專利名稱：鹽沉結(jié)合電滲析分離純化巖藻聚糖硫酸酯方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種分離純化巖藻聚糖硫酸酯的方法，尤其是一種操作簡單、成本低廉、提取率高，可工業(yè)化生產(chǎn)的鹽沉結(jié)合電滲析分離純化巖藻聚糖硫酸酯方法。
背景技術(shù)：
巖藻聚糖硫酸酯(fucoidan)是一種存在于褐藻中的特殊硫酸多糖，國內(nèi)外研究表明其具有抗凝血、降血脂、抗腫瘤、抗病毒，增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能等多種生物學(xué)活性。由于海帶在我國養(yǎng)殖區(qū)域廣泛，產(chǎn)量巨大，占世界產(chǎn)量的89%左右，因此海帶已成為巖藻聚糖硫酸酯的主要生產(chǎn)原料之一。傳統(tǒng)的生產(chǎn)方法有酸解和蒸煮酸解法破環(huán)性大，環(huán)境污染較嚴(yán)重且目的性差、提取率低；蒸煮法雖然克服了酸解法所存在的缺點(diǎn)，但是其提取率更低。為了解 決傳統(tǒng)提取方法存在的問題，中國專利號(hào)為200510047582. X的發(fā)明專利，公開了一種“酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法”，其步驟是將纖維素酶和果膠酶，按重量比例為
2飛1配制成復(fù)合纖維素酶；以粉碎的褐藻為原料，向原料中加入原料重量1(Γ20倍的水，并加入原料重量O. 23、. 34%的復(fù)合纖維素酶，在pH為6. 0 8. O的條件下酶解50 80分鐘，然后以9(TlO(rC水浴加熱3 4小時(shí)，降至室溫，離心得上清液；在上清液中加入乙醇產(chǎn)生沉淀，離心得上清液；向所得上清液中再加入乙醇產(chǎn)生沉淀，收集沉淀；乙醚清洗沉淀，真空冷凍干燥沉淀得白色粉末。雖然，通過該方法可以很好地解決了傳統(tǒng)提取方法所存在的問題，可在酶解后的上清液中提取褐藻(海帶)中的巖藻聚糖硫酸酯，且提取率提高了 O. 37
2.40%，但是生產(chǎn)過程中主要是以乙醇分離純化；由于乙醇價(jià)格較高且對(duì)使用車間的環(huán)境安全有特殊要求，使褐藻巖藻聚糖硫酸酯工業(yè)化提取分離受到限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的上述技術(shù)問題，提供一種操作簡單、成本低廉，可工業(yè)化生產(chǎn)的鹽沉結(jié)合電滲析分離純化巖藻聚糖硫酸酯方法。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種鹽沉結(jié)合電滲析分離純化巖藻聚糖硫酸酯方法，依次按如下步驟進(jìn)行
a.取用于提取巖藻聚糖硫酸酯的褐藻酶解液，蒸煮抽提滅酶，降至室溫，離心得上清
液；
b.調(diào)節(jié)上清液固形物濃度為1% 2.5% ；
c.向上清液中添加濃度為I.5mol的CaCl2溶液，添加量為上清液總質(zhì)量的O. 078%
O.20% ；
d.過濾，所得濾液經(jīng)電滲析處理；
e.電滲析后的液體經(jīng)濃縮、噴霧干燥得白色粉末。所述電滲析條件是電壓為60V 100V，流速為I. 5 6L/min。本發(fā)明是利用鹽沉淀結(jié)合電滲析替代了現(xiàn)有的酒精沉淀法，在提取率相當(dāng)?shù)那疤嵯?提取物為原料總重的3. (Γ5. 1%)，不僅操作方法簡單，而且因不使用價(jià)格相對(duì)較高的乙醇，對(duì)提純車間也無需特殊要求，使得提取巖藻聚糖硫酸酯的整體成本降低，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :
a.按照現(xiàn)有“酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法”，稱取干海帶15kg，將海帶經(jīng)清洗、粉碎后，加入海帶重量20倍的水，加入占原料重量O. 32%的復(fù)合纖維素酶(纖維素酶與果膠酶重量比為3 :1)，在pH值6的條件下酶解60min，然后在94°C下煮4. 5小時(shí)，即抽提提取細(xì)胞間壁中的巖藻聚糖硫酸酯及滅酶處理，降至室溫，離心得上清液；
b.檢測上清液固形物濃度，濃縮或加水稀釋，調(diào)節(jié)上清液固形物濃度為1%; c.向上清液中添加濃度為I.5mol的CaCl2溶液，添加量為上清液總質(zhì)量的O. 078% ；
d.CaCl2溶液使褐藻酸與褐藻酸鈉轉(zhuǎn)化為褐藻酸鈣沉淀，過濾去沉淀，所得濾液經(jīng)電滲析處理，所述電滲析條件是電壓為60V，流速為I. 5L/min,電滲析可脫去濾液中的重金屬、鈣離子、氯離子及氯化物等小分子化合物；
