本發(fā)明涉及生產(chǎn)腐胺的能力提高的重組微生物，以及利用所述微生物生產(chǎn)腐胺的方法。

背景技術(shù)：
腐胺(或1,4-丁二胺)是如亞精胺和精胺等的一類聚胺，存在于革蘭氏陰性細(xì)菌和真菌中。由于在各種物種中腐胺存在的濃度范圍很大，因此估計(jì)其在微生物代謝中起著重要作用。腐胺通常采用化學(xué)合成的方法，通過(guò)源于丙烯的琥珀腈和丙烯腈生產(chǎn)。所述化學(xué)合成采用衍生自石油化學(xué)品的物質(zhì)作為起始原料，還利用有毒的化學(xué)物質(zhì)，因此，該方法不是環(huán)境友好的而且具有石油消耗的問(wèn)題。為了解決這些問(wèn)題，很多研究試圖開(kāi)發(fā)利用微生物來(lái)生物合成腐胺的方法，這種方法對(duì)環(huán)境更友好并減少能源消耗。根據(jù)現(xiàn)有的知識(shí)，可通過(guò)兩種微生物途徑生物合成腐胺。一種途徑是，谷氨酸鹽產(chǎn)生鳥(niǎo)氨酸，而鳥(niǎo)氨酸脫羧基合成腐胺。另一種途徑是，鳥(niǎo)氨酸合成精氨酸，通過(guò)精氨酸產(chǎn)生胍丁胺，然后再?gòu)碾叶“泛铣筛?。此外，其他合成腐胺的方法利用轉(zhuǎn)化有參與已知腐胺合成途徑的酶的目標(biāo)微生物。例如，WO09/125924公開(kāi)了高收率生產(chǎn)腐胺的方法，該方法使大腸桿菌(E.coli)中參與腐胺分解和利用的途徑失活、使作為腐胺前體的鳥(niǎo)氨酸轉(zhuǎn)化為精氨酸的途徑失活、和增強(qiáng)鳥(niǎo)氨酸的生物合成途徑。一篇在2010年出版的文獻(xiàn)公開(kāi)了一種生產(chǎn)高濃度腐胺的方法，所述方法將使鳥(niǎo)氨酸轉(zhuǎn)化為腐胺的蛋白導(dǎo)入不產(chǎn)腐胺的棒狀桿菌(Corynebacterium)菌株，并提高其活性。此外，還公開(kāi)了從精氨酸產(chǎn)生腐胺的方法，該方法將源自大腸桿菌的精氨酸脫羧酶和胍丁胺酶(agmatinase)引入菌株。就此而言，鳥(niǎo)氨酸途徑的腐胺產(chǎn)量是精氨酸途徑的約50倍(Schneider等.,Appl.Microbiol.Biotechnol.88:4,859-868,2010)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
技術(shù)問(wèn)題在此背景中，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過(guò)弱化或除去NCgl0101蛋白的活性，可以在棒狀桿菌屬的微生物中高收率地生產(chǎn)腐胺，從而完成本發(fā)明。技術(shù)方案本發(fā)明的目的之一是提供能高收率地生產(chǎn)腐胺的棒狀桿菌屬的重組微生物，所述微生物經(jīng)修飾而具有相比于內(nèi)源活性得到弱化的NCgl0101活性。本發(fā)明的另一目的是提供利用該微生物產(chǎn)生腐胺的方法。有益效果當(dāng)利用產(chǎn)腐胺能力提高的本發(fā)明棒狀桿菌屬微生物來(lái)產(chǎn)生腐胺時(shí)，其經(jīng)修飾，從而與內(nèi)源活性相比，弱化了NCg10101活性，因此，其能高收率地產(chǎn)生腐胺。因此，所述微生物可廣泛用于更有效地產(chǎn)生腐胺。附圖說(shuō)明圖1是顯示編碼NCgl0100、NCgl0101、NCgl0102、NCgl0103和NCgl0104的基因在野生型谷氨酸棒狀桿菌ATCC13032菌株的染色體(chromosome)上相對(duì)位置的示意圖；和圖2顯示了在本發(fā)明制備的重組菌株之間作生長(zhǎng)比較的測(cè)試結(jié)果，其中，1、2、3、4、5和6是將pHC139T、pHC139T-P(CJ7)-NCgl0100、pHC139T-P(CJ7)-tNCgl0100、pHC139T-P(CJ7)-NCgl0101、pHC139T-P(CJ7)-NCgl0102-NCgl0103和pHC139T-P(CJ7)-NCgl0104分別引入KCCM11138P而制備的菌株。最佳方式為實(shí)現(xiàn)上述目的，在一方面，本發(fā)明提供產(chǎn)生腐胺能力提高的棒狀桿菌屬重組微生物，與內(nèi)源活性相比，所述微生物經(jīng)弱化或除去NCg10101蛋白的活性而得以修飾，所述蛋白具有SEQIDNO.17或SEQIDNO.19所示氨基酸序列。本文所用的術(shù)語(yǔ)“NCg10101”表示顯示出金屬依賴酶活性的蛋白，其在谷氨酸棒狀桿菌中表達(dá)，其功能尚未完全了解。其包括肽酶M20家族或氨基苯甲?；?谷氨酸利用蛋白(AbgB)的金屬結(jié)合域或氨基丙氧基。大腸桿菌的AbgB構(gòu)成含AbgB的氨基苯甲?；?谷氨酸水解酶，將氨基苯甲酰基-谷氨酸水解成氨基苯甲酸鹽和谷氨酸鹽。氨基苯甲酸鹽已知用作葉酸合成的前體，但其與腐胺產(chǎn)生的關(guān)系尚未知。本發(fā)明的NCgl0101蛋白可包含SEQIDNO:17或SEQIDNO:19所示氨基酸序列。然而，不限于此，因?yàn)楦鶕?jù)微生物種類或菌株，該蛋白的氨基酸序列可能有所不同。換言之，其可以是突變型蛋白或人工變體，所述突變型蛋白或人工變體的氨基酸序列在SEQIDNO:17或SEQIDNO:19所示氨基酸序列的一個(gè)或多個(gè)位置包含一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的取代、缺失、插入或添加，只要有助于通過(guò)弱化該蛋白的活性而提高產(chǎn)腐胺能力。本文的“幾個(gè)”可根據(jù)蛋白中氨基酸殘基的三維結(jié)構(gòu)的位置或類型而有所不同，但尤其表示2-20，特別是2-10，更特別是2-5。此外，根據(jù)微生物的個(gè)體或種類，氨基酸的取代、缺失、插入、添加或倒置包括人工變體或天然突變所致的那些。