一種無花果粗多糖的制備及純化方法與用途
【專利摘要】本發(fā)明是一種無花果粗多糖的制備方法，其步驟如下：取無花果干若干剪碎，用95%乙醇回流去脂及色素，抽濾后殘?jiān)?0%乙醇回流去小分子雜質(zhì)；然后取殘?jiān)鳛闊o花果多糖的提取原料；取殘?jiān)?，用水作為溶劑在微波條件下提取后，抽濾，取濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至100Ml，加95%乙醇后靜置24h，離心后取沉淀，沉淀用Sevage法除去蛋白后，冷凍干燥，即得無花果粗多糖；提取時(shí)，殘?jiān)退牧弦罕?：20-23；微波功率為550W，提取時(shí)間為13min，醇沉用乙醇量為提取液體積的3.50-3.60倍。本發(fā)明還公開了無花果粗多糖的純化方法及用途。
【專利說明】一種無花果粗多糖的制備及純化方法與用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種多糖的制備方法，特別是一種無花果粗多糖的制備方法；本發(fā)明還涉及前述方法制得的無花果粗多糖的純化方法；本發(fā)明還涉及無花果粗多糖或者無花果多糖純品在制備α-葡萄糖苷酶抑制劑中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]無花果Ficus carica.L隸屬?？崎艑?，可食用部分是它的干燥花托，不僅味道甜美，還具有廣泛的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值。據(jù)報(bào)道，無花果可用于健胃清腸、消腫解毒，并可抑制腫瘤、提高機(jī)體免疫力。無花果富含多糖，多糖具有多種生理活性，如抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗氧化、抑制α-葡萄糖苷酶等。關(guān)于抗腫瘤等生物活性均可從文獻(xiàn)中找到實(shí)驗(yàn)依據(jù)，但其抑制葡萄糖苷酶的作用卻沒有人研究，α -葡萄糖苷酶能催化α -1, 4-糖苷鍵水解，是小腸內(nèi)麥芽糖、蔗糖等寡糖水解的酶，抑制α-葡萄糖苷酶的活性，可使葡萄糖的生成及吸收減緩，降低餐后血糖峰值。故α-葡萄糖苷酶抑制劑是一類新型的二型糖尿病用藥，可用于餐后血糖調(diào)節(jié)，保持患者的餐后血糖平穩(wěn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種方法簡單合理、操作方便、得率高的無花果粗多糖的制備方法。
[0004]本發(fā)明所要解決的 另一技術(shù)問題是提供了上述方法制備的無花果粗多糖的純化方法。
[0005]本發(fā)明所述方法制得的無花果粗多糖或者所述的純化方法純化得到的無花果多糖純品可以用于制備α-葡萄糖苷酶抑制劑。
[0006]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是一種無花果粗多糖的制備方法，其特點(diǎn)是，其步驟如下:取無花果干若干剪碎，用95%乙醇回流去脂及色素，抽濾后殘?jiān)?0%乙醇回流去小分子雜質(zhì)；然后取殘?jiān)鳛闊o花果多糖的提取原料；取殘?jiān)?，用水作為溶劑在微波條件下提取后，抽濾，取濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至100Μ1，加95%乙醇后靜置24h,離心后取沉淀,沉淀用Sevage法除去蛋白后,冷凍干燥，即得無花果粗多糖；提取時(shí)，殘?jiān)退牧弦罕?:20-23 ;微波功率為550W，提取時(shí)間為13min，醇沉用乙醇量為提取液體積的3.50-3.60倍。
[0007]本發(fā)明所述的無花果粗多糖的制備方法中，最優(yōu)選的技術(shù)特征是:提取時(shí)，殘?jiān)退牧弦罕?:22.45 ;醇沉用乙醇量為提取液體積的3.55倍。
[0008]本發(fā)明還公開了一種如以上技術(shù)方案所述方法制得的無花果粗多糖的純化方法，其特點(diǎn)是，其步驟如下:
(I)離子交換纖維素DEAE-52經(jīng)蒸餾水充分溶脹后，用0.5 M的NaOH和0.5 M的HCl交替處理數(shù)次后再用蒸餾水反復(fù)洗滌，直至其PH至6進(jìn)行裝柱，采用2.0cm X 30 cm常壓砂芯玻璃柱，裝好的離子柱再用蒸餾水進(jìn)行平衡24小時(shí)待用；(2)取無花果粗多糖以蒸餾水配制成質(zhì)量濃度為1%的溶液；然后將無花果多糖溶液上已經(jīng)平衡好的DEAE-52離子交換柱，上樣體積為5 mL，用O-1M NaCl 200 mL以50 mL/h的流速過柱，用自動(dòng)部分收集器以每管5mL的量進(jìn)行收集，以苯酚一硫酸比色法測定每管的總糖濃度作洗脫曲線，根據(jù)洗脫曲線收集相同組份，于40°C減壓濃縮并冷凍干燥得到無花果多糖；
(3)Sephacryl S-300HR經(jīng)蒸餾水輕柔洗滌數(shù)次、減壓脫氣后裝柱，采用1.6 cm X 80cm柱，以蒸餾水平衡；將步驟(2)得到的無花果多糖溶于去離子水，配制濃度為15mg/mL的多糖溶液，上已經(jīng)平衡好的Sephacryl S-300HR分子篩柱，上樣量為2mL，用去離子水以6mL/h的流速進(jìn)行洗脫；用分部收集器進(jìn)行收集，用苯酚一硫酸比色法測每管的總糖濃度，再根據(jù)洗脫曲線合并相同組份，去鹽透析后，40°C減壓濃縮后冷凍干燥；如上操作反復(fù)進(jìn)行純化若干次冷凍干燥得到無花果多糖純品。
