一種肝素鈉的高效提取工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種肝素鈉高效提取工藝，具體包括對腸粘膜與水的混合物進(jìn)行酶解，所述腸粘膜與水的比例為1:4，然后進(jìn)行常規(guī)吸附、遞增吸附、洗脫、沉淀純化、干燥后獲得肝素鈉。由于本發(fā)明的提取工藝中增加了二次酶解和遞增吸附，提高肝素鈉的收率，所得肝素鈉純度也有所提高，具體地，肝素鈉的收率可達(dá)到一億IU/1200-1400根豬小腸，相對于常規(guī)工藝提高30-45%；生產(chǎn)的肝素鈉純度可達(dá)到110-130IU/mg；本發(fā)明的高效提取工藝節(jié)約用水約40%，節(jié)約用鹽20-40%，用水量少，用鹽量少，經(jīng)濟(jì)效益高，是一種高效的肝素鈉提取工藝。
【專利說明】一種肝素鈉的高效提取工藝
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從動(dòng)物腸衣中提取肝素鈉的提取工藝，具體為一種肝素鈉的高效提取工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]肝素鈉是一種由動(dòng)物結(jié)締組織的肥大細(xì)胞產(chǎn)生的酸性粘多糖的硫酸酯類物質(zhì)，因其具有強(qiáng)抗凝作用，是防治深層靜脈血栓形成等血栓栓塞性疾病的首選藥物，隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)肝素鈉不僅有抗凝、抗血栓形成和調(diào)整血脂的作用，還有抗炎、抗過敏、抗病毒、抗癌等多種生物學(xué)功能。雖肝素鈉用于臨床已有60余年的歷史，但迄今還沒有一種能夠完全代替它的產(chǎn)品，所以它仍然是最重要的抗凝血和抗血栓的生化藥物，且目前只能從動(dòng)物的部分組織中提取，不能人工合成。我國是生豬養(yǎng)殖、屠宰和消費(fèi)大國，更是腸衣加工大國。腸粘膜是提取肝素鈉的最佳原料，國內(nèi)有大量致力于從腸粘膜中提取肝素鈉的廠家，大部分企業(yè)用鹽析法或酶鹽結(jié)合法提取肝素鈉。酶鹽結(jié)合法的主要程序是:先對腸粘膜物進(jìn)行酶解、過濾，然后用樹脂吸附、洗脫，再用酒精沉淀，純化后烘干即成。肝素鈉提取率多在一億IU/2300-2500根小腸之間(最好水平在一億IU/1600根小腸，僅個(gè)別企業(yè)可達(dá)到此水平)，所提肝素鈉的純度較低，常在70-90IU/mg，其中含有大量的蛋白質(zhì)，色澤黑褐，給臨床用藥的制備增加難度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種肝素鈉的高效提取工藝，具有收率高，肝素鈉純度高，用水量少，用鹽量少，經(jīng)濟(jì) 效益高的優(yōu)點(diǎn)。
[0004]為實(shí)現(xiàn)上述有益效果，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):一種肝素鈉的高效提取工藝，先對腸粘膜與水的混合物進(jìn)行酶解，所述腸粘膜與水的比例為1: 4，然后進(jìn)行常規(guī)吸附、遞增吸附、洗脫、沉淀純化、干燥后獲得肝素鈉，具體包括以下步驟:(I)采用腸粘膜與水的混合物進(jìn)行酶解，酶解采用的酶制劑為2709蛋白酶，酶解完成后，過濾雜質(zhì)；(2)常規(guī)樹脂吸附；(3) 二次酶解:常規(guī)樹脂吸附2~3h后，將小腸與吸附樹脂之間按照1:1的比例加入2709蛋白酶進(jìn)行分解；(4)遞增吸附:二次酶解之后，按照每根小腸I克加入樹脂進(jìn)行再次吸附；(5)洗脫:常規(guī)法樹脂洗脫；(6)沉淀:常規(guī)法肝素鈉沉淀；(7)純化；常規(guī)法肝素鈉純化；(8)干燥:常規(guī)法干燥即得到純品的肝素鈉。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案具有以下優(yōu)點(diǎn):
1.由于本發(fā)明的提取工藝中增加的二次酶解和遞增吸附，使得肝素鈉的收率提高，且純度也有所提高。本發(fā)明中提取肝素鈉的收率可達(dá)到一億IU/1200-1400根豬小腸；生產(chǎn)的肝素鈉純度可達(dá)到110-130IU/mg，比常規(guī)工藝提高30_45%。
[0006]2.用水量少，用鹽量少，經(jīng)濟(jì)效益高。相比較未引入二次酶解和遞增吸附工藝的提取工藝，本發(fā)明的高效提取工藝節(jié)約用水約40%，節(jié)約用鹽20-40%。【具體實(shí)施方式】
[0007]為了使本發(fā)明的目的及技術(shù)方案的優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實(shí)例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0008]一種肝素鈉的高效提取工藝，具體包括以下步驟:
