一種金針菇多糖的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及金針菇多糖提取【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種金針菇多糖的提取方法：超微粉碎；向超微粉中加入水，加入纖維素酶酶解，再加入果膠酶和木聚糖酶酶解；超聲提取；濃縮、醇沉、脫蛋白、脫色、透析、干燥，即得金針菇多糖。本發(fā)明采用超微粉碎、酶解聯(lián)合超聲提取，對金針菇多糖進(jìn)行提取，提取效率顯著提高且用時(shí)短，節(jié)省了原料和能源，并能保持多糖活性；并且發(fā)現(xiàn)，采用復(fù)合酶酶解時(shí)，先加入纖維素酶后加入果膠酶和木聚糖酶，比3種酶單獨(dú)加入或者一起加入時(shí)，提取率都有所提高，提供了一種金針菇多糖的高效提取方法。
【專利說明】一種金針菇多糖的提取方法
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】
本發(fā)明涉及金針菇多糖提取【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種金針菇多糖的提取方法。
[0002]【背景技術(shù)】
金針菇(Flammulina Velutipes)，又名“毛柄金錢菌”，俗稱“冬菇”、“樸菇”，在《中國植物圖鑒》上又稱作“樸蕈”。在真菌分類中屬于擔(dān)子菌亞門層菌綱傘菌目口蘑科小火焰菌屬。因其菌柄外形細(xì)長，似金針菜，人們故稱金針菇，香味清新高雅，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值。在國際市場中的消費(fèi)量僅次于蘑菇和香菇。金針菇菌蓋嫩滑、顏色嫩白，菌柄細(xì)脆，形美，味鮮，是世界上食藥兩用菌和觀賞菌。具有較高的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值，有廣闊的開發(fā)前景。每100g干金針菇中糖類60.2g，蛋白質(zhì)31.23g，維生素(VBpVByVPPJCJEJDZ)及礦物質(zhì)也較為豐富(磷、鉀、鈉、鈣、鎂、鐵、錳、硒)，賴氨酸和精氨酸含量分別為1.024g和1.231g，含量平均高于其它菇類，由于含有能夠促進(jìn)兒童健康生長和智力發(fā)育的賴氨酸和精氨酸，國外又稱之為“增智菇。金針菇多糖具有較強(qiáng)的抗氧化、保濕美容、抗腫瘤、降血脂、增強(qiáng)免疫的生物活性，正日益成為功能性食品、化妝品及醫(yī)藥等行業(yè)研究的熱點(diǎn)。
[0003]CN103113487A公開了一種使用纖維素酶預(yù)處理，微波輔助萃取的同時(shí)制備金針菇多糖和蛋白的方法。CN101560264A公開了一種利用超聲波作為輔助手段對金針菇菌絲體組織進(jìn)行處理，同時(shí)以纖維素酶、果膠酶及蛋白酶組成的復(fù)合酶對金針菇菌絲體酶解獲得金針菇多糖的技術(shù)。CN102702378A公開了一種對金針菇超微粉進(jìn)行超聲提取的提取金針菇多糖的方法。
[0004]但上述提取 方法，提取率方面都不太好，不能更好的將其中的金針菇多糖提取干凈。
[0005]
【發(fā)明內(nèi)容】

為了解決以上金針菇多糖提取技術(shù)中提取率還有進(jìn)一步空間的問題，本發(fā)明提供了一種提取率更高的金針菇多糖的提取方法。
[0006]本發(fā)明是通過以下措施實(shí)現(xiàn)的:
一種金針菇多糖的提取方法，其特征在于包括以下步驟:
(1)超微粉碎:將金針菇子實(shí)體烘干，超微粉碎機(jī)粉碎至200-400目得超微粉；
(2)混合加酶:向超微粉中加入20-30倍重量的水，加入纖維素酶1.3 X IO5U/g-7.8X105U/g 超微粉，ρΗ4.5-5.5，溫度 50-60。。，酶解 1.2-2.5h ;再加入果膠酶 2 X IO4U/g-12X104U/g 超微粉和木聚糖酶 L 5X105U/g-9X105U/g 超微粉，在 pH4_6，溫度 45_60°C，酶解 1.5-2.5h ；
(3)超聲提取:將步驟(2)所得酶解液在超聲功率300-500W下提取15-35min，離心，得提取液；
(4)提取液經(jīng)濃縮、醇沉、脫蛋白、脫色、透析、干燥，即得金針菇多糖。
[0007]優(yōu)選步驟(2)中向超微粉中加入25倍重量的水，加入纖維素酶4.5X105U/g超微粉，pH=4.8，溫度55°C，酶解2h ;再加入果膠酶7 X 104U/g超微粉和木聚糖酶5.5 X 105U/g超微粉，在ρΗ5.5，溫度60 V，酶解2h。[0008]優(yōu)選步驟(4)中濃縮為將提取液濃縮至1/4-1/3體積得濃縮液。
