專利名稱：一種羧甲基化黑木耳多糖、粗多糖及其制備方法和應用的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種羧甲基化黑木耳多糖及其制備方法和它的應用，屬于多糖改性技術(shù)領域。
背景技術(shù)：
黑木耳UuricWariaauricular (L. ex Hook) Underw)又名木蛾、樹雞、云耳、耳子等，屬真菌類擔子菌綱，銀耳目，木耳科，木耳屬，廣泛分布于北半球溫帶地區(qū)的東北亞， 尤其是我國東北地區(qū)。黑木耳不僅味道鮮美，而且營養(yǎng)豐富，經(jīng)全面營養(yǎng)成分分析表明，黑木耳含有豐富的蛋白質(zhì)、多種氨基酸、纖維素、維生素及礦物質(zhì)等(男憲廣.黑木耳的質(zhì)量標準及其營養(yǎng)成分.中國林副特產(chǎn)，1996，36 G人·力-忍入有著“素中之肉”、“素食之王” 的美稱，是一種營養(yǎng)價值極高的黑色滋補食品，得到世界廣泛的公認Π農(nóng)7為，741，關療寧.黑木耳營養(yǎng)保健功能及其產(chǎn)品開發(fā).保鮮與加工，2010，10 (1):54-56.)。傳統(tǒng)中醫(yī)認為，黑木耳性味甘平，具有清肺潤腸、滋陰補血、活血化瘀、明目養(yǎng)胃等功效，對崩漏、痔瘡、 血痢、貧血及便秘等癥狀有效?，F(xiàn)代藥理學研究表明，黑木耳的生物活性主要來自其多糖成分，黑木耳多糖作為“生物應答效應物”，具有抗凝血、抗腫瘤、抗炎癥等細胞保護作用，還具有降低血脂、血糖、血液粘度、膽固醇以及抗糖尿病、抗衰老、抗輻射等多種生物功能Of資剛，全永亮，管斌，胡勇.黑木耳多糖研究進展.糧油食品科技，2010，18 (1) :47-54.)。但研究發(fā)現(xiàn)，黑木耳中性多糖由于其溶解性差，極大的限制了其進一步的研究和在食品、藥品開發(fā)中的應用。分子修飾是通過化學、物理學及生物學等手段對化合物分子進行結(jié)構(gòu)改造，以獲得不同結(jié)構(gòu)類型衍生物的方法。對多糖進行分子修飾，有利于改變多糖的結(jié)構(gòu)，改善多糖的溶解性，增強天然多糖的生物活性或使多糖產(chǎn)生新的活性，還可降低多糖類藥物的毒副作用，從而有利于多糖類藥物的開發(fā)與應用。多糖分子修飾的方法主要有硫酸化修飾、磷酸化修飾、乙?；揎?、烷基化修飾、磺?；揎?、羧甲基化修飾等(張難，吳遠根，莫莉萍，張永鳳，邱樹毅，王文平.多糖的分子修飾研究進展.貴州科學，2008，26 (3):66-71.)。羧甲基化作為一種常用的修飾方法，已成為人們關注的焦點。2010年，吳廣楓，李平蘭等申請的專利“一種所佳話雙歧桿菌胞外多糖及其制備方法和應用”(申請?zhí)?201001248295. 6)，將胞外多糖與氯乙酸在堿溶液中反應得到羧甲基雙歧桿菌胞外多糖，并證明該多糖可以顯著提高小鼠脾細胞中IL-2、IFNy細胞因子水平，免疫調(diào)節(jié)力顯著高于未改性的雙歧桿菌胞外多糖。2005年，郭祀遠等申請的專利“羧甲基裂褶多糖制備方法及在化妝品和抗腫瘤藥物中應用”(申請?zhí)?00510101678.Χ)，發(fā)現(xiàn)羧甲基化多糖的溶解性得到顯著改善，并且保持良好的流變性能和抗腫瘤活性。本發(fā)明人對黑木耳多糖進行羧甲基化，確定其結(jié)構(gòu)特征，比較研究了羧甲基化前后多糖的溶解性和抗氧化活性。有關黑木耳多糖羧甲基化衍生物的制備和抗氧化活性研究至今未見國內(nèi)外文獻報道，也未見相應專利公開
發(fā)明內(nèi)容
