一種親和沉淀介質(zhì)的合成方法及其制備依諾肝素鈉的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種親和沉淀介質(zhì)的合成方法及其制備依諾肝素鈉的應(yīng)用，在經(jīng)親和沉淀介質(zhì)純化的肝素鈉溶液中用芐索氯銨鹽鹽化肝素，肝素芐索氯銨鹽酯化生成肝素芐基酯，在堿性條件下對(duì)肝素芐基酯進(jìn)行解聚，經(jīng)乙醇沉淀后得到依諾肝素鈉粗品，雙氧水簡(jiǎn)單的氧化脫色后即得依諾肝素鈉精品。本發(fā)明以肝素鈉粗品為原料并采用親和沉淀介質(zhì)純化，有效的去除與肝素結(jié)合或非結(jié)合的雜質(zhì)，并保證了肝素天然結(jié)構(gòu)的完整性，增加了肝素的活性收率，為后續(xù)依諾肝素鈉的制備工藝的穩(wěn)定性和可控性提供依據(jù)。本發(fā)明降低了生產(chǎn)成本，提高了生產(chǎn)效率，更適于工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】一種親和沉淀介質(zhì)的合成方法及其制備依諾肝素鈉的應(yīng)用【技術(shù)領(lǐng)域】[0001]本發(fā)明涉及依諾肝素鈉的制備方法，更具體的說，本發(fā)明涉及一種親和沉淀介質(zhì)的制備及其在依諾肝素鈉制備中的應(yīng)用。【背景技術(shù)】 [0002]肝素(Heparin)是一種廣泛存在于人和哺乳動(dòng)物組織中的具有天然抗凝血活性酸性黏多糖。肝素作為抗凝血藥物已經(jīng)在臨床上使用了近百年，到目前為止仍是最重要的抗凝血和抗血栓藥物之一，是防治深層靜脈血栓形成等栓塞性疾病的首選藥物。此外，肝素還具有抗病毒、抗炎、抗過敏、抗癌、降血脂等多種生物學(xué)功能。肝素在長(zhǎng)期使用的過程中，產(chǎn)生了不可預(yù)見的副作用，易導(dǎo)致出血、血小板減少、骨質(zhì)疏松等副作用。為了減少肝素的副作用，二十世紀(jì)八十年代末研發(fā)了低分子肝素。[0003]依諾肝素鈉(Enoxaparin sodium)是低分子肝素的一種，歐洲藥典(EP) 7.0版對(duì)依諾肝素鈉定義為:它是通過對(duì)豬腸黏膜肝素的芐基酯衍生物進(jìn)行堿解聚而獲得的。EP7.0 規(guī)定依諾肝素鈉的重均分子量為3800-5000道爾頓，特征值約為4500，分子量大于8000的組分不超過18%、分子量2000~8000的組分為68%~82%、分子量小于2000的組分為12%~ 20%。按干燥品計(jì)算，抗X a因子效價(jià)為95-120IU/mg，抗II a因子效價(jià)為20~35IU/mg。抗 X a因子效價(jià)與抗II a因子效價(jià)的比值為3.3~5.3。[0004]依諾肝素鈉主要用于抗血栓、抗凝血、預(yù)防深靜脈血栓及肺栓塞、治療不穩(wěn)定心絞痛和非Q波心梗等。其主要的作用機(jī)制是通過與抗凝血酶III結(jié)合，經(jīng)依諾肝素鈉結(jié)合的抗凝血酶III結(jié)合凝血酶和FXa的能力增強(qiáng)，因依諾肝素鈉分子鏈較短，對(duì)凝血酶的抑制作用較弱，而對(duì)抗F X a的作用較強(qiáng)，能抑制凝血酶的激活，還能抑制血小板聚集，減少暫時(shí)性血小板凝塊轉(zhuǎn)變成永久性血小板血纖維蛋白凝塊的發(fā)生機(jī)率，改變血液的流動(dòng)性，降低血液黏度，維持血液正常的流動(dòng)。與其他低分子量肝素相比，依諾肝素鈉具有皮下注射吸收好、 半衰期長(zhǎng)、生物利用度高、副反應(yīng)少，劑量易于確定，不需要實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)等諸多優(yōu)點(diǎn)，頗受臨床醫(yī)生和廣大患者的青睞，臨床應(yīng)用的適應(yīng)癥不斷擴(kuò)大。