǎn)相組合物分開使用細(xì)胞。根據(jù)給定的最終用途，細(xì)胞能夠?yàn)榛罴?xì)胞、人造細(xì)胞、血影細(xì)胞(即紅細(xì)胞或血小板影)或假病毒體。例如，可以選擇細(xì)胞以在應(yīng)用部位產(chǎn)生具體的活性劑，例如生長因子。也能夠包括調(diào)節(jié)細(xì)胞生存能力、分化和/或生長的生物活性劑。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞可以為干細(xì)胞，或者在其他實(shí)施方案中，細(xì)胞可以為提供治療優(yōu)勢的對應(yīng)于在治療位置的組織類型的祖細(xì)胞或其他細(xì)胞。例如，并入可轉(zhuǎn)相組合物并應(yīng)用于患者肝臟的傷口或表面的肝細(xì)胞可以幫助其再生和修復(fù)。這對其中諸如肝硬化、纖維化、囊性疾病或惡性腫瘤的疾病導(dǎo)致非功能性組織、瘢痕形成或組織被癌細(xì)胞代替的情況是特別有用的?？梢詫ζ渌鞴俸徒M織也使用類似的方法。能夠物理加入和/或通過化學(xué)粘附加入生物活性劑。通過在應(yīng)用到靶表面和治愈之前和/或期間將生物活性劑與可轉(zhuǎn)相材料混合來進(jìn)行物理加入。通常將材料混入蛋白質(zhì)底物溶液以形成溶液、懸浮液或分散液。在一個(gè)實(shí)施方案中，能夠?qū)⑸锘钚詣┌庠谥T如微球、微膠囊、脂質(zhì)體、血影細(xì)胞或假病毒體的遞送裝置內(nèi)，該裝置本身實(shí)現(xiàn)釋放速率和細(xì)胞攝入。通過在聚合前或聚合時(shí)將活性劑與蛋白質(zhì)底物或交聯(lián)組合物(通常為蛋白質(zhì)底物)的聚合材料進(jìn)行化學(xué)耦合(例如通過諸如胺、羥基、硫醇等的反應(yīng)官能團(tuán)的偶聯(lián))來進(jìn)行生物活性劑的化學(xué)加入。為了確保保持可轉(zhuǎn)相組合物的期望治愈時(shí)間和突發(fā)(burst)性質(zhì)，生物活性劑的物理和/或化學(xué)加入考慮到存在于最終組合物中的蛋白質(zhì)底物和交聯(lián)劑的相對量，并能夠據(jù)此進(jìn)行調(diào)節(jié)。^^本發(fā)明的生物相容性可轉(zhuǎn)相組合物在將一定量的可轉(zhuǎn)相組合物遞送至需要其的個(gè)體、患者或宿主的特定部位或位置的方法中使用，所述特定部位或位置典型地為外科手術(shù)部位、損傷部位、縫合位置或出血或暴露血液的其他位置。個(gè)體、患者或宿主典型地為 “哺乳動物(mammal) ”或“哺乳動物(mammalian) ”，其中概括地使用這些術(shù)語以描述在哺乳動物綱內(nèi)的生物體，其包括但不限于食肉目(例如狗和貓)、嚙齒目(例如小鼠、豚鼠和大鼠)、兔形目(例如兔)和靈長目(例如人、黑猩猩和猴)。在許多實(shí)施方案中，動物或宿主， 即個(gè)體(本文也稱為患者)為人。在任何給定應(yīng)用中遞送給個(gè)體的量將根據(jù)應(yīng)用的性質(zhì)和組合物的使用必要地變化，但在某些典型實(shí)施方案中，該量為約Iml至約50ml，例如約Iml至約25ml，包括約Iml 至約5ml，例如約:3ml。盡管必須取決于使用本發(fā)明組合物的特定應(yīng)用，但是在許多實(shí)施方案中，將本發(fā)明組合物局部遞送至宿主的特定區(qū)域、部位或位置，其中所述部位或位置當(dāng)然可以變化。典型的部位或位置包括但不限于血管、器官等。根據(jù)特定應(yīng)用，可以手動或用遞送裝置(例如，如下面更詳細(xì)描述的，在支架應(yīng)用中用來遞送組合物的遞送裝置)將組合物遞送至感興趣的部位。應(yīng)用本發(fā)明的生物相容性可轉(zhuǎn)相組合物可用于多種不同應(yīng)用中。該可轉(zhuǎn)相組合物的典型應(yīng)用包括在以引用的形式并入本文中的第3，438，374號、第5，092，841號、第5，292, 362 號、第 5，385，606 號、第 5，575，815 號、第 5，583，114 號、第 5，843，156 號、第 6，162，241 號、 第 6，290，729 號、第 6，302，898 號、第 6，310，036 號、第 6，329，337 號、第 6，371，975 號、第 6，372，229 號、第 6，423，333 號、第 6，458，147 號、第 6，475，182 號、第 6，547,806 號和第 7，303，757 號美國專利，以及第 2002/0015724 號、第 2002/0022588 號、第 2002/0133193 號、 第 2002/0173770 號、第 2002/0183244 號、第 2002/019490 號、第 2002/0032143 號美國申請中描述的那些應(yīng)用。