為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明提供一種羧甲基化黑木耳多糖及其制備方法和應用。一、本發(fā)明的第一個目的在于提供一種羧甲基化黑木耳粗多糖和羧甲基化黑木耳多糖。一種羧甲基化黑木耳粗多糖(CMAAP)，其多糖得率為61. 36% ；羧甲基化取代度為 0. 857 ；溶解度為 0. 6 mg/mL。一種羧甲基化黑木耳多糖(CMAAP22)，該多糖分子量為3. 4X IO6 Da ；單糖組成為 甘露糖(man)葡萄糖(glu) = 1. 06 1 ；該多糖以β-(1 — 3)-D- man為主鏈，glu以取代基的形式鍵和于甘露糖的0-2和0-6位，糖殘基的C-2，C-4和C-6位由-CH2COOH部分取代；該多糖溶解度為26 mg/mL。本發(fā)明的第二個目的在于提供上述羧甲基化黑木耳粗多糖和羧甲基化黑木耳多糖的制備方法，按照下述步驟進行
(1)黑木耳多糖的提取方法
以料液比1 50-1 70(m/v)，在溫度80-100°C水中提取2_4h，提取2次，合并上清液，上清液經(jīng)濃縮后，加入乙醇醇沉，使得多糖的濃縮液中乙醇濃度為60-85% (v/v)，所得沉淀離心、經(jīng)冷凍干燥24-48h后得黑木耳粗多糖(AAP)； ⑵羧甲基化黑木耳多糖的制備
取上述傳統(tǒng)水提醇沉所得黑木耳粗多糖，以料液比l:40(m/v)加入異丙醇，室溫劇烈攪拌15min ；在上述溶液中按照體積比40 7的比例逐滴加入質(zhì)量濃度為20%氫氧化鈉溶液， 室溫下攪拌反應一定時間；再按照黑木耳粗多糖與氯乙酸質(zhì)量比1 :0. 5-1. 5的比例加入氯乙酸，于20-60°C恒溫水浴鍋中反應2-4 h ；反應液用稀鹽酸中和至中性，經(jīng)透析、濃縮和醇沉后即得羧甲基化黑木耳粗多糖(CMAAP)；
(3)取羧甲基化黑木耳粗多糖，用適量水溶解，離心除去不溶物，上清液通過DEAE-52 離子交換柱進行分離；逐步以0-1 mol/L的NaCl溶液洗脫，用硫酸-苯酚法繪制洗脫曲線， 根據(jù)洗脫曲線分別收取合并洗脫液，其中0. lmol/L NaCl的洗脫液經(jīng)濃縮、透析后，上葡聚糖凝膠柱，以0.1 mol/L NaCl洗脫，根據(jù)洗脫曲線收取合并洗脫液，經(jīng)濃縮、透析、凍干得羧甲基化黑木耳多糖(CMAAP22)。三、本發(fā)明的第三個目的在于提供羧甲基化黑木耳粗多糖和羧甲基化黑木耳多糖作為抗氧化劑在功能食品和食品添加劑中的應用。該發(fā)明的優(yōu)點是(1)本發(fā)明采用分子修飾的方法制備出羧甲基化黑木耳粗多糖和羧甲基化黑木耳多糖；(2)本發(fā)明的羧甲基化黑木耳粗多糖和羧甲基化黑木耳多糖的溶解性好，其溶解度分別是未羧甲基化黑木耳多糖的6倍和260倍；(3)本發(fā)明的羧甲基化黑木耳粗多糖和羧甲基化黑木耳多糖的抗氧化活性顯著提高，可作為抗氧化劑，應用于功能食品和食品添加劑。


圖1是羧甲基黑木耳多糖的13C-NMR譜圖； 圖2是對· OH的清除率；
圖3是對DPPH ·的清除率；圖4是對ABTS+的清除率。
具體實施例方式實施例1
稱取IOOg黑木耳粉末，置于圓底燒瓶中，按料液比1:50、浸提時間2h、浸提溫度80°C， 在熱水浴中回流浸提2次，冷卻后離心，合并上清液；上述清液經(jīng)減壓濃縮，加入4倍體積 95%乙醇進行沉淀，所得沉淀經(jīng)離心、冷凍干燥后得粗多糖(AAP)樣品粉末。黑木耳多糖得率為20.52%。取黑木耳粗多糖樣品1. Og溶于40mL異丙醇中，室溫下劇烈攪拌15min后， 將7mL的20%的NaOH逐滴加入上述攪拌液中，室溫下攪拌反應lh，再將0. 5g氯乙酸溶于少量蒸餾水中，慢慢加入上述反應液中，反應混合液置于20°C恒溫水浴鍋中反應2h，待冷卻至室溫，反應產(chǎn)物用稀鹽酸中和至PH為7，流水透析24h，蒸餾水透析48h后，濃縮至一定體積，用4倍95%乙醇在4°C下沉淀12h，冷凍干燥得羧甲基化黑木耳粗多糖(CMAAP)。所得羧甲基化黑木耳粗多糖的得率為39. 75%。實施例2
