專利名稱：一種抗氧化活性油茶餅粕多糖的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物化學(xué)領(lǐng)域，是一種提取多糖的方法，特別涉及一種以油茶餅柏為原料的抗氧化多糖提取方法。
背景技術(shù)：
植物多糖具有許多生物活性功能，包括免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血糖、降血脂、抗輻射、抗菌抗病毒、保護(hù)肝臟等。植物多糖廣泛的生物活性己逐漸被人們利用，其獨(dú)特活性和來源的天然性在保障人體健康應(yīng)用中具有很大潛力。因此，如何提高收率是研究植物多糖的首要問題。目前,我國油茶面積約有4500萬畝。全國油茶籽年產(chǎn)量100萬噸左右,榨油后的油茶餅柏68. 39萬噸。 油茶副產(chǎn)品綜合開發(fā)利用技術(shù)目前主要集中在茶皂素的開發(fā)與利用方面，其它成分開發(fā)利用的報(bào)道很少。目前國內(nèi)生產(chǎn)茶皂素年產(chǎn)I. 86萬噸，已廣泛用于日化，建材，醫(yī)藥等領(lǐng)域。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，茶皂素在油茶餅柏中的含量為10 15%，而總糖含量則達(dá)30 35%，其中相當(dāng)大比例為多糖。但由于對油茶餅柏多糖的分子結(jié)構(gòu)與功能尚不十分清楚，因此，油茶多糖尚未如茶阜素一樣形成規(guī)模產(chǎn)業(yè)。傳統(tǒng)提取油茶餅柏中多糖的方法是用水提取。由于需要加熱至沸騰，既耗能大，同時(shí)會(huì)導(dǎo)致多糖受熱時(shí)間過長分解。王元鳳等(食品工業(yè)，2008，(6) :29 32)通過對水提法、醇提法提取油茶籽多糖、茶皂素的最佳提取條件進(jìn)行比較，確定了油茶籽多糖、茶皂素的最佳提取條件以水做提取溶劑，溫度75°C，2次浸提，固液比分別為I : 9和I : 5，每次各I. 5小時(shí)，油茶籽多糖得率9. 09%，質(zhì)量分?jǐn)?shù)20. 07%。吳雪輝等(食品工業(yè)科技，2008，29 (9) :197 199)采用微波技術(shù)提取茶柏中的多糖，探討了各因素對多糖提取效果的影響，通過正交實(shí)驗(yàn)及極差和線性回歸分析，獲知原料粒度對油茶餅柏中多糖提取效果影響顯著。得出最佳微波提取工藝條件為微波功率640W，提取時(shí)間3min，固液比I : 25，粒度80 100目，提取次數(shù)I次。此條件下油茶多糖的提取率為15. 15%。黃寶生(CN200710191396. 2)發(fā)明了一種從油茶籽餅柏中提取茶多糖的方法。具體做法是將油茶籽柏按IOKg比100-200L水的比例，在水中浸泡，然后加溫同時(shí)進(jìn)行攪拌，趁熱進(jìn)行過濾，將過濾后的液體繼續(xù)加熱，使液體濃縮至1/4體積，在濃縮的溶液中加入的酵母，保持在25-32°C溫度下，振動(dòng)發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間0. 5-3天后。停止振動(dòng)，使其沉淀，取上層清液加入清液體積3倍的乙醇進(jìn)行攪拌，然后放入冰箱內(nèi)冷凍，將冷凍液加水使其溶解分層沉淀，取上層液體，將上層液體經(jīng)噴霧干燥得茶多糖。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種抗氧化活性多糖的提取方法，尤其是一種以油茶餅柏為原料的提取抗氧化活性多糖的方法，以充分利用油茶加工廢棄物。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是一種抗氧化活性油茶餅柏多糖的制備方法，其特征在于，具體步驟為(I)將油茶餅柏粉碎至60目 80目的餅柏粉，然后將餅柏粉加入預(yù)先溶解有纖維素酶的水溶液中提??；其中餅柏粉與水溶液質(zhì)量比例為I : 20 40，纖維素酶用量為餅柏粉干重量的0. 3% 0. 4%，提取溫度為45°C _55°C，提取時(shí)間3小時(shí)-5小時(shí)；(2)將提取液過濾，濾液濃縮，調(diào)整濃縮后的溶液使得溶液中溶質(zhì)的質(zhì)量百分含量為3% 10%，聚酰胺柱吸附8小時(shí) 12小時(shí)，去離子水洗脫；(3)收集水洗液濃縮，濃縮液加3 5倍體積的乙醇沉淀12小時(shí) 36小時(shí)；離心獲得醇沉沉淀，干燥得到多糖。所述纖維素酶的酶活力> 15000u/g。 所述多糖為灰白色多糖。將所獲得的多糖進(jìn)行體外抗氧化活性測試，發(fā)現(xiàn)對DPPH自由基有良好的清除作用。DPPH 全稱是 I, I-二苯基-2-三硝基苯餅(I, l-Diphenyl-2-picrylhydrazylradical 2, 2-Diphenyl-l- (2,4,6-trinitrophenyl) hydrazyl),是一種很穩(wěn)定的氮中心的自由基，它的穩(wěn)定性主要來自共振穩(wěn)定作用的3個(gè)苯環(huán)的空間障礙，使夾在中間的氮原子上不成對的電子不能發(fā)揮其應(yīng)有的電子成對作用。DPPH法于1958年被提出，廣泛用于地量測定生物試樣、藥品和食品的抗氧化能力。