[0009]以下對(duì)本發(fā)明方法進(jìn)行更為詳細(xì)的描述。
[0010]1.1材料與試劑
無花果干果購于連云港市海連路市場；α-葡萄糖苷酶(批號(hào):EC3.2.1.20);4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG，批號(hào):026K1516);阿卡波糖(批號(hào):lot 16869);以上均購自Sigma公司；4_硝基苯酚(PNP，上海晶純?cè)噭┯邢薰?；硫酸、葡萄糖、苯酚、乙醇等均為國產(chǎn)分析純。
[0011]2 方法
2.1無花果粗多糖(CFCP)的制備及含量測定
2.1.1標(biāo)準(zhǔn)曲線
采用苯酚-硫酸法以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，在490nm比色測定多糖提取液的吸光度，以吸光度(A)與溶液多糖質(zhì)量濃度(c)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為:A=14.568c-0.0082,r=0.9972。結(jié)果表明，葡萄糖在7.5-52.5 μ g/mL與吸光度線性關(guān)系良好。
[0012]2.1.2 CFCP 提取
由于經(jīng)典的水提取方法耗時(shí)，得率低等缺陷，在無花果多糖粗提過程中，采用微波法提取，為得到最大的多糖得率，采用了響應(yīng)面法進(jìn)行提取各因素的優(yōu)化。采用了對(duì)無花果多糖得率影響較大的四個(gè)因素，即微波功率、微波時(shí)間、料液比和醇沉?xí)r加醇的體積倍數(shù)。
[0013]提取前預(yù)處理:取無花果干若干剪碎，用95%乙醇回流去脂及色素，抽濾后殘?jiān)?0%乙醇回流去小分子雜質(zhì)，然后取殘?jiān)?，作為無花果多糖的提取原料。取殘?jiān)盟鳛槿軇┰谖⒉l件下提取后，抽濾，取濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至IOOmL左右，加若干倍體積95%乙醇后靜置24h，離心后取沉淀，沉淀用Sevage法除去蛋白后，冷凍干燥，即得無花果粗多糖CFCP。并配制成一定濃度的CFCP溶液，待用。
[0014]表I無花果多糖提取響應(yīng)面分析因素與水平
【權(quán)利要求】
1.一種無花果粗多糖的制備方法，其特征在于，其步驟如下:取無花果干若干剪碎，用95%乙醇回流去脂及色素，抽濾后殘?jiān)?0%乙醇回流去小分子雜質(zhì)；然后取殘?jiān)?，作為無花果多糖的提取原料；取殘?jiān)?，用水作為溶劑在微波條件下提取后，抽濾，取濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至IOOMIJp 95%乙醇后靜置24h，離心后取沉淀，沉淀用Sevage法除去蛋白后，冷凍干燥，即得無花果粗多糖；提取時(shí)，殘?jiān)退牧弦罕?:20-23 ;微波功率為550W，提取時(shí)間為13min，醇沉用乙醇量為提取液體積的3.50-3.60倍。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無花果粗多糖的制備方法，其特征在于:提取時(shí)，殘?jiān)退牧弦罕?:22.45 ;醇沉用乙醇量為提取液體積的3.55倍。
3.—種如權(quán)利要求1或2所述方法制得的無花果粗多糖的純化方法，其特征在于，其步驟如下: (1)離子交換纖維素DEAE-52經(jīng)蒸餾水充分溶脹后，用0.5 M的NaOH和0.5 M的HCl交替處理數(shù)次后再用蒸餾水反復(fù)洗滌，直至其PH至6進(jìn)行裝柱，采用2.0cm X 30 cm常壓砂芯玻璃柱，裝好的離子柱再用蒸餾水進(jìn)行平衡24小時(shí)待用； (2)取無花果粗多糖以蒸餾水配制成質(zhì)量濃度為1%的溶液；然后將無花果多糖溶液上已經(jīng)平衡好的DEAE-52離子交換柱，上樣體積為5 mL，用0_1M NaCl 200 mL以50 mL/h的流速過柱，用自動(dòng)部分收集器以每管5mL的量進(jìn)行收集，以苯酚一硫酸比色法測定每管的總糖濃度作洗脫曲線，根據(jù)洗脫曲線收集相同組份，于40°C減壓濃縮并冷凍干燥得到無花果多糖； (3)Sephacryl S-300HR經(jīng)蒸餾水輕柔洗滌數(shù)次、減壓脫氣后裝柱，采用1.6 cm X 80cm柱，以蒸餾水平衡；將步驟(2)得到的無花果多糖溶于去離子水，配制濃度為15mg/mL的多糖溶液，上已經(jīng)平衡好的Shacryl S-300HR分子篩柱，上樣量為2mL，用去離子水以6mL/h的流速進(jìn)行洗脫；用分部收集器進(jìn)行收集，用苯酚一硫酸比色法測每管的總糖濃度，再根據(jù)洗脫曲線合并相同組份，去鹽透析后，40°C減壓濃縮后冷凍干燥；如上操作反復(fù)進(jìn)行純化若干次冷凍干燥得到無花果多糖純品。
4.一種如權(quán)利要求1或2所述方法制得的無花果粗多糖或者如權(quán)利要求3所述的純化方法純化得到的無花果多糖純品 在制備α-葡萄糖苷酶抑制劑中的用途。
【文檔編號(hào)】C08B37/00GK103435714SQ201310408513
【公開日】2013年12月11日 申請(qǐng)日期:2013年9月10日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月10日
【發(fā)明者】李盈蕾, 陳建華, 孫吉佑, 詹永成, 宋曉凱 申請(qǐng)人:淮海工學(xué)院