針對(duì)降鈣素基因相關(guān)肽的拮抗劑抗體及其使用方法本申請(qǐng)是中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)200680042443.0(PCT/IB2006/003181)的分案申請(qǐng)，母案申請(qǐng)日為2006年11月2日，題目為“針對(duì)降鈣素基因相關(guān)肽的拮抗劑抗體及其使用方法”。本申請(qǐng)要求于2005年11月14日提交的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)No.60/736，623的優(yōu)先權(quán)，其通過(guò)引用并入本文。技術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明涉及抗CGRP拮抗劑抗體用于預(yù)防、改善或治療血管運(yùn)動(dòng)癥狀如CGRP相關(guān)頭痛(例如偏頭痛)和熱潮紅的用途。

背景技術(shù)：
CGRP(降鈣素基因相關(guān)肽)是37個(gè)氨基酸的神經(jīng)肽，其屬于肽家族，包括降鈣素、腎上腺髓質(zhì)素和淀粉不溶素。在人中，存在兩種形式的CGRP(α-CGRP和β-CGRP)，它們具有類(lèi)似的活性。它們有三個(gè)氨基酸不同，并顯示不同的分布。至少兩種CGRP受體亞型也可解釋有差異的活性。CGRP是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)遞質(zhì)，并已顯示是外周中有效的血管擴(kuò)張藥，含CGRP的神經(jīng)元在外周與血管緊密結(jié)合。CGRP介導(dǎo)的血管擴(kuò)張也與神經(jīng)原性炎癥相關(guān)(其作為導(dǎo)致原生質(zhì)外滲和微脈管系統(tǒng)血管舒張的事件級(jí)聯(lián)的一部分)，其存在于偏頭痛中。CGRP因其與血管運(yùn)動(dòng)癥狀的可能聯(lián)系而被注意(Wyonetal.Scand.J.Urol.Nephrol.35：92-96(2001)；Wyonetal.Menopause7(1)：25-30(2000))。血管運(yùn)動(dòng)癥狀(VMS)如熱潮紅和寢汗是與絕經(jīng)相關(guān)的最常見(jiàn)癥狀，發(fā)生在所有在天然或手術(shù)誘導(dǎo)后絕經(jīng)女性的60％到80％中。熱潮紅很可能是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)對(duì)減退的性類(lèi)固醇的適應(yīng)性應(yīng)答(FreedmanAm.J.HumanBiol.13：453-464(2001))。迄今為止，對(duì)于潮紅的最有效的療法是基于激素的治療，所述激素包括雌激素和/或一些黃體酮。激素治療能夠有效緩和潮紅，但是不適合所有女性。觀察到的心理和情緒癥狀(如神經(jīng)質(zhì)、疲勞、易激惹、失眠、抑郁、失憶、頭痛、焦慮、神經(jīng)質(zhì)或不能集中)被認(rèn)為是由熱潮紅和寢汗后的睡眠缺乏引起的(Krameretal.，In：Murphyetal.，3.sup.rdInt′lSymposiumonRecentAdvancesinUrologicalCancerDiagnosisandTreatment-Proceedings，Paris，F(xiàn)rance：SCI：3-7(1992))。男性類(lèi)固醇激素(雄激素)減少后也經(jīng)歷熱潮紅。在年齡相關(guān)的雄激素減退的情況下(Katovich，etal.，ProceedingsoftheSocietyforExperimentalBiology&Medicine，1990，193(2)：129-35)以及與前列腺癌治療相關(guān)的激素喪失的極端情況下(Berendsen，etal.，EuropeanJournalofPharmacology，2001，419(1)：47-54)是這樣的。三分之一的這類(lèi)患者會(huì)經(jīng)歷足夠嚴(yán)重到引起顯著不適和不便的長(zhǎng)期和頻繁的癥狀。CGRP是與其它血管運(yùn)動(dòng)癥狀的病理學(xué)相關(guān)的有效的血管擴(kuò)張劑，所述癥狀例如所有形式的血管性頭痛，包括偏頭痛(有先兆或無(wú)先兆)和叢集性頭痛。Durham，N.Engl.J.Med.350：1073-1075，2004?；颊咂^痛期間頸外靜脈中的CGRP水平升高。Goadsbyetal.，Ann.Neurol.28：183-7，1990。靜脈施用人α-CGRP在患有無(wú)先兆偏頭痛的患者中誘導(dǎo)頭痛和偏頭痛，這提示CGRP在偏頭痛中具有原因作用。Lassenetal.，Cephalalgia22：54-61，2002.CGRP與偏頭痛的可能相關(guān)性是開(kāi)發(fā)和測(cè)試大量下述化合物的基礎(chǔ)，所述化合物抑制CGRP的釋放(例如叔馬曲坦)、拮抗CGRP受體(例如二肽衍生物BIBN4096BS(BoerhringerIngelheim)；CGRP(8-37))或與一種或多種受體相關(guān)蛋白質(zhì)相互作用，所述受體相關(guān)蛋白質(zhì)例如受體活性膜蛋白(RAMP)或受體組件蛋白質(zhì)(RCP)均影響CGRP對(duì)其受體的結(jié)合。Brain，S.etal.，TrendsinPharmacologicalSciences23：51-53，2002。A-2腎上腺素受體亞型和腺苷A1受體也調(diào)控(抑制)CGRP釋放和三叉神經(jīng)活化(Goadsbyetal.，Brain125：1392-401，2002)。針對(duì)GR79236(metrafadil)腺苷A1的受體(其已經(jīng)顯示在人中抑制神經(jīng)原性血管舒張和三叉神經(jīng)傷害感受)也可以具有抗偏頭痛的活性(Arulmanietal.，Cephalalgia25：1082-1090，2005；Giffinetal.，Cephalalgia23：287-292，2003)。使得該理論混淆的是下述觀察：用僅抑制神經(jīng)原性炎癥(例如速激肽NK1受體拮抗劑)或三叉神經(jīng)活化(例如5HT1D受體激動(dòng)劑)的化合物治療顯示作為偏頭痛的急性治療相對(duì)無(wú)效，引起一些研究人員質(zhì)疑是否抑制CGRP釋放是有效的抗偏頭痛治療的主要作用機(jī)制。Arulmanietal.，Eur.J.Pharmacol.500：315-330，2004。偏頭痛是復(fù)雜的、常見(jiàn)的神經(jīng)原性病癥，其特征在于嚴(yán)重的、偶發(fā)的頭痛和相關(guān)的特征，所述相關(guān)特征可包括惡心，嘔吐，對(duì)光、聲音或運(yùn)動(dòng)敏感。在一些患者中，頭痛之前有前兆或伴隨前兆。頭痛可以是嚴(yán)重的，并在某些患者中也可以是單側(cè)的。偏頭痛發(fā)作對(duì)日常生活是破壞性的。在美國(guó)和西歐，偏頭痛患者的總體患病率在一般人群中占11％(6％男性；15-18％女性)。另外，個(gè)體中發(fā)作的中位頻率是1.5次/月。盡管能夠獲得大量治療來(lái)緩和或減少癥狀，但是對(duì)每個(gè)月具有多于3-4次偏頭痛發(fā)作的患者來(lái)說(shuō)預(yù)防療法是推薦的。Goadsbyetal.NewEngl.J.Med.346(4)：257-275，2002。用于治療偏頭痛的藥理學(xué)干涉的變化和患者間應(yīng)答的多樣性是該病癥不同特性的證明。因此，顯示5-羥色胺能以及腎上腺素能、去甲腎上腺素能、和多巴胺能活性的這類(lèi)相對(duì)非選擇性的藥物，如麥角生物堿(例如麥角胺、二氫麥角胺、美西麥角)，已經(jīng)用于治療偏頭痛超過(guò)八十年。其它治療包括阿片制劑(例如羥考酮)和β-腎上腺素能拮抗劑(例如普萘洛爾)。一些患者(通常是具有更溫和癥狀的患者)能夠用非處方藥物控制它們的癥狀，所述非處方藥例如一種或多種非甾體抗炎劑(NSAIDs)，如阿司匹林、撲熱息痛和咖啡因(例如Migraine)的組合。更近期地，已經(jīng)用托吡酯治療一些偏頭痛患者，托吡酯是封閉電壓依賴性鈉通道和某些谷氨酸受體(AMPA紅藻氨酸鹽)、增強(qiáng)GABA-A受體活性和封閉碳酸酐酶的抗驚厥劑。相對(duì)而言更近期地，5-羥色胺5HT-1B/1D和/或5HT-1a受體激動(dòng)劑(如叔馬曲坦)在一些患者中的成功已經(jīng)引起研究人員提出了該病癥的5-羥色胺能病因?qū)W。不幸的是，盡管一些患者對(duì)該治療反映良好，但是其它的患者對(duì)其作用相對(duì)有抵抗力。假定氨基酸能腦干細(xì)胞核中的離子通道功能障礙解釋了該疾病，然而偏頭痛的精確病理生理學(xué)仍未被充分理解。一種形式的偏頭痛(家族性偏癱偏頭痛)已經(jīng)顯示與電壓門(mén)控P/Q-型鈣通道的α1亞基中的錯(cuò)義突變相關(guān)，人們認(rèn)為很可能也在其它患者群體中發(fā)現(xiàn)其它的離子通道突變。盡管血管擴(kuò)張與偏頭痛相關(guān)并加重疼痛癥狀，但是這類(lèi)神經(jīng)血管事件目前被認(rèn)為是該病癥的結(jié)果而不是起因。總之，調(diào)節(jié)感覺(jué)輸入的腦干途徑的功能障礙被認(rèn)為是偏頭痛的統(tǒng)一特征。Goadsby，P.J.etal.，NewEngl.J.Med.346(4)：257-275，2002。在本申請(qǐng)中引用了多種出版物(包括專(zhuān)利和專(zhuān)利申請(qǐng))。這些出版物的公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用整體并入本文。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本文公開(kāi)的發(fā)明涉及抗CGRP拮抗劑抗體和施用抗CGRP拮抗劑抗體用于治療或預(yù)防血管運(yùn)動(dòng)癥狀的方法，所述血管運(yùn)動(dòng)癥狀例如頭痛，如有先兆或無(wú)先兆的偏頭痛、偏癱性偏頭痛、叢集性頭痛、偏頭痛神經(jīng)痛、久頭痛、緊張性頭痛和由其它醫(yī)療條件(如由腫瘤引起的感染或顱內(nèi)壓升高)引起的頭痛。其它血管運(yùn)動(dòng)癥狀包括熱潮紅。一方面，本發(fā)明提供了用于在個(gè)體中治療或預(yù)防至少一種血管運(yùn)動(dòng)癥狀的方法，所述方法包括對(duì)個(gè)體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體。一方面，本發(fā)明提供了用于在個(gè)體中治療或預(yù)防頭痛(例如偏頭痛和叢集性頭痛)的方法，所述方法包括對(duì)個(gè)體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體。另一方面，本發(fā)明提供了用于在個(gè)體中改善、控制、減少頭痛(例如偏頭痛和叢集性頭痛)發(fā)作或延遲頭痛發(fā)生或發(fā)展的方法，所述方法包括對(duì)個(gè)體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于在個(gè)體中改善、控制、減少頭痛(例如偏頭痛和叢集性頭痛)發(fā)作或延遲頭痛發(fā)生或發(fā)展的方法，所述方法包括對(duì)個(gè)體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體與至少一種適用于治療頭痛的其它試劑的組合。這類(lèi)其它試劑包括5-HT1-樣激動(dòng)劑(作用于其它5-HT1位點(diǎn)上的激動(dòng)劑)和非甾體類(lèi)抗炎藥(NSAIDs)?？膳c抗CGRP抗體組合使用的5-HT1激動(dòng)劑的例子包括已知為曲坦類(lèi)(triptans)的一類(lèi)化合物，如叔馬曲坦、佐米曲坦、那拉曲坦、利扎曲坦、伊立曲坦、阿莫曲坦和夫羅曲坦。麥角生物堿和相關(guān)化合物也顯示具有5-HT激動(dòng)劑活性并被用于治療頭痛如偏頭痛。這些化合物包括麥角胺、馬來(lái)酸麥角新堿和甲磺酰麥角堿(例如二氫麥角柯寧堿、雙氫麥角汀、雙氫麥角隱亭和雙氫麥角胺甲磺酸鹽(DHE45))?？梢耘c抗CGRP抗體組合使用的NSAIDs的例子包括萘普生、氟比洛芬、酮洛芬、奧沙普秦、依托度酸、吲哚美辛、酮咯酸、萘丁美酮、邁菲那密酸(mefanamicacid)和吡羅昔康。其它的NSAIDs包括環(huán)氧化酶2(COX-2)抑制劑。該組成員包括：塞來(lái)考昔；羅非考昔；美洛昔康；JTE-522；L-745，337；NS398及其可藥用鹽。另一方面，本發(fā)明提供了用于在個(gè)體中改善、控制、減少熱潮紅的發(fā)作或延遲其發(fā)生或發(fā)展的方法，所述方法包括對(duì)個(gè)體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體。另一方面，本發(fā)明提供了用于在個(gè)體中改善、控制、減少熱潮紅的發(fā)作或延遲其發(fā)生或發(fā)展的方法，所述包括對(duì)個(gè)體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體與至少一種適用于治療熱潮紅的試劑的組合。這類(lèi)其它試劑包括，但不限于基于激素(包括雌激素和/或黃體酮)的治療。在一個(gè)實(shí)施方案中，在上述任何方法中使用的抗CGRP拮抗劑抗體是本文所述的任何抗體。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體能識(shí)別人CGRP。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體與人α-CGRP和β-CGRP均能結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體能與人和大鼠CGRP結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體結(jié)合具有CGRP的氨基酸25-37的C末端片段。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體結(jié)合CGRP的氨基酸25-37中的C末端表位。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體是單克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體是人源化的。在一些實(shí)施方案中，抗體是人的。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體是抗體G1(如本文所述)。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體包含表6所示抗體G1或G1變體的一個(gè)或多個(gè)CDR(例如一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或在一些實(shí)施方案中包含所有六個(gè)CDR)。還在其它實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體包含圖5所示重鏈可變區(qū)的氨基酸序列(SEQIDNO：1)和圖5所示輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列(SEQIDNO：2)。在一些實(shí)施方案中，抗體包含下述經(jīng)修飾的恒定區(qū)，所述恒定區(qū)例如是免疫惰性的(包括是部分免疫惰性的，其例如不引發(fā)補(bǔ)體介導(dǎo)的裂解、不刺激抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)、活化小膠質(zhì)細(xì)胞)，或具有降低的一種或多種這些活性。在一些實(shí)施方案中，恒定區(qū)被修飾，這如Eur.J.Immunol.(1999)29：2613-2624；PCT申請(qǐng)No.PCT/GB99/01441；和/或UK專(zhuān)利申請(qǐng)No.9809951.8中所述。