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一種肝素鈉的精制方法

文檔序號:3677060閱讀:355來源:國知局
一種肝素鈉的精制方法
【專利摘要】本發(fā)明為一種肝素鈉的精制方法,屬于生化行業(yè)領(lǐng)域。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種吸附除雜與添加酶激活劑進行酶解的聯(lián)合精制肝素鈉的方法,該方法能解決單純的吸附與酶解難以徹底除雜的問題,且通過酶激活劑的使用,大大縮短了酶解時間,提高了生產(chǎn)效率。
【專利說明】一種肝素鈉的精制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生化行業(yè)領(lǐng)域,具體地說,涉及一種肝素鈉的精制方法。
【背景技術(shù)】
[0002]肝素鈉是肝素的鈉鹽形式產(chǎn)物,是一種含有硫酸基的酸性粘多糖類天然抗凝血物質(zhì)??蓮V泛用于防治各種心腦血管疾病,在臨床應(yīng)用中廣受青睞。
[0003]肝素鈉廣泛存在于哺乳動物的腸粘膜、肺、肝中,特別是豬小腸粘膜中含量最高。目前我國生產(chǎn)的肝素鈉主要以豬小腸粘膜為原料進行提取,由于肝素鈉在動物體內(nèi)多以肝素鈉-蛋白質(zhì)復(fù)合物的形式存在,故使得粗品中會殘留一定量的蛋白質(zhì),影響了產(chǎn)品的品質(zhì)。
[0004]目前,我國肝素鈉的精制主要采用酶解、鹽解、吸附的一種或多種生產(chǎn)工藝。申請?zhí)枮?01210161795.5和申請?zhí)枮?01110067346.X的專利采用樹脂吸附的方法來精制肝素鈉,申請?zhí)枮?01110169065.5的專利采用酶解法進行精制,專利號為201210095896.7采用鹽解、酶解與吸附相結(jié)合的方式進行精制,由于采用單一的吸附或酶解法進行精制很難得到效價高的肝素鈉,而酶解反應(yīng)由于反應(yīng)速度較慢,酶用量大,生產(chǎn)周期長,且純化時采用多次溶解再沉淀的方法,酒精用量大,并且產(chǎn)品收率低,大大影響了生產(chǎn)效率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種吸附除雜與添加酶激活劑進行酶解的聯(lián)合精制肝素鈉的方法,該方法能解決單純的吸附與酶解難以徹底除雜的問題,且通過酶激活劑的使用,大大縮短 了酶解時間,提高了生產(chǎn)效率。
[0006]本發(fā)明的解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:一種肝素鈉的精制方法,包括下述步驟:
(1)預(yù)處理:將粗品肝素鈉進行粉碎、過篩;
(2)溶解:按照粗品肝素鈉:水的重量比為1:5~20進行溶解;
(3)酶解:在步驟2所制成的肝素鈉溶液中加入胰酶和酶激活劑,在pH6、、45飛(TC下酶解2~6小時;
(4)升溫至7(T90°C,過濾取濾液;
(5)將步驟4所得的濾液經(jīng)氧化、吸附、過濾、超濾濃縮、沉淀、脫水后制得肝素鈉。
[0007]優(yōu)化地,所述步驟(1)中肝素鈉粗品經(jīng)粉碎過篩后所得為直徑小于30目的粉末。
[0008]優(yōu)化地,所述步驟(3)中加入胰酶的量為溶液質(zhì)量的2%_8%。
[0009]優(yōu)化地,所述步驟(3)中所用酶激活劑為氯化鈣、醋酸鈣的一種或兩種,所用量為溶液質(zhì)量的0.05%-0.15%。
[0010]優(yōu)化地,所述步驟(5)中氧化為在步驟(4)所得濾液中加入雙氧水,對濾液進行氧化處理,加入量為濾液質(zhì)量的0.1%-1%。對濾液進行氧化處理。
[0011]優(yōu)化地,所述步驟(5)中吸附為向氧化后的濾液中加入占濾液質(zhì)量分數(shù)0.2%-2%的Ca3 (PO4) 2以除去濾液中的雜質(zhì)。
[0012] 優(yōu)化地,所述步驟(5)中過濾為采用板框過濾,采用0.22微米的醋酸纖維素濾膜。
[0013]優(yōu)化地,所述步驟(5)中超濾濃縮為選用截留分子量為3000的醋酸纖維素濾膜。
[0014]優(yōu)化地,所述步驟(5)中沉淀為將超濾濃縮后的溶液中用鹽酸調(diào)節(jié)pH至5.0-6.0,邊攪動邊加入乙醇,使乙醇度數(shù)在38~45度,靜置10-12小時沉淀。