編碼本發(fā)明氨基酸序列的多核苷酸可包括編碼以下蛋白的多核苷酸序列：具有SEQIDNO:17或SEQIDNO:19所示氨基酸序列的蛋白，或者其氨基酸序列與SEQIDNO:17或SEQIDNO:19所示氨基酸序列有80％或更高、特別是90％或更高、更特別是95％或更高、尤其是97％或更高同源性的蛋白，只要該蛋白具有與NCg10101蛋白相似的活性。最特別的是SEQIDNO:16或SEQIDNO:18所示多核苷酸序列。術(shù)語(yǔ)“同源性”表示兩條氨基酸序列之間的同一性，其可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法檢測(cè)，采用BLAST2.0來(lái)計(jì)算諸如評(píng)分、同一性和相似性等參數(shù)。此外，本發(fā)明的編碼NCg10101的多核苷酸序列可與SEQIDNO:16所示多核苷酸或由其制備的探針在“嚴(yán)格條件”下雜交，也可以是編碼能正常起作用的NCg10101蛋白的經(jīng)修飾的多核苷酸。本文所用的“嚴(yán)格條件”是指允許多核苷酸間進(jìn)行特異性雜交的條件，具體描述于，例如，《分子克隆》(實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)，J.Sambrook等編，第二版，冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版，紐約冷泉港，1989)或《最新分子生物學(xué)方法》(F.M.Ausubel等編，JohnWiley&Sons公司，紐約)。例如，在65℃的雜交緩沖液中進(jìn)行雜交(3.5×ssc，0.02％Ficoll，0.02％聚乙烯吡咯烷酮，0.02％牛血清白蛋白，2.5mMNaH2PO4(pH7)，0.5％SDS，2mMEDTA)。SSC是pH為7的0.15M氯化鈉/0.15M檸檬酸鈉。雜交之后，在室溫下用2×SSC清洗轉(zhuǎn)移了DNA的膜，然后在68℃下采用0.1-0.5×ssc/0.1×SDS進(jìn)行清洗?？赏ㄟ^(guò)以下方式弱化本發(fā)明NCg10101蛋白的活性：1)編碼該蛋白的多核苷酸的部分或完全缺失，2)修飾表達(dá)調(diào)控序列以降低該多核苷酸的表達(dá)，3)修飾染色體上的序列或4)它們的組合。在上文中，可利用染色體基因插入的載體，通過(guò)將編碼內(nèi)源性靶蛋白的多核苷酸替換為標(biāo)記基因或部分核苷酸序列缺失的多核苷酸來(lái)實(shí)施編碼蛋白的多核苷酸的部分或完全缺失?！安糠帧比笔У拈L(zhǎng)度可根據(jù)多核苷酸的種類而有所不同，但尤其是2bp-300bp，更特別是2bp-100bp，更特別是1bp-5bp。還可通過(guò)以下方式修飾表達(dá)調(diào)控序列來(lái)降低多核苷酸表達(dá)：通過(guò)核苷酸序列的缺失、插入、保守或非保守性取代或它們的組合在表達(dá)調(diào)控序列中誘導(dǎo)突變以進(jìn)一步弱化表達(dá)調(diào)控序列的活性，或?qū)⒈磉_(dá)調(diào)控序列替換成活性更低的序列。表達(dá)調(diào)控序列包括編碼啟動(dòng)子的序列、操縱子序列、核糖體結(jié)合位點(diǎn)和控制轉(zhuǎn)錄和翻譯終止的序列。此外，可通過(guò)以下方式修飾染色體上的多核苷酸序列以弱化蛋白的活性：通過(guò)核苷酸序列的缺失、插入、保守或非保守性取代或它們的組合在序列中誘導(dǎo)突變以進(jìn)一步弱化該序列的活性，或?qū)⒍嗪塑账嵝蛄刑鎿Q成經(jīng)修飾的序列以便獲得更弱的蛋白活性。同時(shí)，還可進(jìn)一步修飾產(chǎn)腐胺能力增強(qiáng)的本發(fā)明棒狀桿菌屬微生物，從而相比于內(nèi)源活性，弱化參與鳥(niǎo)氨酸合成精氨酸的鳥(niǎo)氨酸氨甲?；D(zhuǎn)移酶(ArgF)的活性和參與谷氨酸輸出的蛋白(NCg10101)的活性。此外，可通過(guò)額外導(dǎo)入鳥(niǎo)氨酸脫羧酶(ODC)活性來(lái)修飾棒狀桿菌屬微生物。相較于內(nèi)源性活性，還可進(jìn)一步修飾棒狀桿菌屬微生物以增強(qiáng)乙酰谷氨酸合酶將谷氨酸轉(zhuǎn)化成乙酰谷氨酸的活性，增強(qiáng)鳥(niǎo)氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶(ArgJ)將乙酰鳥(niǎo)氨酸轉(zhuǎn)化為鳥(niǎo)氨酸的活性，增強(qiáng)乙酰谷氨酸激酶(ArgB)將乙酰谷氨酸轉(zhuǎn)化為乙酰谷氨酰磷酸的活性，增強(qiáng)乙酰γ谷氨酰磷酸還原酶(ArgC)將乙酰谷氨酰磷酸轉(zhuǎn)化為乙酰谷氨酸半醛的活性，和增強(qiáng)乙酰鳥(niǎo)氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ArgD)將乙酰谷氨酸半醛轉(zhuǎn)化為乙酰鳥(niǎo)氨酸的活性，藉此增強(qiáng)作為腐胺前體的鳥(niǎo)氨酸的生物合成途徑(SakanyanV等.,Microbiology.142:1,99-108,1996)。在此例中，ArgF、NCg11221、ODC、ArgC、ArgJ、ArgB和ArgD可分別具有(但不特定限于)SEQIDNO.:20、21、22、23、24、25、26所示的氨基酸序列，或與這些序列有80％或更高、特別是90％或更高、更特別是95％或更高，尤其是97％或更高的同源性的氨基酸序列。本文所用的術(shù)語(yǔ)“鳥(niǎo)氨酸脫羧酶(ODC)”是指利用鳥(niǎo)氨酸產(chǎn)生腐胺的酶，ODC需要磷酸吡哆醛(吡哆醛5'-磷酸，PLP)作為輔酶。ODC見(jiàn)于大部分革蘭氏陰性菌，也可見(jiàn)于一些腸道細(xì)菌，例如革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌-乳酸菌。大腸桿菌有兩種編碼ODC的基因，其一為speC，在特定濃度下持續(xù)表達(dá)，而另一種speF則在特定條件(在有高于一定濃度的鳥(niǎo)氨酸存在下以及低pH下)下表達(dá)。