專利名稱：靈芝多糖提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種以靈芝為原料提取成分方法，特別涉及靈芝多糖提取方法。
背景技術(shù)：
靈芝多糖是由三股單糖鏈構(gòu)成的、具有螺旋狀立體構(gòu)形(三級結(jié)構(gòu))的葡聚糖，其立體構(gòu)形與脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)相似，是一種大分子化合物，其分子量從 數(shù)千到數(shù)十萬，它是一種從靈芝孢子粉或靈芝中提取的物質(zhì)。不溶于高濃度的乙醇，微溶于低濃度的乙醇及冷水，在熱水中能全部溶解。靈芝多糖都存在于靈芝的細胞壁內(nèi)壁。靈芝多糖中除含有葡萄糖外，大多還含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、巖藻糖、甘露糖、鼠李糖等單糖，但含量較少。傳統(tǒng)的靈芝多糖提取方法主要是采用熱水浸提法、酸浸提法、堿浸提法提取。酸或堿浸提法雖能提高提取率，但對設(shè)備要求高且極易破壞多糖的結(jié)構(gòu)，還存在環(huán)境污染問題。另外由于靈芝子實體由纖維素、半纖維素和木質(zhì)素等主要成分構(gòu)成，結(jié)構(gòu)緊密，活性多糖有效成分附著在細胞壁內(nèi)側(cè)，傳統(tǒng)的熱水浸提法時間長、耗能高，活性成分提取物得率低。中國專利CN1181271介紹了使用低壓水煮工藝，多糖的藥理活性比常規(guī)水煮要高，但多糖提取率偏低，且所得提取物中靈芝三萜酸含量也偏低。中國專利CN1560072通過采用超臨界CO2萃取靈芝三萜酸提取液，提余物再經(jīng)熱水浸提得靈芝多糖提取液。但該方法所需設(shè)備投入較大、操作難度和生產(chǎn)成本也較高，且靈芝多糖提取率偏低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種安全環(huán)保高效的提取靈芝多糖的方法。發(fā)明的一種實施方式，提供一種靈芝三職的提取方法，包括I)獲取靈芝干粉，向靈芝干粉中加入復合酶溶液，在35 60°C下復合酶作用酶解I 4h，酶解結(jié)束后加熱滅活復合酶；2)加熱滅活后的靈芝干粉加入乙醇，使乙醇濃度達40% 80%，調(diào)pH值為9 10，在40°C 90°C下進行頻率為20 IOOKHz的超聲處理，超聲處理2 4h后分離出不溶物；3)將步驟2)分離得到的不溶物中加入乙醇調(diào)節(jié)乙醇濃度為40% 80%，在40°C 90°C下進行頻率為20 IOOKHz的超聲處理，超聲處理2 4h后分離出最終不溶物；4)將步驟3)得到的終不溶物調(diào)節(jié)pH為中性，除醇，加入8倍于終不溶物重量的水，在50°C 90°C下進行水提，將所得水提提取液進行濃縮，噴干，得到靈芝多糖。復合酶溶液中復合酶為木瓜蛋白酶、纖維素酶和果膠酶中任意兩種或三種混合物。木瓜蛋白酶用量為每克靈芝干粉4800 800000U、纖維素酶用量為每克靈芝干粉90 1500U，果膠酶用量為每克靈芝干粉32 200U。步驟I)中復合酶溶液用量為每克靈芝干粉加入3mL。
步驟2)中使用的氫氧化鈉為飽和溶液。步驟3)中使用lmol/L的HCl調(diào)節(jié)pH。步驟3)中水提共進行兩次。步驟4)中加水量為8倍于終不溶物質(zhì)量。本發(fā)明方法所用溶劑安全，避免了傳統(tǒng)方法中采用氯仿、甲醇等有機溶劑對環(huán)境的污染。與超臨界二氧化碳萃取法相比，具有提取設(shè)備簡單、操作方便、成本低、速度快、收效高等特點。采用生物酶酶解原料后再提取 相對于傳統(tǒng)的熱水浸提法，可使靈芝多糖的提取率和含量得到較大提高。