[0009]優(yōu)選步驟(4)中提取液經(jīng)濃縮后在醇濃度為70%_90%條件下醇沉，沉淀析出后離心，棄去上清液，得醇沉多糖。
[0010]優(yōu)選步驟(4)中提取液經(jīng)濃縮、醇沉后所得醇沉多糖復(fù)溶后，加入木瓜蛋白酶3X 106U/g醇沉多糖，酶解，酶解液再用Sevag法協(xié)助去除蛋白質(zhì),離心,棄去沉淀,得上清液。
[0011]優(yōu)選步驟(4)中提取液經(jīng)濃縮、醇沉、去蛋白后所得上清液加入活性炭脫色，離心，收集脫色液。
[0012]優(yōu)選步驟(4)中提取液經(jīng)濃縮、醇沉、脫蛋白、脫色后所得脫色液濃縮后于截留量為8000的透析袋流水透析2-3天。
[0013]優(yōu)選步驟(4)中干燥為真空冷凍干燥。
[0014]本發(fā)明的有益效果:
本發(fā)明采用超微粉碎、酶解聯(lián)合超聲提取，對金針菇多糖進(jìn)行提取，提取效率顯著提高且用時(shí)短，節(jié)省了原料和能源，并能保持多糖活性；并且發(fā)現(xiàn)，采用復(fù)合酶酶解時(shí)，先加入纖維素酶后加入果膠酶和木聚糖酶，比3種酶單獨(dú)加入或者一起加入時(shí)，提取率都有所提高，提供了一種金針菇多糖的高效提取方法。
【具體實(shí)施方式】 [0015]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。下述實(shí)施例中金針菇多糖的檢測采用苯酚-硫酸法，蛋白質(zhì)的檢測采用考馬斯亮藍(lán)法。
[0016]實(shí)施例1:
(1)超微粉碎:將金針菇子實(shí)體烘干，超微粉碎機(jī)粉碎至300目得超微粉；
(2)混合加酶:向超微粉中加入25倍重量的水，加入纖維素酶4.5X 105U/g超微粉，pH=4.8，溫度55°C，酶解2h ;再加入果膠酶7 X 104U/g超微粉和木聚糖酶5.5X 105U/g超微粉，在ρΗ5.5，溫度600C，酶解2h ；
(3)超聲提取:將步驟(2)所得酶解液在超聲功率400W下提取25min，離心，得提取液，測得多糖提取率為20.3% ；
(4)提取液經(jīng)濃縮、醇沉、脫蛋白、脫色、透析、干燥，即得金針菇多糖。
[0017]濃縮、醇沉、脫蛋白、脫色、透析、干燥采用現(xiàn)有技術(shù)中的常規(guī)操作步驟即可，并沒有特殊的限定，舉例如下:
提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至1/3 ;在80%醇沉濃度、4°C下醇沉24h，離心，棄去上清液合并醇沉多糖；將醇沉多糖復(fù)溶，加入用量為3X106IU/g醇沉多糖的木瓜蛋白酶，在40°C下酶解lh, 100°C滅酶15min ;酶解液加入Sevag試劑(氯仿:正丁醇=5:1),恒溫?fù)u床以200r/min震蕩20min,再于潤旋儀劇烈震蕩IOmin,經(jīng)4500r/min離心20min,除去水與有機(jī)相間的變性蛋白得多糖液；取多糖液加入體積質(zhì)量1.5%活性炭，50°C下脫色40min ;將脫色完的多糖液濃縮，截留量為8000的透析袋流水透析48h，真空冷凍干燥得產(chǎn)品。
[0018]實(shí)施例2:
(I)超微粉碎:將金針菇子實(shí)體烘干，超微粉碎機(jī)粉碎至200目得超微粉；(2)混合加酶:向超微粉中加入20倍重量的水，加入纖維素酶1.3X105U/g超微粉，pH=4.5，溫度50°C，酶解1.2h ;再加入果膠酶2 X 104U/g超微粉和木聚糖酶1.5X 105U/g超微粉，在pH=4，溫度450C，酶解1.5h ;
(3)超聲提取:將步驟(2)所得酶解液在超聲功率300W下提取15min，離心，得提取液，測得多糖提取率為17.5% ；
(4)提取液經(jīng)濃縮、醇沉、脫蛋白、脫色、透析、干燥，即得金針菇多糖。
[0019]濃縮、醇沉、脫蛋白、脫色、透析、干燥采用現(xiàn)有技術(shù)中的常規(guī)操作步驟即可，并沒有特殊的限定。如實(shí)施例1中所述。
[0020]實(shí)施例3:
(1)超微粉碎:將金針菇子實(shí)體烘干，超微粉碎機(jī)粉碎至400目得超微粉；
(2)混合加酶:向超微粉中加入30倍重量的水，加入纖維素酶7.8X105U/g超微粉，pH=5.5，溫度60°C，酶解2.5h ;再加入果膠酶12X 104U/g超微粉和木聚糖酶9X 105U/g超微粉，在pH=6，溫度60 0C，酶解2.5h ；
(3)超聲提取:將步驟(2)所得酶解液在超聲功率500W下提取35min，離心，得提取液，測得多糖提取率為18.9% ；
(4)提取液經(jīng)濃縮、醇沉、脫蛋白、脫色、透析、干燥，即得金針菇多糖。
[0021]濃縮、醇沉 、脫蛋白、脫色、透析、干燥采用現(xiàn)有技術(shù)中的常規(guī)操作步驟即可，并沒有特殊的限定。