還提供了用于實(shí)踐本方法的系統(tǒng)。該系統(tǒng)可包括用于將底物和交聯(lián)組合物遞送至給藥部位的流體遞送部件，混合部件等。這種系統(tǒng)的實(shí)例包括在第7，303，757號美國專利中描述的那些系統(tǒng)，該專利的內(nèi)容以引用的形式并入本文中。試劑盒還提供了用于實(shí)踐本方法的試劑盒，如上所述，其中所述試劑盒通常包括可轉(zhuǎn)相組合物的不同的液體底物和液體交聯(lián)組合物成分。底物和交聯(lián)組合物可以存在于試劑盒中的單獨(dú)的容器中，例如，其中底物存在于第一容器中，交聯(lián)作用劑存在于第二容器中，其中容器可以組合結(jié)構(gòu)存在或可以不以組合結(jié)構(gòu)存在。本發(fā)明試劑盒也可以包括混合裝置，用于將底物和交聯(lián)劑混合在一起以產(chǎn)生可轉(zhuǎn)相組合物。如上所述，試劑盒也可以包括遞送裝置(其可以包括或可以不包括混合部件)， 例如雙筒注射器(dual barrel syringe)、導(dǎo)管裝置等。試劑盒也可以進(jìn)一步包括其他部件，例如導(dǎo)絲、傳感器導(dǎo)線等，其可以用于實(shí)踐本方法。除了上述部件，本發(fā)明試劑盒通常還包括使用試劑盒部件來實(shí)踐本方法的說明。 用于實(shí)踐本方法的說明通常記錄在適當(dāng)?shù)挠涗浗橘|(zhì)上。例如，可以將說明打印在例如紙或塑料等基底上。同樣地，說明可以作為包裝說明書存在于試劑盒中，存在于試劑盒或其部件的容器標(biāo)簽中(即與包裝或分包裝一起)等。在其他實(shí)施方案中，說明作為存在于適當(dāng)?shù)挠?jì)算機(jī)可讀存儲介質(zhì)(例如CD-ROM、磁盤等)上的電子存儲數(shù)據(jù)文件存在。在另外的實(shí)施方案中，實(shí)際的說明不存在于試劑盒中，而是提供從遠(yuǎn)距離來源獲得說明的方法，例如通過互聯(lián)網(wǎng)獲得說明。這種實(shí)施方案的實(shí)例為包括網(wǎng)址的試劑盒，能夠在該網(wǎng)址中瀏覽說明和 /或從該網(wǎng)址下載說明。如同說明一樣，這種獲得說明的方法記錄在適當(dāng)?shù)幕咨?。以示例而非限制的方式提供下列?shí)施例。實(shí)驗(yàn)制備可轉(zhuǎn)相組合物的多種制劑，其中在蛋白質(zhì)成分中包括支化的聚乙烯亞胺 (PEI) [50，000至100，000分子量]。如表1所示，檢測示例性的制劑，其中使用的粘度計(jì)為 405-U190，溫度為23. 7°C (室溫)，并且粘度常數(shù)為2. 5^cSt/s (厘沲每秒)。表1 水凝膠研究-粘度檢測
權(quán)利要求
1.可轉(zhuǎn)相組合物，其通過混合下列物質(zhì)制備包含具有協(xié)同粘度增加效應(yīng)的重量比的聚胺和蛋白質(zhì)材料的底物；和包含交聯(lián)作用劑的交聯(lián)劑。
2.如權(quán)利要求1所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述聚胺為聚亞烷基亞胺。
3.如權(quán)利要求2所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述聚亞烷基亞胺為聚乙烯亞胺。
4.如權(quán)利要求3所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述聚乙烯亞胺為支化的聚乙烯亞胺。
5.如權(quán)利要求4所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述支化的聚乙烯亞胺比蛋白質(zhì)材料的重量比為約1 5至80。
6.如權(quán)利要求5所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述支化的聚乙烯亞胺比蛋白質(zhì)材料的重量比為約1 10至40。
7.如權(quán)利要求6所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述底物的運(yùn)動粘度為約70厘沲至200厘沲。
8.如權(quán)利要求1所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述底物還包含碳水化合物。
