專(zhuān)利名稱(chēng)：一種枸杞多糖的純化新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種枸杞多糖的純化方法，特別是涉及一種利用大孔吸附樹(shù)脂-硅膠層析耦合法純化枸杞多糖的新方法。
背景技術(shù)：
枸杞,學(xué)名Lycium chinense,別名茍起子、枸杞紅實(shí)、甜菜子、西枸杞、狗奶子、紅青椒、枸蹄子、枸杞果、地骨子、枸茄茄、紅耳墜、血枸子、枸地芽子、枸杞豆、血杞子、津枸杞， 是爺科枸杞屬植物枸杞的果實(shí)。含甜菜堿(betane),阿托品(aTCMLIBopine),天仙子胺 (gyoscyamine),枸杞多糖,又含玉蜀黍黃質(zhì),酸衆(zhòng)果紅素，隱黃質(zhì)(cryptosxanthin),東莨菪素(scopo-letin)，胡蘿卜素，硫胺素，核黃素，煙酸，維生素C等，具有滋陰明目、除肝火、 利于睡眠、壯陽(yáng)、美白養(yǎng)顏、延緩衰老等功效。
枸杞多糖是從枸杞中提取而得的一種水溶性多糖。已明確該多糖系蛋白多糖，由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6種單糖成分組成。經(jīng)研究表明，枸杞多糖是枸杞子調(diào)節(jié)免疫、延緩衰老的主要活性成分，可改善老年人易疲勞、食欲不振和視力模糊等癥狀，并具有降血脂、抗脂肪肝、抗衰老等作用。近年來(lái)，人們發(fā)現(xiàn)天然植物枸杞中含有大量的枸杞多糖，由于其原料枸杞來(lái)源較廣，從中提取枸杞多糖已取得了可喜進(jìn)展，名稱(chēng)為 “一種枸杞多糖的提取分離方法”的專(zhuān)利申請(qǐng)中便公開(kāi)了將枸杞用烘干、粉碎、過(guò)篩處理，超聲輔助提取并精制枸杞多糖的方法。上述專(zhuān)利文獻(xiàn)中的枸杞多糖提取工藝主要是經(jīng)過(guò)原料預(yù)處理、超聲波輔助萃取、醇沉法分離等步驟精制而成，雖然最后的枸杞多糖純度很高，但其工藝本身耗費(fèi)大，實(shí)際應(yīng)用效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如大孔吸附樹(shù)脂耦合硅膠層析法分離的效果。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種枸杞多糖的純化新方法；本發(fā)明目的還在于提供一種方便快捷、原料來(lái)源豐富、生產(chǎn)成本低廉、分離效果明顯、提取純度高的利用大孔吸附樹(shù)脂-硅膠層析耦合法富集純化枸杞多糖的方法。
本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
本發(fā)明枸杞多糖的純化新方法包括如下步驟
將枸杞果粉碎成粗粉，加入粗粉質(zhì)量15 20倍量的85% 100%甲醇回流提取 120 180分鐘，濾過(guò)；濾液回收甲醇后濃縮至3 5波美得濃縮液，然后用體積比1:1 的鹽酸水溶液將濃縮液pH值調(diào)至2. 5 3，放置20 40分鐘后濾過(guò)；濾液上HPD400、 HPD100、DM-130或AB-8廣譜型大孔樹(shù)脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5% 20%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50% 80%的甲醇洗脫，得 多糖半成品洗脫液，多糖半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為I 3 I的丙同與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮甲醇的體積比為5 7 I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得多糖洗脫液；將多糖洗脫液進(jìn)行精制得枸杞多糖，其含量在70% 以上。
本發(fā)明枸杞多糖的純化新方法包括如下步驟
稱(chēng)取粉碎成粗粉的枸杞果，加入粗粉質(zhì)量20倍量的85%甲醇回流提取180分鐘， 濾過(guò)；濾液回收甲醇后濃縮至5波美得濃縮液，然后用體積比1:1的鹽酸水溶液將濃縮液PH值調(diào)至3，放置40分鐘后濾過(guò)；濾液上HPD400型大孔樹(shù)脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5 %的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50 %的甲醇洗脫，得多糖半成品洗脫液，多糖半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為1:1的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮甲醇的體積比為5 I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得多糖洗脫液；將多糖洗脫液進(jìn)行精制得枸杞多糖。
所述大孔樹(shù)脂吸附步驟采用濕法裝柱，保留液面，將調(diào)pH值后的濾液通過(guò)吸附柱，流速每分鐘O. 05ml/g樹(shù)脂。
所述硅膠層析步驟采用濕法裝柱，保留液面，將半成品按重量1:1拌活化后硅膠，并將拌好的混合物至于硅膠柱上方，洗脫流速每分鐘O. lml/g硅膠。硅膠活化條件為， 110攝氏度30分鐘。
本發(fā)明中采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法進(jìn)行精制。按4g/100ml洗脫液加入針劑活性炭，25 40攝氏度攪拌20 40分鐘，濾過(guò)；濾液，回收混合試劑,濃縮干燥得中間體；中間體用7 9倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過(guò)濾液放涼析出晶體，抽濾得枸杞多糖成品。
本發(fā)明中精制過(guò)程包括如下步驟
按4g/100ml洗脫液加入針劑活性炭，25攝氏度攪拌40分鐘，濾過(guò)；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體；中間體用9倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過(guò)；濾液放涼析出晶體， 抽濾得枸杞多糖成品。