稱取IOOg黑木耳粉末，置于圓底燒瓶中，按料液比1:60、浸提時間3h、浸提溫度90°C， 在熱水浴中回流浸提2次，其余步驟同實例1中黑木耳粗多糖的提取方法，得黑木耳多糖得率為27. 23%。取黑木耳粗多糖樣品1. Og溶于40mL異丙醇中，室溫下劇烈攪拌15min后， 將7mL的20%的NaOH逐滴加入上述攪拌液中，室溫下攪拌反應lh，再將1. Og氯乙酸溶于少量蒸餾水中，慢慢加入上述反應液中，反應混合液置于40°C恒溫水浴鍋中反應3h，其余步驟同實例1中羧甲基化黑木耳粗多糖的制備方法，得羧甲基化黑木耳粗多糖的得率為 54. 69%ο實施例3
稱取IOOg黑木耳粉末，置于圓底燒瓶中，按料液比1 70、浸提時間4h、浸提溫度100°C、 在熱水浴中回流浸提2次，其余步驟同實例1中黑木耳粗多糖的提取方法，得黑木耳多糖得率為32. 24%。取黑木耳粗多糖樣品1. Og溶于40mL異丙醇中，室溫下劇烈攪拌15min后， 將7mL的20%的NaOH逐滴加入上述攪拌液中，室溫下攪拌反應lh，再將1. 5g氯乙酸溶于少量蒸餾水中，慢慢加入上述反應液中，反應混合液置于60°C恒溫水浴鍋中反應4h，其余步驟同實例1中羧甲基化黑木耳粗多糖的制備方法，得羧甲基化黑木耳粗多糖的得率為 61. 36%ο實施例4羧甲基化黑木耳多糖的制備 步驟一、羧甲基化黑木耳粗多糖的純化
1、實驗材料 1.1藥品與試劑黑木耳粗多糖；
DEAE-52纖維素交換樹脂，英國Whatman公司； sephadex G-100，英國 Whatman 公司。Dextran Τ—10，Τ—40，Τ—70，T—500，T—2000 禾口 Blue Dextran T—2000，Pharmacia 公司。1.2 儀器UV-7502 PC可見分光光度計，上海茂欣儀器有限公司層析柱1.6CmX50Cm，上海滬西分析儀器廠有限公司 DHL-A電腦恒流泵，上海滬西分析儀器廠有限公司 DBS-100電腦自動分部收集器，上海滬西分析儀器廠有限公司 2、實驗方法
稱取上述實施例1-3中制備的并經(jīng)透析、濃縮和醇沉后的羧甲基化黑木耳粗多糖150mg，溶于IOmL蒸餾水中，充分溶解后離心，將上清液滴加到DEAE-52層析柱中， 0-1. Omol/L的NaCl水溶液進行洗脫，使用DHL-A恒流泵，控制流速lmL/min，用自動分部收集器收集。6min收集一管，每管收集6mL，收集液每管用苯酚-硫酸法跟蹤檢測，以蒸餾水為空白，于490nm的波長下測定吸光度，直到不再有糖檢出。根據(jù)洗脫曲線，合并各洗脫峰的洗脫液，其中0. lmol/L NaCl的洗脫液用蒸餾水透析72h，減壓濃縮，凍干，上述步驟所得多糖組分上葡聚糖凝膠柱，用0. 1 mol/LNaCl溶液洗脫，使用DHL-A恒流泵，控制流速0. 3mL/ min,用分部自動收集器收集，每管收集3mL，收集液每管用苯酚_硫酸法跟蹤檢測，以蒸餾水為空白，于490nm的波長下測定吸光度，直到不再有糖檢出。繪制洗脫曲線，合并洗脫峰的洗脫液，用蒸餾水透析72h，減壓濃縮，凍干得到羧甲基化黑木耳多糖組分(CMAAP22)。3、實驗結(jié)果
得到羧甲基化黑木耳多糖組分(CMAAP22)。步驟二、羧甲基化黑木耳粗多糖和羧甲基化黑木耳多糖的物化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)特征
1、實驗材料
1.1藥品與試劑
黑木耳多糖；氯化鈉、硫酸、三氯乙酸、苯酚、氫氧化鈉、鹽酸、醋酸鈉、鹽酸羥胺、肌醇、 吡啶、醋酸酐、葡萄糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖、高碘酸鈉、剛果紅等均為分析純。1. 2 儀器
LC-10AVP高效液相色譜系統(tǒng)，日本島津
TSK-GEL G4000PW (7. 5X300mm), TOSOH 公司
預柱TSK-GUARD COLUMN PWH (7. 5 X 75mm)，T0S0H 公司