根據(jù)物種不同，某些物種，如大腸桿菌有兩種ODC，而其他僅有一種。諸如埃希氏菌屬(Escherichiasp.)、志賀氏菌屬(Shigellasp.)、枸櫞酸桿菌屬(Citrobactersp.)、沙門(mén)氏菌屬(Salmonellasp.)和腸桿菌屬(Enterobactersp.)等物種有兩種ODC(speC,speF)，而耶爾森式菌屬(Yersiniasp.)、克雷白氏菌屬(Klebsiellasp.)、歐文氏菌屬(Erwiniasp.)等菌株則有一種ODC(speC)。在乳酸菌中，ODC由一種基因(speF)表達(dá)，其可以在低pH值或充足的鳥(niǎo)氨酸和組氨酸的條件下誘導(dǎo)表達(dá)?？衫迷醋远鄠€(gè)不同物種的ODC編碼基因?qū)DC的活性引入本發(fā)明的棒狀桿菌屬重組微生物。編碼ODC的多核苷酸可包括(但不限于)編碼由以下氨基酸序列組成的蛋白的多核苷酸：SEQIDNO.:22所示氨基酸序列，或者與該氨基酸序列有70％或更高、特別是80％或更高，更特別是90％或更高同源性的氨基酸序列。此外，可通過(guò)本領(lǐng)域熟知的各種方法將鳥(niǎo)氨酸脫羧酶(ODC)活性引入微生物；例如，將包含ODC編碼核苷酸序列的多核苷酸插入染色體的方法，通過(guò)引入載體系統(tǒng)而將多核苷酸導(dǎo)入微生物的方法，將經(jīng)修飾或活性增強(qiáng)的啟動(dòng)子插入ODC編碼核苷酸序列上游的方法，和對(duì)ODC編碼核苷酸序列插入突變的方法。更特別是，如果引入了ODC的編碼核苷酸序列，可利用已知的CJ7啟動(dòng)子作為啟動(dòng)子來(lái)控制其表達(dá)。此外，可通過(guò)以下方式實(shí)現(xiàn)ArgC、ArgJ、ArgB和ArgD活性的增強(qiáng)：1)增加編碼酶的多核苷酸拷貝數(shù)；2)修飾表達(dá)調(diào)控序列以提高多核苷酸的表達(dá)；3)修飾染色體上酶的編碼多核苷酸序列以增強(qiáng)所述酶的活性；或4)以上的組合。在方法1)中，可通過(guò)將多核苷酸操作性連接于載體，或?qū)⑵洳迦胨拗骷?xì)胞的染色體來(lái)實(shí)現(xiàn)編碼酶的多核苷酸拷貝數(shù)增加。更具體地，可通過(guò)引入能夠獨(dú)立復(fù)制并行使功能的載體來(lái)增加宿主細(xì)胞的多核苷酸拷貝數(shù)，其中，編碼本發(fā)明酶的多核苷酸操作性相連；或可通過(guò)引入能夠?qū)⒍嗪塑账岵迦胨拗骷?xì)胞染色體的載體來(lái)增加宿主細(xì)胞的多核苷酸拷貝數(shù)，其中所述多核苷酸操作性相連。本文所用的術(shù)語(yǔ)“載體”是指含有靶蛋白編碼多核苷酸的核苷酸序列的DNA構(gòu)建物，其操作性連接于合適的調(diào)控序列以在合適的宿主中表達(dá)靶蛋白。調(diào)控序列包括引發(fā)轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子、控制轉(zhuǎn)錄的任何操縱序列、編碼合適的mRNA核糖體結(jié)合位點(diǎn)的序列和控制轉(zhuǎn)錄和翻譯終止的序列。所述載體可轉(zhuǎn)染入適合的宿主，然后獨(dú)立于宿主基因組進(jìn)行復(fù)制和行使功能，其自身可整合入染色體。在本發(fā)明中，可利用本領(lǐng)域已知的任何載體，而無(wú)任何特殊限制，只要其能在宿主中復(fù)制。常用載體的例子是自然狀態(tài)或重組狀態(tài)下的質(zhì)粒、黏粒、病毒和噬菌體。例如，pWE15、M13、λMBL3、λMBL4、λIXII、λASHII、λAPII、λt10、λt11、Charon4A和Charon21A可用作噬菌體載體或黏粒載體，而pBR系統(tǒng)、pUC系統(tǒng)、pBluescriptII系統(tǒng)、pGEM系統(tǒng)、pTZ系統(tǒng)、pCL系統(tǒng)和pET系統(tǒng)可用作質(zhì)粒載體?？捎糜诒景l(fā)明的載體沒(méi)有特殊限制，可利用已知的表達(dá)載體。具體地說(shuō)，可利用pACYC177、pACYC184、pCL、pECCG117、pUC19、pBR322、pMW118、pCC1BAC載體。更具體是，可利用pACYC177、pCL、pCC1BAC載體。此外，可將編碼靶蛋白的多核苷酸插入宿主細(xì)胞染色體的載體可以具體是，例如，穿梭載體pECCG112(韓國(guó)專利公開(kāi)號(hào)No.1992-0000933)，其能在大腸桿菌和棒狀菌(Coryneformbacteria)中自我復(fù)制，但不限于此。此外，可利用染色體基因插入的載體將染色體中靶蛋白的編碼多核苷酸替換成新的多核苷酸?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域任何已知的方法實(shí)現(xiàn)多核苷酸插入染色體，例如，通過(guò)同源重組。由于可通過(guò)誘導(dǎo)同源重組將本發(fā)明載體插入染色體，可額外包含選擇標(biāo)記來(lái)確認(rèn)基因成功插入染色體。選擇標(biāo)記用于篩選轉(zhuǎn)化有載體的細(xì)胞，換言之，為了確定目標(biāo)多核苷酸是否插入。可利用可提供可選擇表型的標(biāo)記，所述表型是例如藥物抗性、營(yíng)養(yǎng)缺陷型、對(duì)有毒物質(zhì)的耐受性或表面蛋白的表達(dá)。在用選擇性物質(zhì)處理的環(huán)境中，只有表達(dá)選擇性標(biāo)記的細(xì)胞可以存活，或者細(xì)胞顯示不同表型，因此可通過(guò)這種方法來(lái)選擇成功轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“轉(zhuǎn)化”是指將含有靶蛋白的編碼多核苷酸的載體引入宿主細(xì)胞，從而該蛋白可以在該細(xì)胞中表達(dá)。轉(zhuǎn)化的多核苷酸包括編碼靶蛋白的所有多核苷酸，其能在宿主細(xì)胞中表達(dá)而無(wú)論其定位，是插入宿主細(xì)胞的染色體還是定位在染色體外。