專利名稱：一種絮凝法提取分離山藥多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及山藥多糖，尤其是一種絮凝法提取分離山藥多糖的方法。
背景技術(shù)：
研究發(fā)現(xiàn)，山藥多糖對(duì)CC14誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性肝損傷小鼠肝、腎、心肌和腦組織體內(nèi)外的抗氧化作用，研究結(jié)果表明，山藥多糖能顯著降低CC14誘導(dǎo)肝損傷小鼠肝、腎、心肌、腦和血清中MDA含量，說明山藥多糖可對(duì)抗自由基的生成和清除自由基，對(duì)肝、腎、心肌、腦自由基損傷有保護(hù)作用。應(yīng)用fenton反應(yīng)體外誘導(dǎo)自由基的方法觀察山藥多糖在體外的抗 自由基活性也發(fā)現(xiàn)，山藥多糖對(duì)肝、腎、心肌、腦組織中MDA含量保護(hù)組較模型組明顯減少，說明了山藥多糖的體外抗自由基活性。隨后又發(fā)現(xiàn)，山藥多糖能夠顯著提高小鼠肝細(xì)胞GSH0 GSH是生物體內(nèi)重要的還原物質(zhì)，可作為GSH-PX等的輔酶參與清除自由基，同時(shí)其具有直接清除自由基的作用。急性肝損傷時(shí)加速模型組GSH的消耗，導(dǎo)致其明顯降低，不同濃度的山藥多糖保護(hù)組能升高GSH的含量，其機(jī)制可能是山藥多糖能直接清除自由基，或者是通過促進(jìn)谷胱甘肽合成酶的合成，增加GSH的含量。目前，對(duì)自由基與衰老間的關(guān)系研究常以機(jī)體老化的代謝產(chǎn)物一血漿LPO和組織脂褐素(LF)的含量為衰老的指標(biāo)。代謝過程中所產(chǎn)生的自由基能作用于生物膜磷脂中的多不飽和脂肪酸，產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化物，如丙二醛(MDA)進(jìn)而與磷脂酰乙醇胺和蛋白質(zhì)交聯(lián)成大分子復(fù)合物一脂褐素(老年色素)，這是機(jī)體老化的一種標(biāo)志，影響細(xì)胞代謝和功能形態(tài)改變，促進(jìn)衰老和心腦血管硬化。山藥多糖能降低小鼠LPO和脂褐質(zhì)含量，這可能與清除體內(nèi)自由基有關(guān)。因此，高效低毒的山藥多糖的提取與功能研究對(duì)于維持人體正常生理機(jī)能、延緩衰老有重要意義。絮凝劑，即絮凝過程的藥劑，一般是指能使水溶液中的溶質(zhì)、膠體或懸浮物顆粒脫穩(wěn)而產(chǎn)生絮狀物或絮狀沉淀物的藥劑。目前，還有另一種定義，即根據(jù)水體中膠體顆粒脫穩(wěn)凝聚過程的作用機(jī)理不同，將主要通過表面雙電層壓縮和電中和而使溶質(zhì)、膠體或懸浮物顆粒脫穩(wěn)的藥劑稱為凝聚劑(或混凝劑)，這類藥劑主要是無機(jī)類藥劑；而將溶質(zhì)、膠體或懸浮顆粒之間產(chǎn)生架橋作用以及在沉降過程中產(chǎn)生卷掃作用的藥劑稱為絮凝劑。近年來，新型分離技術(shù)不斷涌現(xiàn)，絮凝技術(shù)以其成本低、周期短、殘留少等優(yōu)點(diǎn)在中藥制藥工業(yè)中展現(xiàn)了良好的應(yīng)用前景，更有望取代醇沉法。通過對(duì)公開專利文獻(xiàn)的檢索，尚未發(fā)現(xiàn)采用絮凝劑提取山藥多糖的技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種絮凝法提取分離山藥多糖的方法，為山藥多糖相關(guān)產(chǎn)品開發(fā)和抗氧化藥物的合成與推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)和實(shí)踐依據(jù)。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)目的的技術(shù)方案是—種絮凝法提取分離山藥多糖的方法，步驟是
⑴定量稱取經(jīng)粉碎、烘干的山藥粉，按照1:15的料水質(zhì)量比加入蒸餾水，于80°C水浴中回流并攪拌提取2h，轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，提取兩次，收集兩次提取所得提取液濃縮備用；⑵配置絮凝劑；⑶移取經(jīng)濃縮的提取液置于錐形瓶中，控制水域溫度，在電磁攪拌狀態(tài)下，緩慢加入絮凝劑，離心分離并收取上清液； ⑷用紫外-可見分光光度計(jì)測定上清液的透光度T700nm和吸光度ABS450nm，考察殼聚糖對(duì)提取液的脫色率和澄清度；向上清液中加入無水乙醇，于冰箱內(nèi)冷藏，隔夜醇沉后離心分離，將所得固體于真空干燥箱內(nèi)烘干至恒重，即得山藥多糖。