ALPHA2-4冷凍干燥設備，德國CHRIST公司
PHS-2C型酸度計，上海分析儀器廠
R-200型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，瑞士 BUchi公司
GC 2010氣相色譜系統(tǒng)，日本島津
RTS-5氣相毛細管柱，(30mX0. 32 mm)
NEXUS 670智能型傅立葉紅外光譜儀，美國尼高利公司
核磁共振儀，Braker
2、實驗方法
2. 1溶解度的測定根據(jù)2005版藥典進行測定。2. 2羧甲基度測定
準確稱取IOmg羧甲基化黑木耳多糖放入IOOmL燒杯中，加入4 mLO. 2mol/L的鹽酸溶液(70%的甲醇溶液配制)，攪拌反應3h。用80%的甲醇溶液洗滌固體至溶液中無Cl_為止。CN 102321186 A
說明書
5/6頁
樣品用0. 01mol/L的NaOH標準溶液溶解，微熱條件下使溶液呈透明后，立即用0. 01mol/L 標準鹽酸溶液反滴定，取代度按下式計算 B= (CNaOH X VNaOH — CHCl X VHCl) /W DS=O. 162B/ (1 - 0. 058B)
W為樣品質(zhì)量(g)，B為每克樣品消耗的NaOH的毫摩爾數(shù)(mmol/g)。2. 3分子量的測定
按照多糖的常規(guī)方法，以分子量已知的Τ-10, T-40, T-70, T-500和T-2000為標準， LC-10AVP島津高效液相色譜系統(tǒng)，色譜柱為TSK-GEL G4000PW (7. 5X300mm)，流動相為 0.003mol/L的醋酸鈉溶液，流速0.8mL/min ；檢測器SHIMADZU RID-10A，溫度25°C。多糖溶液過0. 45 μ m的濾膜，進樣10 μ L02. 4單糖組成分析
精密稱取多糖樣品5mg于安瓿瓶中，用2mol/L的硫酸溶液溶解，封口，100°C烘箱中加熱水解他后，水解液加碳酸鋇中和至中性，以4000 r/min離心除去BaSO4沉淀，上清液冷凍干燥。水解產(chǎn)物經(jīng)乙?；笥脥u津GC 2010氣相色譜系統(tǒng)分析。2. 5 IR 測定
取Img經(jīng)干燥的多糖樣品，與10(T200mg經(jīng)干燥的KBr粉末在瑪瑙研缽中輕輕研磨均勻(在紅外燈下操作)。經(jīng)壓片機壓成薄片，于NEXUS 670智能型傅立葉紅外光譜儀測定獲得紅外光譜圖。2. 6 NMR 測定
取多糖樣品20mg經(jīng)D2O交換3次后，溶于0. 5mLD20中，用BRUKER400型核磁共振儀， 13C-NMR (100MHz，溫度 673. ^O (參見圖 1)。3、實驗結(jié)果
黑木耳粗多糖溶解度為0. 1 mg/mL，羧甲基化黑木耳粗多糖溶解度為0.6 mg/mL，羧甲基黑木耳多糖溶解度為沈mg/mL。羧甲基化黑木耳多糖(CMAAP)的得率為61. 36%;所得羧甲基化黑木耳多糖的羧甲基化取代度為0.857。CMAAP22分子量為3. 4X106 Da。CMAAP22 由甘露糖和葡萄糖組成，其摩爾比分別為1.06 1。黑木耳多糖經(jīng)羧甲基化后的多糖于 1600 011^,1420^1處均出現(xiàn)強吸收峰，(為-C00-的特征吸收峰，其中1600 cnT1左右處為-C-0-的非對稱伸縮振動吸收峰，1420cm-1左右處為-C_0_的對稱伸縮振動吸收峰)，表明已羧甲基化。圖1為羧甲基黑木耳多糖的13C-NMR譜圖，該多糖以—3)-D- man 為主鏈，glu以取代基的形式鍵和于甘露糖的0-2和0-6位，糖殘基的C-2，C-4和C-6位由-CH2COOH部分取代，這種取代是非選擇性的。試驗一羧甲基化黑木耳粗多糖和羧甲基化黑木耳多糖的抗氧化作用 1、實驗材料
1.1藥品與試劑