此外，所述多核苷酸包括編碼靶蛋白的DNA和RNA?？梢肴魏涡问降亩嗪塑账?，只要其能引入宿主細(xì)胞并表達(dá)。例如，可采用表達(dá)盒的形式(基因構(gòu)建物)將多核苷酸引入宿主細(xì)胞，其含有自我表達(dá)所需的所有必須元件。所述表達(dá)盒通常包括操作性連接于多核苷酸的啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)、核糖體結(jié)合位點(diǎn)和翻譯終止信號(hào)。表達(dá)盒可以是能夠自我復(fù)制的表達(dá)載體的形式。此外，多核苷酸可以其自身的形式引入宿主細(xì)胞，并操作性連接于宿主細(xì)胞表達(dá)所需的序列。本文所用的術(shù)語(yǔ)“操作性連接”是指在啟動(dòng)或介導(dǎo)編碼靶蛋白的多核苷酸轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子序列與所述多核苷酸之間的功能性連接。此外，可如下實(shí)施方法2)，修飾表達(dá)調(diào)控序列以增強(qiáng)本發(fā)明多核苷酸的表達(dá)：通過(guò)核苷酸序列的缺失、插入、保守或非保守性取代、或其組合在序列中引入突變，或替換成活性增強(qiáng)的核苷酸序列。所述表達(dá)調(diào)控序列包括啟動(dòng)子、操縱序列(operatorsequence)、核糖體結(jié)合位點(diǎn)編碼序列和控制轉(zhuǎn)錄和翻譯終止的序列。可將強(qiáng)異源啟動(dòng)子連接于多核苷酸表達(dá)單元(unit)的上游以取代原始啟動(dòng)子。強(qiáng)啟動(dòng)子的例子有pcj7啟動(dòng)子、lysCP1啟動(dòng)子、EF-Tu啟動(dòng)子、groEL啟動(dòng)子、aceA或aceB啟動(dòng)子等，更具體是，操作性連接源自棒狀桿菌的lysCP1啟動(dòng)子或pcj7啟動(dòng)子以增強(qiáng)酶的編碼多核苷酸表達(dá)。在本文中，lysCP1啟動(dòng)子是通過(guò)天冬氨酸激酶和天冬氨酸半醛脫氫酶的編碼多核苷酸的啟動(dòng)子區(qū)域核苷酸序列取代獲得的增強(qiáng)啟動(dòng)子，通過(guò)增強(qiáng)天冬氨酸激酶基因的表達(dá)，其足夠強(qiáng)從而將相應(yīng)酶的活性相比于野生型提高了5倍(國(guó)際申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)2009-096689)。此外，鑒定到pcj7啟動(dòng)子在產(chǎn)氨棒狀桿菌(Corynebacteriumammoniagenes)和埃希氏菌(Escherichia)中表達(dá)并具有強(qiáng)啟動(dòng)子活性，其在谷氨酸棒狀桿菌(Corynebacteriumglutamicum)中也能高強(qiáng)度表達(dá)(韓國(guó)專利號(hào)0620092)。此外，可如下所述(但不特別限于此)實(shí)施方法3)，修飾染色體上的多核苷酸序列：通過(guò)核酸序列的缺失、插入、保守或非保守性替換或它們的組合來(lái)誘導(dǎo)序列突變以增強(qiáng)所述序列的活性，或通過(guò)活性增強(qiáng)的核苷酸序列作取代。本發(fā)明的微生物是具有產(chǎn)腐胺能力的微生物，包括原核微生物，其中表達(dá)包含SEQIDNO:17或SEQIDNO:19所示氨基酸序列的蛋白，其可以是，例如埃希氏菌屬(Escherichiasp.)、志賀氏菌屬(Shigellasp.)、枸櫞酸桿菌屬(Citrobactersp.)、沙門(mén)氏菌屬(Salmonellasp.)、腸桿菌屬(Enterobactersp.)、耶爾森式菌屬(Yersiniasp.)、克雷白氏菌屬(Klebsiellasp.)、歐文氏菌屬(Erwiniasp.)、棒狀桿菌屬(Corynebacteriumsp.)、短桿菌屬(Brevibacteriumsp.)、乳桿菌屬(Lactobacillussp.)、單胞菌屬(Sllenomanassp.)和弧菌屬(Vibriosp.)。本發(fā)明微生物具體是棒狀桿菌(Corynebacterium)屬微生物，更具體是谷氨酸棒狀桿菌(Corynebacteriumglutamicum)。在本發(fā)明的一實(shí)施方式中，保藏號(hào)為KCCM11138P的棒狀桿菌屬微生物(韓國(guó)專利公開(kāi)號(hào)No.2012-0064046)得到修飾，其通過(guò)增強(qiáng)腐胺生物合成途徑而具有了產(chǎn)生高濃度腐胺的能力。具體地，產(chǎn)腐胺的菌株KCCM11138P是過(guò)度產(chǎn)生腐胺的菌株，其中，菌株ATCC13032缺失編碼鳥(niǎo)氨酸氨甲?；D(zhuǎn)移酶(ArgF)的基因以便促進(jìn)鳥(niǎo)氨酸累積和編碼谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(glutamateexporter，NCgl1221)的基因以便增加細(xì)胞內(nèi)谷氨酸，引入鳥(niǎo)氨酸脫羧酶(speC)的編碼基因，并增加鳥(niǎo)氨酸生物合成基因(argCJBD)的表達(dá)水平。在本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，修飾了基于谷氨酸棒狀桿菌ATCC13869的腐胺產(chǎn)生菌株DAB12-a。該菌株ATCC13869基于與KCCM11138P相同的基因型，KCCM11138P是基于谷氨酸棒狀桿菌ATCC13032的腐胺產(chǎn)生菌株。具體地說(shuō)，腐胺產(chǎn)生菌株DAB12-a來(lái)自從美國(guó)模式培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)獲得的ATCC13869菌株，其中缺失鳥(niǎo)氨酸氨甲?