在其它一些實(shí)施方案中，抗體包含人重鏈IgG2恒定區(qū)，所述恒定區(qū)包含以下突變：A330P331到S330S331(參考野生型IgG2序列的氨基酸排序)Eur.J.Immunol.(1999)29：2613-2624。在一些實(shí)施方案中，抗體的重鏈恒定區(qū)是具有任何以下突變的人重鏈IgG1：1)A327A330P331到G327S330S331；2)E233L234L235G236到P233V234A235，G236被刪除；3)E233L234L235到P233V234A235；4)E233L234L235G236A327A330P331到P233V234A235G327S330S331，G236被刪除；5)E233L234L235A327A330P331到P233V234A235G327S330S331和6)N297到A297或除N以外的任何其它氨基酸。在一些實(shí)施方案中，抗體的重鏈恒定區(qū)為帶有任何以下突變的人重鏈IgG4：E233F234L235G236到P233V234A235，G236被刪除；E233F234L235到P233V234A235；和S228L235到P228E235。還在其它一些實(shí)施方案中，恒定區(qū)N連接的糖基化不被糖基化(aglycosylated)。在一些實(shí)施方案中，通過(guò)突變寡糖附著殘基(如Asn297)和/或側(cè)翼殘基(其為恒定區(qū)中N-糖基化識(shí)別序列的一部分)，針對(duì)N連接的糖基化而言恒定區(qū)不被糖基化。在一些實(shí)施方案中，針對(duì)N連接的糖基化而言恒定區(qū)不被糖基化。可通過(guò)酶或通過(guò)在糖基化缺陷宿主細(xì)胞中表達(dá)使得針對(duì)N連接的糖基化而言恒定區(qū)不被糖基化?？笴GRP拮抗劑抗體對(duì)CGRP(例如在合適溫度如25或37℃下通過(guò)表面等離振子共振測(cè)量的人α-CGRP)的親合力(KD)可以是約0.02到約200nM。在一些實(shí)施方案中，親合力為下述任何：約200nM、約100nM、約50nM、約10nM、約1nM、約500pM、約100pM、約60pM、約50pM、約20pM、約15pM、約10pM、約5pM或約2pM。在一些實(shí)施方案中，親合力少于下述任何：約250nM、約200nM、約100nM、約50nM、約10nM、約1nM、約500pM、約100pM或約50pM?？笴GRP拮抗劑抗體可以在頭痛之前、期間和/或之后被施用。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體在頭痛(例如偏頭痛和叢集性頭痛)發(fā)作之前被施用?？笴GRP拮抗劑抗體的施用可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何手段：口服、靜脈內(nèi)、皮下、動(dòng)脈內(nèi)、肌內(nèi)、賁門(mén)內(nèi)、椎管內(nèi)、胸內(nèi)、腹膜內(nèi)、心室內(nèi)、舌下、經(jīng)皮和/或經(jīng)過(guò)吸入。施用可以是全身的(例如靜脈內(nèi))或局部的。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體可以與另一試劑(如用于治療頭痛的另一試劑)結(jié)合施用。另一方面，本發(fā)明提供了抗CGRP拮抗劑抗體用于制造本文所述任何方法中使用(例如用于治療或預(yù)防頭痛)的藥物的用途。另一方面，本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療頭痛(例如偏頭痛和叢集性頭痛)的藥物組合物，其包含有效量的抗CGRP拮抗劑抗體，所述抗體與一種或多種可藥用賦形劑組合。另一方面，本發(fā)明提供了用于本文所述任何方法中的試劑盒。在一些實(shí)施方案中，所述試劑盒包含容器、包含本文所述抗CGRP拮抗劑抗體的組合物(其與可藥用媒介組合)和在本文所述任何方法中使用該組合物的說(shuō)明書(shū)。本發(fā)明還提供了抗CGRP拮抗劑抗體和來(lái)自表6所示的抗體G1或其變體的多肽。因此，一方面，本發(fā)明是由ATCC編號(hào)Nos.PTA-6866和PTA-6867的表達(dá)載體生產(chǎn)的抗體G1(可交換地稱作”G1”)。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中是包含重鏈的抗體，所述重鏈由ATCC編號(hào)為No.PTA-6867的表達(dá)載體生產(chǎn)。在再一個(gè)實(shí)施方案中為包含輕鏈的抗體，所述抗體由ATCC編號(hào)為No.PTA-6866的表達(dá)載體生產(chǎn)。G1的重鏈和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列在圖5中顯示?？贵wG1的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)部分(包括Chothia和KabatCDRs)也顯示在圖5中。應(yīng)理解：涉及G1任何局部或整體區(qū)域包括由具有ATCC編號(hào)Nos.PTA-6866和PTA-6867的表達(dá)載體生產(chǎn)的序列和/或圖5中所示的序列。本發(fā)明還提供了具有表6所示氨基酸序列的G1抗體變體。一方面，本發(fā)明是包含VH結(jié)構(gòu)域的抗體，所述VH在氨基酸序列上與SEQIDNO：1至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同。另一方面，本發(fā)明是包含VL的抗體，所述VL在氨基酸序列上與SEQIDNO：2至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同。另一方面，本發(fā)明是包含表6所示抗體G1或其變體的片段或區(qū)域的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，片段為抗體G1的輕鏈。在另一實(shí)施方案中，片段為抗體G1的重鏈。還在另一實(shí)施方案中，片段含有來(lái)自抗體G1輕鏈和/或重鏈的一個(gè)或多個(gè)可變區(qū)。還在另一實(shí)施方案中，片段含有來(lái)自圖5所示輕鏈和/或重鏈的一個(gè)或多個(gè)可變區(qū)。還在另一實(shí)施方案中，片段含有來(lái)自抗體G1輕鏈和/或重鏈的一個(gè)或多個(gè)CDR。另一方面，本發(fā)明提供了多肽(其可以是或不是抗體)，所述多肽含有SEQIDNO：5中公開(kāi)的VHCDR3，或與SEQIDNO：5因1、2、3、4或5個(gè)氨基酸取代而不同的序列。在特別的實(shí)施方案中，這類(lèi)氨基酸取代是保守的氨基酸取代。另一方面，本發(fā)明提供了多肽(其可以是或不是抗體)，所述多肽含有SEQIDNO：8中公開(kāi)的VLCDR3，或與SEQIDNO：8因1、2、3、4或5個(gè)氨基酸取代而不同的序列。在特別的實(shí)施方案中，這類(lèi)氨基酸取代是保守的氨基酸取代。另一方面，本發(fā)明提供了多肽(其可以是或不是抗體)，所述多肽包含以下任一種或多種：a)來(lái)自表6所示抗體G1或其變體的一個(gè)或多個(gè)(一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或六個(gè))CDR；b)來(lái)自表6所示抗體G1重鏈的CDRH3的CDR；和/或c)來(lái)自抗體G1輕鏈的CDRL3的CDR。在一些實(shí)施方案中，CDR為圖5所示的CDR。在一些實(shí)施方案中，來(lái)自表6所示抗體G1或其變體的一個(gè)或多個(gè)CDR與G1或其變體的至少一個(gè)、至少兩個(gè)、至少三個(gè)、至少四個(gè)、至少五個(gè)或至少六個(gè)CDR至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％相同。在一些實(shí)施方案中，CDR為KabatCDR。在其它實(shí)施方案中，CDR為ChothiaCDR。在其它實(shí)施方案中，CDR為Kabat和ChothiaCDR的組合(也稱作“組合的CDR”或“擴(kuò)展的CDR”)。換言之，對(duì)于含有多于一個(gè)CDR的任何給定的實(shí)施方案而言，CDR可以是Kabat、Chothia和/或組合的中任一。在一些實(shí)施方案中，多肽(例如抗體)包含氨基酸序列KASKXaaVXaaTYVS，其中位置5上的Xaa為R、W、G、L或N；且其中位置7的Xaa為T(mén)、A、D、G、R、S、W或V。在一些實(shí)施方案中，氨基酸序列KASKXaaVXaaTYVS是抗體輕鏈的CDR1。在一些實(shí)施方案中，多肽(例如抗體)包含氨基酸序列XaaXaaSNRYXaa，其中位置1上的Xaa為G或A；其中位置2的Xaa為A或H；且其中位置7的Xaa為L(zhǎng)、T、I或S。在一些實(shí)施方案中，氨基酸序列XaaXaaSNRYXaa是抗體輕鏈的CDR2。在一些實(shí)施方案中，多肽(例如抗體)包含氨基酸序列EIRSXaaSDXaaXaaATXaaYAXaaAVKG，其中位置5的Xaa為E、R、K、Q或N；其中位置8的Xaa為A、G、N、E、H、S、L、R、C、F、Y、V、D或P；其中位置9的Xaa為S、G、T、Y、C、E、L、A、P、I、N、R、V、D或M；其中位置12的Xaa為H或F；其中位置15的Xaa為E或D。在一些實(shí)施方案中，氨基酸序列EIRSXaaSDXaaXaaATXaaYAXaaAVKG是抗體重鏈的CDR2。在一些實(shí)施方案中，多肽(例如抗體)包含SEQIDNO：1的氨基酸序列，其中SEQIDNO：1位置99的氨基酸殘基為L(zhǎng)或被A、N、S、T、V或R取代；且其中SEQIDNO：1位置100的氨基酸殘基為A或被L、R、S、V、Y、C、G、T、K或P取代。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體是人抗體。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體是人源化的抗體。在一些實(shí)施方案中，抗體是單克隆的。在一些實(shí)施方案中，抗體(或多肽)被分離。在一些實(shí)施方案中，抗體(或多肽)是基本純的?？贵w的重鏈恒定區(qū)可以來(lái)自任何類(lèi)型的恒定區(qū)(例如IgG、IgM、IgD、IgA和IgE)和任何同種型(如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)。在一些實(shí)施方案中，抗體包含本文所述的經(jīng)修飾的恒定區(qū)。另一方面，本發(fā)明提供了一種多核苷酸(其可以是被分離的)，所述多核苷酸包含編碼表6所示抗體G1或其變體的片段或區(qū)域的多核苷酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，片段為抗體G1的輕鏈。在其它實(shí)施方案中，片段為抗體G1的重鏈。還在另一實(shí)施方案中，片段含有來(lái)自抗體G1輕鏈和/或重鏈的一個(gè)或多個(gè)可變區(qū)。還在另一實(shí)施方案中，片段含有來(lái)自抗體G1輕鏈和/或重鏈的一個(gè)或多個(gè)(即一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或六個(gè))互補(bǔ)性決定區(qū)(CDRs)。另一方面，本發(fā)明是一種多核苷酸(其可以是被分離的)，所述多核苷酸含有編碼表6所示抗體G1或其變體的多核苷酸。在一些實(shí)施方案中，多核苷酸包含SEQIDNO：9和SEQIDNO：10所示的多核苷酸之一或二者。另一方面，本發(fā)明提供了編碼本文所述任何抗體(包括抗體片段)或多肽的多核苷酸。另一方面，本發(fā)明提供了包含本文公開(kāi)的任何多核苷酸的載體(包括表達(dá)載體和克隆載體)和宿主細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，載體為ATCCNo.PTA-6867的pDb.CGRP.hFcGI。在其它實(shí)施方案中，載體為ATCCNo.PTA-6866的pEb.CGRP.hKGI。另一方面，本發(fā)明是包含多核苷酸的宿主細(xì)胞，所述多核苷酸編碼本文公開(kāi)的任何抗體。另一方面，本發(fā)明是被本文所述任何抗體或多肽結(jié)合的CGRP復(fù)合物。在一些實(shí)施方案中，抗體是表6所示的抗體G1或其變體。另一方面，本發(fā)明是藥物組合物，其包含有效量的本文所述任何多肽(包括抗體，如包含一個(gè)或多個(gè)抗體G1的CDR的抗體)或多核苷酸，和可藥用的賦形劑。另一方面，本發(fā)明是產(chǎn)生抗體G1的方法，包括在允許生產(chǎn)抗體G1的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞或其后代，其中所述宿主細(xì)胞包含編碼抗體G1的表達(dá)載體；和在一些實(shí)施方案中純化抗體G1。在一些實(shí)施方案中，表達(dá)載體包含SEQIDNO：9和SEQIDNO：10所示多核苷酸序列之一或二者。另一方面，本發(fā)明提供了通過(guò)在合適的細(xì)胞中表達(dá)一種或多種多核苷酸來(lái)生產(chǎn)本文所述任何抗體或多肽(通常隨后回收和/或分離感興趣的抗體或多肽)的方法，所述多核苷酸編碼抗體(其可以被單獨(dú)地表達(dá)為單個(gè)輕鏈或重鏈，或從一個(gè)載體表達(dá)輕鏈和重鏈二者)或多肽?？笴GRP拮抗劑抗體和多肽和編碼本發(fā)明抗體和多肽的多核苷酸可以用于治療、預(yù)防、改善、控制或減少CGRP異常功能相關(guān)疾病如頭痛(例如偏頭痛、叢集性頭痛、久頭痛和緊張性頭痛)和其它病癥(其可通過(guò)拮抗CGRP活性被治療或預(yù)防)的發(fā)作。另一方面，本發(fā)明提供了包含本文所述任一種或多種組合物的試劑盒和組合物。這些試劑盒(其通常被適當(dāng)?shù)匕b并與合適的說(shuō)明書(shū)一起提供)適用于本文所述的任何方法。附圖概述圖1是顯示12種鼠抗體對(duì)不同丙氨酸取代的人α-CGRP片段的親合力的表格。在25℃，下使用Biacore，通過(guò)將Fab流過(guò)芯片上的CGRP測(cè)量親合力?？騼?nèi)數(shù)值代表丙氨酸突變體相對(duì)于親本片段25-37(斜體)的親合力喪失，來(lái)自19-37親本的K35A除外?！錫″表示19-37和25-37片段的親和力是在不同感受芯片上兩個(gè)獨(dú)立測(cè)量的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差?！錬″表示由于二相解離速率(offrate)，這些相互作用與單一雙分子相互作用模型有所偏差，從而使用構(gòu)象改變模型測(cè)定它們的親和力?；覙?biāo)度鍵：白色(1.0)指示親本親和力；淺灰(小于0.5)指示比親本更高的親和力；深灰(多于2)指示比親本更低的親和力；黑色指示未檢測(cè)到結(jié)合。圖2A和2B顯示了施用CGRP8-37(400nmol/kg)、抗體4901(25mg/kg)和抗體7D11(25mg/kg)對(duì)皮膚血流量的作用，這作為電脈沖刺激30秒后的血細(xì)胞通量來(lái)測(cè)量。在電脈沖刺激之前3-5分鐘，靜脈內(nèi)(iv)施用CGRP8-37。電脈沖刺激前72小時(shí)，腹膜內(nèi)(IP)施用抗體。圖中每個(gè)點(diǎn)表示指定條件下處理的一只大鼠的AUC。圖中每條線表示在指定條件下處理的大鼠的平均AUC。AUC(曲線下面積)等于Δ通量xΔ時(shí)間?！濡ね俊灞硎倦娒}沖刺激后通量單位的變化；″Δ時(shí)間″表示血細(xì)胞通量水平恢復(fù)為電脈沖刺激之前水平所需時(shí)間。圖3顯示了施用不同劑量的抗體4901(25mg/kg，5mg/kg，2.5mg/kg或1mg/kg)對(duì)皮膚血流量的作用，這作為電脈沖刺激30秒后的血細(xì)胞通量來(lái)測(cè)量。電脈沖刺激之前24小時(shí)靜脈內(nèi)(IV)施用抗體。