本發(fā)明中精制過(guò)程中成品用7倍甲醇重結(jié)晶，過(guò)濾母液，回收甲醇，濃縮干燥得多糖半成品。
本發(fā)明應(yīng)用大孔吸附樹(shù)脂-硅膠層析耦合法富集純化枸杞多糖，對(duì)枸杞多糖的吸附選擇性良好，吸附快解析也快，吸附容量較大；原料來(lái)源豐富，生產(chǎn)成本低廉，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量45%以上的多糖半成品和含量70%以上的多糖終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對(duì)較低、提取純度低的缺點(diǎn)。
本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機(jī)械強(qiáng)度高、抗污染能力強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹(shù)脂，不容于酸、堿及有機(jī)媒，對(duì)有機(jī)物選擇性較好，不受無(wú)機(jī)鹽類(lèi)及強(qiáng)離子低分子化合物存在的影響，可以通過(guò)物理吸附從溶液中有選擇地吸附多糖，吸附快、解析也快，吸附容量較大。
本發(fā)明選用硅膠層析法純化并結(jié)合活性炭與重結(jié)晶精制，分離效果更佳。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 :
稱(chēng)取枸杞果10kg，粉碎成粗粉，加18倍量90%的甲醇回流提取140分鐘，濾過(guò)；濾液，回收甲醇，濃縮至4波美，用體積比1:1的鹽酸水溶 液將濃縮液pH值調(diào)至2. 8，放置 40分鐘，濾過(guò)；濾液上HPD100型大孔樹(shù)脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用15%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用70%的甲醇洗脫，得多糖半成品洗脫液，多糖半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為2 I的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮甲醇的體積比為6 I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得多糖洗脫液2L ;加入80g針劑活性炭，30攝氏度攪拌30分鐘，濾過(guò)；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體35g ;中間體用8倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過(guò)濾液放涼析出晶體，抽濾得枸杞多糖成品20g，含量78%。
實(shí)施例2:
稱(chēng)取枸杞果15kg，粉碎成粗粉，加20倍量95%的甲醇回流提取160分鐘，濾過(guò)；濾液，回收甲醇，濃縮至5波美，用體積比1:1的鹽酸水溶液將濃縮液pH值調(diào)至3，放置40 分鐘，濾過(guò)；濾液上HPD400型大孔樹(shù)脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用10%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用60%的甲醇洗脫，得多糖半成品洗脫液，多糖半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為1:1的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮甲醇的體積比為7 I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得多糖洗脫液3. 5L ;加入140g針劑活性炭，40攝氏度攪拌40分鐘，濾過(guò)；濾液，回收混合試劑， 濃縮干燥得中間體60g ;中間體用9倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過(guò)濾液放涼析出晶體，抽濾得枸杞多糖成品32g，含量76. 3%。
實(shí)施例3
稱(chēng)取枸杞果20kg，粉碎成粗粉，加15倍量87%的甲醇回流提取120分鐘，濾過(guò)；濾液，回收甲醇，濃縮至3波美，用體積比1:1的鹽酸水溶液將濃縮液pH值調(diào)至2. 5，放置 40分鐘，濾過(guò)；濾液上AB-8型大孔樹(shù)脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用80%的甲醇洗脫，得多糖半成品洗脫液，多糖半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為3 I的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮甲醇的體積比為5 I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得多糖洗脫液5L ;加入200g針劑活性炭，25攝氏度攪拌20分鐘，濾過(guò)；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體70g ;中間體用8倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過(guò)濾液放涼析出晶體，抽濾得枸杞多糖成品36g，含量77. 5%。
實(shí)施例4