；D(zhuǎn)移酶(ArgF)的編碼基因、編碼蛋白NCgl1221以外運(yùn)谷氨酸的基因，引入了源自大腸桿菌的鳥(niǎo)氨酸脫羧酶(ODC)編碼基因(speC)，而鳥(niǎo)氨酸生物合成基因操縱子(argCJBD)的啟動(dòng)子替換為增強(qiáng)的啟動(dòng)子。根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)施方式，棒狀桿菌屬微生物(KCCM11138P)具有產(chǎn)腐胺的能力，該微生物通過(guò)以下方式制備：缺失鳥(niǎo)氨酸氨甲?；D(zhuǎn)移酶(ArgF)的編碼基因和參與谷氨酸外運(yùn)的谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(NCgl1221)的編碼基因，替換編碼參與谷氨酸合成鳥(niǎo)氨酸的酶的ArgCJBD基因簇自身的啟動(dòng)子，和將鳥(niǎo)氨酸脫羧酶(ODC)的編碼基因(speC)引入野生型谷氨酸棒狀桿菌ATCC13032的染色體。基于KCCM11138P，選出在含有高濃度腐胺的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好的一克隆(A15)，證實(shí)選出的A15包含編碼NCgl0100、NCgl0101、NCgl0102、NCgl0103和NCgl0104的基因(實(shí)施例1)。此外，由于5類基因中編碼NCg10101的基因，微生物在含有高濃度腐胺的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)(實(shí)施例2)。就NCg10101編碼基因的特征而言，證實(shí)在編碼NCg10101的基因過(guò)表達(dá)的菌株中腐胺產(chǎn)生降低(實(shí)施例3)，在編碼NCg10101的基因缺失的菌株中腐胺產(chǎn)生升高(實(shí)施例4)。因此，本發(fā)明人通過(guò)除去產(chǎn)生腐胺的菌株KCCM11138P中的NCg10101基因而制備得到產(chǎn)腐胺能力提高的谷氨酸棒狀桿菌菌株，將該菌株命名為谷氨酸棒狀桿菌CC01-0244，保藏于韓國(guó)微生物保藏中心(下文簡(jiǎn)寫(xiě)為“KCCM”)，保藏日期2011年12月26日，登錄號(hào)KCCM11241P。為實(shí)現(xiàn)以上目的，在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明涉及生產(chǎn)腐胺的方法，包括以下步驟：培養(yǎng)產(chǎn)腐胺能力提高的棒狀桿菌屬微生物，該微生物經(jīng)修飾以具有弱化的NCg10101蛋白活性，所述NCg10101蛋白具有SEQIDNO.17或SEQIDNO.19所示的氨基酸序列；和從以上步驟所得的培養(yǎng)液中分離腐胺。本發(fā)明的培養(yǎng)方法可在本領(lǐng)域已知的合適培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下實(shí)施。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)所選的菌株方便地調(diào)整和采用培養(yǎng)方法。培養(yǎng)方法的例子包括(但不限于)分批、連續(xù)和補(bǔ)料分批培養(yǎng)。培養(yǎng)基必須適當(dāng)?shù)貪M足具體菌株的要求。培養(yǎng)基必須適當(dāng)?shù)貪M足具體菌株的要求。用于各種微生物的培養(yǎng)基描述于，例如，《通用細(xì)菌學(xué)方法手冊(cè)》(ManualofMethodsforGeneralBacteriology)，美國(guó)細(xì)菌協(xié)會(huì)(AmericanSocietyforBacteriology)，(華盛頓,哥倫比亞特區(qū)，美國(guó)，1981)?？衫靡韵伦鳛榕囵B(yǎng)基的碳源：糖和碳水化合物(例如，葡萄糖、蔗糖、乳糖、果糖、麥芽糖、糖蜜、淀粉和纖維素)，乳脂和脂肪(例如，大豆油、葵花籽油、花生油和椰油)，脂肪酸(例如，棕櫚酸、硬脂酸和亞油酸)，醇類(例如，丙三醇和乙醇)以及有機(jī)酸(例如，乙酸)等。這些物質(zhì)可單獨(dú)或混合使用。可利用以下作為氮源：含氮有機(jī)化合物(例如，蛋白胨，酵母提取物，牛肉提取物，麥芽提取物，玉米漿，豆粕粉和尿素)或非有機(jī)化合物(例如，硫酸銨，氯化銨，磷酸銨，碳酸銨和硝酸銨)，而這些物質(zhì)也可以單獨(dú)或混合使用?？衫靡韵挛镔|(zhì)作為磷源：磷酸二氫鉀或磷酸氫二鉀或其相應(yīng)的含鈉鹽。此外，培養(yǎng)基還可包括生長(zhǎng)必要的金屬鹽(例如，硫酸鎂或硫酸鐵)，最后，除了上述物質(zhì)外，還可利用必要的生長(zhǎng)促進(jìn)物質(zhì)，例如氨基酸和維生素。除培養(yǎng)基外，也可以加入合適的前體。進(jìn)料物質(zhì)可以在培養(yǎng)基中一次性提供或在培養(yǎng)過(guò)程中足量提供。可通過(guò)合適的堿性化合物(例如，氫氧化鈉、氫氧化鉀或氨)或酸性化合物(例如磷酸或硫酸)調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH。可采用消泡劑(例如脂肪酸聚乙二醇酯)來(lái)調(diào)節(jié)起泡情況?？梢胙鯕饣蚝鯕怏w混合物，例如空氣來(lái)維持培養(yǎng)的需氧環(huán)境。培養(yǎng)溫度通常為20-45℃，特別是25-40℃?？梢猿掷m(xù)培養(yǎng)直至腐胺產(chǎn)生達(dá)到所需上限，通常在10-160小時(shí)內(nèi)達(dá)到該目標(biāo)。腐胺可釋放入培養(yǎng)基，或包含在細(xì)胞中。就收集和回收在本發(fā)明培養(yǎng)方法中產(chǎn)生的腐胺的方法而言，可根據(jù)培養(yǎng)方法(例如，分批、連續(xù)或補(bǔ)料分批培養(yǎng))，采用本領(lǐng)域已知的合適方法從培養(yǎng)基中回收目標(biāo)物質(zhì)。