一種用于生物蛋白分離的磁性微球的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種用于生物蛋白分離的磁性微球的制備方法，通過配制并使用適宜的乳化液對(duì)磁性微球基體進(jìn)行處理，并通過乳液聚合實(shí)現(xiàn)對(duì)磁性微球基體表面的修飾，從而獲得一種表面包覆有聚丙烯酸酯類聚合物層的磁性微球。其中，所述乳化液包括以下組分：丙烯酸單酯類化合物、丙烯酸二醇酯類化合物、引發(fā)劑以及任選地陰離子表面活性劑和水。當(dāng)用于生物蛋白分離時(shí)，該磁性微球在不影響與特定蛋白的連接能力的前提下，顯著減少了與其它蛋白的非特異性吸附，為實(shí)現(xiàn)高的蛋白特異性吸附的分離工程提供了新的選擇。
【專利說明】—種用于生物蛋白分離的磁性微球的制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物蛋白分離的【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種用于生物蛋白分離的磁性微球的制備方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]磁性納米粒子(例如Fe3O4納米粒子)既具有納米材料所特有的性質(zhì)，如粒徑小、比表面大、偶聯(lián)容量高等，又具有磁響應(yīng)性及超順磁性，可以在恒定磁場(chǎng)下聚集和定位、在交變磁場(chǎng)下吸收電磁波產(chǎn)生熱，此外磁性納米粒子還可以通過表面改性而帶有多種活性功能基團(tuán)(如-OH、-C00H、-NH3等)。因此，磁性納米粒子在例如生物分離、藥物釋放、高熱法制癌癥等生物醫(yī)藥領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景，從而受到了廣泛關(guān)注。
[0003]在生物和醫(yī)藥領(lǐng)域中，磁性微球通常指磁性高分子微球，其是一種近幾年發(fā)展起來的磁性材料，一般是采用將磁性無機(jī)粒子(例如Fe3O4等)與有機(jī)高分子材料相結(jié)合形成具有磁性的復(fù)合微球?，F(xiàn)有磁性微球通過其表面改性等方式即可達(dá)到賦予其表面多種功能基的目的，從而其已被廣泛運(yùn)用到生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)和分離工程等領(lǐng)域中。特別是在生物分離純化、免疫分析、以及生物檢測(cè)等領(lǐng)域，顯示出磁性微球使用方便、快捷、高效等特點(diǎn)。
[0004]用于生物分離的磁性微球通常需要具備以下幾個(gè)性質(zhì):(I)超順磁性；(2)粒徑均一 ；(3)在水相中分散性好；(4)非特異性吸附低；(5)具有可供修飾的表面化學(xué)基團(tuán)。磁性微球在蛋白質(zhì)分離方面也具有明顯的優(yōu)點(diǎn):磁分離技術(shù)可用于大規(guī)模操作；分離過程可以直接在含有懸浮的固體粒子或另外的生物粒子的原始樣品中進(jìn)行；分離過程簡(jiǎn)單迅速。
[0005]然而，蛋白質(zhì)在磁性微球表面上的非特異性吸附是采用磁性微球進(jìn)行生物分離中的一個(gè)致命的事件，不僅會(huì)降低微球的特異性分離效果，而且在檢疫測(cè)定中會(huì)增加背景信號(hào)，降低信噪比。通常，阻止蛋白對(duì)磁性納米粒子或磁性微球的非特異性吸附的策略是對(duì)其表面進(jìn)行化學(xué)修飾。
[0006]專利文獻(xiàn)CN102746529A公開了一種乳液聚合制備單分散磁性微球的方法，但是該方法制備的磁性微球?qū)Φ鞍踪|(zhì)的非特異性吸附高，在免疫檢測(cè)中的性噪比不佳，且成本較高，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0007]專利文獻(xiàn)CN92105584.6公開了一種通過懸浮聚合制備免疫磁性微球的方法,在該方法中，將Y -Fe2O3或Fe3O4磁粉表面用長(zhǎng)鏈脂肪酸進(jìn)行改性處理，然后在苯乙烯溶液中進(jìn)行懸浮聚合，得到免疫磁性微球。該方法制備的磁性微球雖然成本低，但是對(duì)蛋白質(zhì)的非特異性吸附也較高，而且在水中分散性不佳。
