專利名稱：一種低效價肝素鈉的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生化藥物領(lǐng)域，特別涉及一種低效價肝素鈉的提取方法。背景技術(shù)：
肝素是1916年Mclean研究凝血機制時從肝臟組織中發(fā)現(xiàn)的一種酸性粘多糖。1939年，BrinkhousfIj等證明了肝素具有抗凝血活性，從此，肝素作為天然抗凝血物質(zhì)而受到世界各國的重視。肝素用于臨床雖有60余年的歷史，但到目前為止，還沒有一種能夠完全代替它的產(chǎn)品，所以它仍然是最重要的生化藥物之一，也是我國主要的出口藥物之一。肝素具有強抗凝作用，是防治深層靜脈血栓形成等血栓栓塞性疾病的首選藥物，隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)肝素不但有抗凝、抗血栓形成和調(diào)整血脂的作用，還有抗炎、抗過敏、抗病毒、抗癌等多種生物學(xué)功能，肝素鈉在生產(chǎn)中，肝素鈉-蛋白復(fù)合體中的肝素鈉解離不完全，去除蛋 白的過程中料渣會帶走部分肝素鈉的問題，造成浪費。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為了彌補現(xiàn)有生產(chǎn)技術(shù)的不足，解決了料渣會帶走部分肝素鈉，造成浪費的問題，提供了一種低效價肝素鈉的提取方法。本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的
一種低效價肝素鈉的提取方法，其特殊之處在于包括如下步驟
Cl)溶解將傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)肝素鈉而產(chǎn)生的料渣中加水，水與料渣的重量比為2-5:1，然后在所得的溶液中加入溶液重1%_5%的腸衣專用鹽，攪拌并升溫至50-55°C，反應(yīng)2-3h，得到反應(yīng)液；
(2)酶解在反應(yīng)液中加入NaOH調(diào)節(jié)pH至8.5-9. 0，然后向反應(yīng)液內(nèi)加入胰蛋白酶，胰蛋白酶與料渣的重量比I: 45-55，反應(yīng)溫度為50-55°C，時間為3_4h，得到酶解液；
(3)去除蛋白在酶解液中加入酶解液重量1%_2%的氯化鈣反應(yīng)，用 NaOH調(diào)酶解液的pH為9. 0-9. 5，升溫至80_85°C，進行離心，得到離心液；
(4)去除鈣離子將離心液放涼到30-50°C，按Ca2+:C032_濃度比1:1的比例，向離心液中添加碳酸鈉或碳酸鈉的結(jié)晶水合物，反應(yīng)后，進行過濾，得到過濾液；
(5)沉淀將過濾液中，添加鹽酸調(diào)pH為6.0-6. 5，然后用乙醇進行沉淀，靜止，去除上層液，收集下層沉淀；
(6)脫水、烘干將所收集的沉淀，用體積分數(shù)為95-100%的乙醇進行脫水處理，脫水后的沉淀在75-80°C進行烘干處理，得到低效價肝素鈉。本發(fā)明的低效價肝素鈉的提取方法，步驟(I)腸衣專用鹽添加量為溶液重的3%。本發(fā)明的低效價肝素鈉的提取方法，步驟(2)中料渣胰蛋白酶的重量比50:1。本發(fā)明的低效價肝素鈉的提取方法，步驟(3)氯化鈣的添加量為酶解液重量的I. 5%。本發(fā)明的低效價肝素鈉的提取方法，步驟(5)中上層液中乙醇的體積分數(shù)為40%-45%。傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝在肝素鈉生產(chǎn)過程中，往往對料渣不做處理直接倒掉。而料渣中解離不完全的肝素鈉也料渣一起倒掉，致使產(chǎn)品收率低。本發(fā)明通過酶解肝素鈉料渣將殘留肝素鈉再次解離，然后加入氯化鈣沉淀蛋白，通過離心、過濾、沉淀、脫水、烘干等步驟將肝素鈉完全提取出來，提高肝素鈉收率。