本發(fā)明涉及干細胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及曲古抑菌素A在維持干細胞干性中的用途。更具體地，本發(fā)明涉及曲古抑菌素A在維持干細胞干性中的用途、干細胞培養(yǎng)基、用于干細胞培養(yǎng)的試劑盒以及干細胞培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：
干細胞，尤其是間充質(zhì)干細胞（mesenchymalstemcells,ormesenchymalstromalcells,MSCs），能夠促進多種損傷組織的修復(fù)，具有廣泛的臨床應(yīng)用前景。但是，干細胞會在體外擴增時發(fā)生自主分化和衰老，即無法維持干性，從而降低了其分化形成其它更為重要的細胞如神經(jīng)細胞和心肌細胞的能力，這是目前干細胞培養(yǎng)的突出問題，也會嚴重制約干細胞的臨床應(yīng)用。因而，目前的干細胞培養(yǎng)中有效維持其干性，意義重大。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明的一個目的在于提出一種能夠有效維持干細胞干性的方法。需要說明的是，本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列發(fā)現(xiàn)而完成的：表觀遺傳是調(diào)節(jié)干細胞干性的重要機制，不恰當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件能夠使Oct4、CXCR4、端粒酶等干性相關(guān)基因的表達發(fā)生表觀遺傳的改變，尤其是組蛋白乙酰化的改變，從而造成MSCs在體外培養(yǎng)時發(fā)生自主分化、干性下降。因而，預(yù)防或糾正這些基因表觀遺傳改變可保持或恢復(fù)MSCs的原有特性。曲古抑菌素A(TrichostatinA，TSA）源自鏈霉菌代謝產(chǎn)物，是一種短鏈脂肪酸，具有多種生物學(xué)作用最先作為抗真菌藥物使用。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在傳統(tǒng)MSCs培養(yǎng)液中添加一定劑量的TSA（例如6-50nM）能夠有效地維持MSCs擴增培養(yǎng)過程中的組蛋白乙酰化的狀態(tài)，從而能夠有效地維持MSCs的性狀。而在作用機制方面，TSA能夠通過與Zn2+的螯合作用特異的、可逆的抑制哺乳動物組蛋白去乙?；福℉DACs）的活性，從而證明了發(fā)明人的上述發(fā)現(xiàn)。由此，本發(fā)明提出了以下幾個方面：根據(jù)本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提出了曲古抑菌素A在維持干細胞干性中的用途。具體地，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在傳統(tǒng)干細胞培養(yǎng)基中添加一定劑量例如6-50nM的TSA，能夠有效地維持干細胞擴增培養(yǎng)過程中的組蛋白乙?；臓顟B(tài)，從而能夠有效地維持干細胞的干性，避 免干細胞在體外培養(yǎng)時發(fā)生自主分化。其中，需要說明的是，在本文中所使用的術(shù)語“干細胞”包括所有類型的干細胞，例如間充質(zhì)干細胞以及其他成體干細胞等。根據(jù)本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明提出了一種干細胞培養(yǎng)基。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該干細胞培養(yǎng)基包含：基礎(chǔ)培養(yǎng)基；以及6-50nM的曲古抑菌素A。發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，利用本發(fā)明的干細胞培養(yǎng)基進行干細胞培養(yǎng)，能夠有效地維持干細胞擴增培養(yǎng)過程中的組蛋白乙酰化的狀態(tài)，從而能夠有效地維持干細胞的干性，減少干細胞體外培養(yǎng)過程中的自主分化，減緩衰老進程，則經(jīng)過體外擴增培養(yǎng)獲得的干細胞將更有效地用于干細胞移植等臨床治療。另外，根據(jù)本發(fā)明上述實施例的干細胞培養(yǎng)基還可以具有如下附加的技術(shù)特征：根據(jù)本發(fā)明的實施例，基礎(chǔ)培養(yǎng)基的種類不受特別限制，可以根據(jù)所要培養(yǎng)的干細胞的種類，選擇合適的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為選自DMEM、IMDM和MEM的至少一種。根據(jù)本發(fā)明的一些具體示例，對間充質(zhì)干細胞進行培養(yǎng)所采用的本發(fā)明的干細胞培養(yǎng)基中所包含的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為低糖DMEM。