[0008] 王羽等人采用多孔Y-Fe2O3OS12磁性硅膠作為基質(zhì)，首先環(huán)氧基修飾，然后采用粒徑約為50 μ m聚合物酸將外表面的環(huán)氧基先開環(huán)形成二醇基，然后再以十八胺、亞硫酸氫鈉及三乙胺鹽酸鹽分別與內(nèi)表面殘余的環(huán)氧基進(jìn)行反應(yīng)，最終得到內(nèi)表面依次為十八烷基、磺酸基和季銨鹽基而外表面為二醇基的新型磁性限進(jìn)材料(王羽，基于磁性微球限進(jìn)功能化的新型生物樣品預(yù)處理技術(shù)[D]，天津大學(xué)，2012年)。該材料外表面的二醇基可以起到排阻蛋白的作用，而且內(nèi)表面為磺酸基和季銨鹽基的磁性限進(jìn)材料對(duì)小分子物質(zhì)的吸附量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于內(nèi)表面為十八烷基的材料。然而，該論文中公開的磁性微球的制備工藝較為復(fù)雜，其對(duì)生物蛋白的特異性分離效果還有待進(jìn)一步考究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的是提供一種磁性微球，該磁性微球能夠用于生物蛋白的分離并顯著地減少或避免蛋白非特異性吸附。
[0010]本發(fā)明的另一個(gè)重要的目的是提供如上所述的磁性微球的制備方法。在該方法中，本發(fā)明的發(fā)明人基于大量的研究和試驗(yàn)，選擇合適的乳化液組分及其含量，結(jié)合具有磁性的基體，從而在不影響連接特定蛋白的同時(shí)又獲得能夠減少或避免與其它蛋白發(fā)生非特異性吸附的磁性微球。
[0011]此外，本發(fā)明還提供了如上所述的磁性微球在免疫檢測(cè)方面的應(yīng)用。
[0012]根據(jù)本發(fā)明，提供了一種用于生物蛋白分離的磁性微球的制備方法，包括以下步驟:步驟a):制備乳化液；步驟b):將具有磁性的磁性微球基體分散于所述乳化液中，得到分散體系；步驟c):將所述分散體系進(jìn)行聚合反應(yīng)；其中，所述磁性微球基體為經(jīng)過表面修飾使其表面帶有活性基團(tuán)的磁性微粒； 所述乳化液包括以下組分:丙烯酸單酯類化合物、丙烯酸二醇酯類化合物和引發(fā)劑。所述引發(fā)劑優(yōu)選為水溶性引發(fā)劑。其中，丙烯酸單酯類化合物充當(dāng)聚合單體，丙烯酸二醇酯類化合物起到交聯(lián)劑的作用。在上述方法中所使用的磁性微球基體經(jīng)改性處理后獲得特定種類的官能團(tuán)，且在引發(fā)劑的作用下丙烯酸單酯類和交聯(lián)劑能夠發(fā)生交聯(lián)聚合而包覆在磁性微球基體表面，從而得到所述磁性微球。與現(xiàn)有技術(shù)不同，本發(fā)明采用上述乳化液對(duì)磁性微球基體進(jìn)行修飾并不是為了引入活性基團(tuán)，同時(shí)通過聚合物承載所述活性基團(tuán)，而是在磁性微球基體已帶有活性基團(tuán)的基礎(chǔ)上，通過特定的乳化液乳化聚合形成的聚合物層對(duì)磁性微球基體作進(jìn)一步的修飾改性，從而使磁性微球在不影響通過活性基團(tuán)特異性連接特定蛋白(例如抗原)的情況下，還可以減少或避免與其它蛋白的非特異性吸附。本發(fā)明的技術(shù)原理可以通過以下說明進(jìn)行解釋，但這并不能構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限定。通過本發(fā)明提供的方法制備得到的包覆聚丙烯酸酯類聚合物的磁性微球，其表面的空洞、凹陷等缺陷得到填補(bǔ)(而這些空洞、凹陷等缺陷正是使得具有一定形狀(例如Y形)的干擾抗體被非特異性吸附的重要原因)，表面更為光滑，因此對(duì)其它蛋白的非特異性吸附大為減少。
[0013]在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述乳化液還包括陰離子表面活性劑和水。丙烯酸單酯類化合物與丙烯酸二醇酯類化合物疏水性強(qiáng)，而磁性微球基體的親水性好，這樣磁性微球與丙烯酸單酯類化合物與丙烯酸二醇酯類化合物得不到充分的接觸，當(dāng)加入水溶性好的表面活性劑時(shí)，不僅有利于使磁性微球分散性更好，而且使得聚合物易于吸附到磁性微球基體表面進(jìn)行聚合，通過對(duì)磁性微球基體的包覆，也彌補(bǔ)了微球表面的某些物理缺陷。
