低凝固溫度瓊脂糖的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種低凝固溫度瓊脂糖的制備方法，包括以下步驟：瓊脂糖與去離子水按（w/v）20:1～30:1混合加熱溶膠；溶膠后加入NaBH4，在溫度為80℃下反應15min；加入0.5M?NaOH活化瓊脂糖羥基，隨后加入修飾劑硫酸二甲酯；反應結束后用鹽酸調節(jié)pH至中性，再用乙醇沉淀。本發(fā)明方法操作簡單，制備的瓊脂糖凝固溫度低，易于放大。該方法為低凝固溫度瓊脂糖的制備進一步工業(yè)化奠定了基礎，具有廣闊的應用前景。
【專利說明】低凝固溫度瓊脂糖的制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種屬于天然產物多糖純化后的化學修飾方法，尤其涉及一種低凝固溫度瓊脂糖的制備方法。
【背景技術】
[0002]在瓊脂糖的應用中，特別是現(xiàn)代生物技術研究中，都需要低凝固溫度瓊脂糖。從天然原藻中提取的瓊脂和瓊脂糖的凝固溫度在38 °C左右，許多生物熱敏物質在此環(huán)境中會失去生物活性。瓊脂糖凝膠達到一定的凝膠強度(1.0%，250g/cm2)才有實際應用價值。因而，制備低凝固溫度而又具有一定凝膠強度的瓊脂糖對于推進生物技術研究的發(fā)展十分必要。在國外，Guiseley發(fā)明了利用烷基化、羥烷基化、鏈烯基化、?；磻苽涞湍虦囟拳傊堑姆椒ā?br> [0003]瓊脂糖的原料來源廣泛，不同的原料提取制得的瓊脂糖在電內滲和硫酸根含量等方面會有差別，這樣會導致瓊脂糖單元中游離的-OH數(shù)量不同，其化學性質因而各不相同。
[0004]但是目前國內對由龍須菜制備的瓊脂糖進行化學修飾制備低凝固溫度瓊脂糖的報道還沒有，因 此對龍須菜瓊脂糖進行化學修飾不僅可以加大對龍須菜的深加工，而且也可以填補我國在此領域的空白。
[0005]自“龍須菜良種981”在廣東汕頭南澳島示范栽培獲得成功以來，龍須菜栽培面積不斷擴大，目前南澳龍須菜養(yǎng)殖形成規(guī)?；骄€產達到3.5噸，養(yǎng)殖周期從原產地春秋兩季各45天延長至5個月以上。全國龍須菜的栽培面積超過20萬畝，年產量15萬噸干品，成為繼海帶和紫菜之后第三大海藻栽培業(yè)。龍須菜瓊膠質量分數(shù)高達20%以上，所產瓊膠經改性后是江蘺中質量最好的，正逐漸取代石花菜成為瓊膠生產的主要原料。目前，據(jù)不完全統(tǒng)計，龍須菜瓊膠產量已占我國瓊膠產量的80%左右。同時生產的瓊膠可以進一步加工成瓊脂糖等聞附加值的廣品。

【發(fā)明內容】

[0006]本發(fā)明針對目前瓊脂糖凝固溫度高的不足，而提供一種低凝固溫度瓊脂糖的制備方法，包括以下步驟:
[0007](I)瓊脂糖與去離子水按(w/v) 20:1~30:1混合加熱溶膠；
[0008](2)溶膠后加入一定量NaBH4,在溫度為80°C下反應15min ；
[0009](3)加入0.5M NaOH活化瓊脂糖羥基，隨后加入修飾劑硫酸二甲酯(DMS)；
[0010](4)反應結束后用鹽酸調節(jié)pH至中性，再用乙醇沉淀。
[0011]進一步地，所述的瓊脂糖是由龍須菜制備而來。
[0012]進一步地，所述的NaBH4其濃度是2.0~1.5mg/ml。
[0013]進一步地，所述的瓊脂糖羥基活化過程中使用的0.5M NaOH體積是5~7ml。
[0014]進一步地，步驟3采用的硫酸二甲酯(DMS)體積為2.0~3.0ml0
[0015]進一步地，所述的修飾過程中反應溫度是60~80°C,時間45~60min。[0016]進一步地，所述的乙醇沉淀中，乙醇終(v/v)濃度為80%~70%，沉淀時間12h。
[0017]實施本發(fā)明，具有如下有益效果:
[0018]本發(fā)明方法操作簡單，制備的瓊脂糖凝固溫度低，易于放大。該方法為低凝固溫度瓊脂糖的制備進一步工業(yè)化奠定了基礎，具有廣闊的應用前景。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1是本發(fā)明中瓊脂糖修飾后紅外光譜圖；
[0020]圖2是本發(fā)明中瓊脂糖修飾前紅外光譜圖。
【具體實施方式】
[0021]為使本發(fā)明的目的、技術方案和優(yōu)點更加清楚，下面將結合附圖對本發(fā)明作進一步地詳細描述。
[0022]圖1、圖2分別是采用本發(fā)明方法對瓊脂糖進行修飾后和修飾前的紅外光譜圖，對甲基化的多糖進行紅外分析是為了檢測甲基化是否發(fā)生或完全。如果，紅外光譜圖中3440-3500cm_1處無吸收峰，即無羥基吸收峰，說明完全甲基化，但是瓊脂糖(agarose)上不同位置羥基活潑型是不同的，以6位羥基最易甲基化，一旦瓊脂糖的6位被甲基化后，其鄰位羥基的反應活性將降低，這使得瓊脂糖上的羥基不會完全甲基化。
[0023]
【權利要求】
1.一種低凝固溫度瓊脂糖的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:(1)將由龍須菜制備的瓊脂糖與去離子水按(w/v)20:1~30:1混合加熱溶膠； (2)溶膠后加入NaBH4,在溫度為80°C下反應15min； (3)加入0.5M NaOH活化瓊脂糖羥基，隨后加入修飾劑硫酸二甲酯； (4)反應結束后用鹽酸調節(jié)pH至中性，再用乙醇沉淀。
2.根據(jù)權利要求1所述的低凝固溫度瓊脂糖的制備方法，其特征在于:所述的他8比其濃度是2.0~1.5mg/ml。
3.根據(jù)權利要求1所述的低凝固溫度瓊脂糖的制備方法，其特征在于:所述的瓊脂糖羥基活化過程中使用的0.5M NaOH體積是5~7ml。
4.根據(jù)權利要求1所述的低凝固溫度瓊脂糖的制備方法，其特征在于:步驟3采用的硫酸二甲酯DMS體積為2.0~3.0ml0
5.根據(jù)權利要求1所述的低凝固溫度瓊脂糖的制備方法，其特征在于:所述的修飾過程中反應溫度是60~80°C，時間45~60min。
6.根據(jù)權利要求1所述的低凝固溫度瓊脂糖的制備方法，其特征在于:所述的乙醇沉淀中，乙醇終v/v濃度為80%~70%，沉淀時間12h。
【文檔編號】C08B37/12GK103936890SQ201410027327
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年1月21日 優(yōu)先權日:2014年1月21日
【發(fā)明者】杜虹, 谷洋洋, 陳潔輝, 麥偉群 申請人:汕頭大學, 汕頭市澄海區(qū)瓊膠廠