用于制備68Ga絡(luò)合物的工藝發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用于制備含有同位素的絡(luò)合物，特別是可用作放射性標(biāo)記物（radiomarker）的含有同位素68Ga的絡(luò)合物的工藝。技術(shù)現(xiàn)狀盡管利用68Ga示蹤的放射性示蹤物來體內(nèi)PET成像的最新臨床研究的鼓舞人心的結(jié)果，但是不允許長期分布的短的同位素半衰期（68分鐘）與示蹤過程所需的裝備的“生產(chǎn)放射性藥物學(xué)”一起仍然阻止其在核醫(yī)學(xué)常規(guī)中的廣泛使用。用Ga-68進(jìn)行示蹤通過將放射性金屬與合適的螯合劑在反應(yīng)介質(zhì)中絡(luò)合來進(jìn)行，引入到所述反應(yīng)介質(zhì)中的由68Ga發(fā)生器的淋洗驅(qū)出的68Ga的放射性劑量、待示蹤分子（在本申請中被稱為螯合劑官能化分子或前體）的量和合適的緩沖劑來保證絡(luò)合的最佳pH。所謂的68Ga發(fā)生器是市售的并且含有鍺（想要的68Ga通過鍺衰變由鍺自然形成）的樹脂；因此，在合適的pH條件下并且在螯合劑官能化分子的存在下樹脂的淋洗允許想要的含有68Ga的絡(luò)合物的形成；根據(jù)所選擇的螯合劑官能化分子，可能需要在75-90℃下加熱。對成功示蹤的主要限制在于以下事實：合適的pH必須保持恒定以及在絡(luò)合工藝過程中金屬雜質(zhì)與Ga-68的競爭?？紤]到以上所述，能夠保證標(biāo)準(zhǔn)pH的合適的緩沖劑的研究顯然是技術(shù)人員在68Ga示蹤中不斷研究的主題并且仍然是個機會。這樣的緩沖劑應(yīng)該是無毒的，能夠在3.5-5.0的pH范圍內(nèi)緩沖，不應(yīng)該與鎵離子競爭并且優(yōu)選地具有弱的金屬絡(luò)合能力。在所報道的不同的緩沖劑之中，主要被使用至今的緩沖劑是HEPES（磺酸衍生物）或醋酸鹽緩沖劑；然而，它們僅允許在嚴(yán)格限定的pH范圍內(nèi)起作用（PublicationofVelikyan等人，BioconjugateChem.，2008，19，569-573）并且在淋洗酸度稍微改變時就可能不再保持所需的緩沖能力。例如，來自發(fā)生器的淋洗體積即使少量增加也使得pH變?yōu)槠茐慕j(luò)合，產(chǎn)生大量游離Ga-68的值。這產(chǎn)生使最終純化變得強制的非順應(yīng)性的風(fēng)險。此外，關(guān)于HEPES緩沖劑無毒物學(xué)數(shù)據(jù)可獲得：也不得不進(jìn)行最終純化以在施用放射性藥物之前除去或至少減少HEPES。其它緩沖劑最近被建議（WO2010/092114）作為Ga-68絡(luò)合的有效溶液，例如乳酸鹽、酒石酸鹽和碳酸鹽緩沖劑。這些緩沖劑包括至少兩種Ga-68協(xié)同功能，克服了它們會干擾示蹤的偏見。無論如何，它們的用途已利用減少的和純化的發(fā)生器淋洗液部分得到成功地測試，沒有免除Ga-68溶液的預(yù)示蹤處理。第二個重要的限制是金屬雜質(zhì)的競爭，主要是源于固定相和Ga-68衰變兩者的三價和二價陽離子（Zn）的競爭。這些金屬以及Ga-68被螯合劑官能化分子束縛，減少了實際可用于示蹤的分子的數(shù)目。這可導(dǎo)致降低制劑的最終放射化學(xué)純度的Ga-68的不完全絡(luò)合。在現(xiàn)有技術(shù)中，在示蹤過程中沒有被螯合劑官能化分子絡(luò)合的Ga-68有時通過示蹤后添加過量的具有公認(rèn)的同位素親和力的螯合劑（例如EDTA螯合劑）而被完全掩蔽以避免很高部分的游離金屬存在并且在施用放射性藥物制劑的情況下促進(jìn)它們的消除（WO2010/141833-實施例2）。