[0014]在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述乳化液包括基于乳化劑總重量計(jì)為0.5-30重量％的丙烯酸單酯類化合物、0.05-5重量％的丙烯酸二醇酯類化合物、0.2-2重量％的水溶性引發(fā)劑、0.1-1重量％的水溶性陰離子表面活性劑，以及62-99重量％的水。其中，丙烯酸單酯類化合物的含量?jī)?yōu)選為0.1-15重量％，還優(yōu)選為2-10%。丙烯酸二醇酯類化合物的含量?jī)?yōu)選為0.1-2%。其中，所述丙烯酸單酯類化合物的量進(jìn)一步優(yōu)選為0.5-20重量％，還優(yōu)選為2-15重量％。此外，應(yīng)理解，如上所述“丙烯酸單酯類化合物”不限于單一化合物，可以是丙烯酸單酯類化合物的任意混合物。上述“丙烯酸二醇酯類化合物”等組分與此類似。另外，上述各化合物的特定種類與含量不可單獨(dú)看待，應(yīng)從整體上考慮，通過乳化液各成分及其特定含量的協(xié)同作用，使得乳化液對(duì)修飾磁球表面效果達(dá)到最佳。例如，丙烯酸二醇酯類化合物含量低于0.05%時(shí)，與單體的交聯(lián)聚合反應(yīng)不佳，導(dǎo)致對(duì)磁球的表面修飾效果不理想，最終達(dá)不到本發(fā)明提高信噪比的技術(shù)效果；而當(dāng)其含量過高，余量的丙烯酸二醇酯類化合物可能與磁性微球基體上的活性基團(tuán)作用，降低后期磁性微球與抗原蛋白連接的能力，更不利于檢測(cè)。同樣，對(duì)丙烯酸單酯類化合物含量的限定原因亦如上所述。在本發(fā)明中，通過選擇這樣的乳化液配方，經(jīng)乳液聚合之后，在磁性微球基體的表面形成聚合物層，該聚合物層既不影響磁性微球與特定蛋白(通過活性基團(tuán))的連接能力，同時(shí)又能減少該磁性微球與其它蛋白的非特異性作用，還能保證磁性微球的物化性能的穩(wěn)定性。這些有益效果例如可以從下面的實(shí)施例得到驗(yàn)證。
[0015]在本發(fā)明的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，為了獲得合適厚度的聚合層以及優(yōu)化聚合反應(yīng)，使得交聯(lián)劑與單體協(xié)同增效且不帶來副產(chǎn)物，從而更好地保持磁性微球活性基團(tuán)與特定蛋白的連接能力，同時(shí)減少磁性微球與其它蛋白的非特異性吸附，丙烯酸二醇酯類化合物的重量含量為丙烯酸單醇酯類化合物的重量含量的5-15%，還優(yōu)選為10%。
[0016]適用于本發(fā)明的丙烯酸單酯類化合物包括但不限于甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸羥乙酯、甲基丙烯酸正丙酯、甲基丙烯酸羥丙酯、甲基丙烯酸正丁酯和甲基丙烯酸羥丁酯。適用于本發(fā)明的丙烯酸二醇酯類化合物包括但不限于乙二醇二甲基丙烯酸酯、1，3_丙二醇二甲基丙烯酸酯、1，3_ 丁二醇二甲基丙烯酸酯、1，4_ 丁二醇二甲基丙烯酸酯、新戊二醇二甲基丙烯酸酯、和1，6_己二醇二甲基丙烯酸酯。適用于本發(fā)明的水溶性引發(fā)劑包括但不限于過硫酸鈉、過硫酸鉀和過硫酸胺；適用于本發(fā)明的陰離子表面活性劑包括但不限于十二烷基硫酸鈉、十二烷基磺酸鈉、十六烷基磺酸鈉和正癸基硫酸鈉。所使用的水優(yōu)選為純化水。
[0017]在本發(fā)明中，為了不影響磁性微球與后期特定蛋白的連接能力的同時(shí)減少該磁性微球與其它蛋白的非特異性吸附作用，且不影響磁性微球本身的物化性能，例如磁性、水相中的分散性等，本發(fā)明通過使乳化液中的丙烯酸酯類化合物和丙烯酸二醇酯類化合物發(fā)生交聯(lián)聚合反應(yīng)，從而最終在磁性微球基體表面形成表面包覆聚丙烯酸酯類聚合物層的磁性微球。而磁性微球在既不影響與特定蛋白連接的同時(shí)又需要減少后續(xù)與其它蛋白的非特異性吸附的情況下，就需要在丙烯酸酯類化合物和丙烯酸二醇酯類化合物發(fā)生交聯(lián)聚合反應(yīng)之前對(duì)磁性微球基體進(jìn)行表面引入活性基團(tuán)。所述活性基團(tuán)能與生物蛋白鍵合。所述活性基團(tuán)例如為巰基、羥基、羧基、氨基、環(huán)氧基、醛基、異氰酸酯基、氰酸酯基、氰基、異氰基、烯丙基、芐基、丙烯基、馬來酰亞胺基、N-羥基琥珀酰亞胺酯基、羰基、酚羥基、磺酸基、肟基(包括醛肟、酮肟等)、偶氮基、異氰基、腙基以及上述所有官能團(tuán)的衍生基團(tuán)。