一種黑丑多糖的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種黑丑多糖的提取方法，包括：原料除雜，粉碎過篩，脫脂脫色，熱水提取，離心，濃縮，脫蛋白，干燥，得粗多糖，復(fù)溶，分級醇沉，離心，凍干，得白色黑丑多糖，經(jīng)試驗(yàn)并修正得最佳提取條件為提取溫度85℃、提取時(shí)間4.25h、液料比為51∶1(mL/g)，具有方案工藝簡單，操作便捷，多糖的得率較高，可達(dá)25.5％，經(jīng)過分級醇沉后多糖的純度也很高，有望實(shí)現(xiàn)工業(yè)化的應(yīng)用的優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】一種黑丑多糖的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物多糖提取方法，特別涉及一種黑丑多糖的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]研究證實(shí)植物多糖能夠增強(qiáng)機(jī)體的特異性和非特異性免疫力，直接或間接激活B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞，對腫瘤、高血脂、高血壓、糖尿病等疾病具有治療和抑制作用。目前在國內(nèi)象茶多糖、香菇多糖、黃芪多糖、蘆薈多糖、南瓜多糖等已經(jīng)在臨床或保健市場得到了廣泛的應(yīng)用。
[0003]黑丑是植物牽牛(Pharbitis nil (Linn.)Choisy)成熟干燥的種子,在我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)里常用來治療大小便不利、水腫腹脹等癥。張虹等的《黑丑提取物的體內(nèi)外抗腫瘤活性及其初步機(jī)制》曾報(bào)道黑丑的乙醇提取物具有抗腫瘤的功效。楊廣成等在《牽牛子(黑丑)揮發(fā)油成分研究》中對黑丑中的揮發(fā)油成分進(jìn)行了分析。林文群等在《牽牛子(黑丑)化學(xué)成分的初步研究》中，對黑丑中的脂肪酸成分、氨基酸組成及礦物元素進(jìn)行了研究。然而目前尚未見到有關(guān)黑丑多糖研究的報(bào)道。也未有關(guān)于黑丑多糖提取的相關(guān)方法報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提出一種黑丑多糖的提取方法，方案工藝簡單，操作便捷，多糖的得率較高，可達(dá)25.5%，經(jīng)過分級醇沉后多糖的純度也很高，有望實(shí)現(xiàn)工業(yè)化的應(yīng)用。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為:
[0006]一種黑丑多糖的 提取方法，其步驟為:
[0007]I)、將黑丑經(jīng)過手工除雜，粉碎過篩，粉末依次經(jīng)30_60°C的石油醚、95%乙醇回流處理3h，再經(jīng)80±2°C干燥24h，即得脫脂脫色黑丑粉末，裝棕色玻璃瓶置于干燥器內(nèi)保存?zhèn)溆?
[0008]2)、按照液料比51: l(mL/g)進(jìn)行浸提，水溫維持85±_1°C，提取4小時(shí)15分鐘，離心收回上清液；
[0009]3)、在真空度低于0.1MPa, 50?55°C條件下將上清液濃縮到原體積的1/4?1/3，得濃縮液；加入濃縮液體積20%的氯仿和4%的正丁醇，間歇振蕩15min，離心lOmin，合并上清液測其體積，繼續(xù)加相應(yīng)體積的氯仿和正丁醇，并重復(fù)步驟三直到無沉淀生成；
[0010]4)、上清液經(jīng)噴霧干燥后得灰白色粗多糖。
[0011]所述的粗黑丑多糖經(jīng)復(fù)溶后，緩緩加入無水乙醇，使乙醇濃度達(dá)到30%，靜置6h后，離心得30%醇沉多糖；上清液里繼續(xù)加入乙醇至濃度達(dá)50%，靜置6h后，離心得50%醇沉多糖；再向上清液中加乙醇使?jié)舛冗_(dá)80%，靜置離心后得80%醇沉多糖；分別冷凍干燥后均為白色粉末。
[0012]本發(fā)明的有益效果是提出了一種黑丑多糖的提取方法，方案工藝簡單，操作便捷，多糖的得率較高，可達(dá)25.5%，經(jīng)過分級醇沉后多糖的純度也很高，有望實(shí)現(xiàn)工業(yè)化的應(yīng)用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1為本發(fā)明的流程框圖。
[0014]圖2為原料顆粒度對多糖得率的影響圖。
[0015]圖3為溫度對黑丑多糖得率的影響圖。
[0016]圖4為浸提時(shí)間對多糖得率的影響圖。
[0017]圖5為料液比對多糖得率的影響圖。
[0018]圖6為各因素間交互影響圖:
[0019]a為時(shí)間和溫度對多糖得率的影響圖；
[0020]b為液料比和溫度對多糖得率的影響圖:
[0021]c為液料比和時(shí)間對多糖得率的影響圖。
[0022]圖7為黑丑多糖的紅外吸收光譜圖。
[0023]圖8為黑丑多糖對DPPH自由基的清除效果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0024]下面結(jié)合附圖及具 體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述: [0025]如圖1所示，一種黑丑多糖的提取方法，其步驟為:
[0026]I)、將黑丑經(jīng)過手工除雜，粉碎過篩，粉末依次經(jīng)30_60°C的石油醚、95%乙醇回流處理3h，再經(jīng)80±2°C干燥24h，即得脫脂脫色黑丑粉末，裝棕色玻璃瓶置于干燥器內(nèi)保存?zhèn)溆谩?br> [0027]2)、按照液料比51: l(mL/g)進(jìn)行浸提，水溫維持85±_1°C，提取4小時(shí)15分鐘，離心收回上清液。