而且，所述絮凝劑為殼聚糖絮凝劑或ZTCI+1。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是I、本發(fā)明采用絮凝技術(shù)提取的山藥多糖，不僅具有較高的純度、獲得較高的收率，而且能起到一定的脫色作用，解決了雙氧水脫色工藝對(duì)山藥多糖活性的潛在的影響。2、本發(fā)明采用絮凝法提取山藥多糖，在保證了山藥多糖的高得率和高純度的基礎(chǔ)上，大大簡化了工藝流程并縮短了提取周期，而且該工藝使無水乙醇用量大幅降低，節(jié)約了乙醇回收的成本，提高了經(jīng)濟(jì)效益；同時(shí)，該技術(shù)應(yīng)用于山藥多糖的提取分離工藝，不用調(diào)節(jié)PH即可獲得高純度、高得率的山藥多糖，這為工業(yè)化生產(chǎn)實(shí)現(xiàn)了很大的便利。3、本發(fā)明所采用的絮凝劑為殼聚糖，不僅本身為天然食用產(chǎn)品，毒性較小且無異味，同時(shí)成本低廉，進(jìn)一步使山藥多糖提取分離成本有所降低；在絮凝提取工藝中，將“綠色化學(xué)”的思想運(yùn)用于整個(gè)提取工藝，不使用有毒的有機(jī)溶劑、金屬離子，同時(shí)，山藥多糖的提取工藝流程簡潔、明晰，易于工業(yè)化。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳述，以下實(shí)施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例I :一種絮凝法提取分離山藥多糖的方法，步驟是⑴定量稱取經(jīng)粉碎、烘干的山藥粉，按照1:15的料水質(zhì)量比加入蒸餾水，于80°C水浴中回流并攪拌提取2h，轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，提取兩次，收集兩次提取所得提取液濃縮備用；⑵由于殼聚糖不溶于水和堿溶液，也不溶于硫酸和磷酸，因此實(shí)驗(yàn)用殼聚糖絮凝劑均采用醋酸溶液配制。⑶移取經(jīng)濃縮的藥液5mL置于錐形瓶中，控制水域溫度，在電磁攪拌狀態(tài)下，緩慢加入一定量的殼聚糖溶液；將樣品水域保溫，前3h每半小時(shí)攪動(dòng)I次，3h后每一小時(shí)攪動(dòng)I次，一定時(shí)間后取出，離心分離并收取上清液；⑷用紫外一可見分光光度計(jì)測定上清液的透光度HOOnm和吸光度ABS450nm，考察殼聚糖對(duì)提取液的脫色率和澄清度；向上清液中加入無水乙醇，于冰箱內(nèi)冷藏，隔夜醇沉后離心分離，將所得固體于真空干燥箱內(nèi)烘干至恒重，即得山藥多糖。本實(shí)驗(yàn)采用殼聚糖絮凝劑對(duì)山藥多糖水提液進(jìn)行處理，可以在起到很好的澄清純化作用的同時(shí)，獲得較好的收率。經(jīng)殼聚糖絮凝劑處理的山藥多糖含量可高達(dá)51. 7%，多糖得率為6. 39%。殼聚糖作為長鏈高分子化合物，在山藥多糖水提液中，與酸或酸性化合物結(jié)合后為陽離子型聚電解質(zhì)，分子中的活性基團(tuán)NH3+可吸附溶液中的蛋白質(zhì)等帶負(fù)電的基團(tuán)，從而起到對(duì)藥液的澄清和純化作用。實(shí)施例2 ⑴定量稱取經(jīng)粉碎、烘干的山藥粉，經(jīng)1:15料液比蒸煮，取上清液濃縮；(2) ZTCI+1絮凝劑有I型、II型、III型、IV型四種和預(yù)處理劑，根據(jù)其主要性能選用ZTCI+1 I型絮凝劑進(jìn)行本實(shí)驗(yàn)，其兩組份具體處理過程分別如下A組分，稱取ZTCI+1中A組分lg，先用少量的水?dāng)嚦珊隣?，然后加入需要量的水，繼續(xù)攪拌至完全分散，溶脹24小時(shí)，用雙層紗布過濾，即得1%A組分溶液；B組分，配制1%醋酸溶液，稱取ZTC1+1中B組分lg，先加入少量的1%醋酸溶液攪成糊狀，然后加入需要量的醋酸溶液，繼續(xù)攪拌至完全分散，溶脹24h，用雙層紗布過濾， 即得1%B組分溶液。 ⑶移取經(jīng)濃縮的藥液25mL，稀釋至50mL后置于錐形瓶中，控制水域溫度，在電磁攪拌狀態(tài)下，緩慢加入一定量的第一組分，將樣品水域保溫，每0. 5h攪動(dòng)I次；一定時(shí)間后，向體系中緩慢加入第二組分，繼續(xù)水浴保溫，3h后取出，離心分離并收取上清液，將上清液濃縮至25mL ； ⑷用紫外-可見分光光度計(jì)測定上清液的透光度HOOnm和吸光度ABS450nm，考察殼聚糖對(duì)提取液的脫色率和澄清度；向上清液中加入無水乙醇，于冰箱內(nèi)冷藏，隔夜醇沉后離心分離，將所得固體于真空干燥箱內(nèi)烘干至恒重，即得山藥多糖。