圖中每點(diǎn)表示在指定條件下處理的一只大鼠的AUC。圖中線條表示在指定條件下處理的大鼠的平均AUC。圖4A和4B顯示了施用抗體4901(1mg/kgor10mg/kg，Lv.)、抗體7E9(10mg/kg，i.v.)和抗體8B6(10mg/kg，i.v.)對(duì)皮膚血流的作用，這作為電脈沖刺激30秒后的血細(xì)胞通量來(lái)測(cè)量?？贵w被靜脈內(nèi)(i.v.)施用，然后在抗體施用后30分鐘、60分鐘、90分鐘和120分鐘進(jìn)行電脈沖刺激。Y軸表示與未施用抗體時(shí)(時(shí)間0)的AUC水平相比的AUC百分比。X軸表示施用抗體和電脈沖刺激之間的時(shí)間(分鐘)。與時(shí)間0相比，″*″表示P＜0.05，″**″表示P＜0.01。使用單向ANOVA用Dunnett′s多重比較檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)。圖5顯示了抗體G1的重鏈可變區(qū)(SEQIDNO：1)和輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO：2)的氨基酸序列。KabatCDR為黑體，ChothiaCDR加下劃線。重鏈和輕鏈可變區(qū)的氨基酸殘基被連續(xù)編號(hào)。圖6顯示了使用Biacore通過(guò)肽競(jìng)爭(zhēng)對(duì)抗體G1的表位作圖。N生物素化的人α-CGRP被捕獲在SA感受芯片上。沒(méi)有競(jìng)爭(zhēng)肽時(shí)或與10μM競(jìng)爭(zhēng)肽孵育1小時(shí)后，將G1Fab(50nM)倒在芯片上。測(cè)量芯片上G1Fab對(duì)人α-CGRP的結(jié)合。Y軸表示與不存在競(jìng)爭(zhēng)肽時(shí)相比，競(jìng)爭(zhēng)肽的存在封閉的結(jié)合百分比。圖7顯示了使用抗體G1(1mg/kg或10mg/kg，靜脈內(nèi))或運(yùn)載體(PBS，0.01％Tween20)對(duì)皮膚血流的作用，這作為電脈沖刺激30秒后的血細(xì)胞通量來(lái)測(cè)量?？贵wG1或運(yùn)載體被靜脈內(nèi)(i.v.)施用，然后在抗體施用后30分鐘、60分鐘、90分鐘和120分鐘進(jìn)行神經(jīng)電脈沖刺激。Y軸表示與未施用抗體或運(yùn)載體時(shí)(時(shí)間0)的AUC水平(定義為100％)相比的AUC百分比。X軸表示施用抗體和電脈沖刺激之間的時(shí)間(分鐘)。與運(yùn)載體相比，″*″表示P＜0.05，″**″表示P＜0.01。施用雙向ANOVA和Bonferroni后期檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)。圖8A顯示了施用抗體G1(1mg/kg，3mg/kg或10mg/kg，靜脈內(nèi))或運(yùn)載體(PBS，0.01％Tween20)對(duì)皮膚血流的作用，這作為給藥后24小時(shí)電脈沖刺激30秒后的血細(xì)胞通量來(lái)測(cè)量?？贵wG1或運(yùn)載體在神經(jīng)電脈沖刺激前24小時(shí)被靜脈內(nèi)(i.v.)施用。Y軸表示曲線下的總面積(血細(xì)胞通量變化乘以刺激到通量恢復(fù)基線的時(shí)間差，AUC)。X軸表示抗體G1的不同劑量。與運(yùn)載體相比，″*″表示P＜0.05，″**″表示P＜0.01。施用單向ANOVA和Dunn′s多重比較檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)。圖8B顯示了施用抗體G1(0.3mg/kg，1mg/kg，3mg/kg或10mg/kg，靜脈內(nèi))或運(yùn)載體(PBS，0.01％Tween20)對(duì)皮膚血流的作用，這作為給藥后7天電脈沖刺激30秒后的血細(xì)胞通量來(lái)測(cè)量?？贵wG1或運(yùn)載體在神經(jīng)電脈沖刺激前7天被靜脈內(nèi)(i.v.)施用。Y軸表示總AUC。X軸表示抗體G1的不同劑量。與運(yùn)載體相比，″**″表示P＜0.01，″***″表示P＜0.001。施用單向ANOVA和Dunn′s多重比較檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)。圖8C是對(duì)來(lái)自圖8A和8B的數(shù)據(jù)的曲線擬合分析?？贵wG1或運(yùn)載體在神經(jīng)電脈沖刺激前24小時(shí)或7天靜脈(i.v.)施用。Y軸表示總AUC。X軸表示不同的G1劑量，以″mg/kg″為單位，用對(duì)數(shù)標(biāo)度以測(cè)定EC5O。圖9顯示了電場(chǎng)刺激后抗體mu7E9(10mg/kg)、BIBN4096BS或運(yùn)載體(PBS，0.01％Tween20)對(duì)腦膜中動(dòng)脈直徑改變的作用。在建立對(duì)電刺激的基線應(yīng)答后0分鐘的時(shí)間點(diǎn)靜脈(i.v.)施用抗體mu7E9、BIBN4096BS或運(yùn)載體。Y軸表示電場(chǎng)刺激后腦膜中動(dòng)脈直徑的改變。靜止直徑對(duì)應(yīng)0％。X軸表示電脈沖刺激的時(shí)間(分鐘)。與運(yùn)載體相比，″*″指示P＜0.05，″**″指示P＜0.01。使用單向ANOVA和Dunett′s多重比較檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)。圖10顯示了電場(chǎng)刺激后不同劑量的抗體G1(1mg/kg，3mg/kg或10mg/kg，靜脈)或運(yùn)載體(PBS，0.01％Tween20)對(duì)腦膜中動(dòng)脈直徑改變的作用。在電場(chǎng)刺激前7天靜脈(i.v.)施用抗體G1或運(yùn)載體。Y軸表示腦膜中動(dòng)脈直徑的改變。靜止直徑對(duì)應(yīng)0％。X軸表示刺激電壓。與運(yùn)載體相比，″*″指示P＜0.05，″**″指示P＜0.01，″***″指示P＜0.001。使用雙向ANOVA和Bonferroniposttests分析數(shù)據(jù)。圖11A顯示了在嗎啡上癮的大鼠中皮下注射納洛酮(1mg/kg)之前24小時(shí)靜脈(i.v.)施用抗體mu4901(10mg/kg)或運(yùn)載體(PBS，0.01％Tween20)對(duì)所述皮下注射誘導(dǎo)的體核溫度降低的作用。Y軸表示與基線的溫度差異。X軸表示從注射納洛酮的點(diǎn)開(kāi)始測(cè)量的時(shí)間。圖11B顯示了在嗎啡上癮的大鼠中皮下注射納洛酮(1mg/kg)之前24小時(shí)靜脈(i.v.)施用抗體mu4901(10mg/kg)或運(yùn)載體(PBS，0.01％Tween20)對(duì)所述皮下注射誘導(dǎo)的尾表溫度提高的作用。Y軸表示與基線的溫度差異。X軸表示從注射納洛酮的點(diǎn)開(kāi)始測(cè)量的時(shí)間。發(fā)明詳述本文公開(kāi)的本發(fā)明提供了通過(guò)對(duì)個(gè)體施用治療有效量的抗CGRP拮抗劑抗體，用于在個(gè)體中治療和/或預(yù)防血管運(yùn)動(dòng)癥狀如頭痛(例如偏頭痛、叢集性頭痛、久頭痛和緊張性頭痛)或熱潮紅的方法。本文公開(kāi)的本發(fā)明還提供了來(lái)自表6所示G1或其變體的抗CGRP拮抗劑抗體和多肽。本發(fā)明還提供了這些抗體和多肽的制造和使用方法。一般技術(shù)除非另有說(shuō)明，本發(fā)明的實(shí)踐將使用分子生物學(xué)(包括重組技術(shù))、微生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫學(xué)的常規(guī)技術(shù)，其在本領(lǐng)域技術(shù)的范圍內(nèi)。這類(lèi)技術(shù)已在文獻(xiàn)中被充分解釋?zhuān)鑫墨I(xiàn)例如MolecularCloning：ALaboratoryManual，secondedition(Sambrooketa1.，1989)CoIdSpringHarborPress；OligonucleotideSynthesis(MJ.Gait，ed.，1984)；MethodsinMolecularBiology，HumanaPress；CellBiology：ALaboratoryNotebook(J.E.Cellis，ed.，1998)AcademicPress；AnimalCellCulture(R.I.Freshney，ed.，1987)；IntroductiontoCellandTissueCulture(J.P.MatherandP.E.Roberts，1998)PlenumPress；CellandTissueCulture：LaboratoryProcedures(A.Doyle，J.B.Griffiths，andD.G.Newell，eds.，1993-1998)J.WileyandSons；MethodsinEnzymoiogy(AcademicPress，Inc.)；HandbookofExperimentalImmunology(D.M.WeirandCC.Blackwell，eds.)；GeneTransferVectorsforMammalianCells(J.M.MillerandM.P.Calos，eds.，1987)；CurrentProtocolsinMolecularBiology(F.M.Ausubeletal.，eds.，1987)；PCR：ThePolymeraseChainReaction，(Mullisetal.，eds.，1994)；CurrentProtocolsinImmunology(J.E.Coliganetal.，eds.，1991)；ShortProtocolsinMolecularBiology(WileyandSons，1999)；lmmunobiology(CA.JanewayandP.Travers，1997)；Antibodies(P.Finch，1997)；Antibodies：apracticalapproach(D.Catty.，ed.，IRLPress，1988-1989)；Monoclonalantibodies：apracticalapproach(P.ShepherdandCDean，eds.，OxfordUniversityPress，2000)；Usingantibodies：alaboratorymanual(E.HarlowandD.Lane(ColdSpringHarborLaboratoryPress，1999)；TheAntibodies(M.ZanettiandJ.D.Capra，eds.，HarwoodAcademicPublishers，1995)。定義“抗體”是能夠通過(guò)位于免疫球蛋白分子可變區(qū)的至少一個(gè)抗原識(shí)別位點(diǎn)特異結(jié)合靶標(biāo)(如碳水化合物、多核苷酸、脂質(zhì)、多肽等)的免疫球蛋白分子。本文使用的該術(shù)語(yǔ)不僅包括完整的多克隆或單克隆抗體，而且包括其片段(如Fab，F(xiàn)ab′，F(xiàn)(ab′)2，F(xiàn)v)、單鏈(ScFv)、突變體、包含抗體部分的融合蛋白(如結(jié)構(gòu)域抗體)和免疫球蛋白分子的包含抗原識(shí)別位點(diǎn)的任何其它經(jīng)修飾的構(gòu)型?？贵w包括任何種類(lèi)的抗體，如IgG、IgA或IgM(或其亞家族)，且抗體不必須是任何特別的種類(lèi)。可以根據(jù)抗體重鏈恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列，將免疫球蛋白指定為不同的種類(lèi)。存在五種主要的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中一些可以被進(jìn)一步分為亞類(lèi)(同種型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。對(duì)應(yīng)于不同免疫球蛋白家族的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域分別被稱作α、δ、ε、γ和μ。不同家族免疫球蛋白的亞基結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)型是公知的。本文使用的“單克隆抗體”是指從一群基本均質(zhì)的抗體獲得的抗體，即除了可少量存在的可能的天然存在的突變外，包含該種群的個(gè)體抗體是相同的。單克隆抗體是高度特異的，其針對(duì)單個(gè)抗原性位點(diǎn)。另外，與多克隆抗體制劑(其典型地包括針對(duì)不同決定簇(表位)的不同抗體)相反，每種單克隆抗體針對(duì)抗原上的單個(gè)決定簇。修飾詞“單克隆的”指示抗體的特性是得自基本均質(zhì)的抗體種群，并不應(yīng)被理解為要求通過(guò)任何特定的方法生產(chǎn)抗體。例如，可以通過(guò)首先由KohlerandMilstein，1975，Nature，256：495描述的雜交瘤方法來(lái)制造，或可以通過(guò)U.S.Pat.No.4,816,567中所述的重組DNA方法來(lái)制造根據(jù)本發(fā)明待使用的單克隆抗體。單克隆抗體也可以分離自噬菌體文庫(kù)，所述噬菌體文庫(kù)使用例如McCaffertyetal.，1990，Nature，348：552-554中所述的技術(shù)產(chǎn)生。本文使用的“人源化的”抗體是指非人(例如鼠)抗體的下述形式，其為特異的嵌合體免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其含有來(lái)自非人免疫球蛋白的最小序列的片段(例如Fv，F(xiàn)ab，F(xiàn)ab′，F(xiàn)(ab′)2或抗體的其它抗原結(jié)合亞序列)。對(duì)于大部分而言，人源化的抗體是下述人免疫球蛋白(受體抗體)，所述人免疫球蛋白中來(lái)自受體的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)被替換為來(lái)自非人物種的CDR(供體抗體)的殘基，所述非人物種如小鼠、大鼠或兔，所述來(lái)自非人物種的CDR具有所需的特異性、親和力和生物活性。在一些情況下，人免疫球蛋白的Fv框架區(qū)(FR)殘基被替換為相應(yīng)的非人殘基。另外，人源化抗體可包含下述殘基，所述殘基既不存在于受體抗體中，也不存在于引入的CDR或框架區(qū)中，但是被包括在內(nèi)以進(jìn)一步精制和優(yōu)化抗體表現(xiàn)。通常，人源化抗體基本包含所有的(至少一個(gè)，典型地兩個(gè))可變結(jié)構(gòu)域，其中所有或幾乎所有的CDR區(qū)對(duì)應(yīng)于非人免疫球蛋白的CDR區(qū)，所有或幾乎所有的FR區(qū)是人免疫球蛋白共有序列的FR區(qū)。人源化抗體最適當(dāng)?shù)匾舶辽僖徊糠置庖咔虻鞍缀愣▍^(qū)或結(jié)構(gòu)域(Fc)，典型地為人免疫球蛋白的恒定區(qū)或結(jié)構(gòu)域。抗體可具有如WO99/58572中所述被修飾的Fc區(qū)。其它形式的人源化抗體具有一個(gè)或多個(gè)CDR(一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè))，其根據(jù)原始抗體被改變，也稱作“來(lái)自”一個(gè)或多個(gè)原始抗體CDR的一個(gè)或多個(gè)CDR。本文使用的“人抗體”是指具有對(duì)應(yīng)于下述抗體氨基酸序列的抗體，所述抗體由人生產(chǎn)和/或使用本領(lǐng)域已知或本文公開(kāi)的用于制造人抗體的任何技術(shù)制造。人抗體的該定義包括包含至少一個(gè)人重鏈多肽或至少一個(gè)人輕鏈多肽的抗體。一個(gè)這樣的例子是包含鼠輕鏈和人重鏈多肽的抗體。人抗體可以使用本領(lǐng)域已知的多種技術(shù)生產(chǎn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，人抗體選自噬菌體文庫(kù)，其中該噬菌體文庫(kù)表達(dá)人抗體(Vaughanetal.