具體實施例方式下述實施例中的實驗方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法，除醇和濃縮方法皆為減壓旋蒸法，所用的酶與試劑為市售商業(yè)產(chǎn)品。下面對發(fā)明作進一步詳細的說明。實施例I :(I)取50. Og粉碎好的干燥靈芝子實體，裝入超聲萃取釜中，將復合酶(0.6g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g ;和I. 2g纖維素酶，酶活15000U/g)加入到150ml水中，并將該溶液加入到超聲萃取釜中，在35°C下對原料進行酶解4h，酶解結(jié)束后，升溫至100°C滅酶0. 5h。(2)向釜中加入95%的乙醇和水，至提取液體積達到500ml，乙醇濃度達到40%，再加入氫氧化鈉飽和溶液調(diào)PH為9后，加熱至40°C，保溫提取2h，期間使用50KHz的超聲波超聲lOmin，一釜原料提取2次。(3)分離得提取液和靈芝渣子，提取液可用于提取靈芝三萜，渣子用lmol/L的HCl調(diào)PH為中性后并除醇，加入靈芝重量8倍量的水，在50°C條件下進行水提4h，共提取2次，將水提所得提取液進行濃縮后噴干得靈芝多糖，得率為2. 74%，多糖含量為32. 3%。實施例2 (I)取50. Og粉碎好的干燥靈芝子實體，裝入超聲萃取釜中，將復合酶(I. 2g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g ;和0. 6g纖維素酶，酶活15000U/g)加入到150ml水中，并將該溶液加入到超聲萃取釜中，在50°C下對原料進行酶解3h，酶解結(jié)束后，升溫至100°C滅酶0. 5h。(2)向釜中加入95%的乙醇和水，至提取液體積達到500ml，乙醇濃度達到50%，再加入氫氧化鈉飽和溶液調(diào)PH為10后，加熱至50°C，保溫提取2h，期間使用20KHz的超聲波超聲50min，一釜原料提取2次。(3)分離得提取液和靈芝渣子，提取液可用于提取靈芝三萜，渣子調(diào)pH為中性后并除醇，加入靈芝重量8倍量的水，在60°C條件下進行水提3h，共提取2次，將水提所得提取液進行濃縮后噴干得靈芝多糖，得率為3. 12%，多糖含量為36.8%。實施例3 (I)取50. Og粉碎好的干燥靈芝子實體，裝入超聲萃取釜中，將復合酶(0. 3g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g ；0. 3g纖維素酶，酶活15000U/g ;和5. Og果膠酶，酶活20000U/g)加入到150ml水中，并將該溶液加入到超聲萃取釜中，在50°C下對原料進行酶解2h，酶解結(jié)束后，升溫至100°C滅酶0. 5h。(2)向釜中加入95%的乙醇和水，至提取液體積達到500ml，乙醇濃度達到70%，再加入燒堿調(diào)pH為10后，加熱至60°C，保溫提取2h，期間使用IOOKHz的超聲波超聲90min，一釜原料提取2次。(3)分離得提取液和靈芝渣子，提取液可用于提取靈芝三萜，渣子調(diào)pH為中性后并除醇，加入靈芝重量8倍量的水，在70°C條件下進行水提2h，共提取2次，將水提所得提取液進行濃縮后噴干得靈芝多糖，得率為3. 33%，多糖含量為35. 8%。實施例4 (I)取50. Og粉碎好的干燥靈芝子實體，裝入超聲萃取釜中，將復合酶(0. Sg木瓜蛋白酶，酶活800000U/g ；0. 8g纖維素酶，酶活15000U/g ;和0. 8g果膠酶，酶活20000U/g)加入到150ml水中，并將該溶液加入到超聲萃取釜中，在60°C下對原料進行酶解lh，酶解結(jié)束后，升溫至100°C滅酶0. 5h。 (2)向釜中加入95%的乙醇和水，至提取液體積達到500ml，乙醇濃度達到80%，再加入燒堿調(diào)PH為9后，加熱至70°C，保溫提取2h，期間使用80KHz的超聲波超聲30min，一釜原料提取2次。(3)分離得提取液和靈芝渣子，提取液可用于提取靈芝三萜，渣子調(diào)pH為中性后并除醇，加入靈芝重量8倍量的水，在80°C條件下進行水提2h，共提取2次，將水提所得提取液進行濃縮后噴干得靈芝多糖，得率為3. 34%，多糖含量為38. 6%。實施例5 (I)取50. Og粉碎好的干燥靈芝子實體，裝入超聲萃取釜中，將復合酶(2. Og木瓜蛋白酶，酶活800000U/g ；2. Og纖維素酶，酶活15000U/g ;和0. 8g果膠酶，酶活20000U/g)加入到150ml水中，并將該溶液加入到超聲萃取釜中，在60°C下對原料進行酶解lh，酶解結(jié)束后，升溫至100°C滅酶0. 5h。