本實(shí)驗(yàn)采用ZTCI+1絮凝劑對(duì)山藥多糖水提液進(jìn)行處理，不僅起到良好的澄清純化效果，同時(shí)可以獲得很好的收率。經(jīng)ZTCI+1絮凝劑處理的山藥多糖含量可高達(dá)51. 46%，多糖得率為6. 23%。研究發(fā)現(xiàn)，ZTCI+1天然絮凝劑是由電性相反的兩種絮凝劑復(fù)配使用來起到絮凝作用的，當(dāng)加入陽離子型的B組份后，在不同的大分子之間吸附架橋，使分子迅速增大，起主絮凝作用；再加入陰離子型的A組份后，在B組份所形成的復(fù)合物的基礎(chǔ)上再“架橋”，使絮狀物盡快形成沉淀以便除去。本發(fā)明的工作機(jī)理是絮凝劑，尤其是用于中藥提取液精制的高分子絮凝劑的絮凝作用機(jī)理，是極其復(fù)雜的物理化學(xué)過程，前人雖然已經(jīng)做了許多研究，提出過各種各樣的理論、機(jī)理和模型，但對(duì)其尚多局限于定性的解釋，仍然存在有若干問題尚待解決。目前，公認(rèn)的絮凝作用機(jī)理是凝聚和絮凝兩種過程。凝聚過程是膠體顆粒脫穩(wěn)并形成細(xì)小的凝聚體的過程，而絮凝過程時(shí)所形成的細(xì)小的凝聚體在絮凝劑橋連作用下生成大體積的絮凝物的過程。山藥多糖體外抗氧化能力用pH7. 8,0. 067mol/L 磷酸鹽緩沖液分別配制 0. 102mol/L NBT 溶液；() 101mol/L核黃素溶液；0. 101mol/L L-蛋氨酸溶液。在試管中依次加入待測樣品0. 075ml,NBTO. 3ml,L-蛋氨酸0. 15mL，核黃素0. 15ml和磷酸鹽緩沖液3. 75ml，混勻，對(duì)照組以蒸餾水代替待測樣品。在暗箱光照20min之后在560nm處測定吸光度值。按照下式計(jì)算清除率E = (A對(duì)照一A樣品)/A對(duì)照 X 100%經(jīng)測算，山藥多糖對(duì)02_均具有清除能力，并且清除率隨著其濃度的增大而增大。當(dāng)濃度達(dá)到10mg/ml時(shí)，經(jīng)絮凝劑處理所得到的山藥多糖的清除率為95. 04%，幾乎可以完全清除反應(yīng)體系中的02_。
權(quán)利要求
1.一種絮凝法提取分離山藥多糖的方法，其特征在于步驟是 ⑴定量稱取經(jīng)粉碎、烘干的山藥粉，按照1:15的料水質(zhì)量比加入蒸餾水，于80°C水浴中回流并攪拌提取2h，轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，提取兩次，收集兩次提取所得提取液濃縮備用；⑵配置絮凝劑； ⑶移取經(jīng)濃縮的提取液置于錐形瓶中，控制水域溫度，在電磁攪拌狀態(tài)下，緩慢加入絮凝劑，離心分離并收取上清液； ⑷用紫外一可見分光光度計(jì)測定上清液的透光度T700nm和吸光度ABS450nm，考察殼聚糖對(duì)提取液的脫色率和澄清度；向上清液中加入無水乙醇，于冰箱內(nèi)冷藏，隔夜醇沉后離心分離，將所得固體于真空干燥箱內(nèi)烘干至恒重，即得山藥多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的絮凝法提取分離山藥多糖的方法，其特征在于所述絮凝劑為殼聚糖絮凝劑或ZTCI+1。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種絮凝法提取分離山藥多糖的方法，步驟是⑴定量稱取山藥粉，按照1:15的料水質(zhì)量比加入蒸餾水，于80℃水浴中回流并攪拌提取2h，轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，提取兩次，收集兩次提取所得提取液濃縮備用；⑵配置絮凝劑；⑶移取經(jīng)濃縮的提取液置于錐形瓶中，控制水域溫度，在電磁攪拌狀態(tài)下，緩慢加入絮凝劑，離心分離并收取上清液；⑷用紫外一可見分光光度計(jì)測定上清液的透光度T700nm和吸光度ABS450nm，向上清液中加入無水乙醇，于冰箱內(nèi)冷藏，隔夜醇沉后離心分離，將所得固體于真空干燥箱內(nèi)烘干至恒重，即得山藥多糖。本發(fā)明采用絮凝技術(shù)提取的山藥多糖，不僅具有較高的純度、獲得較高的收率，而且能起到一定的脫色作用，解決了雙氧水脫色工藝對(duì)山藥多糖活性的潛在的影響。
文檔編號(hào)C08B37/00GK102964463SQ20121049104
公開日2013年3月13日 申請(qǐng)日期2012年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月26日
發(fā)明者王麗霞, 劉佳琦, 李彬 申請(qǐng)人:天津科技大學(xué)