目前其全球市場(chǎng)占有率達(dá)低分子肝素的60%以上。[0005]目前世界上生產(chǎn)依諾肝素鈉的工藝為肝素芐基酯的堿裂解法。美國(guó)專利 US005389618A公布了依諾肝素鈉的基本制備過程:肝素季銨鹽的制備，肝素芐基酯的制備，對(duì)肝素芐基酯進(jìn)行堿解聚等工藝步驟。CN102050888B公開了一種依諾肝素鈉的制備方法，其采用親水液相反應(yīng)和疏水液相反應(yīng)以及固相反應(yīng)，將大分子肝素鈉降解為具有特定結(jié)構(gòu)的低分子肝素鈉。CN100436483C公開了一種依諾肝素鈉的純化方法，其在水媒介中用長(zhǎng)鏈季銨鹽鹽化肝素，經(jīng)氯芐酯化后在堿性條件下解聚得到依諾肝素粗品，經(jīng)活性炭和大孔吸附樹脂脫色后得到依諾肝素成品。[0006]然而，其一，上述專利公開的制備工藝中有機(jī)溶劑使用量大，對(duì)環(huán)境有嚴(yán)重的危害；其二，上述專利中幾乎沒有提及對(duì)原料中肝素鈉的結(jié)構(gòu)類似物硫酸皮膚素和多硫酸軟骨素等雜質(zhì)的去除方法，肝素中雜質(zhì)的存在會(huì)對(duì)后續(xù)的肝素的解聚順序等制備過程及依諾肝素鈉精品的分子量分布產(chǎn)生直接的影響。
[0007]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的是為了改進(jìn)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種降低生產(chǎn)成本，提高產(chǎn)品質(zhì)量，エ藝穩(wěn)定可控的依諾肝素鈉制備方法。
[0009]本發(fā)明的目的是這樣來實(shí)現(xiàn)的，其方法步驟為:
(I)親和沉淀介質(zhì)的合成
本親和沉淀介質(zhì)以甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯組成的PH敏感型聚合物為基質(zhì)[其中基質(zhì)優(yōu)選Eudragit S-100 (簡(jiǎn)稱ES-100)或聚丙烯酸樹脂III號(hào)],以凝血酶、抗凝血酶III或魚精蛋白為配基；
具體操作步驟為:稱取一定量的基質(zhì)，加入適量N，N-二甲基甲酰胺攪拌使其溶解，將ES-100溶液加入反應(yīng)器中，底部通氮?dú)鈹嚢?，然后加入N，N- 二異丙基碳二亞胺、1-羥基苯并三唑使ES-100活化3~5分鐘；活化完成后加入配基偶聯(lián)反應(yīng)2.5~3.0小時(shí)；偶聯(lián)反應(yīng)完成后，用8mol/L醋酸調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH值至3.5~4.5，反應(yīng)產(chǎn)物完全析出后抽掉反應(yīng)液，沉淀用0.lmol/L, pH4.0醋酸-醋酸鈉緩沖液洗漆3次,抽去緩沖液即得親和沉淀介質(zhì)。
`[0010](2)親和沉淀介質(zhì)純化肝素鈉粗品
將肝素鈉粗品加入純化水溶解成濃度為5%~10%的肝素鈉粗品溶液,用4~8mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液PH值至7~8.5。取肝素鈉粗品溶液等體積的親和沉淀介質(zhì)，用4~8mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至7.6~8.4,加入與親和沉淀介質(zhì)等體積的50~150mmol/L磷酸鹽緩沖液，攪拌均勻；將肝素鈉粗品溶液緩緩加入到親和沉淀介質(zhì)溶液中，攪拌吸附1.5~3小時(shí)；吸附結(jié)束后調(diào)節(jié)溶液的pH值至4.5~6，使沉淀均勻析出，沉淀用親和沉淀介質(zhì)0.8~1.5倍體積的pH4.5~5.5，0.lmol/L醋酸-醋酸鈉緩沖液攪拌洗滌0.5~I小吋，離心分離沉淀。沉淀用親和沉淀介質(zhì)2~4倍體積的pH7.8，0.lmol/L醋酸-醋酸鈉緩沖液(含1.2~1.8mol/L氯化鈉)攪拌洗脫2~3.5小吋，洗脫液超濾濃縮至肝素鈉濃度為10%~15%，得超濾濃縮液；
