專利名稱：一種從柳蒿芽中制備多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種多糖的制備方法，特別是涉及一種利用大孔吸附樹脂-硅膠層析耦合法從柳蒿芽中制備多糖的方法。
背景技術(shù)：
柳蒿別名柳蒿菜、水蒿、白蒿等，為菊科多年生草本植物，其嫩莖葉可食用。柳蒿每 100克鮮品中含蛋白質(zhì)37克、脂肪O. 7克、碳水化合物9克、粗纖維2.1克、胡蘿卜素4. 4毫克、維生素B20. 3毫克、煙酸1. 3毫克、維生素C 23毫克。每100克干品中含鉀1960毫克、 隹丐950暈克、續(xù)260暈克、憐415暈克、鈉38暈克、鐵13. 9暈克、猛11. 9暈克、鋒2. 6暈克、 銅1. 7毫克。有破血行淤，下氣通絡(luò)之療效。
柳蒿多糖為柳蒿中碳水化合物，經(jīng)科學(xué)研究及臨床應(yīng)用證明，柳蒿多糖具有免疫抑制作用，能減少我們通常使用的免疫抑制劑的諸如細(xì)胞毒性、機(jī)體抗感染能力下降、對(duì)骨髓造血細(xì)胞的繁殖抑制等副作用，還具有抗病毒及抗癌作用。人們發(fā)現(xiàn)天然植物柳蒿芽中含有大量的碳水化合物，從中提取柳蒿多糖并且取得了可喜進(jìn)展，原料柳蒿芽來源較廣。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種從柳蒿芽中制備多糖的方法；本發(fā)明目的還在于提供一種方便快捷、原料來源豐富、生產(chǎn)成本低廉、分離效果明顯、提取純度高的利用大孔吸附樹脂-硅膠層析耦合法富集純化柳蒿芽多糖的方法。
本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
本發(fā)明從柳蒿芽中制備多糖的方法包括如下步驟
將柳蒿芽洗凈，加入粗粉質(zhì)量15 20倍量的85% 100%甲醇回流提取120 180min，濾過；濾液回收甲醇后濃縮至3 5波美得濃縮液，然后用體積比1:1的鹽酸水溶液將濃縮液PH值調(diào)至2. 5 3，放置20 40min后濾過；濾液上HPD400、HPD100、DM-130 或AB-8廣譜型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5% 20%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50% 80%的甲醇洗脫，得多糖半成品洗脫液，多糖半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為I 3 I的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，
然后用丙酮甲醇的體積比為5 7 :1的丙酮與甲醇混合物洗脫，得多糖洗脫液；將多糖洗脫液進(jìn)行精制得柳蒿芽多糖，其含量在96%以上。
本發(fā)明從柳蒿芽中制備多糖的方法包括如下步驟
稱取洗凈的柳蒿 芽，加入粗粉質(zhì)量20倍量的85%甲醇回流提取180min，濾過；濾液回收甲醇后濃縮至5波美得濃縮液，然后用體積比1:1的鹽酸水溶液將濃縮液pH值調(diào)至3，放置40min后濾過；濾液上HPD400型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用 5%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50%的甲醇洗脫，得多糖半成品洗脫液，多糖半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為1:1的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮甲醇的體積比為5 I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得多糖洗脫液；將多糖洗脫液進(jìn)行精制得柳蒿芽多糖。
所述大孔樹脂吸附步驟采用濕法裝柱，保留液面，將調(diào)pH值后的濾液通過吸附柱，流速每minO. 05ml/g樹脂。
所述硅膠層析步驟采用濕法裝柱，保留液面，將半成品按重量1:1拌活化后硅膠，并將拌好的混合物至于硅膠柱上方，洗脫流速每minO. lml/g硅膠。硅膠活化條件為， IlO0C 30min。
本發(fā)明中采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法進(jìn)行精制。按4g/100ml洗脫液加入針劑活性炭，25 40°C攪拌20 40min，濾過；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體；中間體用 7 9倍甲醇40°C熱溶，濾過濾液放涼析出晶體,抽濾得柳蒿芽多糖成品。
本發(fā)明中精制過程包括如下步驟
按4g/100ml洗脫液加入針劑活性炭，25°C攪拌40min，濾過；濾液，回收混合試劑， 濃縮干燥得中間體；中間體用9倍甲醇40°C熱溶，濾過；濾液放涼析出晶體，抽濾得柳蒿芽多糖成品。
本發(fā)明中精制過程中成品用7倍甲醇重結(jié)晶，過濾母液，回收甲醇，濃縮干燥得多糖半成品。