[0028]3)、在真空度低于0.1MPa, 50?55°C條件下將上清液濃縮到原體積的1/4?1/3，得濃縮液；加入濃縮液體積20%的氯仿和4%的正丁醇，間歇振蕩15min，離心lOmin，合并上清液測其體積，繼續(xù)加相應(yīng)體積的氯仿和正丁醇，并重復(fù)步驟三直到無沉淀生成。
[0029]4)、上清液經(jīng)噴霧干燥后得灰白色粗多糖。
[0030]所述的粗黑丑多糖經(jīng)復(fù)溶后，緩緩加入無水乙醇，使乙醇濃度達(dá)到30%，靜置6h后，離心得30%醇沉多糖；上清液里繼續(xù)加入乙醇至濃度達(dá)50%，靜置6h后，離心得50%醇沉多糖；再向上清液中加乙醇使?jié)舛冗_(dá)80%，靜置離心后得80%醇沉多糖；分別冷凍干燥后均為白色粉末。
[0031]本發(fā)明的具體實(shí)現(xiàn)原理如下:
[0032]試驗(yàn)例:
[0033]1.1 材料
[0034]黑丑購買自新鄉(xiāng)市健民大藥房，產(chǎn)地產(chǎn)于河南。經(jīng)簡單手工除雜后，粉碎過篩，將黑丑粉末依次經(jīng)石油醚(30-60°C ),95%乙醇回流處理3h，再經(jīng)80 ± 2°C干燥24h，即得脫脂脫色黑丑粉末，裝棕色玻璃瓶置于干燥器內(nèi)保存?zhèn)溆?。DPPH( 二苯基苦基苯肼)、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，sigma公司；石油醚、乙醇、氯仿、正丁醇、濃硫酸、苯酚等均為國產(chǎn)分析純，除苯酚使用前經(jīng)過重新蒸餾外，其他 試劑未進(jìn)行任何處理。實(shí)驗(yàn)中用水均為去離子水。[0035]1.2主要儀器
[0036]UV2550紫外可見分光光度計(jì)，島津(日本)；R_206旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海申生科技有限公司；FA2104電子分析天平，上海躍平儀器有限公司；HH-S.Z恒溫水浴鍋，鄭州長城科工貿(mào)有限公司；FD-1A_80真空冷凍干燥機(jī)，北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。
[0037]1.3 方法
[0038]1.3.1黑丑多糖提取工藝脫脂脫色黑丑粉末一熱水提取一離心一濃縮一脫蛋白一干燥一粗多糖一復(fù)溶一分級醇沉一離心一凍干一白色黑丑多糖
[0039]1.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制稱取0.1002g已干燥至恒重的D-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，用水定容至IOOmL,得lmg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品儲備液。取IOmL儲備液加水定容到IOOmL,得0.lmg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液。分別取 0、0.25,0.50,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,8.0,9.0,10.0mL標(biāo)準(zhǔn)液置IOmL容量瓶中用水定容至刻度，搖勻，分別取1.0mL置刻度試管中，再依次加入5%苯酚溶液1.0mL和濃硫酸5.0mL，振蕩混勻后于室溫下反應(yīng)30min，然后以O(shè)管為參比，于490nm波長下測定吸光度A值，平行測定三次，對平均值進(jìn)行線形回歸，得回歸方程:A =0.09737XC-0.00306 (R = 0.99986 ；SD = 6.15% ；C 的單位為 μ g/mL)
[0040]1.3.3多糖提取率吸取樣品液1.0mL，按上述步驟測定吸光度值，以標(biāo)準(zhǔn)曲線方程
計(jì)算總糖含量。
【權(quán)利要求】
1.一種黑丑多糖的提取方法，包括以下步驟: 步驟一、將黑丑經(jīng)過手工除雜，粉碎過篩，粉末依次經(jīng)30-60°C的石油醚、95%乙醇回流處理3h，再經(jīng)80±2°C干燥24h，即得脫脂脫色黑丑粉末，裝棕色玻璃瓶置于干燥器內(nèi)保存?zhèn)溆? 步驟二、按照液料比51: l(mL/g)進(jìn)行浸提，水溫維持85±1°C，提取4小時(shí)15分鐘，離心收回上清液； 步驟三、在真空度低于0.1MPa, 50?55°C條件下將上清液濃縮到原體積的1/4?1/3，得濃縮液；加入濃縮液體積20%的氯仿和4%的正丁醇，間歇振蕩15min，離心lOmin，合并上清液測其體積，繼續(xù)加相應(yīng)體積的氯仿和正丁醇，并重復(fù)步驟三直到無沉淀生成； 步驟四、上清液經(jīng)噴霧干燥后得灰白色粗多糖。
2.如權(quán)利要求1所述的一種黑丑多糖的提取方法，其特征在于所述的粗黑丑多糖經(jīng)復(fù)溶后，緩緩加入無水乙醇，使乙醇濃度達(dá)到30%，靜置6h后，離心得30%醇沉多糖；上清液里繼續(xù)加入乙醇 至濃度達(dá)50%，靜置6h后，離心得50%醇沉多糖；再向上清液中加乙醇使?jié)舛冗_(dá)80%，靜置離心后得80%醇沉多糖；分別冷凍干燥后均為白色粉末。
【文檔編號】C08B37/00GK103435711SQ201310301338
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年7月17日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月17日
【發(fā)明者】耿明江, 范秉琳, 楊潔, 李琴, 王秀菊, 張志娟, 席榮英 申請人:新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院