，1996，NatureBiotechnology，14：309-314；Sheetsetal.，1998，PNAS，(USA)95：6157-6162；HoogenboomandWinter，1991，J.MoI.Biol.，227：381；Marksetal.，1991，J.MoI.Biol.，222：581)。也可以通過(guò)將人免疫球蛋白基因座引入轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如小鼠，其中內(nèi)源免疫球蛋白基因已經(jīng)被部分或完全滅活)中制造人抗體。該途徑描述于U.S.專(zhuān)利Nos.5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425和5,661，016?；蛘?，可以通過(guò)使生產(chǎn)針對(duì)靶抗原的抗體的人B淋巴細(xì)胞(這類(lèi)B淋巴細(xì)胞可從個(gè)體回收或可以在體外被免疫)永生來(lái)制備人抗體。參見(jiàn)例如Coleetal.，MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy，AlanR.Liss，p.77(1985)；Boemeretal.，1991，J.Immunol.，147(1)：86-95和U.S.專(zhuān)利No.5,750,373。本文使用的術(shù)語(yǔ)“降鈣素基因相關(guān)肽”和“CGRP”是指維持至少部分CGRP活性的任何形式的降鈣素基因相關(guān)肽及其變體。例如，CGRP可以是α-CGRP或β-CGRP。本文使用CGRP包括所有哺乳動(dòng)物種類(lèi)的天然序列CGRP，例如人、犬、貓、馬和牛。本文使用的“抗CGRP拮抗劑抗體”(可與“抗CGRP抗體”互換使用)是指下述抗體，所述抗體能夠結(jié)合CGRP并抑制CGRP生物活性和/或CGRP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)介導(dǎo)的下游途徑?？笴GRP拮抗劑抗體包括下述抗體，所述抗體能夠(包括顯著地)封閉、拮抗、抑制或降低CGRP生物活性，包括由CGRP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的下游途徑如受體結(jié)合和/或?qū)GRP細(xì)胞應(yīng)答的激發(fā)。就本發(fā)明的目的而言，應(yīng)明確地理解：術(shù)語(yǔ)“抗CGRP拮抗劑抗體”包括所有先前定義的術(shù)語(yǔ)、題目和功能狀態(tài)和特征，由此，CGRP自身、CGRP生物活性(包括但不限于其介導(dǎo)任何方面頭痛的能力)或生物活性的后果以任何有意義的程度上被實(shí)質(zhì)上無(wú)效、降低或中和。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體結(jié)合CGRP并防止CGRP結(jié)合CGRP受體。在其它實(shí)施方案中，抗CGRP抗體結(jié)合CGRP并防止CGRP受體的激活。本文提供了抗CGRP拮抗劑抗體的例子。本文使用的術(shù)語(yǔ)“G1”和“抗體G1”可互換地使用，它們指由具有保藏號(hào)ATCCPTA-6867和ATCCPTA-6866的表達(dá)載體生產(chǎn)的抗體。圖5顯示了重鏈和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列。抗體G1的CDR部分(包括Chothia和KabatCDRs)圖示于圖5中。編碼重鏈和輕鏈可變區(qū)的多核苷酸顯示于SEQIDNO：9和SEQIDNO：10中。G1的表征描述于實(shí)施例中。術(shù)語(yǔ)“多肽”、“寡肽”、“肽”和“蛋白質(zhì)”在本文可互換使用，來(lái)表示任何長(zhǎng)度的氨基酸多聚體。該多聚體可以是線性的或分支的，其可含有經(jīng)修飾的氨基酸，其可以被非氨基酸阻斷。所述術(shù)語(yǔ)還包括已經(jīng)被天然修飾或通過(guò)干涉被修飾的氨基酸多聚體；例如二硫鍵形成、糖基化、脂質(zhì)化、乙?；?、磷酸化或任何其它加工或修飾，如與標(biāo)簽組分的綴合。還包括在定義中的是例如含有有一個(gè)或多個(gè)氨基酸類(lèi)似物(包括例如非天然的氨基酸等)以及本領(lǐng)域已知的其它修飾的多肽。理解到因?yàn)楸景l(fā)明的多肽是以抗體為基礎(chǔ)的，所以所述多肽能夠作為單鏈或結(jié)合的鏈存在。本文可互換地使用的“多核苷酸”或“核酸”指任何長(zhǎng)度的核苷酸多聚體，并包括DNA和RNA。核苷酸可以是脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經(jīng)修飾的核苷酸或堿基，和/或它們的類(lèi)似物，或可以由DNA或RNA聚合酶摻入多聚體中的任何底物。多核苷酸可包含經(jīng)修飾的核苷酸，如甲基化的核苷酸和它們的類(lèi)似物。如果存在對(duì)核苷酸結(jié)構(gòu)的修飾，該修飾可以在多聚體裝配之前或之后給予。核苷酸的序列可以被非核苷酸組件阻斷。多核苷酸可在多聚化后被進(jìn)一步修飾，例如通過(guò)與標(biāo)簽組件綴合來(lái)修飾。其它類(lèi)型的修飾包括例如“帽子”、用類(lèi)似物取代一個(gè)或多個(gè)天然存在的核苷酸、核苷酸間修飾，以及未修飾形式的多核苷酸，所述核苷酸間修飾例如為用不帶電的鍵(例如甲基磷酸酯、磷酸三酯、磷酸酰胺、氨基甲酸酯等)修飾和用帶電的鍵(硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)修飾、含有懸掛部分如蛋白質(zhì)(例如核酸酶、毒素、抗體、信號(hào)肽、ply-L-賴氨酸等)的修飾、用插入劑(例如吖啶、補(bǔ)骨脂素等)修飾、含有螯合劑(例如金屬、放射性金屬、硼、氧化金屬等)的修飾、含有alkylator的修飾、用經(jīng)修飾的鍵(例如α異頭核酸)修飾。另外，任何通常存在于糖中的羥基基團(tuán)可以被磷酸酯基團(tuán)、磷酸基替換，被標(biāo)準(zhǔn)的保護(hù)基團(tuán)保護(hù)，或被激活來(lái)制備與額外的核苷酸的額外鍵，或可以與固體支持物綴合。5’和3’端的OH可以被磷酸化或被胺或1到20個(gè)碳原子的有機(jī)加帽基團(tuán)部分取代。其它羥基也可以被演化為標(biāo)準(zhǔn)的保護(hù)基團(tuán)。多核苷酸還可以含有本領(lǐng)域一般已知的類(lèi)似形式的核糖或脫氧核糖，包括例如2′-O-甲基-、2′-O-烯丙基、2′-氟-或2′-疊氮基-核糖，碳環(huán)糖類(lèi)似物，D-異頭糖，差向異構(gòu)體糖如阿拉伯糖、木糖或來(lái)蘇糖，吡喃糖，呋喃糖，景天庚酮糖，非環(huán)狀類(lèi)似物和非堿性核苷類(lèi)似物如甲基核糖核苷。一個(gè)或多個(gè)磷酸二酯鍵可以被替換為備選的連接基團(tuán)。這些備選的連接基團(tuán)包括，但不限于其中磷酸鹽被替換為P(O)S(″硫代酸鹽″)、P(S)S(″二硫代酸鹽″)、(O)NR2(″酰胺化物″)、P(O)R、P(O)OR′、CO或CH2(″formacetai″)的實(shí)施方案，其中每個(gè)R或R′獨(dú)立地為H或被任選地含有(-O-)鍵、芳基、鏈烯基、環(huán)烷基、環(huán)鏈烯基或araldyl的烷基(1-20C)取代或未取代。多核苷酸中所有的鍵不必須是相同的。前文的敘述適用于本文所指的所有多核苷酸，包括RNA和DNA?？贵w的“可變區(qū)”是指抗體輕鏈的可變區(qū)或抗體重鏈的可變區(qū)，其為單獨(dú)的或組合的。重鏈和輕鏈的可變區(qū)各由四個(gè)框架區(qū)(FR)組成，所述四個(gè)框架區(qū)被三個(gè)互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)連接，所述互補(bǔ)性決定區(qū)也稱作超變區(qū)。每個(gè)鏈中的CDR通過(guò)FR被緊密結(jié)合在一起，并與來(lái)自另一條鏈的CDR一起有助于形成抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)。存在至少兩種用于確定CDR的技術(shù)：(1)以跨物種序列變異性為基礎(chǔ)的途徑(即Kabatetal.SequencesofProteinsofImmunologicalInterest，(5thed.，1991，NationalInstitutesofHealth，BethesdaMD))；和(2)以抗原-抗體復(fù)合物的晶體學(xué)研究為基礎(chǔ)的途徑(Al-lazikanietal(1997)J.Molec.Biol.273：927-948)。本文使用的CDR可表示由任一途徑或兩個(gè)途徑的組合定義的CDR?？贵w的“恒定區(qū)”指抗體輕鏈的恒定區(qū)或抗體重鏈的恒定區(qū)，其為單獨(dú)的或組合的。與抗體或多肽“優(yōu)先結(jié)合”或“特異結(jié)合”(在本文可互換使用)的表位是本領(lǐng)域公知的術(shù)語(yǔ)，確定這類(lèi)特異或優(yōu)先結(jié)合的方法也是本領(lǐng)域公知的。如果一個(gè)分子與特定細(xì)胞或物質(zhì)反應(yīng)或結(jié)合比起它與其它細(xì)胞或物質(zhì)的反應(yīng)或結(jié)合而言更頻繁、更快速、有更長(zhǎng)持續(xù)時(shí)間和/或有更大親和力，則稱該分子顯示“特異結(jié)合”或“優(yōu)先結(jié)合”。如果抗體與靶標(biāo)結(jié)合比起它與其它物質(zhì)的結(jié)合具有更大親和力、親合力、更容易和/或具有更長(zhǎng)持續(xù)時(shí)間，則該抗體“特異結(jié)合”或“優(yōu)先結(jié)合”該靶標(biāo)。例如，與CGRP特異或優(yōu)先結(jié)合的抗體是下述抗體，所述抗體與該表位的結(jié)合比起它與其它CGRP表位或非CGRP表位的結(jié)合具有更大的親和力、親合力、更容易和/或具有更長(zhǎng)的持續(xù)時(shí)間。通過(guò)閱讀該定義還應(yīng)理解到例如，與第一靶標(biāo)特異或優(yōu)先結(jié)合的抗體(或部分或表位)可與第二靶標(biāo)特異或優(yōu)先結(jié)合，或不特異或優(yōu)先結(jié)合。同樣，“特異結(jié)合”或“優(yōu)先結(jié)合”不必須要求(盡管其可包括)專(zhuān)一結(jié)合。通常但不必須地，涉及結(jié)合時(shí)表示優(yōu)先結(jié)合。本文使用的“基本純”是指至少50％純(即不含污染物)、更優(yōu)選至少90％純、更優(yōu)選至少95％純、更優(yōu)選至少98％純、更優(yōu)選至少99％純的材料。“宿主細(xì)胞”包括可以是或已經(jīng)是載體受體的個(gè)體細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)物，所述載體用于摻入多核苷酸插入物。宿主細(xì)胞包括單個(gè)宿主細(xì)胞的后代，并且因?yàn)樘烊?、偶然或故意的突變，所述后代不必須與原始的親本細(xì)胞(在形態(tài)學(xué)或基因組DNA補(bǔ)體上)完全相同。宿主細(xì)胞包括用本發(fā)明的多核苷酸體內(nèi)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。術(shù)語(yǔ)“Fc區(qū)”用于定義免疫球蛋白重鏈C末端區(qū)域?！癋c區(qū)”可以是天然序列Fc區(qū)或變體Fc區(qū)。盡管免疫球蛋白重鏈的Fc區(qū)邊界可變化，但是人IgG重鏈Fc區(qū)通常被定義為從位置Cys226的氨基酸殘基或Pro230開(kāi)始到其羧基端的一段。Fc區(qū)中殘基的排序是如Kabat中的EU索引排序。Kabatetal.，SequencesofProteinsoflmunologicalInterest，5thEd.PublicHealthService，NationalInstitutesofHealth，Bethesda，Md.，1991。免疫球蛋白的Fc區(qū)通常含有兩個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域CH2和CH3。本文使用“Fc受體”和“FcR”描述了結(jié)合抗體Fc區(qū)的受體。優(yōu)選的FcR為天然序列人FcR。另外，優(yōu)選的FcR是結(jié)合IgG抗體(γ受體)的FcR，并包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亞類(lèi)的受體，包括這些受體的等位基因變體或者間接形式。FcγRII受體包括FcγRIIA(“激活受體”)和FcγRIIB(“抑制受體”)，其具有主要在其胞漿區(qū)差異的類(lèi)似的氨基酸序列。RavetchandKinet，1991，Ann.Rev.Immunol.，9：457-92；Capeletal.，1994，Immunomethods，4：25-34；和deHaasetal.，1995，J.Lab.Clin.Med.，126：330-41中綜述了FcR?！錐cR″也包括新生兒受體FcRn，其負(fù)責(zé)母體IgG到胎兒的轉(zhuǎn)移(Guyeretal.，1976，J.Immunol.，117：587；andKimetal.，1994，J.Immunol.，24：249)?！把a(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性”和″CDC″是指存在補(bǔ)體時(shí)靶標(biāo)的溶解。補(bǔ)體系統(tǒng)的第一個(gè)組件(C1q)和與同種抗原復(fù)合的分子(例如抗體)的結(jié)合啟動(dòng)補(bǔ)體激活途徑。為了評(píng)價(jià)補(bǔ)體活化，可進(jìn)行例如Gazzano-Santoroetal.，J.Immunol.Methods，202：163(1996)中所述的CDC實(shí)驗(yàn)?！肮δ苄訤c區(qū)”擁有天然序列Fc區(qū)的至少一個(gè)效應(yīng)子作用。示范性的“效應(yīng)子作用”包括C1q結(jié)合；補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)；Fc受體結(jié)合；抗體依賴性細(xì)胞接到的細(xì)胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細(xì)胞表面受體(例如B細(xì)胞受體；BCR)的下調(diào)等。這類(lèi)效應(yīng)子作用通常要求Fc區(qū)與結(jié)合結(jié)構(gòu)域(例如抗體可變結(jié)構(gòu)域)組合并可使用本領(lǐng)域已知用于評(píng)估這類(lèi)抗體效應(yīng)子作用的多種實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)。“天然序列Fc區(qū)”包含與天然存在的Fc區(qū)氨基酸序列相同的氨基酸序列?！白凅wFc區(qū)”包含與天然序列Fc區(qū)通過(guò)至少一個(gè)氨基酸修飾而不同、但是維持天然序列Fc區(qū)至少一個(gè)效應(yīng)子作用的氨基酸序列。優(yōu)選地，與天然序列Fc區(qū)相比或與親本多肽的Fc區(qū)相比，變體Fc區(qū)具有至少一個(gè)氨基酸取代，例如天然序列Fc區(qū)中或親本多肽的Fc區(qū)中從約一個(gè)到約十個(gè)氨基酸取代，優(yōu)選地從約一個(gè)到約五個(gè)氨基酸取代。本文的變體Fc區(qū)優(yōu)選地與天然序列Fc區(qū)和/或與親本多肽Fc區(qū)具有至少約80％的序列同一性，最優(yōu)選與之有至少約90％的序列同一性，更優(yōu)選與之有至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％、至少約99％的序列同一性。