(3)鹽化
取肝素鈉粗品I~1.5重量倍的芐索氯銨，使之完全溶解于3~4重量倍的純化水中，在攪拌的同時(shí)將芐索氯銨溶液緩緩加入到肝素鈉超濾濃縮液中，再繼續(xù)攪拌45~75分鐘靜置，真空抽濾收集復(fù)合鹽沉淀，用純化水洗滌復(fù)合鹽沉淀2次，在55~65°C減壓干燥30~36小時(shí)，得充分干燥的肝素芐索氯銨鹽；
(4)酯化
取肝素芐索氯銨鹽溶解在4~7重量倍的N，N- 二甲基甲酰胺中，加入肝素芐索氯銨鹽
0.6~1.2重量倍的氯化芐，在30~35°C酷化20~25小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，加入總反應(yīng)體積2倍量的飽和醋酸鈉こ醇溶液，邊加邊攪拌，見有明顯沉淀物后停止攪拌，靜置6小時(shí)后離心，真空抽濾，沉淀用無水こ醇洗滌2次，在55~65°C減壓干燥30~36小時(shí)，得肝素芐基酷。
[0011](5)堿解
取肝素芐基酯用純化水溶解成濃度為5%~7.5%的溶液，加入肝素芐基酯0.05~0.15重量倍的固體氫氧化鈉，在55~65°C的恒溫水浴中，攪拌反應(yīng)60~100分鐘。然后加入 4mol/L鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH值至6.5~7.5，真空抽濾收集濾出液，加入濾出液體積2~4倍量的乙醇沉淀，沉淀靜置10~12小時(shí)，真空抽濾收集沉淀，沉淀于55~65°C減壓干燥30~ 36小時(shí)，得依諾肝素鈉粗品。[0012](6)脫色取依諾肝素鈉粗品溶解在5~12重量倍的純化水中，調(diào)節(jié)溶液pH值至8.5~10.5， 加入溶液體積0.5%~2%的雙氧水，在25~30°C條件下氧化8~10小時(shí)，調(diào)節(jié)溶液pH值至6.5~7.5，加入溶液體積1%~2%的氯化鈉使之完全溶解，加入2~3倍量的乙醇沉淀 10~12小時(shí)，收集沉淀用無水乙醇洗滌2次，烘干得依諾肝素鈉精品。[0013](7)凍干取依諾肝素鈉精品加入4-6倍量的純化水溶解，溶解液除菌過濾后冷凍干燥24小時(shí)得依諾肝素鈉成品。[0014]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明提高了產(chǎn)品的質(zhì)量，降低了生產(chǎn)成本，有效的控制了硫酸皮膚素等雜質(zhì)的含量，并且產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定可控，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。【具體實(shí)施方式】[0015]以下具體實(shí)例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明:實(shí)施例1:1.親和沉淀介質(zhì)的合成:稱取ES-100 1350g用2.7LN，N-二甲基甲酰胺攪拌使其溶解，將溶解后的ES-100溶液加入反應(yīng)器中，底部通氮?dú)鈹嚢?，然后加入N，N- 二異丙基碳二亞胺3.78g，1-羥基苯并三唑4.05g使ES-100活化3分鐘，活化完成后加入魚精蛋白100g偶聯(lián)反應(yīng)2.5小時(shí)。