(1)腸粘膜酶解:將1600根小腸腸粘膜加水后至10噸后放入反應(yīng)釜，升溫至55-65°C，保溫10-20min,按照每根小腸3-4g共計(jì)加入4.8-6.4kg的2709蛋白酶,并加入堿液調(diào)節(jié)pH值到8.5-9.5之間，之后以NaCl與腸粘膜之比為3:100，即每IOOkg腸粘膜與水的混合物中加入2.5-3kg的NaCl調(diào)節(jié)鹽度為2-2.5度，攪拌2_3h，升溫至75°C，停止攪拌10_20min后自然沉淀，過濾、收集濾液；
(2)常規(guī)樹脂吸附:將上一步驟中收集的濾液冷卻至65-70°C時(shí)加入羅門哈斯100型樹脂25-30Kg/釜，攪拌吸附2-3h ；
(3)二次酶解:在上述步驟2的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步按照1:1加入2709蛋白酶進(jìn)行分解；
(4)遞增吸附:二次酶解之后，按照每根小腸I克加入樹脂進(jìn)行再次吸附，攪拌吸附4-6h，將樹脂濾出并清洗干凈；
(5)洗脫:將上述遞增吸附中濾出的樹脂加入5%-7%的鹽水洗滌20-30min，所述的樹脂與鹽水的比例為1:1.2 ;之后過濾，再次加入24%的保和鹽水將樹脂洗脫3-4h，所述洗脫工藝中樹脂與保和鹽水的比例為0.8:1，再次過濾，收集濾液，之后將二次洗脫收集的濾液用于沉淀純化；
(6)沉淀:將上述步驟(5)中第一次和第二次洗脫的洗脫液合并，加入85%-95%乙醇至洗脫液乙醇濃度為40-45度，混`合攪拌后靜置沉淀9-10h，回收上清液并收集肝素鈉沉淀；
(7)純化:將步驟(6)中回收的肝素鈉沉淀用5%的NaCl鹽溶液溶解，離心分離或過濾去除固體雜質(zhì)后，再次加入85%-95%乙醇至洗脫液乙醇濃度為40-45度，混合攪拌后靜置沉淀9-10h，回收上清液并收集肝素鈉沉淀；
(8)干燥:常規(guī)法干燥即得到純品的肝素鈉。
【權(quán)利要求】
1.一種肝素鈉的高效提取工藝，工藝為先對腸粘膜與水的混合物進(jìn)行酶解，所述腸粘膜與水的比例為1:4，然后進(jìn)行常規(guī)吸附、遞增吸附、洗脫、沉淀純化、干燥后獲得肝素鈉，其特征在于具體包括以下步驟: (1)采用腸粘膜與水的混合物進(jìn)行酶解，酶解采用的酶制劑為2709蛋白酶，酶解完成后,過濾雜質(zhì)； (2)常規(guī)樹脂吸附； (3)二次酶解:常規(guī)樹脂吸附2~3h后，將小腸與吸附樹脂之間按照1:1的比例加入2709蛋白酶進(jìn)行分解； (4)遞增吸附:二次酶解之后，按照每根小腸I克加入樹脂進(jìn)行再次吸附； (5)洗脫:常規(guī)法樹脂洗脫； (6)沉淀:常規(guī)法肝素鈉沉淀； (7)純化；常規(guī)法肝素鈉純化； (8)干燥:常規(guī)法干燥即得到純品的肝素鈉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肝素鈉的高效提取工藝，其特征在于:所述特征一各步驟為: (1)腸粘膜酶解:將1600根小腸腸粘膜加水后至10噸后放入反應(yīng)釜，升溫至55-65°C，保溫10-20min,按照每根小腸·3-4g共計(jì)加入4.8-6.4kg的2709蛋白酶,并加入堿液調(diào)節(jié)pH值到8.5-9.5之間，之后以NaCl與腸粘膜之比為3:100，即每IOOkg腸粘膜與水的混合物中加入2.5-3kg的NaCl調(diào)節(jié)鹽度為2-2.5度，攪拌2_3h，升溫至75°C，停止攪拌10_20min后自然沉淀，過濾、收集濾液； (2)常規(guī)樹脂吸附:將上一步驟中收集的濾液冷卻至65-70°C時(shí)加入羅門哈斯100型樹脂25-30Kg/釜，攪拌吸附2-3h ； (3)二次酶解:在上述步驟2的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步按照1:1加入2709蛋白酶進(jìn)行分解； (4)遞增吸附:二次酶解之后，按照每根小腸I克加入樹脂進(jìn)行再次吸附，攪拌吸附4-6h，將樹脂濾出并清洗干凈； (5)洗脫:將上述遞增吸附中濾出的樹脂加入5%-7%的鹽水洗滌20-30min，所述的樹脂與鹽水的比例為1: 1.2 ;之后過濾，再次加入24%的保和鹽水將樹脂洗脫3-4h，所述洗脫工藝中樹脂與保和鹽水的比例為0.8:1，再次過濾，收集濾液，之后將二次洗脫收集的濾液用于沉淀純化； (6)沉淀:將上述步驟(5)中第一次和第二次洗脫的洗脫液合并，加入85%-95%乙醇至洗脫液乙醇濃度為40-45度，混合攪拌后靜置沉淀9-10h，回收上清液并收集肝素鈉沉淀； (7)純化:將步驟(6)中回收的肝素鈉沉淀用5%的NaCl鹽溶液溶解，離心分離或過濾去除固體雜質(zhì)后，再次加入85%-95%乙醇至洗脫液乙醇濃度為40-45度，混合攪拌后靜置沉淀9-10h，回收上清液并收集肝素鈉沉淀； (8)干燥:常規(guī)法干燥即得到純品的肝素鈉。
【文檔編號】C08B37/10GK103848929SQ201410106992
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2014年3月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月21日
【發(fā)明者】常國華, 郭婷婷 申請人:廣元市申達(dá)實(shí)業(yè)有限公司