本文使用的“抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性”和“ADCC”是指細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)，其中表達(dá)Fc受體(FcRs)的非特異性的細(xì)胞毒性細(xì)胞(例如天然殺傷(NK)細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)識(shí)別靶細(xì)胞上的結(jié)合抗體，隨后引起靶細(xì)胞裂解。感興趣的分子的ADCC活性可以使用體外ADCC實(shí)驗(yàn)評(píng)估，例如描述于U.S.專(zhuān)利No.5,500,362或5,821,337中的實(shí)驗(yàn)。適用于這些實(shí)驗(yàn)的效應(yīng)子細(xì)胞包括外周血單核細(xì)胞(PBMC)和NK細(xì)胞?；蛘呋蛄硗獾?，感興趣的分子的ADCC活性可以體內(nèi)評(píng)估，例如在如Clynesetal.，1998，PNAS(USA)，95：652-656中公開(kāi)的動(dòng)物模型中評(píng)估。本文使用的“治療”是用于獲得有益的或所期望的臨床結(jié)果的途徑。就本發(fā)明的目的而言，有益的或所期望的臨床結(jié)果包括，但不限于以下一種或多種：在頭痛的任何方面改進(jìn)，包括減輕嚴(yán)重性、緩和疼痛強(qiáng)度和其它相關(guān)癥狀、減少?gòu)?fù)發(fā)頻率、提高患有頭痛患者的生活質(zhì)量和減少治療頭痛所需其它藥物的劑量。對(duì)于偏頭痛而言，其它相關(guān)癥狀包括，但不限于惡心、嘔吐和對(duì)光、聲音和/或運(yùn)動(dòng)敏感。對(duì)于叢集性頭痛而言，其它相關(guān)癥狀包括，但不限于眼下方或周?chē)[脹、多淚、紅眼、鼻漏或鼻充血和潮紅的臉?！敖档汀鳖^痛“發(fā)生率”表示任何降低的嚴(yán)重性(其可包括降低通常用于該病癥的其它藥物和/或治療的需要和/或用量(例如暴露)，所述其它藥物包括例如用于偏頭痛的麥角胺、雙氫麥角胺或triptan)、持續(xù)時(shí)間和/或頻率(包括例如在個(gè)體中延遲或提高到下次偶然發(fā)作的時(shí)間)。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的，個(gè)體可在它們對(duì)治療的應(yīng)答方面不同，同樣，例如“減少個(gè)體中頭痛發(fā)作的方法”表現(xiàn)了在合理期望(這類(lèi)施用很可能在特定個(gè)體中導(dǎo)致這樣的發(fā)病率降低)的基礎(chǔ)上施用抗CGRP拮抗劑抗體?！案纳啤鳖^痛或頭痛的一種或多種癥狀表示與未施用抗CGRP拮抗劑抗體相比，頭痛的一種或多種癥狀的減少或改進(jìn)。“改善”也包括縮短或減少癥狀的持續(xù)時(shí)間。本文使用的“控制頭痛”是指在個(gè)體中維持或降低頭痛的一種或多種癥狀的嚴(yán)重性或持續(xù)時(shí)間或頭痛發(fā)作的頻率(與治療前的水平相比)。例如，與治療前水平相比，個(gè)體中頭痛持續(xù)時(shí)間或嚴(yán)重性或發(fā)作頻率被降低至少約10％、20％、30％、40％、50％、60％或70％之任一。本文使用的“延遲”頭痛的發(fā)生是指延遲、妨礙、減緩、延緩、穩(wěn)定和/或推遲疾病的進(jìn)展。該延遲可以是不同長(zhǎng)度的時(shí)間，取決于疾病史和、或被治療的個(gè)體。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所明白的，足夠或顯著的延遲可以有效地包括預(yù)防，因?yàn)閭€(gè)體不會(huì)發(fā)生頭痛(例如偏頭痛)?！把舆t”癥狀發(fā)生的方法是與未使用該方法相比時(shí)，降低給定時(shí)間范圍內(nèi)發(fā)生癥狀的可能性和/或降低給定時(shí)間范圍內(nèi)癥狀程度的方法。這類(lèi)比較典型地以臨床研究為基礎(chǔ)，使用統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著數(shù)量的受試者。頭痛的“發(fā)生”或“發(fā)展”表示表示該病癥的最初表現(xiàn)和/或隨后的進(jìn)展。頭痛的發(fā)生是可檢測(cè)的，并使用本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)臨床技術(shù)評(píng)價(jià)。然而，發(fā)生也表示不可檢測(cè)的進(jìn)展。就本發(fā)明的目的而言，發(fā)生或發(fā)展表示癥狀的生物學(xué)過(guò)程。“發(fā)生”包括發(fā)作、復(fù)發(fā)和發(fā)病。本文使用頭痛的“發(fā)病”或“發(fā)作”包括初始發(fā)病和/或復(fù)發(fā)。本文使用的藥物、化合物或藥物組合物的“有效劑量”或“有效量”是足夠產(chǎn)生有益的或期望的結(jié)果的量。對(duì)于預(yù)防性用途而言，有益的或期望的結(jié)果包括例如如消除或降低風(fēng)險(xiǎn)、減輕嚴(yán)重性或延遲疾病開(kāi)始的結(jié)果，包括疾病的生物化學(xué)、組織學(xué)和/或行為癥狀，其并發(fā)癥和在疾病發(fā)生時(shí)存在的中間病理學(xué)表型。對(duì)于治療學(xué)用途而言，有益或期望的結(jié)果包括下述結(jié)果，例如降低疼痛強(qiáng)度、持續(xù)時(shí)間、或頭痛發(fā)作頻率和減少頭痛引起的一種或多種(生物化學(xué)、組織學(xué)和/或行為)癥狀(包括其并發(fā)癥和在疾病發(fā)生時(shí)存在的中間病理學(xué)表型)、提高該疾病患者的生活質(zhì)量、減少治療該疾病所需其它藥物療法的劑量、增強(qiáng)另一藥物療法的作用和/或延遲患者疾病的發(fā)展。有效劑量可以在一次或多次施用中被施用。就本發(fā)明的目的而言，有效的藥物、化合物或藥物組合物劑量是足夠直接或間接完成預(yù)防性或治療性治療的用量。如臨床語(yǔ)境中所理解的，有效的藥物、化合物或藥物組合物劑量可以與其它藥物、化合物或藥物組合物結(jié)合或不結(jié)合地達(dá)到。因此，在施用一種或多種治療劑的語(yǔ)境中如果可以達(dá)到或達(dá)到了期望的結(jié)果，則可認(rèn)為是“有效劑量”；單一劑量與一種或多種其它試劑組合時(shí)，如果可以達(dá)到或達(dá)到了期望的結(jié)果，則可認(rèn)為是以有效的劑量提供的。“個(gè)體”或“受試者”是哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選為人。哺乳動(dòng)物還包括但不限于：農(nóng)業(yè)動(dòng)物、運(yùn)動(dòng)動(dòng)物、寵物、靈長(zhǎng)類(lèi)、馬、犬、貓、小鼠和大鼠。本文使用的“載體”表示一種構(gòu)建體，其能夠?qū)⒁粋€(gè)或多個(gè)感興趣的基因或序列遞送進(jìn)宿主細(xì)胞并優(yōu)選在其中表達(dá)。載體的例子包括，但不限于病毒載體、裸DNA或RNA表達(dá)載體、質(zhì)粒、粘?；蚴删w載體、與陽(yáng)離子冷凝劑結(jié)合的DNA或RNA表達(dá)載體、包裹在脂質(zhì)體中的DNA或RNA表達(dá)載體，和某些真核生物細(xì)胞如生產(chǎn)者細(xì)胞。本文使用的“表達(dá)調(diào)控序列”是指指導(dǎo)核酸轉(zhuǎn)錄的核酸序列。表達(dá)調(diào)控序列可以是啟動(dòng)子(如組成型或誘導(dǎo)型啟動(dòng)子)或增強(qiáng)子。表達(dá)調(diào)控序列與待轉(zhuǎn)錄的核酸序列可操作地連接。本文使用的“可藥用的運(yùn)載體”或“可藥用的賦形劑”包括任何下述材料，其與活性成分組合時(shí)允許該成分維持生物活性，并且對(duì)受試者的免疫體系是無(wú)反應(yīng)性的。例子包括但不限于：任何標(biāo)準(zhǔn)的藥物運(yùn)載體，如磷酸鹽緩沖的鹽水溶液、水、乳劑(如油/水乳劑)和多種類(lèi)型的濕潤(rùn)劑。用于氣霧劑或腸胃外施用的優(yōu)選稀釋劑為磷酸鹽緩沖的鹽水或生理(0.9％)鹽水。包含這類(lèi)運(yùn)載體的組合物通過(guò)公知的常規(guī)方法配制(參閱例如Remington′sPharmaceuticalSciences，18thedition，A.Gennaro，ed.，MackPublishingCo.，Easton，PA，1990；和Remington，TheScienceandPracticeofPharmacy20thEd.MackPublishing，2000)。本文使用術(shù)語(yǔ)“kon”旨在表示抗體與抗原的結(jié)合速率常數(shù)。本文使用術(shù)語(yǔ)“koff”旨在表示抗體從抗體/抗原復(fù)合物解離的速率常數(shù)。本文使用術(shù)語(yǔ)“KD”旨在表示抗體-抗原相互作用的平衡解離常數(shù)。本文使用術(shù)語(yǔ)“血管運(yùn)動(dòng)癥狀”旨在表示與血管舒張相關(guān)的病癥，包括但不限于特別是由溫度調(diào)節(jié)功能障礙導(dǎo)致的頭痛(例如偏頭痛、……其它)、熱潮紅、冷潮紅(或瞬間熱潮紅(hotflashes))、失眠、睡眠紊亂、心境障礙、易激惹、大汗、寢汗、晝汗、疲勞等等。本文使用術(shù)語(yǔ)“面紅”、“熱潮紅”和“瞬間熱潮紅”是本領(lǐng)域認(rèn)可的術(shù)語(yǔ)，其表示體溫偶發(fā)性紊亂，典型地由突發(fā)的皮膚潮紅組成，通常伴隨受試者的排汗。A.用于預(yù)防或治療血管運(yùn)動(dòng)癥狀的方法一方面，本發(fā)明提供了用于在個(gè)體中治療或預(yù)防至少一種血管運(yùn)動(dòng)癥狀如頭痛(例如偏頭痛)或熱潮紅的方法，所述方法包括對(duì)個(gè)體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體或來(lái)自該抗體的多肽。另一方面，本發(fā)明提供了用于在個(gè)體中改善、控制、減少至少一種血管運(yùn)動(dòng)癥狀發(fā)作或延遲其發(fā)生或發(fā)展的方法，所述癥狀如頭痛(例如偏頭痛)或熱潮紅，所述方法包括對(duì)個(gè)體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體。另一方面，本發(fā)明提供了用于在個(gè)體中改善、控制、減少頭痛(例如偏頭痛)發(fā)作或延遲其發(fā)生或發(fā)展的方法，包括對(duì)個(gè)體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體與至少一種適用于治療頭痛的其它試劑的組合。這類(lèi)其它試劑包括但不限于：5-HT激動(dòng)劑和NSAID。例如，抗體和至少一種其它試劑可以伴隨施用，即它們可以以足夠接近的時(shí)間接近度施用從而允許它們個(gè)體的治療作用重疊。例如，與抗CGRP抗體組合施用的5-HT激動(dòng)劑或NSAID的量應(yīng)當(dāng)足以降低患者中頭痛復(fù)發(fā)的頻率，或產(chǎn)生與施用這些試劑中的一種而不存在其它時(shí)相比更長(zhǎng)的持久作用。該步驟可用于治療落入多種種類(lèi)之任一中的頭痛，包括：有先兆或無(wú)先兆的偏頭痛；叢集性頭痛；偏頭痛性神經(jīng)痛；久頭痛；緊張性頭痛；其它醫(yī)學(xué)病癥(例如感染或腫瘤引起的顱內(nèi)壓升高)導(dǎo)致的頭痛；慢性發(fā)作性偏頭痛；與結(jié)構(gòu)損傷無(wú)關(guān)的多種頭痛；與非血管性顱內(nèi)病癥相關(guān)的頭痛；與物質(zhì)施用及其停藥相關(guān)的頭痛；與非頭感染相關(guān)的頭痛；與代謝紊亂相關(guān)的頭痛；與顱、頸、眼、耳、鼻、竇房結(jié)、牙、口或其它面部或顱結(jié)構(gòu)病癥相關(guān)的頭痛；腦神經(jīng)痛和神經(jīng)干痛和去傳入(deafferentiation)痛。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠確定與抗CGRP抗體組合使用的特定試劑的合適劑量。例如，可以以從約0.01到約300mg的劑量施用舒馬曲坦。當(dāng)非腸胃外施用時(shí)，舒馬曲坦的典型劑量為從約25到約100mg。通常優(yōu)選約50mg，當(dāng)腸胃外施用時(shí)，優(yōu)選的劑量為約6mg。然而，這些劑量可以根據(jù)本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)方法改變，從而將其針對(duì)特定患者或特定的組合治療最優(yōu)化。另外，例如塞來(lái)考昔可以以50和500mg之間的用量被施用。另一方面，本發(fā)明提供了用于在個(gè)體中改善、控制、減少熱潮紅發(fā)作或延遲其發(fā)生或發(fā)展的方法，包括對(duì)個(gè)體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體與至少一種適用于治療熱潮紅的其它試劑的組合。這類(lèi)其它試劑包括，但不限于基于激素的治療，所述激素包括雌激素和/或一些黃體酮。關(guān)于本文所述的所有方法，提及抗CGRP拮抗劑抗體時(shí)也包括包含一種或多種這些試劑的組合物。這些組合物可進(jìn)一步包含本領(lǐng)域公知的合適賦形劑，如包括緩沖液的可藥用賦形劑。本發(fā)明可單獨(dú)使用或與其它常規(guī)治療方法組合使用?？笴GRP拮抗劑抗體可以通過(guò)任何合適的途徑施用給個(gè)體。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)明白：本文所述的實(shí)施例不旨在限制，而是對(duì)可用技術(shù)的闡述。因此在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體根據(jù)已知的方法施用給個(gè)體，例如靜脈施用(例如作為推注施用或通過(guò)一段時(shí)間內(nèi)的連續(xù)輸注施用)，通過(guò)肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦脊髓內(nèi)、皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、舌下、滑膜內(nèi)，通過(guò)吹入、椎觀內(nèi)、口內(nèi)、吸入或局部途徑。施用可以是全身性的(例如靜脈施用)或局部的?？缮虡I(yè)獲得的用于液體制劑的噴霧器(包括噴射霧化器和超聲噴霧器)適用于施用。液體制劑可直接噴霧，低壓凍干粉末可以在重建后噴霧?；蛘?，可以使用碳氟化合物制劑和壓力定量氣霧劑將抗CGRP拮抗劑抗體霧化，或作為低壓凍干的和研細(xì)的粉末被吸入。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)位點(diǎn)特異或靶向局部遞送技術(shù)施用抗CGRP拮抗劑抗體。位點(diǎn)特異或靶向局部遞送技術(shù)的例子包括抗CGRP拮抗劑抗體的多種可植入補(bǔ)給來(lái)源(depotsources)或局部遞送導(dǎo)管，如輸注導(dǎo)管、留置導(dǎo)管或套針、合成移植物、外膜覆膜(adventitialwraps)、分流器和支架或其它可植入的設(shè)備，位點(diǎn)特異的運(yùn)載體、直接注射或直接應(yīng)用。參閱例如PCT公開(kāi)No.WO00/53211和U.S.專(zhuān)利No.5,981,568?？笴GRP拮抗劑抗體的多種制劑可用于施用。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體可以單獨(dú)施用。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體和可藥用的賦形劑可存在于多種制劑中?？伤幱玫馁x形劑是本領(lǐng)域已知的并是相對(duì)惰性的物質(zhì)，其有助于藥理學(xué)有效物質(zhì)的施用。例如，賦形劑可以有形狀或稠度，或作為稀釋劑作用。