黑木耳多糖配制成生藥濃度2 mg/mL的水溶液備用； DPPH溶液配制成0. 2 mmol/L的無水乙醇溶液； 鄰二氮菲溶液配制成0. 75 mmol/L的無水乙醇溶液； 磷酸鹽緩沖溶液配制成0. 2 mmol/L pH7. 40的緩沖溶液； 硫酸亞鐵溶液配制成0. 75 mmol/L的無水乙醇溶液；雙氧水配置成0. 01%的雙氧水； ABTS+溶液配制成0. 2 mmol/L的溶液；
1.2儀器
TU-1800紫外可見分光光度計北京普析通用儀器有限責任公司； BS124S電子天平北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司； 冷凍干燥機FD-1C-50 北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司； 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52C:鞏義市予華儀器有限責任公司；
2、實驗方法
2. 1黑木耳多糖清除OH自由基作用
將多糖樣品配置成不同濃度的溶液。吸取6mmol/L FeSO4溶液2mL，加入2mL樣品溶液， 再加入6mmol/LH2A溶液2mL，搖勻，靜置lOmin，再加入6mmol/L的水楊酸溶液2mL，搖勻， 靜置30min，于510nm處測定吸光度值(Ai )，以蒸餾水代替水楊酸測得吸光度(Aj )，以蒸餾水代替樣品溶液作為空白測的吸光度(Atl),重復三次。清除率按下式計算 清除率(％) =[1- (Ai-Aj) /A0] X 100 2. 2黑木耳多糖清除DPPH ·自由基作用
分別取2mL不同濃度的樣品液于試管中，加入2mL 2X 10_4mOl/L的DPPH ·溶液(以無水乙醇配制)，混合均勻，暗處反應30分鐘后于517nm處測定其吸光度(Ai),以蒸餾水代替樣品液測得空白吸光度(Atl),重復三次。清除率按下式計算 清除率(％) = (A0-Ai) /A0X 100
2.3黑木耳多糖清除ABTS+自由基作用
分別取0. 2mL的樣品溶液與3. 8mL上述ABTS分析溶液混合，6min后在734nm處測定吸光度Ai。以蒸餾水代替ABTS分析溶液，測得吸光度Aj，以蒸餾水代替樣品溶液測得吸光度
A00清除率(％)=[l-(Ai-Aj)/A0] XlOO
3、實驗結(jié)果
圖2為黑木耳多糖對· OH的清除作用，可以看到黑木耳多糖羧甲基化前后各組分對· OH自由基有一定的清除作用，且羧甲基化修飾后多糖的抗氧化活性皆優(yōu)于修飾前多糖。在濃度為2mg/mL時，經(jīng)修飾的CMAAP22和CMAAP的清除率分別為52. 13%和38. 42%(修飾前AAP為27. 75%)。圖3為黑木耳多糖對DPPH ·的清除作用，黑木耳多糖羧甲基化前后各組分對DPPH ·均有一定的清除作用，且羧甲基化修飾后多糖的抗氧化活性皆優(yōu)于修飾前多糖。在濃度為1. 5mg/mL時，經(jīng)修飾的CMAAP22和CMAAP的清除率分別為78. 95%和63. 03% (修飾前AAP為46. 38%)。圖4為黑木耳多糖對ABTS+的清除作用，黑木耳多糖羧甲基化前后各組分對ABTS+均有一定的清除作用，且羧甲基化修飾后多糖的抗氧化活性皆優(yōu)于修飾前多糖，弱于Vc。在濃度為2mg/mL時，CMAAP22和CMAAP的清除率分別為65. 53%和55. 88% (修飾前AAP為38. 30%)。4、結(jié)論
與未羧甲基化黑木耳多糖相比，羧甲基化黑木而多糖對DPPH自由基、羥自由基和ABTS+ 自由基的清除都有很大的提高。
權(quán)利要求
1.一種羧甲基化黑木耳多糖，其特征在于該多糖分子量為3.4X106 Da;單糖組成為 甘露糖(man)葡萄糖(glu) = 1. 06 1 ；該多糖以β - (1 — 3)-D- man為主鏈，glu以取代基的形式鍵和于甘露糖的0-2和0-6位，糖殘基的C-2，C-4和C-6位由-CH2COOH部分取代；該多糖溶解度為26 mg/mL。