[0015]優(yōu)化地,所述步驟(5)中脫水用無水乙醇脫水,離心后真空干燥。
[0016]本發(fā)明的有益效果為利用吸附除雜和酶解的方法聯(lián)合精制肝素鈉除雜較徹底,得到的產(chǎn)品效價高,收率高,且通過添加酶激活劑使酶解速率大大提高,減少了酶的用量,縮短生產(chǎn)周期,降低生產(chǎn)成本,利于工業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實施方式】
[0017]實施例1
本發(fā)明的具體步驟為實驗前先對所用器具、試劑、耗材進行高壓滅菌。具體步驟如下:
1、將粗品肝素鈉用粉碎機粉碎、過篩,得到直徑小于30目的粉末;
2、按照粗品肝素鈉:水的重量比為1:5進行溶解;
3、在步驟2所制成的肝素鈉溶液中加入質(zhì)量分數(shù)為2%的胰酶和0.05%的氯化鈣,在pH6、45°C下酶解2小時;
4、升溫至70°C,過濾取濾液;
5、在濾液中加入質(zhì)量分數(shù)為0.1%的雙氧水和0.2%Ca3 (PO4)2,選用0.22微米的醋酸纖維素濾膜進行半框過濾,選用可截留分子量3000的醋酸纖維素濾膜進行超濾濃縮,將濾液用鹽酸調(diào)pH為5.0,邊攪邊加乙醇,度數(shù)為38度,沉淀10小時,脫水干燥用無水乙醇脫水,
離心后真空干燥。
[0018]將實驗過程及產(chǎn)品各數(shù)據(jù)記錄于表1。
實施例2
實驗前先對所用器具、試劑、耗材進行高壓滅菌。具體步驟如下:
1、將粗品肝素鈉用粉碎機粉碎、過篩,得到直徑小于30目的粉末;
2、按照粗品肝素鈉:水的重量比為1:12進行溶解;
3、在步驟2所制成的肝素鈉溶液中加入質(zhì)量分數(shù)為4%胰酶和0.1%醋酸鈣,在pH7.5、55°C下酶解4小時;
4、升溫至80°C,過濾取濾液;
5、在濾液中加入1%的雙氧水和2%的Ca3(PO4)2,板框過濾選用0.22微米的醋酸纖維素濾膜,選用可截留分子量為3000的醋酸纖維素濾膜進行超濾濃縮,將濾液用鹽酸調(diào)pH為5.5,邊攪邊加乙醇,度數(shù)為41度,沉淀11小時,脫水干燥用無水乙醇脫水,離心后真空干燥。
[0019]將實驗過程及產(chǎn)品各數(shù)據(jù)記錄于表1。
[0020]實施例3
實驗前先對所用器具、試劑、耗材進行高壓滅菌。具體步驟如下:
1、將粗品肝素鈉用粉碎機粉碎、過篩,得到直徑小于30目的粉末;
2、按照粗品肝素鈉:水的重量比為1:20進行溶解;3、在步驟2所制成的肝素鈉溶液中加入質(zhì)量分數(shù)為8%胰酶和0.15%氯化鈣,在pH9、60°C下酶解6小時;
4、升溫至90°C,過濾取濾液;
5、在濾液中加入質(zhì)量分數(shù)為0.5%的雙氧水和1%的Ca3(PO4)2,選用;0.22微米的醋酸纖維素濾膜進行板框過濾,選用可截留分子量3000的醋酸纖維素濾膜進行超濾濃縮,將濾液用鹽酸調(diào)pH為6.0,邊攪邊加乙醇,度數(shù)為45度,沉淀12小時,脫水干燥用無水乙醇脫水,離心后真空干燥。
[0021]將實驗過程及產(chǎn)品各數(shù)據(jù)記錄于表1。
[0022]對比例I
本對比例僅采用吸附法對肝素鈉進行精制,即方法與實施例1相比去除步驟3和4,其他步驟完全相同。
[0023]將實驗過程及產(chǎn)品各數(shù)據(jù)記錄于表1。
[0024]對比例2
本對比例僅采用酶解方法且不使用酶激活劑對肝素鈉進行精制,即方法與實施例1相比去除了步驟5中添加Ca3 (PO4) 2與步驟3中添加酶激活劑這兩個過程,其他步驟完全相同。
[0025]將實驗過程及產(chǎn)品各數(shù)據(jù)記錄于表1。
[0026]對比例3
本對比例采用的方法為吸附與酶解相結(jié)合的方法,但不添加酶激活劑,即方法與實施例I相比去除步驟3中添加酶激活劑這一過程,其他步驟完全相同。
[0027]將實驗過程及產(chǎn)品各數(shù)據(jù)記錄于表1。
[0028]對比例4
實驗前先對所用器具、試劑、耗材進行高壓滅菌。具體步驟如下:
1、將粗品肝素鈉用粉碎機粉碎、過篩,得到直徑小于30目的粉末;
2、按照粗品肝素鈉:水的重量比為1:1進行溶解;
3、在步驟2所制成的肝素鈉溶液中加入胰酶和酶激活劑1%的胰酶,0.04%氯化鈣,在pH5、40°C下酶解I小時;
4、升溫至60°C,過濾取濾液;