合適的賦形劑包括但不限于穩(wěn)定劑、濕潤(rùn)劑和乳化劑、不同滲量的鹽、包膠劑、緩沖液和皮膚穿透促進(jìn)劑。賦形劑以及用于腸胃外和非腸胃外藥物遞送的制劑公開(kāi)于Remington，TheScienceandPracticeofPharmacy20thEd.MackPublishing(2000)中。在一些實(shí)施方案中，這些試劑被配制為用于通過(guò)(例如腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)等)注射施用。因此，這些試劑可與可藥用媒介如鹽水、Ringer′s溶液、葡萄糖溶液等等組合。特定的給藥方案(即劑量、時(shí)間和重復(fù))將取決于特定的個(gè)體和該個(gè)體的醫(yī)療史?？笴GRP抗體可以使用任何合適的方法施用，所述方法包括注射(例如腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)等)?？笴GRP抗體也可以如本文所述通過(guò)吸入施用。通常，對(duì)于抗CGRP抗體的施用而言，初始的候選劑量可以為約2mg/kg。就本發(fā)明的目的而言，典型的每日劑量可以從約3μg/kg到30μg/kg到300μg/kg到3mg/kg，到30mg/kg到100mg/kg或更多的范圍內(nèi)，取決于上述因素。例如可使用約1mg/kg、約2.5mg/kg、約5mg/kg、約10mg/kg和約25mg/kg的劑量。對(duì)于在若干天或更久的重復(fù)施用而言，根據(jù)病癥持續(xù)治療，直到發(fā)生期望的癥狀抑制或直到達(dá)到足夠的治療水平，例如降低疼痛。示范性的給藥方案包括施用約2mg/kg的初始劑量，然后是約1mg/kg抗CGRP抗體的每周維持劑量，或然后是每隔一周約1mg/kg的維持劑量。然而，其它給藥方法可以是有用的，取決于醫(yī)生希望達(dá)到的藥物代謝動(dòng)力學(xué)衰變模式。例如，在一些實(shí)施方案中，考慮一周一到四次的給藥。該療法的過(guò)程容易地通過(guò)常規(guī)技術(shù)和實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。給藥方案(包括使用的CGRP拮抗劑)可隨時(shí)間變化。就本發(fā)明的目的而言，抗CGRP拮抗劑抗體的適當(dāng)劑量取決于使用的抗CGRP拮抗劑抗體(或其組合物)、待治療的頭痛(例如偏頭痛)類(lèi)型和嚴(yán)重性、試劑是否就預(yù)防或治療的目的被使用、先前療法、患者的醫(yī)療史和對(duì)試劑的應(yīng)答，以及主治醫(yī)師的判斷。典型地，臨床醫(yī)師會(huì)施用抗CGRP拮抗劑抗體，直到達(dá)到完成期望結(jié)果的劑量。劑量和/或頻率可隨治療進(jìn)程改變。經(jīng)驗(yàn)性考慮(例如半衰期)通常有助于劑量的確定。例如，與人免疫系統(tǒng)相容的抗體(如人源化抗體或全人抗體)可用于延長(zhǎng)抗體的半衰期和預(yù)防抗體被宿主的免疫系統(tǒng)攻擊。施用頻率可隨著治療進(jìn)程確定和調(diào)整，并通常(但非必須)以頭痛(例如偏頭痛)的治療和/或抑制和/或改善和/或延遲為基礎(chǔ)?；蛘撸笴GRP拮抗劑抗體的持久連續(xù)釋放制劑可以是適當(dāng)?shù)?。用于達(dá)到持久釋放的多種制劑和設(shè)備是本領(lǐng)域已知的。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以按經(jīng)驗(yàn)確定已經(jīng)被給予一次或多次抗CGRP拮抗劑抗體施用的個(gè)體中抗CGRP拮抗劑抗體的劑量。個(gè)體被給予增加劑量的抗CGRP拮抗劑抗體。為了評(píng)估抗CGRP拮抗劑抗體的效力，可依照該疾病的指征來(lái)進(jìn)行。根據(jù)本發(fā)明方法的抗CGRP拮抗劑抗體的施用可以是連續(xù)的或間斷的，取決于例如受體的生理?xiàng)l件、施用目的是治療性的還是預(yù)防性的，以及熟練醫(yī)生已知的其它因素。抗CGRP拮抗劑抗體的施用可以在預(yù)選的時(shí)間段中基本上是連續(xù)的，或可以是一系列間隔的劑量，例如發(fā)生頭痛(例如偏頭痛)之前、期間或之后之任一；之前；期間；之前和之后；期間和之后；之前和期間；或發(fā)生頭痛之前、期間和之后。施用可以在可能引起頭痛的任何事件之前、期間和/或之后。在一些實(shí)施方案中，可存在多于一種抗CGRP拮抗劑抗體?？梢源嬖谥辽僖环N、至少兩種、至少三種、至少四種、至少物種不同的或更多的抗CGRP拮抗劑抗體。通常這些抗CGRP拮抗劑抗體可以具有彼此不會(huì)不利影響的互補(bǔ)活性。拮抗劑抗CGRP抗體也可以用于與其它CGRP拮抗劑或CGRP受體拮抗劑結(jié)合。例如，可使用一種或多種以下的CGRP拮抗劑：針對(duì)CGRP的抗反義分子(包括針對(duì)編碼CGRP的核酸的抗反義分子)、CGRP抑制化合物、CGRP結(jié)構(gòu)類(lèi)似物、結(jié)合CGRP的CGRP受體的顯性負(fù)相突變、抗CGRP受體抗體。抗CGRP拮抗劑抗體也可以與其它試劑結(jié)合使用，所述其它試劑起到增強(qiáng)和/或補(bǔ)充試劑有效性的作用。按下文所述，將根據(jù)本發(fā)明使用的抗CGRP拮抗劑抗體的治療性制劑制備為低壓凍干制劑或水性溶液的形式用于儲(chǔ)存：將具有期望純度的抗體與任選的可藥用運(yùn)載體、賦形劑或穩(wěn)定劑混合(Remington，TheScienceandPracticeofPharmacy20thEd.MackPublishing(2000))?？山邮艿倪\(yùn)載體、賦形劑或穩(wěn)定劑在使用的劑量上對(duì)于受體是無(wú)毒的，并可包含緩沖液如磷酸、檸檬酸和其它有機(jī)酸；鹽如氯化鈉；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫氨酸；防腐劑(例如氯化十八烷基二甲基芐基銨；氯化六甲雙銨；氯化苯甲烴銨、氯化苯乙銨；苯酚、丁醇或苯甲醇；對(duì)羥基苯甲酸烷基酯，如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環(huán)己醇；3-戊醇；和m-甲酚)；低分子量(少于約10個(gè)殘基)的多肽；蛋白質(zhì)，如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水多聚體如聚乙烯吡咯酮；氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑如EDTA；糖如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽的反例子如鈉；金屬絡(luò)合物(例如Zn-蛋白質(zhì)絡(luò)合物)；和/或非離子型表面活性劑，如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。通過(guò)本領(lǐng)域已知方法制備含有抗CGRP拮抗劑抗體的脂質(zhì)體，所述方法例如描述于Epstein，etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA82：3688(1985)；Hwang，etal.，Proc.NatlAcad.Sci.USA77：4030(1980)；和U.S.Pat.Nos.4,485,045和4,544,545中。具有增強(qiáng)的循環(huán)時(shí)間的脂質(zhì)體公開(kāi)于U.S.專(zhuān)利No.5,013,556中。尤其有用的脂質(zhì)體可以通過(guò)反相蒸發(fā)法用脂質(zhì)組合物產(chǎn)生，所述脂質(zhì)組合物含有磷脂酰膽堿、膽固醇和PEG衍生的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)。通過(guò)將脂質(zhì)體濾過(guò)確定孔徑的濾器得到具有期望直徑的脂質(zhì)體。在膠體給藥系統(tǒng)(例如脂質(zhì)體、白蛋白微球、微乳劑、納米顆粒和納米膠囊)或大乳劑中，活性成分也可以被捕獲在微膠囊中例如分別被捕獲在羥甲基纖維素或明膠微膠囊和多聚(methylmethacylate)微膠囊中，所述微膠囊例如通過(guò)凝聚技術(shù)或通過(guò)界面聚合法制備。這類(lèi)技術(shù)公開(kāi)于Remington，TheScienceandPracticeofPharmacy20thEd.MackPublishing(2000)中?？芍苽渚忈屩苿＞忈屩苿┑暮线m例子包括含有抗體的固體疏水多聚體的半滲透性基質(zhì)，所述基質(zhì)是有形狀物體(例如薄膜或微膠囊)的形式。緩釋基質(zhì)的例子包括聚酯、水凝膠(例如多聚(2-羥乙基-異丁烯酯)或多聚(乙烯醇))、多聚乳酸化合物(U.S.Pat.No.3,773,919)、L-谷氨酸共聚物和7乙基-L-谷氨酸鹽、非降解性的乙烯-醋酸乙烯酯、降解性的乳酸-羥乙酸共聚物如LUPRONDEPOTTM(由乳酸-羥乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林組成的可注射微球)、乙酸異丁酸蔗糖酯和多聚-D-(-)-3-羥基丁酸。用于體內(nèi)施用的配方必須是無(wú)菌的。這通過(guò)例如濾過(guò)無(wú)菌濾膜容易地實(shí)現(xiàn)。治療性的抗CGRP拮抗劑抗體組合物通常被置于具有無(wú)菌接入口的容器(例如帶有可被皮下注射針穿透的塞子的靜脈注射溶液袋或瓶)中。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以是用于口、腸胃外或直腸施用或通過(guò)吸入或吹入施用的單位劑型，如片劑、丸劑、膠囊、粉末、顆粒、溶液或懸浮液或栓劑。為了制備固體組合物如片劑，將主要的活性成分與藥物運(yùn)載體(例如常規(guī)的壓片成分，如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、磷酸二鈣或樹(shù)膠)和其它藥物稀釋劑(例如水)混合，形成含有本發(fā)明化合物或其無(wú)毒可藥用鹽的均相混合物的固體預(yù)配制組合物。當(dāng)提到這些預(yù)配制組合物是均相的時(shí)，表示活性成分遍及組合物被均一地分散，從而組合物可以被容易地再分為等效的單位劑型，如片劑、丸劑和膠囊。然后將該固體預(yù)配制組合物再分為上述類(lèi)型的單位劑型，其含有從0.1到約500mg的本發(fā)明活性成分。新組合物的片劑或丸劑可以被包被或者以其它方式復(fù)合，得到給予長(zhǎng)效的優(yōu)點(diǎn)的劑型。例如，片劑或丸劑可以包含內(nèi)部劑量和外部劑量組分，后者是前者上外膜的形式。這兩種組分可以被腸道層分開(kāi)，所述腸溶層(entericlayer)作用在于抵抗胃中的崩解并允許內(nèi)部組分完整地進(jìn)入十二指腸或被延遲釋放。多種材料可被用于這類(lèi)腸溶層或包衣，這類(lèi)材料包括大量多聚酸和多聚酸與如紫膠、鯨蠟醇和醋酸纖維素類(lèi)材料的混合物。合適的表面活性劑尤其包括：非離子型試劑，例如聚氧乙烯山梨聚糖(例如TweenTM20、40、60、80或85)和其它山梨聚糖(例如SpanTM20、40、60、80或85)。含有表面活性劑的組合物應(yīng)便利地包含0.05％和5％之間的表面活性劑，并可以在0.1％和2.5％之間。應(yīng)當(dāng)理解如果必需的話可添加其它成分，例如甘露醇或其它可藥用的媒介。合適的乳劑可以使用可商業(yè)獲得的脂肪乳劑來(lái)制備，所述脂肪乳劑例如IntralipidTM、LiposynTM、InfonutrolTM、LipofundinTM和LipiphysanTM?；钚猿煞挚杀蝗苡陬A(yù)先混合的乳劑組合物中，或者其可溶于油(例如大豆油、紅花油、棉籽油、芝麻油、玉米油或杏仁油)或通過(guò)將磷脂(例如卵磷脂、大豆磷脂或大豆卵磷脂)與水混合形成的乳劑中。應(yīng)當(dāng)理解可添加其它成分，例如甘油或葡萄糖，以調(diào)節(jié)乳劑的張力。合適的乳劑典型地含有多至20％的油，例如5％和20％之間。脂肪乳劑包含0.1和1.0Im之間、尤其是0.1和0.5Im之間的脂肪微滴，并具有5.5到8.0范圍內(nèi)的pH。乳劑組合物可以是通過(guò)將抗CGRP拮抗劑抗體與IntralipidTM或其組分(大豆油、卵磷脂、甘油和水)混合制備的組合物。用于吸入或吹入的組合物包括在可藥用的、水性或有機(jī)溶劑或其混合物中的溶液和懸浮液和粉末。液體或固體組合物可含有上文公開(kāi)的合適的可藥用賦形劑。在一些實(shí)施方案中，通過(guò)口或鼻呼吸途徑施用組合物用于局部或全身作用。優(yōu)選地在無(wú)菌可藥用溶劑中的組合物可以通過(guò)使用氣體被噴灑。被噴灑的溶液可以從噴霧設(shè)備直接被呼吸，或噴霧設(shè)備可以與面罩、帷罩或間歇性正壓呼吸機(jī)結(jié)合。溶液、懸浮液或粉末組合物可以從以適當(dāng)方式遞送配方的設(shè)備中(優(yōu)選口或鼻地)被施用。頭痛的診斷或評(píng)估是本領(lǐng)域充分確定的。評(píng)估可以根據(jù)受試者測(cè)量(例如癥狀的患者特征)來(lái)確定。例如，偏頭痛可以基于以下標(biāo)準(zhǔn)診斷：1)頭痛的偶發(fā)性發(fā)作持續(xù)4到72個(gè)小時(shí)；2)具有兩種以下癥狀：?jiǎn)蝹?cè)疼痛、博動(dòng)、運(yùn)動(dòng)時(shí)加重，和中度或嚴(yán)重強(qiáng)度的疼痛；和3)以下癥狀之一：惡心或嘔吐，和畏光或恐聲(phonophobia)。Goadsbyetal.，N.Engl.J.Med.346：257-270，2002。治療有效性可以通過(guò)本領(lǐng)域公知的方法評(píng)估。例如，可評(píng)估疼痛緩解。因此，在一些實(shí)施方案中，在施用抗CGRP抗體后1、2或幾個(gè)小時(shí)后主觀地觀察到疼痛緩解。在一些實(shí)施方案中，在施用抗CGRP抗體后主觀地觀察頭痛發(fā)作的頻率。B.抗CGRP拮抗劑抗體本發(fā)明的方法使用抗CGRP拮抗劑抗體，所述CGRP拮抗劑抗體表示封閉、抑制或降低(包括顯著地)CGRP生物活性的任何抗體分子，所述生物活性包括由CGRP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)介導(dǎo)的下游途徑，例如受體結(jié)合和/或?qū)GRP的細(xì)胞應(yīng)答的激發(fā)?？笴GRP拮抗劑抗體應(yīng)顯示以下特征中的任一種或多種：(a)結(jié)合CGRP；(b)封閉CGRP與其受體結(jié)合；(c)封閉或降低CGRP受體活化(包括cAMP活化)；(d)抑制CGRP生物活性或下調(diào)由CGRP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能介導(dǎo)的下游途徑；(e)預(yù)防、改善或治療頭痛(例如偏頭痛)的任何方面；(f)提高CGRP的清除率；和(g)抑制(減少)CGRP合成、生產(chǎn)或釋放?？笴GRP拮抗劑抗體是本領(lǐng)域已知的。參閱例如Tanetal.，Clin.Sci.(Lond).89：565-73，1995；Sigma(Missouri，US)，產(chǎn)品編號(hào)C7113(clone#4901)；Plourdeetal.，Peptides14：1225-1229，1993。就本發(fā)明的目的而言，抗體與CGRP以下述方式反應(yīng)，所述方式抑制CGRP和/或CGRP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能介導(dǎo)的下游途徑。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體識(shí)別人CGRP。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體與人α-CGRP和β-CGRP均結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體與人和大鼠CGRP結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體結(jié)合具有CGRP的氨基酸25-37的C末端片段。