本發(fā)明應(yīng)用大孔吸附樹脂-硅膠層析耦合法富集純化柳蒿芽多糖，對(duì)柳蒿芽多糖的吸附選擇性良好，吸附快解析也快，吸附容量較大；原料來源豐富，生產(chǎn)成本低廉，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量45%以上的多糖半成品和含量96%以上的多糖終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對(duì)較低、提取純度低的缺點(diǎn)。
本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機(jī)械強(qiáng)度高、抗污染能力強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹脂，不容于酸、堿及有機(jī)媒，對(duì)有機(jī)物選擇性較好，不受無機(jī)鹽類及強(qiáng)離子低分子化合物存在的影響，可以通過物理吸附從溶液中有選擇地吸附多糖，吸附快、解析也快，吸附容量較大。
本發(fā)明選用硅膠層析法純化并結(jié)合活性炭與重結(jié)晶精制，分離效果更佳。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 :
稱取洗凈的柳蒿芽10kg，粉碎成粗粉，加18倍量90%的甲醇回流提取140min，濾過；
濾液，回收甲醇，濃縮至4波美，用體積比1:1的鹽酸水溶液將濃縮液pH值調(diào)至2. 8，放置40min，濾過；濾液上HPDlOO型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用 15%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用70%的甲醇洗脫，得多糖半成品洗脫液，多糖半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為2 I的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮甲醇的體積比為6 I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得多糖洗脫液2L ;加入80g針劑活性炭，30攝氏度 攪拌30min，濾過；濾液， 回收混合試劑，濃縮干燥得中間體35g ;中間體用8倍甲醇40°C熱溶，濾過濾液放涼析出晶體，抽濾得柳蒿芽多糖成品20g，含量73%。
實(shí)施例2
稱取洗凈的柳蒿芽15kg，粉碎成粗粉，加20倍量95%的甲醇回流提取160min，濾過；
濾液，回收甲醇，濃縮至5波美，用體積比1:1的鹽酸水溶液將濃縮液pH值調(diào)至3，放置40min，濾過；濾液上HPD400型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用10% 的甲醇洗雜質(zhì)，然后用60%的甲醇洗脫，得多糖半成品洗脫液，多糖半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為 1 1的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮甲醇的體積比為7 1的丙酮與甲醇混合物洗脫，得多糖洗脫液3. 5L ;加入140g針劑活性炭，40°C攪拌40min，濾過；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體60g ;中間體用9倍甲醇40°C熱溶，濾過濾液放涼析出晶體，抽濾得柳蒿芽多糖成品328，含量71，3%。
實(shí)施例3
稱取洗凈的柳蒿芽20kg，粉碎成粗粉，加15倍量87%的甲醇回流提取120min， 濾過；濾液，回收甲醇，濃縮至3波美，用體積比1:1的鹽酸水溶液將濃縮液pH值調(diào)至2.5，放置40min，濾過；濾液上AB-8型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用80%的甲醇洗脫，得多糖半成品洗脫液，多糖半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為3 1 的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮甲醇的體積比為5 1的丙酮與甲醇混合物洗脫，得多糖洗脫液5L ;加入200g針劑活性炭，25°C攪拌20min，濾過；濾液，回收混合試劑， 濃縮干燥得中間體70g ;中間體用8倍甲醇40°C熱溶，濾過濾液放涼析出晶體，抽濾得柳蒿芽多糖成品36g，含量72. 5%。
實(shí)施例4
稱取洗凈的柳蒿芽5kg，粉碎成粗粉，加20倍量98%的甲醇回流提取160min，濾過；濾液，回收甲醇，濃縮至3波美，用體積比1:1的鹽酸水溶液將濃縮液pH值調(diào)至2.6，放置40min，濾過；濾液上DM-130型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5% 的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50%的甲醇洗脫，得多糖半成品洗脫液，多糖半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為 1 1的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮甲醇的體積比為7 1的丙酮與甲醇混合物洗脫，得多糖洗脫液1200ml ;加入48g針劑活性炭，40°C攪拌25min，濾過；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體20g ;中間體用7倍甲醇40°C熱溶，濾過濾液放涼析出晶體，抽濾得柳蒿芽多糖成品12g，含量73. 2%。