偶聯(lián)反應(yīng)完成后，用8mol/L醋酸調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH值至3.5，反應(yīng)產(chǎn)物完全析出后抽掉反應(yīng)液，沉淀用0.lmol/L, pH4.0醋酸-醋酸鈉緩沖液洗滌3次，抽去緩沖液即得親和沉淀介質(zhì)。[0016]2.親和沉淀介質(zhì)純化肝素鈉粗品:取120g肝素鈉粗品，溶解在2400mL純化水中，用4mol/L的氫氧化鈉調(diào)pH至7 ;取親和沉淀介質(zhì)2400mL,用4mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至7.6,加入50mmol/L的磷酸鹽緩沖液 2400mL,攪拌均勻；將肝素鈉粗品溶液緩緩加入到親和沉淀介質(zhì)溶液中，攪拌吸附1.5小時(shí)；吸附結(jié)束后調(diào)節(jié)溶液的PH值至4.5，使沉淀均勻析出，沉淀用pH4.5,0.lmol/L醋酸-醋酸鈉的緩沖液1920mL攪拌洗滌0.5小時(shí)，離心分離沉淀，沉淀用pH7.8，0.lmol/L醋酸-醋酸鈉緩沖液(含1.2 mo I/L氯化鈉)4800mL攪拌洗脫2小時(shí)，洗脫液超濾濃縮至1200mL，得超濾濃縮液；3.消除降解工藝制備依諾肝素鈉(I)取120g的芐索氯銨，溶解于360g的純化水中，在攪拌的同時(shí)將芐索氯銨溶液緩緩加入到肝素鈉的超濾濃縮液中， 再繼續(xù)攪拌45分鐘靜置，真空抽濾收集復(fù)合鹽沉淀，用純化水洗滌復(fù)合鹽沉淀2次，55°C減壓干燥30小時(shí)，得充分干燥的肝素芐索氯銨鹽。[0017](2)取肝素芐索氯銨鹽溶解在4重量倍的N，N- 二甲基甲酰胺中，加入肝素芐索氯銨鹽0.6重量倍的氯化芐，在30°C酯化20小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，加入總反應(yīng)體積2倍量的飽和醋酸鈉こ醇溶液,邊加邊攪拌,見有明顯沉淀物后停止攪拌,靜置6小時(shí)后離心，真空抽濾，沉淀用無水こ醇洗滌2次，55°C減壓干燥30小時(shí)，得肝素芐基酷。
[0018](3)取肝素芐基酯用純化水溶解成濃度為5%的水溶液，加入肝素芐基酯0.05重量倍的固體氫氧化鈉，在55°C的恒溫水浴中，攪拌反應(yīng)60分鐘。然后加入4mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)溶液的PH值至6.5，真空抽濾收集濾出液，加入濾液體積2倍量的こ醇沉淀，沉淀靜置10小時(shí)，真空抽濾收集沉淀，沉淀于55°C減壓干燥30小時(shí)，得依諾肝素鈉粗品。
[0019](4)取依諾肝素鈉粗品溶解于5重量倍的純化水中，調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.5，加入溶液體積0.5%的雙氧水，在25°C條件下氧化8小吋，調(diào)節(jié)溶液的pH值為6.5，加入溶液體積的1%的氯化鈉使之完全溶解，加入2倍量的こ醇沉淀10小吋，收集沉淀用無水こ醇洗滌2次，烘干得依諾肝素鈉精品。
[0020](5)取依諾肝素鈉精品加入4倍量的純化水溶解，溶解液除菌過濾后冷凍干燥24小時(shí)得依諾肝素鈉成品。
[0021]實(shí)施例2:
1.親和沉淀介質(zhì)的合成:
稱取聚丙烯酸樹脂III號(hào)1350g用13.5LN，N-二甲基甲酰胺攪拌使其溶解，將溶解后的聚丙烯酸樹脂III號(hào)溶液加入反應(yīng)器中，底部通氮?dú)鈹嚢?，然后加入N，N- 二異丙基碳二亞胺7.56g，1-羥基苯并三唑8.1g使ES-100活化5分鐘，活化完成后加入凝血酶200g偶聯(lián)反應(yīng)3.0小吋。偶聯(lián)反應(yīng)完成后，用8mol/L醋酸調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH值至4.5，反應(yīng)產(chǎn)物完全析出后抽掉反應(yīng)液，沉淀用0.lmol/L, pH4.0醋酸-醋酸鈉緩沖液洗滌3次，抽去緩沖液即得親和沉淀介質(zhì)。