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體結(jié)合CGRP的氨基酸25-37中的C末端表位。適用于本發(fā)明的抗體可包括單克隆抗體、多克隆抗體、抗體片段(例如Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、Fc等)、嵌合抗體、雙特異性抗體、雜綴合物抗體、單鏈(ScFv)、其突變體、包含抗體部分的融合蛋白(例如結(jié)構(gòu)域抗體)、人源化抗體，和免疫球蛋白分子的包含所需特異性的抗原識(shí)別位點(diǎn)的任何其它經(jīng)修飾的構(gòu)型，包括抗體的糖基化變體、抗體的氨基酸序列變體和共價(jià)修飾的抗體。抗體可以是犬的、大鼠的、人的，或任何其它來(lái)源的(包括嵌合的或人源化的抗體)。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體是單克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體被人源化。在一些實(shí)施方案中，抗體是人的。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體是抗體G1(如本文所述)。在一些實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體包含表6所示抗體G1或G1變體的一個(gè)或多個(gè)CDR(例如一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或在一些實(shí)施方案中包含所有六個(gè)CDR)。還在其它實(shí)施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體包含圖5所示重鏈可變區(qū)的氨基酸序列(SEQIDNO：1)和圖5所示輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列(SEQIDNO：2)。在一些實(shí)施方案中，抗體包含經(jīng)修飾的恒定區(qū)，例如本文所述是免疫惰性的恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，恒定區(qū)如Eur.J.Immunol.(1999)29：2613-2624；PCT申請(qǐng)No.PCT/GB99/01441；和/或UK專(zhuān)利申請(qǐng)No.9809951.8中所述被修飾。在其它實(shí)施方案中，抗體包含人重鏈IgG2恒定區(qū)，所述恒定區(qū)包含以下突變：A330P331到S330S331(參考野生型IgG2序列的氨基酸排序)。Eur.J.Immunol.(1999)29：2613-2624。在一些實(shí)施方案中，抗體包含帶有以下突變的IgG4恒定區(qū)：E233F234L235到P233V234A235。還在其它實(shí)施方案中，針對(duì)N連接的糖基化而言，恒定區(qū)不被糖基化(aglycosylated)。在一些實(shí)施方案中，通過(guò)突變寡糖附著殘基(如Asn297)和/或側(cè)翼殘基(其為恒定區(qū)中N-糖基化識(shí)別序列的一部分)，使得針對(duì)N連接的糖基化而言恒定區(qū)不被糖基化。在一些實(shí)施方案中，針對(duì)N連接的糖基化而言恒定區(qū)不被糖基化。可通過(guò)酶或通過(guò)在糖基化缺陷宿主細(xì)胞中表達(dá)使得針對(duì)N連接的糖基化而言恒定區(qū)不被糖基化?？笴GRP拮抗劑抗體對(duì)CGRP(例如人α-CGRP)的親合力(KD)可以是約0.02到約200nM。在一些實(shí)施方案中，親合力為下述任何：約200nM、約100nM、約50nM、約10nM、約1nM、約500pM、約100pM、約60pM、約50pM、約20pM、約15pM、約10pM、約5pM或約2pM。在一些實(shí)施方案中，親合力少于下述任何：約250nM、約200nM、約100nM、約50nM、約10nM、約1nM、約500pM、約100pM或約50pM。測(cè)定抗體對(duì)CGRP的親合力的一種方式是通過(guò)測(cè)量抗體的單功能Fab片段的親合力。為了獲得單功能的Fab片段，可以用木瓜蛋白酶切割抗體(例如IgG)或重組表達(dá)?？梢酝ㄟ^(guò)裝備有固定的鏈霉親和素感受芯片(SA)的表面等離振子共振(Biacore3000TM表面等離振子共振(SPR)系統(tǒng)，Biacore，INC，PiscatawayNJ)使用HBS-EP電泳緩沖液(0.01MHEPES，pH7.4、0.15NaCl、3mMEDTA、0.005％v/v表面活性劑P20)測(cè)定抗體的抗CGRPFab片段的親和力。可以在HBS-EP緩沖液中將生物素化的人CGRP(或任何其它CGRP)稀釋為少于0.5ug/mL的濃度，并使用不同的接觸時(shí)間將其注射越過(guò)個(gè)體芯片通道，以達(dá)到兩種范圍的抗原密度：用于詳細(xì)動(dòng)力學(xué)研究的50-200響應(yīng)單位(RU)或用于篩選實(shí)驗(yàn)的800-1,000RU。再生研究顯示25％v/v乙醇中25mMNaOH有效地去除了結(jié)合的Fab同時(shí)維持芯片上多于200個(gè)注射的CGRP活性。典型地，將純化的Fab樣品的連續(xù)稀釋(針對(duì)0.1-10x評(píng)估的KD的濃度)以100μL/分鐘注射1分鐘，并允許至多2小時(shí)的解離時(shí)間。通過(guò)ELISA和/或SDS-PAGE電泳，使用已知濃度的Fab(通過(guò)氨基酸分析測(cè)定)作為標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定Fab蛋白質(zhì)的濃度。使用BlAevaluation程序，通過(guò)將數(shù)據(jù)整體與1∶1Langmuir結(jié)合模型(Karlsson，R.Roos，H.Fagerstam，L.Petersson，B.(1994).MethodsEnzymology6.99-110)擬合，同時(shí)獲得動(dòng)力學(xué)結(jié)合速率(kon)和解離速率(koff)。平衡解離常數(shù)(KD)值作為koff/kon計(jì)算。該方案適用于測(cè)定抗體對(duì)任何CGRP的親合力，所述CGRP包括人CGRP、另一哺乳動(dòng)物的CGRP(例如小鼠CGRP、大鼠CGRP、靈長(zhǎng)類(lèi)CGRP)以及不同形式的CGRP(例如α和β形式)。抗體的親合力通常在25℃下測(cè)量，但是也可以在37℃測(cè)量?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法來(lái)制造抗CGRP拮抗劑抗體。免疫宿主動(dòng)物的途徑和時(shí)間表通常與如本文所進(jìn)一步描述的、用于抗體刺激和生產(chǎn)的、確定的和常規(guī)的技術(shù)一致。用于生產(chǎn)人和小鼠抗體的一般技術(shù)是本領(lǐng)域已知的并在本文被描述了。本發(fā)明包括：任何哺乳動(dòng)物受試者(包括人)或來(lái)自其中的生產(chǎn)抗體的細(xì)胞可以被加工，用作生產(chǎn)哺乳動(dòng)物(包括人)雜交瘤細(xì)胞系的基礎(chǔ)。典型地，用一定量的免疫原(包括本文所述的免疫原)腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、口、皮下、腳掌內(nèi)和/或皮內(nèi)接種宿主細(xì)胞。可以使用Kohler，B.andMilstein，C.(1975)Nature256：495-497的或被Buck，D.W.，etal.，InVitro，18：377-381(1982)修飾的一般體細(xì)胞雜交技術(shù)，從淋巴細(xì)胞和無(wú)限增殖化骨髓瘤細(xì)胞制備雜交瘤?？梢垣@得的骨髓瘤株系(包括但不限于X63-Ag8.653和來(lái)自SaIkInstitute，CellDistributionCenter，SanDiego，Calif.，美國(guó)的骨髓瘤株系)可用于雜交中。通常，該技術(shù)涉及使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的促融劑(如聚乙二醇)或通過(guò)電手段融合骨髓瘤細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。融合后將細(xì)胞從融合培養(yǎng)基中分離并在選擇性生長(zhǎng)培養(yǎng)基如次黃嘌呤-氨基蝶呤-胸腺嘧啶(HAT)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，以消除未雜交的親本細(xì)胞?？捎帽疚乃龅难a(bǔ)充了血清或未補(bǔ)充血清的任何培養(yǎng)基lai培養(yǎng)分泌單克隆抗體的雜交瘤。作為細(xì)胞融合技術(shù)的另一選擇，可以使用EBV無(wú)限增殖化B細(xì)胞生產(chǎn)本發(fā)明的抗CGRP單克隆抗體。如果需要，將雜交瘤擴(kuò)展并亞克隆，并通過(guò)常規(guī)免疫測(cè)定步驟(例如放射免疫測(cè)定、酶免疫測(cè)定或熒光免疫測(cè)定)來(lái)測(cè)試上清液的抗免疫原活性。可用作抗體來(lái)源的雜交瘤包括生產(chǎn)對(duì)CGRP特異的單克隆抗體或其部分的親本雜交瘤的所有衍生的后代細(xì)胞?？梢允褂靡阎襟E體外或體內(nèi)培養(yǎng)生產(chǎn)這類(lèi)抗體的雜交瘤。如果需要的化，可以通過(guò)常規(guī)免疫球蛋白純化步驟(如硫酸銨沉淀、凝膠電泳、透析、色譜法和超濾)從培養(yǎng)基或體液中分離單克隆抗體。如果存在不期望的活性，可例如通過(guò)將制劑流過(guò)吸附劑并將期望的抗體從免疫原上洗脫或釋放來(lái)去除，所述吸附劑由附著在固相上的免疫原組成。用人CGRP或含有靶氨基酸序列的片段免疫宿主動(dòng)物能夠得到一群抗體(例如單克隆抗體)，所述靶氨基酸序列使用雙功能試劑或衍生試劑與在要免疫的物種中是免疫原性的蛋白質(zhì)綴合，所述蛋白質(zhì)為例如鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)素(keyholelimpethemocyanin)、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制劑，所述雙功能試劑或衍生試劑為例如馬來(lái)酰亞胺苯甲酰硫代琥珀酰亞胺(maleimidobenzoylsulfosuccinimide)酯(通過(guò)半胱氨酸殘基綴合)、N-羥基琥珀酰亞胺酯(通過(guò)賴氨酸殘基)、丙烯醛、琥珀酸酐、SOCl2或R1N＝C＝NR，其中R或R1是不同的烷基。如果需要的話，可以對(duì)感興趣的抗CGRP拮抗劑抗體(單克隆或多克隆)進(jìn)行測(cè)序，隨后可將多核苷酸序列克隆進(jìn)載體中用于表達(dá)或繁殖。編碼感興趣的抗體的序列可以在宿主細(xì)胞中的載體中維持，然后可以將宿主細(xì)胞擴(kuò)展或冷凍用于進(jìn)一步的用途?；蛘?，可將多核苷酸序列用于遺傳操作，以“人源化”抗體或改善抗體的親和力或其它特性。例如，恒定區(qū)可以被改造得更像人恒定區(qū)，從而如果抗體被用于臨床試驗(yàn)和在人中治療時(shí)避免免疫應(yīng)答?？梢云谕z傳改造抗體序列，以獲得對(duì)CGRP的更大親和力和在抑制CGRP中的更強(qiáng)效力。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)明白，可以對(duì)抗CGRP拮抗劑抗體進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)多核苷酸改變并仍然維持其對(duì)CGRP的結(jié)合能力。人源化單克隆抗體存在四個(gè)一般步驟。這些步驟為：(1)確定初始抗體輕和重可變結(jié)構(gòu)域的核苷酸和預(yù)測(cè)的氨基酸序列(2)設(shè)計(jì)人源化抗體，即決定在人源化過(guò)程中使用何種抗體框架區(qū)(3)實(shí)際的人源化方法/技術(shù)和(4)人源化抗體的轉(zhuǎn)染和表達(dá)。參閱例如U.S.專(zhuān)利Nos.4,816,567、5,807,715、5,866,692、6,331,415、5,530,101、5,693,761、5,693,762、5,585,089和6,180,370。包含來(lái)自于非人免疫球蛋白的抗原結(jié)合位點(diǎn)的大量“人源化”抗體分子已經(jīng)被描述過(guò)，包括下述嵌合抗體，所述嵌合抗體具有與人恒定區(qū)融合的嚙齒動(dòng)物V區(qū)或經(jīng)修飾的嚙齒動(dòng)物V區(qū)以及它們結(jié)合的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)。參閱例如Winteretal.Nature349：293-299(1991)，Lobuglioetal.Proc.Nat.Acad.Sci.USA86：4220-4224(1989)，Shawetal.JImmunol.138：4534-4538(1987)和Brownetal.CancerRes.47：3577-3583(1987)。其它參考文獻(xiàn)描述了在與適當(dāng)?shù)娜丝贵w恒定區(qū)融合之前移植進(jìn)人支持框架區(qū)(FR)的嚙齒動(dòng)物CDR。參閱例如Riechmannetal.Nature332：323-327(1988)，Verhoeyenetal.Science239：1534-1536(1988)和Jonesetal.Nature321：522-525(1986)。另一參考文獻(xiàn)描述了被重組修飾的嚙齒動(dòng)物框架區(qū)支持的嚙齒動(dòng)物CDR。參閱例如歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)No.0519596。這些“人源化”分子被設(shè)計(jì)為最小化對(duì)嚙齒動(dòng)物抗人抗體分子的不期望的免疫應(yīng)答，所述免疫應(yīng)答限制了這些部分在人受體中治療性應(yīng)用的持續(xù)時(shí)間和有效性。例如，可以工程改造抗體恒定區(qū)，使得其為免疫惰性的(例如不引發(fā)補(bǔ)體裂解)。參閱例如PCT公開(kāi)No.PCT/GB99/01441；UK專(zhuān)利申請(qǐng)No.9809951.8。還可以使用的人源化抗體的其它方法由Daughertyetal.，Nucl.AcidsRes.19：2471-2476(1991)和U.S.專(zhuān)利Nos.6,180,377；6,054,297；5,997,867；5,866,692；6,210,671和6,350,861和PCT公開(kāi)No.WO01/27160中公開(kāi)。再或者，可以通過(guò)使用可商業(yè)獲得的小鼠獲得完全的人抗體，所述小鼠已經(jīng)被工程改造為表達(dá)特異的人免疫球蛋白蛋白質(zhì)。被設(shè)計(jì)為生產(chǎn)更期望的(例如完全人抗體)或更有活力的免疫應(yīng)答的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物也可以用于產(chǎn)生人源化的抗體或人抗體。這類(lèi)技術(shù)的例子為來(lái)自Abgenix，Inc.(Fremont，CA)的XenomouseTM和來(lái)自Medarex，Inc.(Princeton，NJ)的TCMouseTM?；蛘?，可以使用本領(lǐng)域已知的任何方法重組制造和表達(dá)抗體。又或者，可以通過(guò)噬菌體展示技術(shù)重組制造抗體。參閱例如U.S.專(zhuān)利Nos.5,565,332；5,580,717；5,733,743；和6,265,150；和Winteretal.