本發(fā)明所使用的磁性微球基體可以是根據(jù)已知的方法對(duì)未修飾的磁性微粒進(jìn)行表面改性而獲得，也可以通過直接購(gòu)買獲得。所述未修飾的磁性微粒例如可以是Y-Fe2O3, MeFe2O3(Me = Co、Mn、Ni)，F(xiàn)e3O4, N1、Co、Fe、Fe-Co和N1-Fe合金等納米粒子,優(yōu)選為Y Fe2O3和/或Fe3O4納米粒子。合適的磁性微球基體例如可以是Dynabeads (挪威Dynal公司生產(chǎn))、Estapor微球(貨號(hào) Ml-070/60, Merck 公司生產(chǎn))、Sera-Mag 磁珠(貨號(hào) 2415-2105-050250, ThermoScientific 公司生產(chǎn))或 Dynabeads 磁珠(貨號(hào) M-280, LifeTechnologies 公司生產(chǎn))等。[0018]本發(fā)明所使用的磁性微球基體的粒徑大小優(yōu)選為0.1-5 μ m。在這個(gè)粒徑范圍的磁性微球基體既在水相中具有良好的分散性，又保證了較大的比表面積。磁性微球基體可以是實(shí)心的或空心的，還可以是多孔的。磁性微球基體的形狀優(yōu)選為球形。球形的磁性微球基體，其表面積大，吸附效果最佳。
[0019]在分散體系中，磁性微球基體的濃度太大容易產(chǎn)生聚集沉淀，濃度太小則乳化聚合效果不佳、生產(chǎn)效率低。因此，本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)后，將分散體系中的磁性微球基體濃度選擇為10-400mg/mL,并優(yōu)選為10-200mg/mL,還優(yōu)選為10-150mg/mL,進(jìn)一步優(yōu)選為20-100mg/mL。在該濃度范圍中，磁性微球基體能夠在分散體系中均勻穩(wěn)定地分散，又能獲得較佳的聚合效果。
[0020]為保證包覆在磁性微球基體表面的聚丙烯酸酯類聚合物層具有合適的厚度，且對(duì)磁性微球基體表面修飾效果最佳，所述方法的步驟c)中的聚合反應(yīng)優(yōu)選在60-90°C，更優(yōu)選在70-75°C下進(jìn)行；還優(yōu)選在攪拌下進(jìn)行聚合反應(yīng)10_40h，更優(yōu)選為15-30h。
[0021]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法還包括步驟c)之后的步驟d):將步驟c)得到的產(chǎn)物進(jìn)行固液分離，洗滌固體，得到所述磁性微球。
[0022]在一些具體實(shí)施方案中，在步驟a)中，將所述乳化液的組分相互混勻來制備所述乳化液，例如通過攪拌或超聲使乳化液的固體組分溶解，并任選地采用均質(zhì)化處理(例如采用高壓勻質(zhì)機(jī)、高剪切乳化劑等進(jìn)行均質(zhì)化)，使乳化液的組分相互充分混勻得到乳化液；在步驟b)中，通過超聲使磁性微球基體分散于所述乳化液中；在步驟d)中，所述固液分離采用磁分離或離心；所 述洗滌依次以有機(jī)溶劑和水洗滌數(shù)次；所述有機(jī)溶劑選自醇類(例如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇等)、酯類(例如乙酸乙酯、乙酸丁酯等)和鹵代烴中的一種或多種。
[0023]本發(fā)明還提供了一種根據(jù)如上所述的方法制備得到的磁性微球，其包括具有磁性的磁性微球基體和包覆所述磁性微球基體的聚丙烯酸酯類。聚丙烯酸酯類材料的包覆能夠彌補(bǔ)磁性微球基體表面的某些缺陷，從而減少后續(xù)的非特異性吸附，但不影響蛋白的連接能力。
[0024]在本發(fā)明的磁性微球中，表面包覆的聚丙烯酸酯類聚合物的厚度尤為重要，厚度太大則容易將磁性微球基體表面的活性基團(tuán)遮蓋，從而影響其與后續(xù)的蛋白連接能力，厚度太小，則起不到對(duì)微球基體表面的物理修飾作用，從而達(dá)不到減少非特異性吸附的能力。通過本發(fā)明的發(fā)明人的大量研究，制備得到的磁性微球表面包覆的聚丙烯酸酯類厚度為
0.001-5 μ m,優(yōu)選為5nm-1000nm，還優(yōu)選為10_500nm，進(jìn)一步優(yōu)選為lO-lOOnm，更優(yōu)選為50nm-100nm。該厚度范圍的聚丙烯酸酯類聚合物層有利于不影響后期磁性微球表面基團(tuán)與特定蛋白的連接，減少或避免磁性微球與其它蛋白的非特異性吸附，以及避免影響到磁性微球本身的物化性質(zhì)，例如磁性。