根據(jù)本發(fā)明的實施例，本發(fā)明的干細胞培養(yǎng)基中曲古抑菌素A的濃度不受特別限制，只要在6-50nM范圍內(nèi)，該干細胞培養(yǎng)基均能夠滿足干細胞干性維持的要求。根據(jù)本發(fā)明的一些具體示例，所述干細胞培養(yǎng)基含有6.25-12.5nM所述曲古抑菌素A。根據(jù)本發(fā)明的另一些實施例，所述干細胞培養(yǎng)基含有6.25nM所述曲古抑菌素A。由此，本發(fā)明的干細胞培養(yǎng)基維持干細胞干性的效果更好，利用該培養(yǎng)基進行干細胞培養(yǎng)，干細胞在體外擴增時自主分化現(xiàn)象少，衰老速度慢，進而獲得的干細胞能夠有效地用于干細胞移植等臨床治療中。根據(jù)本發(fā)明的實施例，本發(fā)明的干細胞培養(yǎng)基還可以進一步包括其他干細胞體外擴增培養(yǎng)所需要的組分。根據(jù)本發(fā)明的實施例，本發(fā)明的干細胞培養(yǎng)基進一步包含選自血清、細胞因子、細胞外基質(zhì)分子的至少一種。其中，根據(jù)本發(fā)明的一些實施例，所述血清為胎牛血清。根據(jù)本發(fā)明的另一些實施例，所述細胞因子為bFGF。根據(jù)本發(fā)明的一些具體示例，所述細胞外基質(zhì)分子為選自fibronectin、膠原蛋白和透明質(zhì)酸的至少一種。即，在傳統(tǒng)干細胞培養(yǎng)基尤其是目前應(yīng)用最多、培養(yǎng)效果較好的干細胞培養(yǎng)基中添加6-50nM曲古抑菌素A，即可獲得本發(fā)明的干細胞培養(yǎng)基。根據(jù)本發(fā)明的一些具體示例，本發(fā)明的干細胞培養(yǎng)基為添加了6-50nM曲古抑菌素A，10%胎牛血清，100IU青霉素和100μg/ml鏈霉素的低糖DMEM。由此，該干細胞培養(yǎng)基非常適于培養(yǎng)干細胞尤其是間充質(zhì)干細胞，利用該干細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得的干細胞干性好，自主分化現(xiàn)象少，衰老速度慢，進而獲得的干細胞能夠有效地用于干細胞移植等臨床治療中。根據(jù)本發(fā)明的再一方面，本發(fā)明提出了一種用于干細胞培養(yǎng)的試劑盒。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該試劑盒中含有6-50nM的曲古抑菌素A。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在干細胞培養(yǎng)過程中使用該試劑盒，即添加6-50nM的曲古抑菌素A，能夠有效地維持干細胞的干性，減少干細胞體外培養(yǎng)過程中的自主分化，減緩衰老進程，則經(jīng)過體外擴增培養(yǎng)獲得的干細胞能夠有效地用于干細胞移植等臨床治療中。根據(jù)本發(fā)明的實施例，本發(fā)明的用于干細胞培養(yǎng)的試劑盒中曲古抑菌素A的濃度不受 特別限制，只要在6-50nM范圍內(nèi)，該試劑盒均能夠滿足干細胞干性維持的要求。根據(jù)本發(fā)明的一些具體示例，該用于干細胞培養(yǎng)的試劑盒中含有6.25-12.5nM所述曲古抑菌素A。根據(jù)本發(fā)明的另一些實施例，該用于干細胞培養(yǎng)的試劑盒中含有6.25nM所述曲古抑菌素A。由此，將本發(fā)明的試劑盒用于干細胞培養(yǎng)過程中時，培養(yǎng)獲得的干細胞干性好，自主分化現(xiàn)象少，衰老速度慢，進而獲得的干細胞能夠有效地用于干細胞移植等臨床治療中。根據(jù)本發(fā)明的實施例，本發(fā)明的用于干細胞培養(yǎng)的試劑盒中還可以進一步包括其他干細胞體外擴增培養(yǎng)所需要的組分。根據(jù)本發(fā)明的實施例，本發(fā)明的用于干細胞培養(yǎng)的試劑盒中進一步包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基。其中，根據(jù)本發(fā)明的一些具體示例，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為選自DMEM、IMDM和MEM的至少一種。根據(jù)本發(fā)明的實施例，本發(fā)明的用于干細胞培養(yǎng)的試劑盒中進一步包含選自血清、細胞因子、細胞外基質(zhì)分子的至少一種。其中，根據(jù)本發(fā)明的一些實施例，所述血清為胎牛血清。根據(jù)本發(fā)明的另一些實施例，所述細胞因子為bFGF。根據(jù)本發(fā)明的一些具體示例，所述細胞外基質(zhì)分子為選自fibronectin、膠原蛋白和透明質(zhì)酸的至少一種。根據(jù)本發(fā)明的一些具體示例，本發(fā)明的用于干細胞培養(yǎng)的試劑盒中包含6-50nM曲古抑菌素A，10%胎牛血清，100IU青霉素和100μg/ml鏈霉素以及低糖DMEM，并且上述各組分分別設(shè)置于不同的容器中。由此，本發(fā)明的用于干細胞培養(yǎng)的試劑盒非常適于培養(yǎng)干細胞尤其是間充質(zhì)干細胞，利用該試劑盒培養(yǎng)獲得的干細胞干性好，自主分化現(xiàn)象少，衰老速度慢，進而獲得的干細胞能夠有效地用于干細胞移植等臨床治療中。