，Annu.Rev.Immunol.12：433-455(1994)?；蚩梢允褂檬删w展示技術(shù)(McCaffertyetal.，Nature348：552-553(1990))從來(lái)自未免疫的供體的免疫球蛋白可變(V)結(jié)構(gòu)域基因倉(cāng)庫(kù)中體外生產(chǎn)人抗體和抗體片段。根據(jù)該技術(shù)，將抗體V結(jié)構(gòu)域在讀碼框內(nèi)克隆進(jìn)絲狀噬菌體(如M13或fd)的主要或次要外殼蛋白中，并作為噬菌體顆粒表面上的功能性抗體片段展示。因?yàn)榻z狀顆粒含有噬菌體基因組的單鏈DNA拷貝，所以基于抗體功能特征的選擇也導(dǎo)致選擇編碼顯示這些特征的抗體的基因。因此，噬菌體模擬B細(xì)胞的一些特征。噬菌體展示可以以多種形式進(jìn)行；綜述參閱例如Johnson，KevinS.andChisweli，DavidJ.，CurrentOpinioninStructuralBiology3：564-571(1993)。可以使用若干種來(lái)源的V基因區(qū)段用于噬菌體展示。Clacksonetal.，Nature352：624-628(1991)從來(lái)自免疫小鼠脾中的V基因小量隨機(jī)組合文庫(kù)中分離的不同的抗噁唑酮抗體陣列。基本依照Marketal.，J.MoI.Biol.222：581-597(1991)或Griffithetal.，EMBOJ.12：725-734(1993)所述的技術(shù)可以構(gòu)建來(lái)自未免疫的人供體的V基因倉(cāng)庫(kù)并分離針對(duì)不同抗原(包括自身抗原)陣列的抗體。天然免疫應(yīng)答中，抗體基因以高速率累積突變(體細(xì)胞高度突變)。一些引入的改變會(huì)賦予更高的親和力，并且在隨后的抗原激發(fā)中優(yōu)先地復(fù)制和分化展示高親和力表面免疫球蛋白的B細(xì)胞。可以通過(guò)使用已知為“鏈改組(chainshuffling)”(Marks，etal.，Bio/Technol.10：779-783(1992))的技術(shù)模擬該天然過(guò)程。在該方法中，通過(guò)噬菌體展示獲得的“原始”人抗體的親和力可以如下被改進(jìn)：用得自未免疫的供體的V結(jié)構(gòu)域基因天然存在的變體倉(cāng)庫(kù)(倉(cāng)庫(kù))連續(xù)地置換重鏈和輕鏈的V區(qū)域基因。該技術(shù)允許生產(chǎn)具有pM-nM范圍內(nèi)親和力的抗體和抗體片段。制造非常大的噬菌體抗體倉(cāng)庫(kù)(也已知為“所有之母文庫(kù)(themother-of-alllibraries)”)的策略已經(jīng)由Waterhouseetal.，Nucl.AcidsRes.21：2265-2266(1993)描述?；蚋慕M也可以用于從嚙齒動(dòng)物抗體中衍生人抗體，其中人抗體具有與初始的嚙齒動(dòng)物抗體相似的親和力和特異性。根據(jù)該方法(其也被稱作“表位印記”)，通過(guò)噬菌體展示技術(shù)獲得的嚙齒動(dòng)物抗體的重鏈或輕鏈V結(jié)構(gòu)域基因被置換為人V結(jié)構(gòu)域基因倉(cāng)庫(kù)，創(chuàng)建了嚙齒動(dòng)物-人嵌合體。在抗原上的選擇導(dǎo)致能夠重建功能性抗原結(jié)合位點(diǎn)(即表位支配(印記)配偶體的選擇)的人可變區(qū)的分離。重復(fù)該過(guò)程從而置換剩余的嚙齒動(dòng)物V結(jié)構(gòu)域時(shí)，獲得人抗體(參閱1993年四月1日公開(kāi)的PCT公開(kāi)No.WO93/06213)。與通過(guò)CDR移植對(duì)嚙齒動(dòng)物抗體的常規(guī)人源化不同，該技術(shù)提供了完全的人抗體，其不具有嚙齒動(dòng)物來(lái)源的框架或CDR殘基。顯然，盡管上文的討論僅涉及人源化的抗體，但是所討論的一般性原則適用于定制用于例如犬、貓、靈長(zhǎng)類(lèi)、馬和牛的抗體。還顯而易見(jiàn)的是本文所述的人源化抗體的一個(gè)或多個(gè)方面(例如CDR移植、框架突變和CDR突變)可以組合?？砂聪挛乃鰜?lái)重組制造抗體：首先將生產(chǎn)多種抗體或一種抗體的細(xì)胞從宿主動(dòng)物中分離，獲得基因序列，并使用該基因序列在宿主細(xì)胞(例如CHO細(xì)胞)中重組表達(dá)抗體。可使用的另一方法是在植物(例如煙草)或轉(zhuǎn)基因乳中表達(dá)抗體序列。用于在植物或乳中重組表達(dá)抗體的方法已經(jīng)被公開(kāi)。參閱例如Peeters，etal.Vaccine19：2756(2001)；Lonberg，N.andD.HuszarInt.Rev.Immunol13：65(1995)；和Pollock，etal.，JImmunolMethods231：147(1999)。用于制造抗體衍生物(例如人源化的、單鏈的等)的方法是本領(lǐng)域已知的。免疫測(cè)定和流式細(xì)胞分選技術(shù)如熒光激活細(xì)胞分選術(shù)(FACS)也可以用于分離對(duì)CGRP特異的抗體。抗體可以結(jié)合與許多不同的運(yùn)載體結(jié)合。運(yùn)載體可以是活性的和/或惰性的。公知的運(yùn)載體的例子包括聚丙烯、聚苯乙烯、聚乙烯、葡聚糖、尼龍、淀粉酶、玻璃、天然和經(jīng)修飾的纖維素、聚丙烯酰胺、瓊脂糖和磁石。就本發(fā)明的目的而言，運(yùn)載體的特性可以是可溶的或不溶的。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)直到用于結(jié)合抗體的其它合適運(yùn)載體，或應(yīng)該能夠使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定。在一些實(shí)施方案中，運(yùn)載體包括靶向心肌膜的部分。容易使用常規(guī)步驟(例如通過(guò)使用能夠特異結(jié)合下屬基因的寡核苷酸探針，所述基因編碼單克隆抗體的重鏈和輕鏈)對(duì)編碼單克隆抗體的DNA進(jìn)行分離和測(cè)序。雜交瘤細(xì)胞左右這類(lèi)DNA優(yōu)選的來(lái)源作用。一旦被分離，可以將DNA置于表達(dá)載體(例如PCT公開(kāi)No.WO87/04462中公開(kāi)的表達(dá)載體)中，然后將其轉(zhuǎn)染進(jìn)宿主細(xì)胞中獲得重組宿主細(xì)胞中單克隆抗體的合成，所述宿主細(xì)胞例如以其它方式不生產(chǎn)免疫球蛋白蛋白質(zhì)的大腸桿菌細(xì)胞、猿猴COS細(xì)胞、中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞或骨髓瘤細(xì)胞。參閱例如PCT公開(kāi)No.WO87/04462。DNA也可以被修飾，例如通過(guò)將同源鼠序列位置替換為人重鏈和輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域的編碼序列(Morrisonetal.，Proc.Nat.Acad.Sci.81：6851(1984))，或通過(guò)將編碼非免疫球蛋白多肽的序列的全部或部分與免疫球蛋白編碼序列共價(jià)接合。以該方式制備“嵌合的”或“雜交的”抗體，其具有本文的抗CGRP單克隆抗體的結(jié)合特異性。可以使用本領(lǐng)域已知的方法鑒定或表征來(lái)自抗體的抗CGRP拮抗劑抗體和多肽，從而探測(cè)和/或測(cè)量CGRP生物活性的降低、緩和或中和。例如，也可以通過(guò)將候選試劑與CGRP孵育并監(jiān)測(cè)任一種或多種以下特性來(lái)鑒定抗CGRP拮抗劑抗體：(a)結(jié)合CGRP；(b)封閉CGRP與其受體結(jié)合；(c)封閉或降低CGRP受體活化(包括cAMP活化)；(d)抑制CGRP生物活性或由CGRP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能介導(dǎo)的下游途徑；(e)預(yù)防、改善或治療頭痛(例如偏頭痛)的任何方面；(f)提高CGRP的清除率；和(g)抑制(減少)CGRP合成、生產(chǎn)或釋放。在一些實(shí)施方案中，通過(guò)將候選試劑與CGRP孵育并監(jiān)測(cè)CGRP的結(jié)合和/或伴隨的生物活性降低或中和來(lái)鑒定抗CGRP拮抗劑抗體或多肽。可以用經(jīng)純化的CGRP多肽，或用天然表達(dá)CGRP多肽或被轉(zhuǎn)染以表達(dá)CGRP多肽的細(xì)胞進(jìn)行結(jié)合測(cè)定。在一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合測(cè)定是競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合測(cè)定，其中評(píng)價(jià)候選抗體與已知抗CGRP拮抗劑競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合CGRP的能力。該測(cè)試可以以多種形式進(jìn)行，包括ELISA形式。在其它實(shí)施方案中，通過(guò)將候選試劑與CGRP孵育，并監(jiān)測(cè)結(jié)合和伴隨的對(duì)細(xì)胞表面上表達(dá)的CGRP受體活化抑制來(lái)鑒定抗CGRP拮抗劑抗體。在最初的鑒定后，可以通過(guò)生物測(cè)定進(jìn)一步證實(shí)和精制候選抗CGRP拮抗劑抗體的活性，所述生物測(cè)定已知用于檢驗(yàn)靶向的生物活性?；蛘?，可以使用生物測(cè)定直接篩選候選者。例如，CGRP促進(jìn)響應(yīng)細(xì)胞中大量可測(cè)量的改變。這些改變包括但不限于：細(xì)胞(例如SK-N-MC細(xì)胞)中cAMP的刺激。也可以使用動(dòng)物模型測(cè)量拮抗劑活性，例如測(cè)量由刺激大鼠隱神經(jīng)誘導(dǎo)的皮膚血管擴(kuò)張。Escottetal.，Br.J.Pharmacol.110：772-776，1993?？蛇M(jìn)一步使用頭痛(例如偏頭痛)的動(dòng)物模型檢驗(yàn)拮抗劑抗體或多肽的效力。Reuter，etal.，F(xiàn)unctionalNeurology(15)Suppl.3，2000。用于鑒定和表征抗CGRP拮抗劑抗體的方法中的一些在實(shí)施例中詳細(xì)描述?？梢允褂帽绢I(lǐng)域公知的方法表征抗CGRP拮抗劑抗體。例如，一種方法是鑒定其結(jié)合的表位，或“表位作圖”。存在本領(lǐng)域已知的用于對(duì)蛋白質(zhì)上的表位位置作圖和表征的許多方法，包括解答抗體-抗原復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)、競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定、基因片段表達(dá)測(cè)定，和基于合成肽的測(cè)定，例如描述于Chapter11ofHarlowandLane，UsingAntibodies，aLaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NewYork，1999中。在額外的例子中，可使用表位作圖確定抗CGRP拮抗劑抗體結(jié)合的序列。表位作圖可以從多種來(lái)源商業(yè)獲得，例如PepscanSystems(Edelhertweg15，8219PHLelystad，荷蘭)。表位可以是線性表位(即包含在單鏈氨基酸中)或通過(guò)氨基酸的三維相互作用形成的構(gòu)型表位(其不必須包含在單鏈中)。多種長(zhǎng)度(例如至少4-6個(gè)氨基酸長(zhǎng))的肽可以被分離或(例如重組地)合成，并用于與抗CGRP拮抗劑抗體的結(jié)合測(cè)定中。在另一例子中，抗CGRP拮抗劑抗體結(jié)合的表位可以通過(guò)使用來(lái)自CGRP序列的重疊肽并測(cè)定抗CGRP拮抗劑抗體的結(jié)合而在系統(tǒng)性篩選中確定。根據(jù)基因片段表達(dá)測(cè)定，隨機(jī)地或通過(guò)特異的遺傳構(gòu)建使編碼CGRP的開(kāi)放讀碼框成為片段，并測(cè)定待所表達(dá)的CGRP片段與待檢驗(yàn)的抗體的反應(yīng)性。例如可以通過(guò)PCR生產(chǎn)基因片段，隨后在存在放射性氨基酸的情況下體外轉(zhuǎn)錄和翻譯為蛋白質(zhì)。然后通過(guò)免疫沉淀和凝膠電泳測(cè)定抗體與放射性標(biāo)記的CGRP片段的結(jié)合。也可以通過(guò)使用在噬菌體顆粒表面上展示的隨機(jī)肽序列大文庫(kù)(噬菌體文庫(kù))鑒定某些表位?；蛘?，可以在簡(jiǎn)單的結(jié)合測(cè)定中測(cè)試確定的重疊肽片段文庫(kù)對(duì)測(cè)試抗體的結(jié)合。在一個(gè)額外的例子中，可以進(jìn)行抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域誘變、結(jié)構(gòu)域切換實(shí)驗(yàn)和丙氨酸掃描誘變，來(lái)鑒定表位結(jié)合所需的、充分的和/或必要的殘基。例如，可以使用突變體CGRP進(jìn)行結(jié)構(gòu)域切換實(shí)驗(yàn)，其中CGRP多肽的多個(gè)片段已經(jīng)被置換(切換)為來(lái)自密切相關(guān)的、但是抗原性不同的蛋白質(zhì)(例如神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子蛋白質(zhì)家族的另一成員)的序列?？梢酝ㄟ^(guò)評(píng)估抗體與突變體CGRP的結(jié)合，來(lái)評(píng)估特定CGRP片段對(duì)抗體結(jié)合的重要性?？捎糜诒碚骺笴GRP拮抗劑抗體的又一方法是使用競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法(其使用已知結(jié)合相同抗原的其它抗體，即CGRP上的多個(gè)片段)來(lái)確定抗CGRP拮抗劑抗體是否與其它抗體結(jié)合相同的表位。競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的?？梢允褂帽磉_(dá)載體來(lái)指導(dǎo)抗CGRP拮抗劑抗體的表達(dá)。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉使用表達(dá)載體體內(nèi)獲得外源蛋白質(zhì)的表達(dá)。參閱例如U.S.專(zhuān)利Nos.6,436,908；6,413,942；和6,376,471。表達(dá)載體的施用包括局部或全身施用，包括注射、口施用、基因槍或插入導(dǎo)管施用和局部施用。在另一實(shí)施方案中，表達(dá)載體被直接施用至交感干或神經(jīng)節(jié)，或施用進(jìn)冠狀動(dòng)脈、心房、腦室或心包中。也可以使用含有表達(dá)載體或亞基因組多核苷酸的治療性組合物的定向遞送。受體介導(dǎo)的DNA遞送技術(shù)描述于例如Findeisetal.，TrendsBiotechnol.(1993)11：202；Chiouetal.，GeneTherapeutics：MethodsAndApplicationsOfDirectGeneTransfer(J.A.Wolff，ed.)(1994)；Wuetal.，J.Biol.Chem.(1988)263：621；Wuetal.，J.Biol.Chem.(1994)269：542；Zenkeetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1990)87：3655；Wuetal.，J.Biol.Chem.(1991)266：338中。在基因治療方案中，對(duì)局部施用而言，含有多核苷酸的治療性組合物在約100mg到約200mgDNA的范圍內(nèi)被施用。在基因治療方案中也可以使用約500ng到約50mg、約1μg到約2mg、約5μg到約500μg和約20μg到約100μgDNA范圍內(nèi)的濃度?？梢允褂没蜻f送媒介遞送治療性多...