本發(fā)明的有益效果為在傳統(tǒng)肝素鈉生產(chǎn)工藝基礎(chǔ)上，對肝素鈉料渣進一步酶解，去除蛋白，將肝素鈉-蛋白復(fù)合體中未完全解離的肝素鈉，提取出來，相應(yīng)的提高肝素鈉的收率，以料渣為原料提取的肝素鈉，其收率為5%-7%，所得肝素鈉的效價一般在50-60USP u/mg左右，可以作為肝素鈉粗品使用，而該肝素鈉粗品的價格較高，大約為I萬元/kg，由于該肝素鈉提取成本低，大約為5000元，對該部分肝素鈉的進一步提取，既避免了資源浪費又能有效的提聞利潤。
具體實施方式
實施例I:
本實施例的低效價肝素鈉的提取方法，通過下述步驟實現(xiàn)
(1)溶解將200kg傳統(tǒng)肝素鈉生產(chǎn)產(chǎn)生的料渣加入反應(yīng)罐中，向反應(yīng)罐中加入600kg水，打開攪拌機進行攪拌，加入24kg腸衣專用鹽，打開蒸汽閥門使溫度達到53°C，攪拌3h，得到反應(yīng)液；
(2)酶解用質(zhì)量濃度20%的NaOH調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH至8.5，向反應(yīng)液中加入4kg胰蛋白酶，使反應(yīng)液溫度保持在53 °C，反應(yīng)3. 5h ；
(3)去除蛋白步驟(2)結(jié)束后，向酶解液中加入12kg氯化I丐,反應(yīng)30min,用質(zhì)量濃度20%的NaOH調(diào)節(jié)酶解液pH為9. 2，打開蒸汽閥門使溫度達到80°C，進行離心，得到離心液；
(4)去鈣離子打開降溫閥使離心液溫度降到30-50°C，向離心液中加入11.7kg的無水碳酸鈉，反應(yīng)30min，進行過濾，得到過濾液；
(5)沉淀將過濾液用6mol/L的鹽酸調(diào)pH為6.5，用體積分數(shù)為85%_90%的乙醇進行沉淀，邊加乙醇邊進行攪拌，控制上層乙醇體積分數(shù)為42%，靜置2h，上層待乙醇抽入復(fù)沉te中，收集下層沉淀。(6)脫水、烘干將收集到的沉淀，用體積分數(shù)為97%的乙醇進行脫水，脫水后的沉淀放入烘箱中，用80°C的蒸汽干燥7h，即得低效價肝素鈉10kg，收率為5%，該肝素鈉粗品的價格大約為I萬元/kg，總價值為10萬元，有效提高了利潤。實施例2:
步驟(I)中料渣加入135kg，水加入260kg，腸衣專用鹽加入3. 95kg，溫度為50°C，反應(yīng)3h。步驟(2)中，反應(yīng)液pH為8. 7，胰蛋白酶加入3kg，反應(yīng)液溫度保持在50°C，反應(yīng)3h。步驟(3)中，氯化鈣加入4kg，反應(yīng)30min，調(diào)節(jié)酶解液的pH至9. 0，溫度為82V ； 步驟(4)中，添加十水碳酸鈉，其添加量為10. 31kg。步驟(5)中，過濾液pH調(diào)至6. 2，上層乙醇體積分數(shù)為45%，靜置3h。步驟(6)中，用體積分數(shù)為95%的乙醇進行脫水，烘干溫度為75°C，時間為5h，低效價肝素鈉產(chǎn)量為9kg,收率為6. 66%,該肝素鈉粗品的價格大約為I萬元/kg,總價值為9萬元，有效提高了利潤。其他步驟與實施例I相同。
其中，十水碳酸鈉也可按Ca2+ =CO32-濃度比I: I的比例，換成其他碳酸鈉的結(jié)晶水合物，如一水碳酸鈉、七水碳酸鈉等。實施例3
步驟(I)中料渣加入350kg，水加入1750kg，腸衣專用鹽加入105kg，溫度為55°C，反應(yīng)2-3h。步驟(2)中，反應(yīng)液pH為9. O，胰蛋白酶加入6. 36kg，反應(yīng)液溫度保持在55°C，反應(yīng) 3. 5h。步驟(3)中，氯化鈣加入44. 22kg，反應(yīng)30-50min，調(diào)節(jié)酶解液的pH至9.5，溫度為 85 0C ；
