前列腺活組織檢查中低級(jí)PIN(LG-PIN)中ERG基因重排和蛋白質(zhì)過(guò)表達(dá)的存在相關(guān)申請(qǐng)?zhí)峤槐旧暾?qǐng)，其要求2011年2月24日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)No.61/446,300的權(quán)益。發(fā)明領(lǐng)域本公開內(nèi)容涉及用于早期階段檢測(cè)生物學(xué)樣品中先前已經(jīng)可檢出的前列腺癌細(xì)胞作為癌癥病理學(xué)的方法。更具體地，本公開內(nèi)容涉及組合的與ERGFISH測(cè)定法偶聯(lián)的抗ERG免疫組織化學(xué)測(cè)定法，其導(dǎo)致更有可能鑒定與癌癥有關(guān)的并且因此預(yù)測(cè)癌癥的低級(jí)PIN。發(fā)明背景癌癥的早期檢測(cè)是治療癌癥患者中的關(guān)鍵特征。在男性中，前列腺癌是所有人種最普遍的癌癥形式。盡管僅在美國(guó)每年超過(guò)300,000名男性診斷為前列腺癌，但是眾所周知，目前可用的測(cè)試是不準(zhǔn)確的且主觀的。因此，許多例前列腺癌發(fā)生未確診，直到疾病進(jìn)展至后期階段，包括轉(zhuǎn)移。在過(guò)去十年里，前列腺癌的發(fā)病率及其關(guān)聯(lián)死亡率兩者已經(jīng)在增加。據(jù)估計(jì)約50-65%的前列腺癌是局部化的，9-17%已經(jīng)擴(kuò)散到前列腺附近的區(qū)域，并且20-25%已經(jīng)轉(zhuǎn)移到身體的其它部位。前列腺癌的篩選主要通過(guò)PSA（針對(duì)前列腺特異性抗原的血液測(cè)試）和DRE（直腸指檢（DigitalRectalExam））測(cè)試進(jìn)行。通過(guò)檢查自針吸活組織檢查衍生的組織樣品進(jìn)行癌癥確認(rèn)。這些方法不能區(qū)分良性疾病和癌癥。不能區(qū)分可以導(dǎo)致例如患有良性疾病的患者暴露于不必要的并具有副作用（例如陽(yáng)痿和失禁）的治療。此外，估計(jì)PSA測(cè)試遺漏所有癌癥個(gè)體的20%-30%。明顯需要具有更好的靈敏性和特異性的診斷學(xué)。由于前列腺癌發(fā)病率的增加以及此病癥轉(zhuǎn)移的高速率，急切需要就是在最早階段檢出此疾病，以及能靶向潛在轉(zhuǎn)移性前列腺癌細(xì)胞的療法。理想地，這些治療類型會(huì)適用于早期階段、局限性前列腺癌以及治療轉(zhuǎn)移性疾病兩者。一個(gè)會(huì)使男性健康極大受益的領(lǐng)域是是否有可以用于檢測(cè)低級(jí)前列腺上皮內(nèi)瘤形成（lowgradeprostateintraepithelialneoplasia，LG-PIN）的特異性檢測(cè)方法。LG-PIN是前列腺細(xì)胞中的一種惡性前增殖，其最常在外周區(qū)中找到。PIN會(huì)在多至16%的已經(jīng)進(jìn)行經(jīng)直腸超聲引導(dǎo)前列腺活組織檢查的男性中得到鑒定。在PIN中，細(xì)胞重排顯示在缺少基質(zhì)侵入的情況下導(dǎo)管和腺構(gòu)造的保留及隨PIN等級(jí)升高對(duì)基底細(xì)胞層的進(jìn)行性破壞。其它已報(bào)告的組織學(xué)或生物學(xué)變化包括：神經(jīng)內(nèi)分泌或分泌分化喪失、核和核仁異常、新血管生成（neovascularity）、升高的增殖潛力和伴有DNA含量變化的遺傳不穩(wěn)定性。隨著PIN程度升高，看到升高的核畸變程度以及升高的基底細(xì)胞破壞。PIN具有完整的或破碎的基底細(xì)胞層，而癌癥（PC）缺乏基底細(xì)胞層。