此法是根據(jù)DPPH自由基有單電子，在517nm處有一強(qiáng)吸收，其醇溶液呈紫色的特性。當(dāng)有自由基清除劑存在時(shí)，由于與其單電子配對而使其吸收逐漸消失，其褪色程度與其接受的電子數(shù)量成定量關(guān)系，因而可用分光光度計(jì)進(jìn)行快速的定量分析。經(jīng)測試I. 5mg/ml濃度下DPPH自由基清除率達(dá)68. 38% -71. 38%。DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)的具體步驟為準(zhǔn)確稱取DPPH粉末，用甲醇溶解制備成儲(chǔ)備液，_20°C保存，臨用前用甲醇稀釋至120 ii g/mlo在反應(yīng)體系中，于IOmL比色管中加入2ml不同濃度的樣品溶液，再加入3ml DPPH溶液，振蕩搖勻，于室溫下避光靜置30min，然后測定溶液在515nm處的吸光值。依據(jù)以下公式計(jì)算自由基清除率清除率％ =(Aci-AJAj) X IOOAtl ;A0為DPPH溶液的吸光值，Ai為DPPH溶液與多糖樣品溶液反應(yīng)后吸收值，Aj為多糖樣品溶液的吸收值。相對于現(xiàn)有技術(shù)而言，本發(fā)明的有益效果在于I、通過本發(fā)明獲得的油茶餅柏多糖抗氧化活性高，充分利用油茶加工廢棄物，工藝過程安全環(huán)保，不使用有毒化學(xué)試劑，為充分利用油茶加工廢棄物提供了新的途徑。2、傳統(tǒng)的水提取多糖，由于需要加熱至沸騰，既耗能大，同時(shí)會(huì)導(dǎo)致多糖受熱時(shí)間過長分解。本發(fā)明采取酶輔助提取法節(jié)約能源，同時(shí)較低的提取溫度可保護(hù)多糖不易分解。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :(I)油茶餅柏多糖的制備稱取油茶餅柏粉碎至80目粉末250g，加水5000mL，加纖維素酶(酶活力>15000u/g)875mg，50°C水浴提取3小時(shí)后，雙層紗布過濾，得淡黃色提取溶液。所得提取液減壓濃縮至700ml，使得溶液中溶質(zhì)的質(zhì)量百分含量為6%，通過預(yù)裝500g聚酰胺的層析柱，充分混合均勻，靜置吸附12小時(shí)，以柱體積4倍的去離子水進(jìn)行洗脫。收集所獲得的洗脫溶液，減壓濃縮至較小體積，加入濃縮液體積5倍的95%乙醇，充分?jǐn)嚢?，靜置12小時(shí)。離心(4500轉(zhuǎn)/min, IOmin)。取沉淀后真空冷凍干燥,得灰白色多糖2. 45g。(2)油茶餅柏多糖體外抗氧化活性的測試將實(shí)施例I所得油茶餅柏多糖進(jìn)行DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)以驗(yàn)證抗氧化性效果，結(jié)果見表I。表I多糖清除DPPH自由基效果
權(quán)利要求
1.一種抗氧化活性油茶餅柏多糖的制備方法，其特征在于，具體步驟為 (1)將油茶餅柏粉碎至60目 80目的餅柏粉，然后將油茶餅柏粉加入預(yù)先溶解有纖維素酶的水溶液中提取；其中油茶餅柏粉與水溶液質(zhì)量比例為I : 20 40，纖維素酶用量為餅柏粉干重量的O. 3% O. 4%，提取溫度為45°C _55°C，提取時(shí)間3小時(shí)-5小時(shí)； (2)將提取液過濾，濾液濃縮，調(diào)整濃縮后使得溶液中溶質(zhì)的質(zhì)量百分含量為3% 10%，上聚酰胺柱吸附8小時(shí) 12小時(shí)，去離子水洗脫； (3)收集去離子水洗液濃縮，濃縮液(濃縮到什么程度是否有要求？)加3 5倍體積的乙醇沉淀12小時(shí) 36小時(shí)；離心獲得醇沉沉淀，干燥得到多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述抗氧化活性油茶餅柏多糖的制備方法，其特征在于，所述纖維素酶的酶活力> 15000u/g。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種提取多糖的方法，特別涉及一種以油茶餅粕為原料的抗氧化多糖提取方法，具體步驟為將油茶餅粕粉碎至60～80目加入預(yù)先溶解有纖維素酶(酶活力＞15000u/g)的水溶液中提?。黄渲酗炂煞叟c水溶液質(zhì)量比例為1∶20～40；纖維素酶用量為餅粕粉重量的0.3％～0.4％；提取溫度為45-55℃；提取時(shí)間3-5小時(shí)。提取液過濾，濃縮后用聚酰胺吸附8～12小時(shí)，后用去離子水洗脫。收集洗脫液濃縮，加3～5倍的乙醇沉淀12～36小時(shí)。離心獲得醇沉沉淀，冷凍干燥得到灰白色多糖。本發(fā)明充分利用油茶加工廢棄物，工藝過程安全環(huán)保，不使用有毒化學(xué)試劑，為充分利用油茶加工廢棄物提供了新的途徑。
文檔編號(hào)C08B37/00GK102796203SQ201110140050
公開日2012年11月28日 申請日期2011年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月27日
發(fā)明者李湘洲, 張勝, 吳志平, 林科峰 申請人:中南林業(yè)科技大學(xué), 李湘洲