本發(fā)明的實(shí)施方式下文將參照以下實(shí)施例更詳細(xì)地描述本發(fā)明。然而，這些實(shí)施例僅作為舉例目的，本發(fā)明不應(yīng)局限于這些實(shí)施例。實(shí)施例1：用于選擇腐胺生物合成的有效基因的文庫(kù)制備和克隆篩選為從野生型棒狀桿菌菌株的染色體中篩選腐胺生物合成的有效基因，制備野生型棒狀桿菌菌株的染色體文庫(kù)。詳細(xì)而言，用限制性酶Sau3AI隨機(jī)切割從野生型谷氨酸棒狀桿菌ATCC13032菌株提取的染色體，從中選擇5-8kb的片段，然后克隆入大腸桿菌穿梭載體pECCG122(韓國(guó)專利公布號(hào)1992-0000933)以制備染色體文庫(kù)。為從如此制備的棒狀桿菌染色體文庫(kù)中選擇有效的腐胺生物合成基因，獲得在含有高濃度腐胺的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的菌落。同時(shí)，將這些文庫(kù)引入具有產(chǎn)腐胺能力的棒狀桿菌屬微生物(KCCM11138P)，從而制備各轉(zhuǎn)化體。選擇能在含有0.35M腐胺(10g/l葡萄糖、0.4g/lMgSO4·7H2O、4g/lNH4Cl、1g/lKH2PO4、1g/lK2HPO4、2g/l脲、10mg/lFeSO4·7H2O、1mg/lMnSO4·5H2O、5mg/l煙酰胺、5mg/l鹽酸硫胺素、0.1mg/l生物素、1mM精氨酸、25mg/l卡那霉素、0.35M腐胺，pH7.0)的基本培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的轉(zhuǎn)化體。菌株KCCM11138P在本發(fā)明人申請(qǐng)的專利(韓國(guó)專利公布號(hào)2012-0064046)中披露，該菌株通過(guò)以下方式制備：缺失野生型谷氨酸棒狀桿菌菌株ATCC13032的染色體中編碼鳥(niǎo)氨酸氨甲?；D(zhuǎn)移酶(ArgF)和谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(NCgl1221)的基因，將源自大腸桿菌W3110菌株的鳥(niǎo)氨酸脫羧酶(ODC)的編碼基因(speC)引入染色體，和替換編碼參與谷氨酸合成鳥(niǎo)氨酸的酶的argCJBD基因簇的啟動(dòng)子，從而制備各轉(zhuǎn)化體。結(jié)果為，選擇了275個(gè)菌落，隨后鑒定在含有高濃度腐胺的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好的菌落。獲得各文庫(kù)克隆并重新引入(產(chǎn))腐胺菌株。隨后，鑒定在含有高濃度腐胺的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好的菌落，因而最終選擇了克隆(A15)。通過(guò)測(cè)序鑒定該選擇的克隆。結(jié)果為，證實(shí)該克隆包含NCgl0100、NCgl0101、NCgl0102、NCgl0103和NCgl0104的總共5個(gè)ORF，其中除去了N-末端的436個(gè)氨基酸(圖1)。圖1是顯示NCgl0100、NCgl0101、NCgl0102、NCgl0103和NCgl0104的編碼基因的相對(duì)位置的示意圖，這些基因在野生型谷氨酸棒狀桿菌ATCC13032菌株的染色體上。實(shí)施例2：鑒定A15克隆中腐胺合成的有效基因?qū)嵤├?-1：克隆A15克隆的5個(gè)基因和制備轉(zhuǎn)化體實(shí)施例1所得A15克隆的核苷酸序列已經(jīng)知曉?；谝郧皥?bào)道的ATCC13032菌株的核苷酸序列，構(gòu)建SEQIDNO.1和2所示的NCgl0100-F和NCgl0100-R作為擴(kuò)增NCgl0100基因的引物，SEQIDNO.2和3所示的NCgl0100-R和tNCgl0100-F作為擴(kuò)增tNCgl0100基因的引物(其中除去了N-末端的436個(gè)氨基酸)，SEQIDNO.4和5所示的NCgl0101-F和NCgl0101-R作為擴(kuò)增NCgl0101基因的引物，SEQIDNO.6和7所示的NCgl0102-F和NCgl0103-R作為擴(kuò)增NCgl0102和NCgl0103基因的引物，和SEQIDNO.8和9所示的NCgl0104-F和NCgl0104-R作為擴(kuò)增NCgl0104基因的引物。此外，構(gòu)建SEQIDNO.10和11所示的P(CJ7)-F和P(CJ7)-R作為擴(kuò)增表達(dá)啟動(dòng)子P(CJ7)(或pcj7)(韓國(guó)專利號(hào)10-0620092)的引物(表1)。隨后，利用ATCC13032菌株的染色體作為模板和SEQIDNO.1-9所示的各引物進(jìn)行PCR(95℃下變性30秒，50℃下退火30秒，72℃下延伸1分鐘～1分30秒，25輪)，從而擴(kuò)增5類基因片段。此外，利用產(chǎn)氨棒狀桿菌的染色體作為模板和SEQIDNO.10和11所示的引物進(jìn)行PCR以擴(kuò)增啟動(dòng)子片段。將KpnI和XbaI切割的5種基因和EcoRV和KpnI切割的CJ7啟動(dòng)子連接入EcoRV和XbaI切割的表達(dá)載體pHC139T(韓國(guó)專利號(hào)10-0860932)，從而制備總共5類表達(dá)載體，pHC139T-P(CJ7)-NCgl0100、pHC139T-P(CJ7)-tNCgl0100、pHC139T-P(CJ7)-NCgl0101、pHC139T-P(CJ7)-NCgl0102-NCgl0103和pHC139T-P(CJ7)-NCgl0104。