權(quán)利要求
1.一種從柳蒿芽中制備多糖的方法，其特征在于該方法包括如下步驟將柳蒿芽洗凈，加入粗粉質(zhì)量15 20倍量的85% 100%甲醇回流提取120 180min，濾過；濾液回收甲醇后濃縮至3 5波美得濃縮液，然后用體積比1:1的鹽酸水溶液將濃縮液PH值調(diào)至2. 5 3，放置20 40min后濾過；濾液上HPD400、HPD100、DM-130 或AB-8廣譜型大孔樹脂吸附柱，吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5% 20%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50% 80%的甲醇洗脫，得多糖半成品洗脫液，多糖半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得多糖半成晶；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為I 3 I的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮甲醇的體積比為5 7 I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得多糖洗脫液；將多糖洗脫液進(jìn)行精制得柳蒿芽多糖。
2.如權(quán)利要求1所述的從柳蒿芽中制備多糖的方法，其特征在于該方法包括如下步驟洗凈的柳蒿芽，加入粗粉質(zhì)量20倍量的85%甲醇回流提取180min，濾過；濾液回收甲醇后濃縮至5波美得濃縮液，然后用體積比1:1的鹽酸水溶液將濃縮液pH值調(diào)至3， 放置40min后濾過；濾液上HPD400型大孔樹脂吸附柱,吸附完畢用水洗雜質(zhì)，再用5%的甲醇洗雜質(zhì)，然后用50%的甲醇洗脫，得多糖半成品洗脫液，多糖半成品洗脫液回收甲醇后濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并用丙酮甲醇的體積比為1:1 的丙酮與甲醇混合物洗雜質(zhì)，然后用丙酮甲醇的體積比為5 I的丙酮與甲醇混合物洗脫，得多糖洗脫液；將多糖洗脫液進(jìn)行精制得柳蒿芽多糖。
3.如權(quán)利要求1或2所述的從柳蒿芽中制備多糖的方法，其特征在于該方法中所述大孔樹脂吸附步驟采用濕法裝柱，保留液面，將調(diào)PH值后的濾液通過吸附柱，流速每分鐘O.05ml/g 樹脂。
4.如權(quán)利要求1或2所述的從柳蒿芽中制備多糖的方法，其特征在于該方法中所述硅膠層析步驟采用濕法裝柱，保留液面，將半成品按重量1:1拌活化后硅膠，并將拌好的混合物至于硅膠柱上方，洗脫流速每分鐘O. lml/g硅膠。硅膠活化條件為，110°C 30min。
5.如權(quán)利要求1或2所述的從柳蒿芽中制備多糖的方法，其特征在于該方法中采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法進(jìn)行精制，按4g/100ml多糖洗脫液加入針劑活性炭，25 40°C攪拌 20 40min，濾過；濾液回收混合試劑后濃縮干燥得中間體；中間體用7 9倍甲醇40°C熱溶,濾過,濾液放涼析出晶體,抽濾得柳蒿芽多糖成品。
6.如權(quán)利要求5所述的從柳蒿芽中制備多糖的方法，其特征在于該方法中精制過程包括如下步驟按4g/100ml洗脫液加入針劑活性炭，25°C攪拌40min，濾過；濾液，回收混合試劑，濃縮干燥得中間體；中間體用9倍甲醇40°C熱溶，濾過濾液放涼析出晶體，抽濾得柳蒿芽多糖成品。
7.如權(quán)利要求6所述的從柳蒿芽中制備多糖的方法，其特征在于該方法中成品用7倍甲醇重結(jié)晶，過濾母液，回收甲醇，濃縮干燥得多糖半成品。
全文摘要
本發(fā)明公開一種從柳蒿芽中制備多糖的方法，該方法為將柳蒿芽洗凈，加15倍量85％的甲醇回流提取120分鐘，濾過；濾液，回收甲醇，濃縮至3波美，用體積比1∶1的鹽酸∶水將濃縮液pH值調(diào)至2.5，放置20分鐘，濾過；濾液上廣譜型大孔樹脂吸附柱，收集洗脫液，回收甲醇，濃縮干燥得多糖半成品；將所得多糖半成品上硅膠層析柱，并以體積比3∶1的丙酮∶甲醇洗雜質(zhì)，繼用體積比7∶1的丙酮∶甲醇洗脫，收集洗脫液；將所收集到的多糖洗脫液進(jìn)行精制得柳蒿芽多糖成品，其含量在70％以上。本發(fā)明方法的最大特點(diǎn)是利用大孔吸附樹脂-硅膠層析耦合方便快捷、原料來源豐富、生產(chǎn)成本低廉、分離效果明顯、提取純度高。
文檔編號(hào)C08B37/00GK103030709SQ20121059558
公開日2013年4月10日 申請(qǐng)日期2012年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月13日
發(fā)明者姚德坤, 姚德利, 張亞紅, 姚航, 黃運(yùn)生, 吳海龍 申請(qǐng)人:大興安嶺林格貝有機(jī)食品有限責(zé)任公司