[0022]2.親和沉淀介質(zhì)純化肝素鈉粗品:
取120g肝素鈉粗品，溶解在1200mL純化水中，用8mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至8.5 ；取親和沉淀介質(zhì)1200mL,用8mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至8.4,加入150mmol/L的磷酸鹽緩沖液1200mL，攪拌均勻；將肝素鈉粗品溶液緩緩加入到親和沉淀介質(zhì)溶液中，攪拌吸附3小時(shí)；吸附結(jié)束后調(diào)節(jié)溶液的PH值至6，使沉淀均勻析出，沉淀用pH5.5,0.lmol/L醋酸-醋酸鈉的緩沖液1800mL攪拌洗滌I小時(shí)，離心分離沉淀，沉淀用pH7.8，0.lmol/L醋酸-醋酸鈉緩沖液(含1.8 mo I/L氯化鈉)4800mL攪拌洗脫3.5小吋，洗脫液超濾濃縮至800mL，得超濾濃縮液；
3.消除降解エ藝制備依諾肝素鈉
(I)取180g的芐索氯銨，溶解于720g的純化水中，在攪拌的同時(shí)將芐索氯銨溶液緩緩加入到肝素鈉的超濾濃縮液中，再繼續(xù)攪拌75分鐘靜置，真空抽濾收集復(fù)合鹽沉淀，用純化水洗滌復(fù)合鹽沉淀2次，65°C減壓干燥36小時(shí)，得充分干燥的肝素芐索氯銨鹽。
[0023](2)取肝素芐索氯銨鹽溶解在7重量倍的N，N- 二甲基甲酰胺中，加入肝素芐索氯銨鹽1.2重量倍的氯化芐，在35°C酷化25小吋，反應(yīng)結(jié)束后，加入總反應(yīng)體積2倍量的飽和醋酸鈉こ醇溶液,邊加邊攪拌,見有明顯沉淀物后停止攪拌,靜置6小時(shí)后離心，真空抽濾，沉淀用無水こ醇洗滌2次，65°C減壓干燥36小時(shí)，得肝素芐基酷。
[0024](3)取肝素芐基酯用純化水溶解成濃度為7.5%的水溶液，加入肝素芐基酯0.15重量倍的固體氫氧化鈉，在65°C的恒溫水浴中，攪拌反應(yīng)100分鐘。然后加入4mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)溶液的PH值至7.5，真空抽濾收集濾出液，加入濾液體積4倍量的こ醇沉淀，沉淀靜置12小時(shí)，真空抽濾收集沉淀，沉淀于65°C減壓干燥36小時(shí)，得依諾肝素鈉粗品。[0025](4)取依諾肝素鈉粗品溶解于12重量倍的純化水中，調(diào)節(jié)溶液pH值至10.5，加入溶液體積2%的雙氧水，在30°C條件下氧化10小時(shí)，調(diào)節(jié)溶液pH值至7.5，加入溶液體積2% 的氯化鈉使之完全溶解,加入3倍量的乙醇沉淀12小時(shí)，收集沉淀用無水乙醇洗滌2次，烘干得依諾肝素鈉精品。[0026](5)取依諾肝素鈉精品加入6倍量的純化水溶解，溶解液除菌過濾后冷凍干燥24 小時(shí)得依諾肝素鈉成品。[0027]實(shí)施例3:本實(shí)施例與實(shí)施例1不同之處是肝素鈉粗品為2kg，親和沉淀介質(zhì)的用量為40L，芐索氯銨2kg。[0028]實(shí)施例4:本實(shí)施例與實(shí)施例2不同之處是肝素鈉粗品為2kg，親和沉淀介質(zhì)的用量為20L，索氯銨3kg。
【權(quán)利要求】