e.電滲析后的液體經(jīng)濃縮、噴霧干燥得白色粉末。所得白色粉末為原料總重的5. 1%，經(jīng)紫外光譜分析，提取物(白色粉末)中巖藻聚糖硫酸酯的含量為提取物總質(zhì)量的25%，余下為甘露醇及微量的褐藻酸，可直接制備巖藻聚糖硫酸酯保健食品或作為保健產(chǎn)品添加劑。。實(shí)施例2
a.按照現(xiàn)有“酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法”，稱取干海帶15kg，將海帶經(jīng)清洗、粉碎后，加入海帶重量18倍的水，加入占原料重量O. 34%的復(fù)合纖維素酶(纖維素酶與果膠酶重量比為3 :1)，在pH值6的條件下酶解50min，然后在95°C下煮3. 5小時(shí)，即抽提提取細(xì)胞間壁中的巖藻聚糖硫酸酯及滅酶處理，降至室溫，離心得上清液；
b.檢測上清液固形物濃度，脫水或加水稀釋，調(diào)節(jié)上清液固形物濃度為2.5% ；
c.向上清液中添加濃度為I.5mol的CaCl2溶液，添加量為上清液總質(zhì)量的O. 2% ；
d.CaCl2溶液使褐藻酸與褐藻酸鈉轉(zhuǎn)化為褐藻酸鈣沉淀，過濾去沉淀，所得濾液經(jīng)電滲析處理，所述電滲析條件是電壓為100V，流速為6L/min，電滲析可脫去濾液中的重金屬、鈣離子、氯離子及氯化物等小分子化合物；
e.電滲析后的液體經(jīng)濃縮、噴霧干燥得白色粉末。所得白色粉末為原料總重的3. 0%，經(jīng)紫外光譜分析，提取物(白色粉末)中巖藻聚糖硫酸酯的含量為提取物總質(zhì)量的45%，余下為甘露醇及微量的褐藻酸，可直接制備巖藻聚糖硫酸酯保健食品或作為保健產(chǎn)品添加劑。。實(shí)施例3:
a.稱取干海帶15kg，加入18倍水，加入海帶O.15%復(fù)合酶，復(fù)合酶由纖維素酶、果膠酶、蛋白質(zhì)酶按照質(zhì)量比為3:1:1的比例混合而成，然后在溫度55°C，pH4. 5酶解40分鐘，95°C蒸煮3. 5小時(shí)，即抽提提取細(xì)胞間壁中的巖藻聚糖硫酸酯及滅酶處理，降至室溫，離心得上清液；
b.檢測上清液固形物濃度，脫水或加水稀釋，調(diào)節(jié)上清液固形物濃度為2.0% ；
c.向上清液中添加濃度為I.5mol的CaCl2溶液，添加量為上清液總質(zhì)量的O. 13% ；d.CaCl2溶液使褐藻酸與褐藻酸鈉轉(zhuǎn)化為褐藻酸鈣沉淀，過濾去沉淀，所得濾液經(jīng)電滲析處理，所述電滲析條件是電壓為80V，流速為3L/min，電滲析可脫去濾液中的重金屬、鈣離子、氯離子及氯化物等小分子化合物；
e.電滲析后的液體經(jīng)濃縮、噴霧干燥得白色粉末。 所得白色粉末為原料總重的3. 7%，經(jīng)紫外光譜分析，提取物(白色粉末)中巖藻聚糖硫酸酯的含量為提取物總質(zhì)量的35%，余下為甘露醇及微量的褐藻酸，可直接制備巖藻聚糖硫酸酯保健食品或作為保健產(chǎn)品添加劑。
權(quán)利要求
1.一種鹽沉結(jié)合電滲析分離純化巖藻聚糖硫酸酯方法，依次按如下步驟進(jìn)行 a.取用于提取巖藻聚糖硫酸酯的褐藻酶解液，蒸煮抽提滅酶，降至室溫，離心得上清液； b.調(diào)節(jié)上清液固形物濃度為1% 2.5% ； c.向上清液中添加濃度為I.5mol的CaCl2溶液，添加量為上清液總質(zhì)量的O. 078% O. 20% ； d.過濾，所得濾液經(jīng)電滲析處理； e.電滲析后的液體經(jīng)濃縮、噴霧干燥得白色粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述鹽沉結(jié)合電滲析分離純化巖藻聚糖硫酸酯方法，其特征在于所述電滲析條件是電壓為60V 100V，流速為I. 5 6L/min。
全文摘要
本發(fā)明公開一種操作簡單、成本低廉、提取率高，可工業(yè)化生產(chǎn)的鹽沉結(jié)合電滲析分離純化巖藻聚糖硫酸酯方法，依次按如下步驟進(jìn)行取用于提取巖藻聚糖硫酸酯的褐藻酶解液，蒸煮抽提滅酶，降至室溫，離心得上清液；調(diào)節(jié)上清液固形物濃度為1%～2.5%；向上清液中添加濃度為1.5mol的CaCl2溶液，添加量為上清液總質(zhì)量的0.078%～0.20%；過濾，所得濾液經(jīng)電滲析處理；電滲析后的液體經(jīng)濃縮、噴霧干燥得白色粉末。
文檔編號(hào)C08B37/00GK102827301SQ20121032580
公開日2012年12月19日 申請(qǐng)日期2012年9月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月6日
發(fā)明者汪秋寬, 何云海, 任丹丹, 李鵬亮, 傅志宇, 劉舒, 姜斌 申請(qǐng)人:大連海洋大學(xué), 汪秋寬