[0022]對比實(shí)施例1:
同實(shí)施例1相比,步驟(2)中3種酶加入順序?yàn)橄燃永w維素酶為4.5X105U/g，pH=4.8，溫度55°C，酶解2h ;再加果膠酶7X 104U/g，pH=4.2，溫度50°C，酶解2h ;最后加入木聚糖酶為5.5X 105U/g，pH=5.5，溫度60°C，酶解2h，其余同實(shí)施例1完全相同，測得多糖提取率為15.4%。
[0023]對比實(shí)施例2:
同實(shí)施例1相比，步驟(2 )中3種酶一起加入，加入量同實(shí)施例1相同，pH=5，溫度55 °C，酶解6h，其余同實(shí)施例1完全相同，測得多糖提取率為14.8%。
[0024]對比實(shí)施例3:
同實(shí)施例1相比,步驟(2)中將木聚糖酶替換為蛋白酶，3種酶一起加入，加入量同實(shí)施例I相同，pH=5，溫度55°C，酶解6h，其余同實(shí)施例1完全相同，測得多糖提取率為10.8%。
[0025]上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受實(shí)施例的限制，其它任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所做的改變、修飾、組合、替代、簡化均應(yīng)為等效替換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種金針菇多糖的提取方法，其特征在于包括以下步驟: (1)超微粉碎:將金針菇子實(shí)體烘干，超微粉碎機(jī)粉碎至200-400目得超微粉； (2)混合加酶:向超微粉中加入20-30倍重量的水，加入纖維素酶1.3 X IO5U/g-7.8X105U/g 超微粉，ρΗ4.5-5.5，溫度 50-60。。，酶解 1.2-2.5h ;再加入果膠酶 2 X IO4U/g-12X104U/g 超微粉和木聚糖酶 L 5X105U/g-9X105U/g 超微粉，在 pH4_6，溫度 45_60°C，酶解 1.5-2.5h ； (3)超聲提取:將步驟(2)所得酶解液在超聲功率300-500W下提取15-35min，離心，得提取液； (4)提取液經(jīng)濃縮、醇沉、脫蛋白、脫色、透析、干燥，即得金針菇多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于步驟(2)中向超微粉中加入25倍重量的水，加入纖維素酶4.5X 105U/g超微粉，pH=4.8，溫度55°C，酶解2h ;再加入果膠酶7X104U/g超微粉和木聚糖酶5.5X 105U/g超微粉，在pH5.5，溫度60°C，酶解2h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于步驟(4)中濃縮為將提取液濃縮至1/4-1/3體積得濃縮液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于步驟(4)中提取液經(jīng)濃縮后在醇濃度為70%-90%條件下醇沉，沉淀析出后離心，棄去上清液，得醇沉多糖。
5.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的提取方法，其特征在于步驟(4)中提取液經(jīng)濃縮、醇沉后所得醇沉多糖復(fù)溶后，加入木瓜蛋白酶3X 106U/g醇沉多糖，酶解，酶解液再用Sevag法協(xié)助去除蛋白質(zhì)，離心，棄去沉淀，得上清液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的提取方法，其特征在于步驟(4)中提取液經(jīng)濃縮、醇沉、去蛋白后所得上清液加入活性炭脫色，離心，收集脫色液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于步驟(4)中提取液經(jīng)濃縮、醇沉、脫蛋白、脫色后所得脫色液濃縮后于截留量為8000的透析袋流水透析2-3天。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于步驟(4)中干燥為真空冷凍干燥。
【文檔編號(hào)】C08B37/00GK103788223SQ201410019678
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2014年1月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月16日
【發(fā)明者】王文亮, 張圣杰, 弓志青, 陳相艷, 孫卿, 宋莎莎, 程安瑋, 官琦, 宋康 申請人:山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品研究所