稱(chēng)取枸杞果5kg，粉碎成粗粉，加20倍量98%的甲醇回流提取160分鐘，濾過(guò)；濾液，回收甲醇，濃縮至3波美，用體積比1:1的鹽酸水溶液將濃縮液pH值調(diào)至2. 6，放置 40分鐘，濾過(guò)；濾液上DM-130型大孔樹(shù)脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50%的甲醇洗脫，得多糖半成品洗脫液，多糖半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為1:1的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮甲醇的體積比為7 I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得多糖洗脫液1200ml ;加入48g針劑活性炭，40攝氏度攪拌25分鐘，濾過(guò)；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體20g ;中間體用7倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過(guò)濾液放涼析出晶體，抽濾得枸杞多糖成品12g，含 量78. 2%。
權(quán)利要求
1.一種枸杞多糖的純化新方法，其特征在于該方法包括如下步驟將枸杞果粉碎成粗粉，加入粗粉質(zhì)量15 20倍量的85% 100%甲醇回流提取120 180分鐘，濾過(guò)；濾液回收甲醇后濃縮至3 5波美得濃縮液，然后用體積比1:1的鹽酸 水溶液將濃縮液PH值調(diào)至2. 5 3，放置20 40分鐘后濾過(guò)；濾液上HPD400、HPD100, DM-130或AB-8廣譜型大孔樹(shù)脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5% 20%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50% 80%的甲醇洗脫，得多糖半成品洗脫液，多糖半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為 I 3 :1的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮甲醇的體積比為5 7 I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得多糖洗脫液；將多糖洗脫液進(jìn)行精制得枸杞多糖。
2.如權(quán)利要求1所述的枸杞多糖的純化新方法，其特征在于該方法包括如下步驟稱(chēng)取粉碎成粗粉的枸杞果，加入粗粉質(zhì)量20倍量的85%甲醇回流提取180分鐘，濾過(guò)；濾液回收甲醇后濃縮至5波美得濃縮液，然后用體積比1:1的鹽酸水溶液將濃縮液pH 值調(diào)至3，放置40分鐘后濾過(guò)；濾液上HPD400型大孔樹(shù)脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50%的甲醇洗脫，得多糖半成品洗脫液，多糖半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為1:1的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮甲醇的體積比為5 I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得多糖洗脫液；將多糖洗脫液進(jìn)行精制得枸杞多糖。
3.如權(quán)利要求1或2所述的枸杞多糖的純化新方法，其特征在于該方法中所述大孔樹(shù)脂吸附步驟采用濕法裝柱，保留液面，將調(diào)PH值后的濾液通過(guò)吸附柱，流速每分鐘O. 05ml/ g樹(shù)脂。
4.如權(quán)利要求1或2所述的枸杞多糖的純化新方法，其特征在于該方法中所述硅膠層析步驟采用濕法裝柱，保留液面，將半成品按重量1:1拌活化后硅膠，并將拌好的混合物至于硅膠柱上方，洗脫流速每分鐘O. lml/g硅膠。硅膠活化條件為，110攝氏度30分鐘。
5.如權(quán)利要求1或2所述的枸杞多糖的純化新方法，其特征在于該方法中采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法進(jìn)行精制，按4g/100ml多糖洗脫液加入針劑活性炭，25 40攝氏度攪拌 20 40分鐘，濾過(guò)；濾液回收混合試劑后濃縮干燥得中間體；中間體用7 9倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過(guò)濾液放涼析出晶體，抽濾得枸杞多糖成品。
6.如權(quán)利要求5所述的枸杞多糖的純化新方法，其特征在于該方法中精制過(guò)程包括如下步驟按4g/100ml洗脫液加入針劑活性炭，25攝氏度攪拌40分鐘，濾過(guò)；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體；中間體用9倍甲醇40攝氏度熱溶，濾過(guò)濾液放涼析出晶體，抽濾得枸杞多糖成品。
7.如權(quán)利要求6所述的枸杞多糖的純化新方法，其特征在于該方法中成品用7倍甲醇重結(jié)晶，過(guò)濾母液，回收甲醇，濃縮干燥得多糖半成品。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種枸杞多糖的純化新方法，該方法為將枸杞果粉碎成粗粉，加15倍量85％的甲醇回流提取120分鐘，濾過(guò)；濾液，回收甲醇，濃縮至3波美，用體積比1∶1的鹽酸∶水將濃縮液pH值調(diào)至2.5，放置20分鐘，濾過(guò)；濾液上廣譜型大孔樹(shù)脂吸附柱，收集洗脫液，回收甲醇，濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并以體積比3∶1的丙酮∶甲醇洗雜質(zhì)，繼用體積比7∶1的丙酮∶甲醇洗脫，收集洗脫液；將所收集到的多糖洗脫液進(jìn)行精制得枸杞多糖成品，其含量在70％以上。本發(fā)明方法的最大特點(diǎn)是利用大孔吸附樹(shù)脂-硅膠層析耦合方便快捷、原料來(lái)源豐富、生產(chǎn)成本低廉、分離效果明顯、提取純度高。
文檔編號(hào)C08B37/00GK103030708SQ201210595559
公開(kāi)日2013年4月10日 申請(qǐng)日期2012年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月13日
發(fā)明者姚德坤, 姚德利, 張亞紅, 姚航, 黃運(yùn)生, 吳海龍 申請(qǐng)人:大興安嶺林格貝有機(jī)食品有限責(zé)任公司