[0025]此外，本發(fā)明還提供了根據(jù)如上所述的方法制備得到的磁性微球在生化檢測(cè)中的應(yīng)用，例如在免疫檢測(cè)，尤其是在化學(xué)發(fā)光免疫定量分析中的應(yīng)用。此類應(yīng)用，例如應(yīng)用于人血清中各種特異性總抗體、特異性IgG、IgM類抗體的化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)。
[0026]在一些具體的應(yīng)用中，本發(fā)明提供的磁性微球可用于對(duì)弓形蟲IgG抗體、弓形蟲IgM抗體、谷氨酸脫羧酶抗體、風(fēng)疹病毒IgG抗體、風(fēng)疹病毒IgM抗體、巨細(xì)胞病毒IgG抗體、巨細(xì)胞病毒IgM抗體、I/II型單純胞疹病毒IgG抗體、I/II型單純胞疹病毒IgM抗體、EB病毒IgG抗體和EB病毒IgM抗體中的至少一種的化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)。
[0027]本發(fā)明提供的磁性微球的制備方法，通過配制并使用適宜的乳化液對(duì)磁性微球基體進(jìn)行處理，并通過乳液聚合實(shí)現(xiàn)對(duì)磁性微球基體表面的修飾，從而獲得一種可用于生物分離的磁性微球。當(dāng)用于生物蛋白分離時(shí)，該磁性微球在不影響與特定蛋白的連接能力的前提下，顯著減少了與后續(xù)的其它蛋白的非特異性吸附，解決了生物蛋白分離中面臨的一個(gè)主要問題，為實(shí)現(xiàn)高的蛋白特異性吸附的分離工程提供了新的選擇。通過該方法獲得的磁性微球具有良好的分散性，其適用于大規(guī)模的操作，分離過程簡(jiǎn)單易行。此外，該制備方法的操作步驟簡(jiǎn)單，所采用的原料廉價(jià)易得，因此具有很大的利用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)意義。
【具體實(shí)施方式】
[0028]下面將通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明，但應(yīng)理解，本發(fā)明的范圍并不限于此。
[0029]實(shí)施例1
[0030]I)磁性微球基體的制備
[0031]按照中國(guó)專利CN92105584中的實(shí)施例1制備用于本實(shí)施例的帶有羧基官能團(tuán)的磁性微球基體。
[0032]2)乳化液的制備
[0033]乳化液的組分及其質(zhì)量百分比如下:
[0034]
【權(quán)利要求】
1.一種用于生物蛋白分離的磁性微球的制備方法，包括以下步驟: 步驟a):制備乳化液: 步驟b):將具有磁性的磁性微球基體分散于所述乳化液中，得到分散體系； 步驟c):將所述分散體系進(jìn)行聚合反應(yīng)； 其中， 所述磁性微球基體為經(jīng)過表面修飾使其表面帶有活性基團(tuán)的磁性微粒； 所述乳化液包括以下組分:丙烯酸單酯類化合物、丙烯酸二醇酯類化合物和引發(fā)劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述乳化液還包括陰離子表面活性劑和水。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述乳化液包括基于乳化劑總重量計(jì)為0.5-30重量％的丙烯酸單酯類化合物、0.05-5重量％的丙烯酸二醇酯類化合物、0.2-2重量％的水溶性引發(fā)劑、0.1-1重量％的水溶性陰離子表面活性劑，以及62-99重量％的水。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于， 所述丙烯酸單酯類化合 物選自甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸羥乙酯、甲基丙烯酸正丙酯、甲基丙烯酸羥丙酯、甲基丙烯酸正丁酯和甲基丙烯酸羥丁酯中的一種或多種； 所述丙烯酸二醇酯類化合物選自乙二醇二甲基丙烯酸酯、1，3_丙二醇二甲基丙烯酸酯、1，3-丁二醇二甲基丙烯酸酯、1，4_ 丁二醇二甲基丙烯酸酯、新戊二醇二甲基丙烯酸酯和1，6_己二醇二甲基丙烯酸酯中的一種或多種； 所述水溶性引發(fā)劑選自過硫酸鈉、過硫酸鉀和過硫酸胺中的一種或多種； 所述陰尚子表面活性劑選自十烷基硫酸納、十烷基橫酸納、十TK烷基橫酸納和正癸基硫酸鈉中的一種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，在所述乳化液中，丙烯酸二醇酯類化合物的重量含量為丙烯酸單醇酯類化合物的重量含量的5-15%。