針對(duì)細(xì)胞角蛋白的基底細(xì)胞特異性免疫染色存在于PIN中，但是在PC區(qū)中是缺乏的。從具有最小變化的最低等級(jí)（I級(jí)）到具有最重度變化的最高等級(jí)（III級(jí)）分級(jí)PIN。大多數(shù)醫(yī)學(xué)論文將PIN分類為高級(jí)或低級(jí)。高級(jí)PIN和III級(jí)PIN同義使用。PC與高級(jí)PIN比低級(jí)更為有關(guān)。PIN似乎比PC的出現(xiàn)早超過(guò)5年。高級(jí)PIN的發(fā)現(xiàn)與后續(xù)活組織檢查中前列腺癌的診斷之間有顯著關(guān)聯(lián)。HG-PIN在多項(xiàng)研究中與33-100%的病例中的這類后續(xù)診斷相關(guān)聯(lián)。在一項(xiàng)研究中，在總共66位男性中檢測(cè)到PIN：21位具有低級(jí)PIN，45位具有高級(jí)PIN。重復(fù)活組織檢查揭示在5/21或24%的低級(jí)組中和在26/45或58%的高級(jí)組中的PC。如此，檢測(cè)可以導(dǎo)致癌癥形成的低級(jí)PIN（與高級(jí)PIN相比，其在疾病進(jìn)展周期中仍然更早）的方法可以用于前列腺癌的早期階段檢測(cè)和預(yù)后，并且導(dǎo)致針對(duì)前列腺癌的更好的治療方案。發(fā)明概述本公開內(nèi)容提供了用于診斷前列腺癌的改進(jìn)方法。例如，本發(fā)明涉及用于早期階段診斷受試者中的前列腺癌的方法，包括測(cè)定所述受試者中低級(jí)前列腺上皮內(nèi)瘤形成（LG-PIN）的存在，包括：提供來(lái)自受試者的樣品；使用核酸雜交技術(shù)通過(guò)檢測(cè)基因組DNA的染色體重排來(lái)檢測(cè)所述樣品中基因融合的存在或缺乏，所述基因融合具有來(lái)自雄激素調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)的5’部分和來(lái)自ERG基因的3’部分，以及使用免疫組織化學(xué)測(cè)定法檢測(cè)ERG蛋白的過(guò)表達(dá)，其中樣品中基因融合和ERG過(guò)表達(dá)兩者的存在指示受試者中與癌癥存在相關(guān)或預(yù)示癌癥的低級(jí)PIN，并且其中所述受試者先前測(cè)定為在前列腺癌方面呈陰性。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述雄激素調(diào)節(jié)基因可以選自包含TMPRSS2、NDRG1、SLC45A3和PSA的組。在其它實(shí)施方案中，檢測(cè)樣品中基因融合的存在或缺乏包括使用選自下組的核酸雜交技術(shù)來(lái)檢測(cè)基因組DNA的染色體重排：原位雜交（ISH）、微陣列和Southern印跡。在某些實(shí)施方案中，這類檢測(cè)包括檢測(cè)嵌合mRNA轉(zhuǎn)錄物，其具有來(lái)自雄激素調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)的5’部分和來(lái)自ERG的3’部分。在本發(fā)明的診斷方法中，所述原位雜交是熒光原位雜交（FISH），其利用選自下組的探針進(jìn)行：從RP11-95I21和CTD-2506J13開發(fā)并且在染色體21q22.3上定位的5p探針和從RP11-476D17和RP11-24A11開發(fā)并且在染色體21q22.3上定位的ERG3p探針。在例示性方法中，ERG蛋白過(guò)表達(dá)的檢測(cè)包括檢測(cè)源自雄激素調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)與ERG基因融合的氨基端截短的ERG蛋白。