5、在濾液中加入0.05%的雙氧水和0.1%的Ca3 (PO4) 2,選用0.22微米的醋酸纖維素濾膜進行板框過濾,選用可截留分子量3000的醋酸纖維素濾膜進行超濾濃縮,將濾液用鹽酸調(diào)pH為4.5,邊攪邊加乙醇,度數(shù)為35度,沉淀8小時,脫水干燥用無水乙醇脫水,離心后真
空干燥。
[0029]將實驗過程及產(chǎn)品各數(shù)據(jù)記錄于表1。
[0030]對比例5
實驗前先對所用器具、試劑、耗材進行高壓滅菌。具體步驟如下:
1、將粗品肝素鈉用粉碎機粉碎、過篩,得到直徑大于30目小于50目的粉末;
2、按照粗品肝素鈉:水的重量比為1:30進行溶解;
3、在步驟2所制成的肝素鈉溶液中加入10%的胰酶,0.2%氯化鈣,在pH10、65°C下酶解8小時;
4、升溫至95°C,過濾取濾液;5、在濾液中加入2%的雙氧水和5%的Ca3(PO4)2,選用0.22微米的醋酸纖維素濾膜進行板框過濾,選用可截留分子量3000的醋酸纖維素濾膜進行超濾濃縮,將濾液用鹽酸調(diào)pH為7.0,邊攪邊加乙醇,度數(shù)為50度,沉淀15小時,脫水干燥用無水乙醇脫水,離心后真空干燥。
[0031]將實驗過程及產(chǎn)品各數(shù)據(jù)記錄于表1。
[0032]表1
【權(quán)利要求】
1.一種肝素鈉的精制方法,包括下述步驟: (1)預(yù)處理:將粗品肝素鈉進行粉碎、過篩; (2)溶解:按照粗品肝素鈉:水的重量比為1:5~20進行溶解; (3)酶解:在步驟2所制成的肝素鈉溶液中加入胰酶和酶激活劑,在pH6、、45飛(TC下酶解2~6小時; (4)升溫至7(T90°C,過濾取濾液; (5)將步驟4所得的濾液經(jīng)氧化、吸附、過濾、超濾濃縮、沉淀、脫水后制得肝素鈉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種肝素鈉的精制方法,所述步驟(1)中肝素鈉粗品經(jīng)粉碎過篩后所得為直徑小于30目的粉末。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種肝素鈉的精制方法,所述步驟(3)中加入胰酶的量為溶液質(zhì)量的2%_8%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種肝素鈉的精制方法,所述步驟(3)中所用酶激活劑為氯化鈣、醋酸鈣的一種或兩種,所用量為溶液質(zhì)量的0.05%-0.15%。
5.根據(jù)權(quán)利要 求1所述的一種肝素鈉的精制方法,所述步驟(5)中氧化為在步驟(4)所得濾液中加入雙氧水,對濾液進行氧化處理,加入量為濾液質(zhì)量的0.1%-1%,對濾液進行氧化處理。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種肝素鈉的精制方法,所述步驟(5)中吸附為向氧化后的濾液中加入占濾液質(zhì)量分數(shù)0.2%-2%的Ca3(PO4)2以除去濾液中的雜質(zhì)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種肝素鈉的精制方法,所述步驟(5)中過濾為采用板框過濾,采用0.22微米的醋酸纖維素濾膜。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種肝素鈉的精制方法,所述步驟(5)中超濾濃縮為選用截留分子量為3000的醋酸纖維素濾膜。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種肝素鈉的精制方法,所述步驟(5)中沉淀為將超濾濃縮后的溶液中用鹽酸調(diào)節(jié)PH至5.0-6.0,邊攪動邊加入乙醇,使乙醇度數(shù)在38~45度,靜置10-12小時沉淀。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種肝素鈉的精制方法,所述步驟(5)中脫水用無水乙醇脫水,離心后真空干燥。
【文檔編號】C08B37/10GK103923230SQ201310009732
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2013年1月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年1月11日
【發(fā)明者】張永勤, 李萍, 曲輝, 張濤 申請人:青島亞博生物科技有限公司
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