(2)向釜中加入95%的乙醇和水，至提取液體積達到500ml，乙醇濃度達到75%，再加入燒堿調(diào)PH為9后，加熱至90°C，保溫提取2h，期間使用70KHz的超聲波超聲40min，一釜原料提取2次。(3)分離得提取液和靈芝渣子，提取液可以用提取靈芝三萜，渣子調(diào)pH為中性后并除醇，加入靈芝重量8倍量的水，在90°C條件下進行水提2h，共提取2次，將水提所得提取液進行濃縮后噴干得靈芝多糖，得率為3. 63%，多糖含量為38.4%。以上所述的僅是本發(fā)明的一些實施方式。對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明創(chuàng)造構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于發(fā)明的保護范圍。
權(quán)利要求
1.靈芝多糖提取方法，包括如下步驟 1)獲取靈芝干粉，向靈芝干粉中加入復合酶溶液，在35 60°C下復合酶作用酶解I 4h，酶解結(jié)束后加熱滅活復合酶； 2)向加熱滅活后的靈芝干粉中加入乙醇，使乙醇濃度達40% 80%，調(diào)pH值為9 10，在40°C 90°C下進行頻率為20 IOOKHz的超聲處理，超聲處理2 4h后分離出不溶物； 3)將步驟2)分離得到的不溶物中加入乙醇，使酒精濃度達40% 80%，在40°C 90°C下進行頻率為20 IOOKHz的超聲處理，超聲處理2 4h后分離出最終不溶物； 4)將步驟3)得到的終不溶物調(diào)節(jié)pH為中性，除醇，加水在50°C 90°C下進行水提，將所得水提提取液進行濃縮，噴干，得到靈芝多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的靈芝多糖提取方法，其特征在于所述復合酶溶液中復合酶為木瓜蛋白酶、纖維素酶和果膠酶中任意兩種或三種混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的靈芝多糖提取方法，其特征在于所述木瓜蛋白酶用量為每克靈芝干粉4800 800000U、纖維素酶用量為每克靈芝干粉90 1500U，果膠酶用量為每克靈芝干粉32 200U。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的靈芝多糖提取方法，其特征在于所述步驟I)中復合酶溶液用量為每克靈芝干粉加入3mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的靈芝多糖提取方法，其特征在于所述步驟2)中使用的氫氧化鈉為飽和溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述的靈芝多糖提取方法，其特征在于所述步驟3)中使用lmol/L 的 HCl 調(diào)節(jié) pH。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項所述的靈芝多糖提取方法，其特征在于所述步驟3)中水提共進行兩次。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項所述的靈芝多糖提取方法，其特征在于所述步驟4)中加水量為8倍于終不溶物質(zhì)量。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種靈芝多糖的提取方法。該方法步驟包括復合酶酶解靈芝子實體、超聲波處理和靈芝多糖提取。本發(fā)明具有溶劑安全，避免了傳統(tǒng)方法中采用氯仿、甲醇等有機溶劑對環(huán)境的污染。與超臨界二氧化碳萃取法相比，具有提取設(shè)備簡單、操作方便、成本低、速度快、收效高等特點。采用生物酶酶解原料后再提取相對于傳統(tǒng)的熱水浸提法，可使靈芝多糖的提取率和含量得到較大提高的效果。
文檔編號C08B37/02GK102766221SQ201210289180
公開日2012年11月7日 申請日期2012年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月15日
發(fā)明者賈利忠 申請人:蘇州菩蕓生物科技有限公司