在其它實(shí)施方案中，過(guò)表達(dá)檢測(cè)包括檢測(cè)嵌合蛋白，其具有由雄激素調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)編碼的氨基端部分和來(lái)自ERG基因的羧基端部分。可以對(duì)任何會(huì)為了測(cè)定前列腺癌而篩選的樣品實(shí)施本發(fā)明的診斷方法。例如，所述樣品可以選自下組：組織、血液、尿液、精液、前列腺分泌物和前列腺細(xì)胞。在具體的實(shí)施方案中，所述基因融合是ARG（包括但不限于TMPRSS2）基因與ERG基因的融合，且其中所述方法進(jìn)一步包括基于基因融合中基因組缺失的存在或缺乏來(lái)表征前列腺細(xì)胞的步驟。TMPRSS2-ERG重排是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。在例示性實(shí)施方案中，這類基因重排是第21號(hào)染色體上TMPRSS2基因與ERG基因之間基因組DNA的缺失。更具體地，所述缺失包括ERG基因外顯子1的缺失或包括TMPRSS2基因外顯子3的缺失。例如，所述缺失包括如下的缺失，其中介于2.8和2.85兆堿基之間的基因組DNA是缺失的?？梢允褂肍ISH測(cè)定法檢測(cè)所述缺失，該FISH測(cè)定法使用至少一種經(jīng)熒光標(biāo)記的選自下組的探針：RP11-95I21、CTD-2506J13、RP11-476D17和RP11-24A11。在例示性實(shí)施方案中，所述缺失指示受試者中的轉(zhuǎn)移性前列腺癌。發(fā)明的診斷方法可以進(jìn)一步包括使用蘇木精和曙紅（H&E）染色劑將所述前列腺細(xì)胞染色以測(cè)定與正常的相鄰細(xì)胞相比具有擴(kuò)大的核大小而無(wú)可見(jiàn)核仁的非典型腔細(xì)胞（luminalcell）的存在。或者/另外，所述診斷方法可以進(jìn)一步包括測(cè)定所述前列腺細(xì)胞中前列腺特異性抗原（PSA）的存在。如記載的，有利地，發(fā)明的診斷方法在其它方法已指示在前列腺癌方面呈陰性的樣品的情況下提供前列腺癌的早期鑒定。例如，對(duì)最初根據(jù)針吸活組織檢查測(cè)定和/或根據(jù)H&E染色測(cè)定已經(jīng)測(cè)試為在前列腺癌方面呈陰性的受試者進(jìn)行所公開的方法。還涵蓋針對(duì)LG-PIN存在的前列腺細(xì)胞測(cè)定法，包括：a）獲得前列腺細(xì)胞的測(cè)試樣品；b）使用免疫組織化學(xué)測(cè)定法分析前列腺細(xì)胞的樣品以測(cè)定ERG的表達(dá)；c）比較步驟b）中測(cè)定的表達(dá)水平與對(duì)照樣品中的水平；d）實(shí)施FISH測(cè)定法來(lái)測(cè)定樣品中基因融合的存在或缺乏，所述基因融合具有來(lái)自雄激素調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)的5’部分和來(lái)自ERG基因的3’部分；并e）如果所述測(cè)試樣品中前列腺細(xì)胞中ERG的表達(dá)水平高于對(duì)照樣品中的，并且如步驟e）中測(cè)定的，存在來(lái)自雄激素調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)的5’部分和來(lái)自ERG基因的3’部分的基因融合，那么確定所述前列腺細(xì)胞會(huì)形成癌癥或指示所述受試者中的近端[或鄰近]癌細(xì)胞。進(jìn)一步涵蓋的是用于治療受試者中的前列腺癌的方法，包括：依照本文中描述的方法測(cè)定低級(jí)PIN的存在，并對(duì)所述受試者...