Ga-68的部分絡(luò)合可以從較高量的螯合劑官能化分子起始而以不同的方式面對。然而，被螯合的前體的量的增加產(chǎn)生可損害診斷結(jié)果的比放射性（specificradioactivity）（放射性產(chǎn)物和未被示蹤的產(chǎn)物之間的比）的不期望的降低。實際上，由于與對相同受體示蹤的分子的競爭，未示蹤的分子的存在可具有對靶組織中的放射性濃度的負(fù)面影響。因此，高SRA（比放射性）對在PET圖像中提供靶組織和其周圍環(huán)境之間足夠的對比是關(guān)鍵的。在技術(shù)現(xiàn)狀中，競爭的金屬離子的存在通常通過在示蹤之前淋洗液的預(yù)純化或分餾來減少（如由專利N°WO2010/092114所描述的），但是這些步驟提供了起始活性的不利損失。此外，如果預(yù)示蹤步驟以及最終純化不能被避免，Ga-68示蹤將在某種程度上通過使用合成模塊一直基于自動化，使試劑盒策略變得不能實施。與所需的技術(shù)專長相比，這需要用于示蹤的不期望的延長的時間。由于放射性核素的短的半衰期（t1/2=68分鐘）以及由發(fā)生器提供的有限的活性，旨在獲得非?？焖俚?、直接的并且高產(chǎn)的絡(luò)合的任何改進(jìn)是高度期望的。由全部以上所述很清楚，需要一種允許克服以上所述問題的制備68Ga絡(luò)合物的工藝。發(fā)明概述描述了用于制備含有68Ga的絡(luò)合物的工藝，其中緩沖劑甲酸/甲酸鹽，可能在能夠掩蔽金屬陽離子的化合物的存在下，被用于絡(luò)合反應(yīng)。發(fā)明詳述本發(fā)明允許通過一種工藝克服以上所述問題，其中Ga-68在水性緩沖劑甲酸/甲酸鹽中通過螯合劑官能化分子有效地絡(luò)合。以上所述緩沖劑甲酸/甲酸鹽不僅允許建立合適的pH，而且容許淋洗液體積/酸度變化。事實上，其緩沖能力集中于適合于Ga-68絡(luò)合的pH值并且其不具有金屬絡(luò)合能力，因此其不提供對示蹤的干擾。此外，這種緩沖劑應(yīng)該與藥物應(yīng)用相容，因為甲酸在藥典中被歸為3類（具有低毒潛能的溶劑）殘留溶劑，5mg/ml（5000ppm）的限值被藥典容許。通常，作為甲酸鹽，甲酸鈉是優(yōu)選的，但是甲酸鹽的任何其它金屬鹽也可被使用。甲酸/甲酸鹽的比通常包括在1和3.5之間。此外，為了面對存在金屬雜質(zhì)的問題，代替增加螯合劑官能化分子的量（假如SRA降低）或利用耗時的和消耗放射性的純化步驟預(yù)處理發(fā)生器淋洗液（因為這是現(xiàn)有技術(shù)中常規(guī)的實踐），發(fā)現(xiàn)掩蔽劑可被用于該工藝中以中和干擾物質(zhì)，使Ga-68更多地游離以與螯合劑官能化分子反應(yīng)。這些掩蔽劑（如果存在的話）作為支撐螯合劑官能化分子（supportchelator-functionalizedmolecule），其暫時地或永久地減少對與螯合的官能化分子的反應(yīng)競爭的金屬。值得注意的是，本發(fā)明中的掩蔽劑的功能與如以上所描述的現(xiàn)有技術(shù)中使用的掩蔽劑的功能是相反的。事實上，根據(jù)已知的程序，在示蹤的最后，具有對鎵的特定親和力的掩蔽劑可被加入以螯合同位素的未反應(yīng)的部分，而根據(jù)本發(fā)明，能夠使金屬雜質(zhì)的競爭降到最低的掩蔽劑在反應(yīng)開始時被加入。很顯然，本發(fā)明中使用的掩蔽劑應(yīng)該優(yōu)先結(jié)合競爭的金屬而不是Ga-68離子以避免干擾主要的示蹤反應(yīng)或形成負(fù)面的（by-side）示蹤物質(zhì)。