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明還提出了一種用于干細胞培養(yǎng)的試劑盒根據(jù)本發(fā)明的實施例，該試劑盒中包含前面所述的干細胞培養(yǎng)基。根據(jù)本發(fā)明的實施例，利用該試劑盒培養(yǎng)獲得的干細胞干性好，自主分化現(xiàn)象少，衰老速度慢，進而獲得的干細胞能夠有效地用于干細胞移植等臨床治療中，本發(fā)明的用于干細胞培養(yǎng)的試劑盒非常適于培養(yǎng)干細胞尤其是間充質(zhì)干細胞。根據(jù)本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明提出了一種干細胞培養(yǎng)方法。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該方法是利用前面所述的干細胞培養(yǎng)基，或者用于干細胞培養(yǎng)的試劑盒進行干細胞培養(yǎng)。根據(jù)本發(fā)明的實施例，利用該方法培養(yǎng)獲得的干細胞干性好，自主分化現(xiàn)象少，衰老速度慢，進而獲得的干細胞能夠有效地用于干細胞移植等臨床治療中。本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實踐了解到。附圖說明本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點從結(jié)合下面附圖對實施例的描述中將變得明顯和容易理解，其中：圖1顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例，添加不同濃度的TSA對MSCs培養(yǎng)的影響實驗的結(jié)果；圖2顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例，含6.25nMTSA的干細胞培養(yǎng)基對MSCs生長影響的實驗結(jié)果。具體實施方式下面詳細描述本發(fā)明的實施例。下面通過參考附圖描述的實施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。實施例1按照以下步驟，進行實驗，以研究添加不同濃度的TSA對MSCs培養(yǎng)的影響，并確定最適的TSA添加濃度：在常規(guī)MSCs培養(yǎng)液（低糖DMEM加10%胎牛血清、100IU青霉素和100μg./ml鏈霉素）中添加不同濃度的TSA（(0、6.25、12.5、25、50、100、200和300nM)），配制成干細胞培養(yǎng)基，然后于5%CO2和37攝氏度的條件下，利用該培養(yǎng)基培養(yǎng)MSCs，培養(yǎng)3天后收獲細胞并進行細胞計數(shù)。TSA處理后的細胞計數(shù)結(jié)果見圖1。如圖1所示，其中*表示P<0.01。圖1的結(jié)果顯示經(jīng)過低濃度（6-50nM）TSA處理后的MSCs數(shù)目增加。由此，表明添加6-50nM的曲古抑菌素A能夠有效促進MSC的增殖，不產(chǎn)生明顯細胞毒性。實施例2根據(jù)實施例1的實驗結(jié)果，選取MSC增殖最好的TSA濃度，進行進一步的長期作用試驗：用含6.25nMTSA的培養(yǎng)液（其他具體成分同實施例1）連續(xù)傳代培養(yǎng)MSCs（從第1代培養(yǎng)至第6代），并利用細胞計數(shù)器進行細胞計數(shù)并計算累積細胞數(shù)量。其中，以含DMSO但無TSA的培養(yǎng)液為空白對照。各代的細胞累計數(shù)量統(tǒng)計結(jié)果見圖2。如圖2所示，其中*表示P<0.01。圖2的結(jié)果顯示，在第6代時含TSA培養(yǎng)液培養(yǎng)的MSCs較空白對照培養(yǎng)的MSCs數(shù)量增加了10倍（*P<0.01）。由此，證明了添加6.25nM的曲古抑菌素A對抑制MSC衰老、維持其干性的效果顯著。在本說明書的描述中，參考術(shù)語“一個實施例”、“一些實施例”、“示例”、“具體示例”、或“一些示例”等的描述意指結(jié)合該實施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點包含于本發(fā)明的至少一個實施例或示例中。在本說明書中，對上述術(shù)語的示意性表述不一定指的是相同的實施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點可以在任何的一個或多個實施例或示例中以合適的方式結(jié)合。盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實施例，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以理解：在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨的情況下可以對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由權(quán)利要求及其等同物限定。