1.ー種親和沉淀介質(zhì)的合成方法，其特征是包括下述步驟: a、活化:以甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯組成的pH敏感型聚合物為基質(zhì)，將基質(zhì)溶于適量的N，N-二甲基甲酰胺，然后加入N，N-二異丙基碳二亞胺、1-羥基苯并三唑使基質(zhì)活化3~5分鐘； b、偶聯(lián):活化完成后加入凝血酶、抗凝血酶III或魚精蛋白中的一種作為配基偶聯(lián)反應(yīng)2.5~3.0小時(shí)；反應(yīng)完成后加8mol/L醋酸調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH值至3.5~4.5，反應(yīng)產(chǎn)物完全析出，抽掉反應(yīng)液用0.lmol/L, pH4.0的醋酸-醋酸鈉緩沖液洗滌沉淀3次，抽去緩沖液即得親和沉淀介質(zhì)； C、以上各步反應(yīng)所用的試劑用量比例為:1350g基質(zhì)，100~200g配基，3.78~7.56gN，N- 二異丙基碳二亞胺，4.05~8.1gl-羥基苯并三唑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種親和沉淀介質(zhì)的合成方法，其特征在于所述pH敏感型聚合物為Eudragit S-100或聚丙烯酸樹脂III號(hào)。
3.—種如權(quán)利要求1所述的ー種親和沉淀介質(zhì)的合成方法在制備依諾肝素鈉的應(yīng)用，其特征在于: (1)用權(quán)利要求1所述的ー種親和沉淀介質(zhì)的合成方法合成的親和沉淀介質(zhì)純化肝素納粗品； (2)將親和沉淀介質(zhì)純化后的肝素鈉溶液直接制備成肝素季銨鹽，然后用3-消除降解法制備依諾肝素鈉。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的ー種親和沉淀介質(zhì)的合成方法在制備依諾肝素鈉的應(yīng)用，其特征在于步驟(1)所述純化方法為:將肝素鈉粗品加入純化水溶解成濃度為5%~10%的肝素鈉粗品溶液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液的pH值至7~8.5 ;取肝素鈉粗品溶液等體積的親和沉淀介質(zhì)，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.6~8.4,加入與親和沉淀介質(zhì)等體積的50~150mmol/L磷酸鹽緩沖液，攪拌均勻；將肝素鈉粗品溶液緩緩加入到親和沉淀介質(zhì)溶液中，攪拌吸附1.5~3小時(shí)；吸附結(jié)束后調(diào)節(jié)溶液的pH值至4.5~6，使沉淀均勻析出，沉淀用親和沉淀介質(zhì)0.8~1.5倍體積的pH4.5~5.5,0.lmol/L醋酸-醋酸鈉緩沖液攪拌洗滌0.5~I小吋，離心分離沉淀；沉淀用親和沉淀介質(zhì)2~4倍體積的pH7.8，0.lmol/L醋酸-醋酸鈉緩沖液攪拌洗脫2~3.5小時(shí)，洗脫液超濾濃縮至肝素鈉濃度為10%~15%，得到超濾濃縮液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的ー種親和沉淀介質(zhì)的合成方法在制備依諾肝素鈉的應(yīng)用，其特征在于所述肝素季銨鹽按下述方法制備: 取肝素鈉粗品I~1.5重量倍的芐索氯銨，使之完全溶解于3~4重量倍的純化水中，在攪拌的同時(shí)將芐索氯銨溶液緩緩加入到肝素鈉超濾濃縮液中，再繼續(xù)攪拌45~75分鐘靜置，真空抽濾收集復(fù)合鹽沉淀，用純化水洗滌2次后在55~65°C減壓干燥30~36小吋，得到充分干燥的肝素芐索氯銨鹽。
【文檔編號(hào)】C08B37/10GK103554305SQ201310477846
【公開日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2013年10月14日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月14日
【發(fā)明者】楊華英, 萬偲, 張素芳, 楊麗琴, 高鐵旦, 魏超娟 申請(qǐng)人:南昌市浩然生物醫(yī)藥有限公司