表1制備表達(dá)A15克隆所含5種基因的菌株的引物NCgl0100-F(SEQIDNO.1)GCGCATATGAGCTCAACAACCTCAAAAACCNCgl0100-R(SEQIDNO.2)GCGTCTAGATTATCCTTCGAGGAAGATCGCAGtNCgt0100-F(SEQIDNO.3)GCGCATATGTGGACGCTGATGGCTGCNCgl0101-F(SEQIDNO.4)GCGCATATGAGTACTGACAATTTTTCTCCACNCgl0101-R(SEQIDNO.5)GCGTCTAGACTAAGCCAAATAGTCCCCTACNCgl0102-F(SEQIDNO.6)GCGCATATGGATGAACGAAGCCGGTTTGNCgl0103-R(SEQIDNO.7)GCGTCTAGATTAATCAATGAAGACGAATACAATTCCNCgl0104-F(SEQIDNO.8)GCGCATATGGCGGGTGACAAATTGTGGNCgl0104-R(SEQIDNO.9)GCGTCTAGATTAGGACAGTTCCGCTGGAGCP(CJ7)-F(SEQIDNO.10)CAGATATCGCCGGCATAGCCTACCGATGP(CJ7)-R(SEQIDNO.11)GCGTCTAGAGATATCAGTGTTTCCTTTCG通過(guò)電穿孔將如此制得到的5類表達(dá)載體和對(duì)照組pHC139T引入實(shí)施例1的KCCM11138P菌株，然后接種于含有25μg/ml卡那霉素的BHIS平板以選擇轉(zhuǎn)化體。實(shí)施例2-2：找尋腐胺的有效基因采用于實(shí)施例1相同的方式從實(shí)施例2-1獲得的總共6類轉(zhuǎn)化體中選擇在含有高濃度腐胺的培養(yǎng)基中良好生長(zhǎng)的轉(zhuǎn)化體(圖2)。圖2是在本發(fā)明所制備轉(zhuǎn)化體之間比較生長(zhǎng)情況的測(cè)試結(jié)果，其中1、2、3、4、5和6表示分別引入6類以下表達(dá)載體的菌株：pHC139T、pHC139T-P(CJ7)-NCgl0100、pHC139T-P(CJ7)-tNCgl0100、pHC139T-P(CJ7)-NCgl0101、pHC139T-P(CJ7)-NCgl0102-NCgl0103和pHC139T-P(CJ7)-NCgl0104。如圖2所示，僅有引入了pHC139T-P(CJ7)-NCgl0101的轉(zhuǎn)化體(4號(hào))在含有高濃度腐胺的培養(yǎng)基中顯示生長(zhǎng)良好，因此選擇NCg10101作為腐胺生物合成的有效基因。實(shí)施例3：評(píng)估NCgl0101-過(guò)表達(dá)菌株產(chǎn)生腐胺的能力評(píng)估過(guò)表達(dá)NCg10101基因的菌株產(chǎn)腐胺的能力，該基因在實(shí)施例2中鑒定為有效基因。將pHC139T-P(CJ7)-NCgl0101引入產(chǎn)腐胺菌株KCCM11138P來(lái)制備用于評(píng)估的菌株。通過(guò)電穿孔將實(shí)施例2-1制備的pHC139T-P(CJ7)-NCgl0101和作為對(duì)照組的pHC139T載體引入產(chǎn)腐胺菌株KCCM11138P，然后接種于含有25μg/ml卡那霉素的BHIS平板以選擇轉(zhuǎn)化體。這些轉(zhuǎn)化體分別命名為KCCM11138P/pHC139T和KCCM11138P/pHC139T-P(CJ7)-NCgl0101。30℃下，將如此選擇的這兩種轉(zhuǎn)化體在含有1mM精氨酸(1％葡萄糖、1％聚蛋白胨、0.5％酵母提取物、0.5％牛肉提取物、0.25％NaCl、0.2％脲、100μl50％NaOH、2％瓊脂、pH6.8，每1L)的CM平板上培養(yǎng)24小時(shí)，然后將一接種環(huán)的細(xì)胞培養(yǎng)物接種在25ml表2所示含有25μg/ml卡那霉素的滴定培養(yǎng)基，30℃下以200rpm振蕩培養(yǎng)96小時(shí)。發(fā)酵期間，在培養(yǎng)基中加入1mM精氨酸培養(yǎng)所有制備的菌株。表2組成濃度(每1L)葡萄糖8％大豆蛋白0.25％玉米漿固體0.5％(NH4)2SO44％脲0.15％KH2PO40.1％MgSO47H2O0.05％生物素100μg鹽酸硫胺素3000μg鈣-泛酸3000μg煙酰胺3000μgCaCO35％結(jié)果如表3所示，當(dāng)NCg10101過(guò)表達(dá)時(shí)，腐胺產(chǎn)量降低。表3菌株類型腐胺(g/L)KCCM11138P/pHC139T9.5KCCM11138P/pHC139T-P(CJ7)-NCgl01015.1實(shí)施例4：評(píng)估NCg10101-缺失菌株產(chǎn)生腐胺的能力實(shí)施例4-1：用基于ATCC13032的腐胺產(chǎn)生菌株制備NCg10101缺失菌株根據(jù)實(shí)施例3，NCg10101過(guò)表達(dá)增加細(xì)胞在含有高濃度腐胺的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，但降低腐胺產(chǎn)量?；诖私Y(jié)果，檢驗(yàn)NCg10101缺失對(duì)產(chǎn)腐胺能力的影響。詳細(xì)地說(shuō)，基于ATCC13032菌株的NCg10101核苷酸序列，構(gòu)建SEQIDNO.12和13所示NCgl0101-del-F1_BamHI和NCgl0101-del-R1_SalI作為引物來(lái)獲得NCg10101的N-末端區(qū)域同源重組片段。構(gòu)建SEQIDNO.14和15所示NCgl0101-del-F2_SalI和NCgl0101-del-R2_XbaI作為引物來(lái)獲得NCg10101的C-末端區(qū)域同源重組片段(表4)。采用這兩對(duì)引物，通過(guò)PCR制備NCg10101基因的N-末端和C-末端區(qū)域的片段。用BamHI&SalI和SalI&XbaI分別處理PCR產(chǎn)物，克隆入BamHI&XbaI處理的pDZ載體?？寺〉馁|(zhì)粒命名為pDZ-NCgl0101(K/O)。