步驟(4)中，無水碳酸鈉加入43. Ikg0 步驟(5)中，過濾液pH調(diào)至6. 0，上層乙醇體積分數(shù)為40%，靜置I. 5h。步驟(6 )中，用體積分數(shù)為100%的乙醇進行脫水，烘干溫度為75-80 V，時間為6h，低效價肝素鈉產(chǎn)量為24. 5kg,收率為7%,該肝素鈉粗品的價格大約為I萬元/kg,總價值為24. 5萬元，有效提高了利潤。其他步驟與實施例I相同。
權(quán)利要求
1.一種低效價肝素鈉的提取方法，其特征在于包括如下步驟 (1)溶解將傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)肝素鈉而產(chǎn)生的料渣中加水，水與料渣的重量比為2-5:1，然后在所得的溶液中加入溶液重1%_5%的腸衣專用鹽，攪拌并升溫至50-55°C，反應(yīng)2-3h，得到反應(yīng)液； (2)酶解在反應(yīng)液中加入NaOH調(diào)節(jié)pH至8.5-9. 0，然后向反應(yīng)液內(nèi)加入胰蛋白酶，胰蛋白酶與料渣的重量比I: 45-55，反應(yīng)溫度為50-55°C，時間為3_4h，得到酶解液； (3)去除蛋白在酶解液中加入酶解液重量1%_2%的氯化鈣反應(yīng)，用 NaOH調(diào)酶解液的pH為9. 0-9. 5，升溫至80_85°C，進行離心，得到離心液； (4)去除鈣離子將離心液放涼到30-50°C，按Ca2+:C032_濃度比1:1的比例，向離心液中添加碳酸鈉或碳酸鈉的結(jié)晶水合物，反應(yīng)后，進行過濾，得到過濾液； (5)沉淀將過濾液中，添加鹽酸調(diào)pH為6.0-6. 5，然后用乙醇進行沉淀，靜止，去除上層液，收集下層沉淀； (6)脫水、烘干將所收集的沉淀，用體積分數(shù)為95-100%的乙醇進行脫水處理，脫水后的沉淀在75-80°C進行烘干處理，得到低效價肝素鈉。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的低效價肝素鈉的提取方法，其特征在于步驟(I)腸衣專用鹽添加量為溶液重的3%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的低效價肝素鈉的提取方法，其特征在于步驟(2)中料渣胰蛋白酶的重量比50:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的低效價肝素鈉的提取方法，其特征在于步驟(3)氯化鈣的添加量為酶解液重量的I. 5%。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的低效價肝素鈉的提取方法，其特征在于步驟(5)中上層液中乙醇的體積分數(shù)為40%-45%。
全文摘要
本發(fā)明涉及生化藥物領(lǐng)域，特別涉及一種低效價肝素鈉的提取方法。該低效價肝素鈉的提取方法，其特殊之處在于包括如下步驟(1)溶解；(2)酶解；(3)去除蛋白；(4)去除鈣離子；(5)沉淀；(6)脫水、烘干。本發(fā)明的有益效果為在傳統(tǒng)肝素鈉生產(chǎn)工藝基礎(chǔ)上，對肝素鈉料渣進一步酶解，去除蛋白，將肝素鈉-蛋白復(fù)合體中未完全解離的肝素鈉,完全提取出來，提高了肝素鈉收率。從料渣中提取出來的肝素鈉效價一般在50-60uspu/mg左右，可以作為肝素鈉粗品使用，有效提高了利潤。
文檔編號C08B37/10GK102898546SQ20121039940
公開日2013年1月30日 申請日期2012年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月19日
發(fā)明者謝成君, 李鑫 申請人:山東紳聯(lián)生物科技有限公司