9.如權(quán)利要求8所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述碳水化合物為殼聚糖。
10.如權(quán)利要求1所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述交聯(lián)作用劑包含醛。
11.如權(quán)利要求10所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述醛為戊二醛。
12.如權(quán)利要求11所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述戊二醛為熱穩(wěn)定化的。
13.如權(quán)利要求1所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述交聯(lián)作用劑包含大分子交聯(lián)作用劑。
14.如權(quán)利要求13所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述大分子交聯(lián)作用劑為過量交聯(lián)作用劑與生理可接受的聚合物的反應(yīng)產(chǎn)物。
15.如權(quán)利要求14所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述生理可接受的聚合物為糖胺聚糖。
16.如權(quán)利要求15所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述糖胺聚糖為透明質(zhì)酸。
17.如權(quán)利要求1所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述底物的粘度接近所述交聯(lián)劑的粘度。
18.如權(quán)利要求17所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述交聯(lián)劑還包含粘度改良劑。
19.如權(quán)利要求1所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述蛋白質(zhì)材料選自白蛋白、彈性蛋白、 纖維蛋白以及可溶和不可溶形式的膠原蛋白，及其組合。
20.如權(quán)利要求1所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述底物還包含選自增粘劑和增塑劑的試齊LU
21.如權(quán)利要求1所述的可轉(zhuǎn)相組合物，其中所述交聯(lián)劑還包含選自增粘劑和增塑劑的試劑。
22.制備可轉(zhuǎn)相組合物的方法，所述方法包括 混合(a)包含具有協(xié)同粘度增加效應(yīng)的重量比的聚胺和蛋白質(zhì)材料的液體底物，所述聚胺比蛋白質(zhì)材料的重量比為約1 4至1 400;和(b)液體交聯(lián)組合物； 以制備所述可轉(zhuǎn)相組合物。
23.通過權(quán)利要求22所述方法制備的固相組合物。
24.用于制備可轉(zhuǎn)相組合物的試劑盒，所述試劑盒包括包含當(dāng)混合時(shí)產(chǎn)生協(xié)同粘度增加效應(yīng)的重量比的聚胺和蛋白質(zhì)材料的底物，所述聚胺比蛋白質(zhì)材料的重量比為1 5至1 100;和包含交聯(lián)作用劑的交聯(lián)劑組合物。
25.如權(quán)利要求M所述的試劑盒，其中所述試劑盒還包括可轉(zhuǎn)相流體遞送裝置。
26.用于治療宿主的方法，所述方法包括將權(quán)利要求1所述的組合物遞送至靶位置。
全文摘要
提供了生物相容性可轉(zhuǎn)相蛋白質(zhì)組合物及其制備和使用方法。通過混合交聯(lián)劑和蛋白質(zhì)底物來制備本發(fā)明的可轉(zhuǎn)相組合物。所述蛋白質(zhì)底物包括一種或多種蛋白質(zhì)和聚胺，其中聚胺和蛋白質(zhì)底物以協(xié)同粘度增加量存在，并且也可以包括下列的一種或多種碳水化合物、增粘劑、增塑劑或其它改性劑。在某些實(shí)施方案中，所述交聯(lián)劑為熱處理的二醛，例如熱處理的戊二醛。還提供用于制備本發(fā)明組合物的試劑盒。本發(fā)明組合物、試劑盒和系統(tǒng)可用于多種不同應(yīng)用中。
文檔編號C08G63/91GK102459402SQ201080026212
公開日2012年5月16日 申請日期2010年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月17日
發(fā)明者I·漢德雷, J·王 申請人:特納西思醫(yī)療公司