2.一種羧甲基化黑木耳粗多糖，其特征在于其多糖得率為61. 36% ；羧甲基化取代度為 0. 857 ；溶解度為 0. 6 mg/mL。
3.權(quán)利要求1所述的一種羧甲基化黑木耳多糖的制備方法，其特征在于按照下述步驟進行(1)黑木耳多糖的提取方法以料液比1 50-1 70，在溫度80-100°C水中提取2_4h，提取2次，合并上清液，上清液經(jīng)濃縮后，加入乙醇醇沉，使得多糖的濃縮液中乙醇濃度為60-85%，所得沉淀離心、經(jīng)冷凍干燥24-48h后得黑木耳粗多糖；⑵羧甲基化黑木耳多糖的制備取上述傳統(tǒng)水提醇沉所得黑木耳粗多糖，以料液比1:40加入異丙醇，室溫劇烈攪拌 15min ；在上述溶液中按照體積比40 7的比例逐滴加入質(zhì)量濃度為20%氫氧化鈉溶液，室溫下攪拌反應一定時間；再按照黑木耳粗多糖與氯乙酸質(zhì)量比1 :0. 5-1. 5的比例加入氯乙酸，于20-60°C恒溫水浴鍋中反應2-4 h ；反應液用稀鹽酸中和至中性，經(jīng)透析、濃縮和醇沉后即得羧甲基化黑木耳粗多糖；(3)取羧甲基化黑木耳粗多糖，用適量水溶解，離心除去不溶物，上清液通過DEAE-52 離子交換柱進行分離；逐步以0-1 mol/L的NaCl溶液洗脫，用硫酸-苯酚法繪制洗脫曲線， 根據(jù)洗脫曲線分別收取合并洗脫液，其中0. lmol/L NaCl的洗脫液經(jīng)濃縮、透析后，上葡聚糖凝膠柱，以0.1 mol/L NaCl洗脫，根據(jù)洗脫曲線收取合并洗脫液，經(jīng)濃縮、透析、凍干得羧甲基化黑木耳多糖。
4.權(quán)利要求2所述的一種羧甲基化黑木耳粗多糖的制備方法，其特征在于按照下述步驟進行(1)黑木耳多糖的提取方法以料液比1 50-1 70，在溫度80-100°C水中提取2_4h，提取2次，合并上清液，上清液經(jīng)濃縮后，加入乙醇醇沉，使得多糖的濃縮液中乙醇濃度為60-85%，所得沉淀離心、經(jīng)冷凍干燥24-48h后得黑木耳粗多糖；⑵羧甲基化黑木耳多糖的制備取上述傳統(tǒng)水提醇沉所得黑木耳粗多糖，以料液比1:40加入異丙醇，室溫劇烈攪拌 15min ；在上述溶液中按照體積比40 7的比例逐滴加入質(zhì)量濃度為20%氫氧化鈉溶液，室溫下攪拌反應一定時間；再按照黑木耳粗多糖與氯乙酸質(zhì)量比1 :0. 5-1. 5的比例加入氯乙酸，于20-60°C恒溫水浴鍋中反應2-4 h ；反應液用稀鹽酸中和至中性，經(jīng)透析、濃縮和醇沉后即得羧甲基化黑木耳粗多糖。
5.權(quán)利要求1所述的一種羧甲基化黑木耳多糖作為抗氧化劑在功能食品和食品添加劑中的應用。
6.權(quán)利要求2所述的一種羧甲基化黑木耳粗多糖作為抗氧化劑在功能食品和食品添加劑中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種羧甲基化黑木耳多糖、粗多糖及其制備方法和應用，屬于多糖改性技術(shù)領域。該羧甲基化黑木耳粗多糖的取代度為0.857，溶解度為0.6mg/ml；羧甲基化黑木耳多糖的溶解度為26mg/ml，分子量為3.4×106Da。本發(fā)明的羧甲基化黑木耳粗多糖和羧甲基化黑木耳多糖的體外抗氧化實驗表明，該多糖與未羧甲基化黑木耳多糖相比，在DPPH自由基、羥自由基、ABTS+自由基的清除作用方面有顯著的提高，并且其溶解性顯著提高，可作為抗氧化劑，用作功能食品和食品添加劑。
文檔編號C08B37/00GK102321186SQ20111021904
公開日2012年1月18日 申請日期2011年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月2日
發(fā)明者仰榴青, 吳向陽, 周葉, 張冰濤, 張敏, 趙婷, 魏紅 申請人:江蘇大學