表4制備NCgl0101-缺失菌株的引物NCgl0101-del-F1_BamHI(SEQIDNO.12)CGGGATCCCGGATTCCCTGCGATCATTGNCgl0101-del-R1_SalI(SEQIDNO.13)ACGCGTCGACCAGTCGACGGAACTTGTGGAGNCgl0101-del-F2_SalI(SEQIDNO.14)ACGCGTCGACGGCAACGACTCCGAAACCTTCNCgl0101-del-R2_XbaI(SEQIDNO.15)CTAGTCTAGACTGGATCCTCATGAATGCGC通過(guò)電穿孔將為獲得KCCM11138PΔNCgl0101菌株制備的pDZ-NCgl0101(K/O)載體引入KCCM11138P菌株，然后接種于含有25μg/ml卡那霉素的BHIS平板。通過(guò)觀察含有X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷)的固體培養(yǎng)基上的菌落是否為藍(lán)色來(lái)證實(shí)載體成功插入染色體。原代染色體插入菌株在營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)(30℃，8小時(shí))，然后從10-4稀釋到10-10，接種于含X-gal的固體培養(yǎng)基。雖然大多數(shù)菌落顯示為藍(lán)色菌落，但少部分的菌落顯示為白色菌落。最終篩選出了NCg10101基因-缺失的菌株，通過(guò)雙交換的白色菌落，利用SEQIDNO.12和15所示引物，通過(guò)PCR鑒定。如此鑒定的變體命名為KCCM11138PΔNCgl0101。實(shí)施例4-2：用基于ATCC13869的腐胺產(chǎn)生菌株制備NCg10101缺失菌株利用基于谷氨酸棒狀桿菌ATCC13869的腐胺產(chǎn)生菌株DAB12-a(argF-缺失、NCgl1221-缺失、引入大腸桿菌speC和arg操縱子-argCJBD啟動(dòng)子-取代的菌株)制備NCg10101缺失菌株，前者與基于谷氨酸棒狀桿菌ATCC13032的產(chǎn)腐胺菌株KCCM11138P具有相同基因型。詳細(xì)地說(shuō)，為鑒定源自谷氨酸棒狀桿菌ATCC13869的編碼NCg10101的基因和其所表達(dá)蛋白的氨基酸序列，利用谷氨酸棒狀桿菌ATCC13869的基因組DNA作為模板和一對(duì)引物SEQIDNO.12和15(NCgl0101-del-F1_BamHI、NCgl0101-del-R2_XbaI)進(jìn)行PCR。本實(shí)施例中，PCR反應(yīng)進(jìn)行30輪：95℃下變性30秒，53℃下退火30秒，72℃下延伸2分鐘30秒。通過(guò)電泳分離PCR產(chǎn)物，并分析它們的序列。經(jīng)序列分析，鑒定到源自谷氨酸棒狀桿菌ATCC13869的編碼NCg10101的基因包含SEQIDNO.18所示核苷酸序列，其編碼的蛋白包含SEQIDNO.19所示氨基酸序列。比較源自谷氨酸棒狀桿菌ATCC13032的NCg10101的氨基酸序列與源自谷氨酸棒狀桿菌ATCC13869的NCg10101的氨基酸序列時(shí)，二者顯示有98％的序列同源性。為缺失源自谷氨酸棒狀桿菌ATCC13869的NCg10101的編碼基因，采用谷氨酸棒狀桿菌ATCC13869的基因組DNA作為模板和表4所列的兩對(duì)引物，以實(shí)施例4-1相同的方式，通過(guò)PCR擴(kuò)增NCg10101基因的N-末端和C-末端區(qū)域。然后，用BamHI&SalI和SalI&XbaI分別處理PCR產(chǎn)物，克隆入BamHI&XbaI處理的pDZ載體，藉此構(gòu)建質(zhì)粒pDZ-2’NCgl0101(K/O)。采用與實(shí)施例4-1相同的方式將質(zhì)粒pDZ-2’NCgl0101(K/O)轉(zhuǎn)化入谷氨酸棒狀桿菌DAB12-a，選擇NCg10101編碼基因缺失的菌株。選擇的谷氨酸棒狀桿菌變體命名為DAB12-aΔNCgl0101。實(shí)施例4-3：評(píng)估NCg10101-缺失菌株產(chǎn)生腐胺的能力為研究NCg10101缺失對(duì)產(chǎn)腐胺菌株產(chǎn)生腐胺能力的影響，比較實(shí)施例4-1和4-2中制備的谷氨酸棒狀桿菌變體。詳細(xì)地說(shuō)，采用與實(shí)施例3相同的方式評(píng)估兩類谷氨酸棒狀桿菌變體(KCCM11138PΔNCgl0101和DAB12-aΔNCgl0101)產(chǎn)腐胺的能力。如下表5所示，發(fā)現(xiàn)NCg10101缺失提高了腐胺產(chǎn)量。表5菌株類型腐胺(g/L)KCCM11138P9.8KCCM11138PΔNCgl010111.3DAB12-a10.1DAB12-aΔNCgl010111.0綜合來(lái)看，實(shí)施例3和4的結(jié)果顯示，在野生型谷氨酸棒狀桿菌菌株中，NCg10101編碼基因過(guò)表達(dá)降低腐胺產(chǎn)量，而該基因缺失增加了腐胺產(chǎn)量，表明NCg10101直接影響腐胺生物合成。因此，在上述實(shí)施例中本發(fā)明人通過(guò)缺失產(chǎn)生腐胺的菌株KCCM11138P中的NCg10101基因而制備得到產(chǎn)腐胺能力提高的谷氨酸棒狀桿菌菌株，將該菌株命名為谷氨酸棒狀桿菌CC01-0244，并在2011年12月26日根據(jù)布達(dá)佩斯條約保藏于作為國(guó)際保藏機(jī)構(gòu)的韓國(guó)微生物保藏中心(下文簡(jiǎn)寫(xiě)為“KCCM”)，登錄號(hào)KCCM11241P?；谝陨厦枋觯绢I(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，可采用其他形式實(shí)施本發(fā)明，而不改變技術(shù)理念或必要技術(shù)特征。就此而言，上述實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明的各方面，但不想要限制本發(fā)明的范圍。應(yīng)理解，本發(fā)明的范圍包括從以下權(quán)利要求的含義、范圍和等同概念所衍生的任何改變和改進(jìn)形式，而非以上的具體描述。