此外，根據(jù)特定的實施方案，本發(fā)明還涉及用于使放射性同位素且特別是68Ga絡(luò)合的工藝，其中緩沖溶液與如以上和下文所描述的掩蔽劑被組合使用。根據(jù)本發(fā)明，螯合劑官能化分子旨在是具有靶向能力的被能夠絡(luò)合放射性同位素諸如Ga-68的螯合物官能化的任何分子。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選的用于絡(luò)合Ga-68的螯合物可選自以下之中：DOTA及其衍生物、NOTA及其衍生物、PCTA及其衍生物。通常還可以使用由如下的任何螯合物，所述螯合物能夠形成圍繞Ga3+的足夠穩(wěn)定的籠狀物，特別是任何脂族胺、大環(huán)胺或線性胺，或具有叔胺的大環(huán)胺。作為具有靶向能力的分子，其旨在是能夠靶向具有診斷或治療益處的生物過程的分子，有利地是氨基酸、肽（有利地包括4至15或4至10個氨基酸）、多肽、蛋白，維生素、單糖或多糖、抗體、核酸或適體。在可用于本發(fā)明的具有靶向能力的分子之中，我們可提及（作為實例并且不作為限制性列表）：-靶向VEGF受體的分子-靶向GRP受體的蛙皮素類似物或分子-靶向生長激素抑制素受體的分子-靶向RGD肽或αvβ3和αvβ5的分子-靶向凋亡過程的膜聯(lián)蛋白V或分子-靶向雌激素受體的分子-靶向動脈粥樣硬化斑塊的分子-在TopicsinCurrentChemistry，卷222，260-274，F(xiàn)undamentalsofReceptor-basedDiagnosticMetallopharmaceuticals中記載的靶向分子。掩蔽劑（如果存在的話）優(yōu)選地在由以下組成的組中選擇：-甘氨酸和其它螯合氨基酸（例如，蛋氨酸、半胱氨酸，等等......）-冠醚和氮冠醚-雜環(huán)有機化合物，例如，1,10-鄰二氮雜菲、2,2'-二吡啶-杯芳烴-多齒螯合劑，例如，蛋白、多糖和多核酸-天然螯合劑，例如，兒茶酚、鞣酸、卟啉-大體上線性的或大環(huán)的螯合劑（例如，莢醚或穴狀配體（kryptand））通常，微摩爾量或更有利地納摩爾量的掩蔽劑被使用，優(yōu)選地小于100納摩爾，例如在20和25納摩爾的范圍內(nèi)。重要的是，注意以上闡明的掩蔽劑也可有利地用于其中其它緩沖劑被使用的絡(luò)合反應(yīng)中。因此，本發(fā)明的另一個實施方案是一種工藝，所述工藝在此包括放射性同位素特別是68Ga的絡(luò)合反應(yīng)，其中如以上所限定的掩蔽劑被添加到反應(yīng)緩沖劑中。優(yōu)選地，絡(luò)合反應(yīng)在3和4.5之間，更優(yōu)選地在3.2和4.2之間，最優(yōu)選地在3.4和4.0之間的pH范圍內(nèi)進(jìn)行。根據(jù)上述工藝獲得的絡(luò)合物也是本發(fā)明的實施方案；它們可含有10mg/ml以下的甲酸/甲酸鹽和100納摩爾以下的掩蔽劑（如果使用的話）。如所述，將商業(yè)發(fā)生器（由具有鍺的樹脂的柱組成）用含有酸（通常是HCL）的淋洗液直接淋洗到含有甲酸鹽和堿的緩沖劑的小瓶中。螯合劑官能化分子（通常在金屬掩蔽劑的存在下，如，例如，鄰二氮雜菲）被添加到小瓶中并且反應(yīng)小瓶被短時間地加熱；產(chǎn)物溶液被收集并且通過反相HPLC和ITLC（MeOH/醋酸銨1M1/1）核查。添加順序也可被倒轉(zhuǎn)。例如，商業(yè)發(fā)生器可用含有酸（通常是HCL）的淋洗液直接淋洗到含有螯合劑官能化分子（優(yōu)選地，在金屬掩蔽劑的存在下，如，例如，鄰二氮雜菲）的小瓶中。