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述丙烯酸二醇酯類化合物的重量含量為所述丙烯酸單醇酯類化合物的重量含量的10%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述活性基團(tuán)能與生物蛋白鍵合。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述活性基團(tuán)選自下列組中的至少一種:巰基、羥基、羧基、氨基、環(huán)氧基、醛基、異氰酸酯基、氰酸酯基、氰基、異氰基、烯丙基、芐基、丙烯基、馬來酰亞胺基、N-羥基琥珀酰亞胺酯基、羰基、酚羥基、磺酸基、肟基、偶?xì)饣③櫥?，以及其衍生基團(tuán)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述磁性微球基體的粒徑大小為 0.1-5 μ m。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述分散體系中的磁性微球基體的濃度為10-150mg/mL。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，步驟c)中的聚合反應(yīng)在60-90°C下進(jìn)行；聚合反應(yīng)時(shí)間為10-40h。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，在步驟a)中，將所述乳化液的組分相互混勻來制備所述乳化液；并且所述方法還包括步驟C)之后的步驟d):將步驟C)得到的產(chǎn)物進(jìn)行固液分離，洗滌固體，得到所述磁性微球；其中，在步驟d)中，所述固液分離采用磁分離或離心；所述洗滌依次以有機(jī)溶劑和水洗滌數(shù)次；所述有機(jī)溶劑選自醇類、酯類和鹵代烴中的一種或多種。
13.—種根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的方法制備的磁性微球,其包括具有磁性的磁性微球基體和包覆所述磁性微球基體的聚丙烯酸酯類。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的磁性微球，其特征在于，所述聚丙烯酸酯類厚度為5nm-1000nmo
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的磁性微球，其特征在于，所述聚丙烯酸酯類厚度為1nm-1OOnm0
16.—種根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的方法制備的磁性微球在化學(xué)發(fā)光免疫定量分析中的應(yīng)用。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的應(yīng)用，其特征在于，所述磁性微球用于人血清中各種特異性總抗體、特異性IgG、IgM類抗體的化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的應(yīng)用，其特征在于，所述磁性微球用于對(duì)弓形蟲IgG抗體、弓形蟲IgM抗體、谷氨酸脫羧酶 抗體、風(fēng)疹病毒IgG抗體、風(fēng)疹病毒IgM抗體、巨細(xì)胞病毒IgG抗體、巨細(xì)胞病毒IgM抗體、I/II型單純胞疹病毒IgG抗體、I/II型單純胞疹病毒IgM抗體、EB病毒IgG抗體和EB病毒IgM抗體中的至少一種的化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)。
【文檔編號(hào)】C08F2/26GK104031201SQ201410232656
【公開日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2014年5月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月29日
【發(fā)明者】饒微, 杜凱, 趙莉 申請(qǐng)人:深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司