甲酸鹽緩沖劑和堿被添加到小瓶中并且反應(yīng)混合物被短時間地加熱。酸淋洗液通常由強酸的水溶液（如，例如，HCl）組成，而堿是強堿（如，例如，NaOH）的水溶液?？偟膩碚f，甲酸鹽緩沖劑的使用保證了合適的pH，即使淋洗液的酸度發(fā)生變化，并且以這種方式降低了由于過低或過高的pH而分別產(chǎn)生高含量的游離68Ga3+或68Ga氫氧化物的未絡(luò)合的Ga-68的量。此外，掩蔽劑的添加允許降低為獲得完全的Ga-68絡(luò)合所需的螯合劑官能化分子的量。這兩個方面使申請人能夠獲得合適程度的絡(luò)合，有利地至少92%、95%和97%，且因此達(dá)到足夠的純度（至少92%、95%和97%）而無需任何種類的預(yù)純化或最終純化。由于獲得的結(jié)果證實了不需要操縱或純化的直接Ga-68示蹤的可行性，此制劑可被應(yīng)用于特定試劑盒的生產(chǎn)。因此，根據(jù)特定的實施方案，本發(fā)明還涉及包括以下的試劑盒：-硅化小瓶（siliconizedvial），其含有螯合劑官能化分子和所選擇的掩蔽劑；硅化小瓶或注射器，其含有合適的超純甲酸/甲酸鈉混合物。此外，本發(fā)明還涉及含有螯合劑官能化分子、被選擇的掩蔽劑和合適的超純甲酸/甲酸鈉混合物的單個小瓶。實施例1用3ml的0.6MHCl淋洗液示蹤的68GaDOTA肽將30mCi的具有SnO2固定相的商業(yè)發(fā)生器（來自IDB）用3ml的0.6M超純HCl的淋洗液直接淋洗到含有200ul的1.5M超純緩沖劑甲酸鹽和400ul的4.5M超純NaOH的小瓶中。然后30ug的DOTA-肽和4.5ug的1,10-鄰二氮雜菲被加入并且反應(yīng)小瓶在95℃下被加熱7分鐘。產(chǎn)物通過反相HPLC和ITLC（MeOH/醋酸銨1M.1/1）核查并且在兩個試驗中均產(chǎn)生98%的放射化學(xué)純度。實施例2用3.2ml的0.6MHCl淋洗液示蹤的68GaDOTA肽將30mCi的具有SnO2固定相的商業(yè)發(fā)生器（來自IDB）用3.2ml的0.6M超純HCl的淋洗液直接淋洗到含有200ul的1.5M超純緩沖劑甲酸鹽和400ul的4.5M超純NaOH的小瓶中。然后30ug的DOTA-肽和4.5ug的1,10-鄰二氮雜菲被加入并且反應(yīng)小瓶在95℃下被加熱7分鐘。產(chǎn)物通過反相HPLC和ITLC（MeOH/醋酸銨1M.1/1）核查并且在兩個試驗中均產(chǎn)生97%的放射化學(xué)純度。實施例3：用3ml的0.6MHCl淋洗液示蹤的68GaDOTA肽將30mCi的具有SnO2固定相的商業(yè)發(fā)生器（來自IDB）用3ml的0.6M超純HCl的淋洗液直接淋洗到含有200ul的1.5M超純緩沖劑甲酸鹽和400ul的4.5M超純NaOH的小瓶中。然后30ug的DOTA-肽和15ug的12-冠-4被加入并且反應(yīng)小瓶在95℃下被加熱7分鐘。產(chǎn)物通過反相HPLC和ITLC（MeOH/醋酸銨1M.1/1）核查并且分別產(chǎn)生98%和96%的放射化學(xué)純度。實施例4：用3ml的0.6MHCl淋洗液示蹤的68GaDOTA肽將30mCi的具有SnO2固定相的商業(yè)發(fā)生器（來自IDB）用3ml的0.6M超純HCl的淋洗液直接淋洗到含有30ug的DOTA-肽和15ug的12-冠-4的小瓶中。然后200ul的1.5M超純緩沖劑甲酸鹽和400ul的4.5M超純NaOH被加入并且反應(yīng)小瓶在95℃下被加熱7分鐘。產(chǎn)物通過反相HPLC和ITLC（MeOH/醋酸銨1M.1/1）核查并且分別產(chǎn)生98%和96%的放射化學(xué)純度。