一種制備雌二醇分子印跡磁性微球的方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于材料科學(xué)與工程和環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域，具體來說是一種利用可控活性聚合一鍋合成制備雌二醇分子印跡磁性微球的方法。利用可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移可控活性自由基聚合與沉淀聚合的一鍋合成方式，以17β-雌二醇為模板的分子印跡與磁敏感材料相結(jié)合，即得到雌二醇分子印跡聚合物磁性微球。本發(fā)明所得微球?qū)?7β-雌二醇具有高的吸附容量、快速的動態(tài)特性、優(yōu)異的識別選擇性，并在外加磁場左右下方便、快速分離，重復(fù)使用性能好。本發(fā)明充分利用可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移可控活性聚合的特性，采用分步投料一鍋操作，制備核殼結(jié)構(gòu)印跡微球，有效簡化了表面印跡過程、縮短了實驗周期，大大提高了識別速率和增加了印跡容量。
【專利說明】一種制備雌二醇分子印跡磁性微球的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于材料科學(xué)與工程和環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域，具體來說是一種利用可控活性聚合 一鍋合成制備雌二醇分子印跡磁性微球的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 17 β_雌二醇是最重要的酚類環(huán)境內(nèi)分泌干擾激素之一，其苯甲酸酯是決定性激 素效價國際單位的基準(zhǔn)物質(zhì)之一。除了調(diào)節(jié)和維持人體正常的內(nèi)分泌系統(tǒng)平衡，17 β -雌 二醇在保持骨骼健康和保護心血管系統(tǒng)方面也扮演著重要角色，并且能影響人的行為和情 緒。然而，越來越多的證據(jù)顯示，稍微過量的17β-雌二醇就會引發(fā)不良生理反應(yīng)，破壞內(nèi) 分泌系統(tǒng)，誘發(fā)癌癥甚至造成死亡。17 β -雌二醇的低劑量高危害性引起人們的廣泛關(guān)注， 亟需對其進行高效識別和檢測，而具有高選擇富集能力的前處理材料和技術(shù)隨之成為研究 的重點。
[0003] 目前，基于分子印跡技術(shù)的分子印跡聚合物（molecularly imprinted polymers, MIPs)，由于選擇性高、穩(wěn)定性好及制備簡單，已作為一種新型固相吸附材料，廣泛應(yīng)用于 環(huán)境樣品等復(fù)雜基體中痕量分析物的高選擇性分離與富集。分子印跡技術(shù)是將模板分子 (目標(biāo)識別分子）與功能單體通過一定的方式形成超分子復(fù)合物，在交聯(lián)劑的存在下，通 過一定的引發(fā)方式引發(fā)生成高度交聯(lián)的高分子聚合物，然后用適當(dāng)?shù)娜軇┫疵撊コ０宸?子，從而形成對模板分子或其相似分子在形狀、大小、功能基團上特異性結(jié)合的聚合物，即 MIPs。MIPs具有親合性和選擇性高、化學(xué)穩(wěn)定性好、使用壽命長、費用低等優(yōu)點，在分離純 化、化學(xué)催化、分析傳感等領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。但是，如何簡化制備步驟以加快實驗進程， 如何提高聚合產(chǎn)率和產(chǎn)物的穩(wěn)定性，如何進一步提高印跡容量，如何提高分子印跡材料的 洗脫和分離效率等問題，仍然制約著MIPs的制備和應(yīng)用。
[0004] 磁性分子印跡聚合物（Magnetic MIPs，M-MIPs)是將磁性材料和分子印跡技術(shù)結(jié) 合形成的一種新型功能材料。M-MIPs可以在外加磁場的作用下進行分離，從而達到主動識 別和方便快速分離的目的。M-MIPs也可作為固相萃取吸附劑，節(jié)省了傳統(tǒng)固相萃取填料裝 柱的時間和材料用量，且具有優(yōu)良的選擇性，在樣品前處理領(lǐng)域富有發(fā)展?jié)摿?。另一方面?可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移（RAFT)可控活性沉淀聚合，操作簡單、容易控制，避免了復(fù)雜的表面 修飾；分步投料一鍋操作，可有效簡化表面印跡過程，縮短實驗周期。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種結(jié)合了可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移可控活性自由基聚合 和沉淀聚合一鍋合成制備雌二醇印跡磁性微球的方法。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用技術(shù)方案為：
[0007] -種制備雌二醇分子印跡磁性微球的方法，微球利用可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移可控 活性自由基聚合與沉淀聚合的一鍋合成方式，以17 β -雌二醇為模板的分子印跡與磁敏感 材料相結(jié)合，即得到雌二醇分子印跡聚合物磁性微球。
[0008] 進一步的說，將Fe304磁材料經(jīng)Si02修飾，而后在Si0 2修飾的Fe304磁材料表面活 化同時引入活性自由基，得活化修飾的Fe 304@Si02微粒，待用；
[0009] 以17 β-雌二醇作為模板分子與功能單體丙烯酰胺加入到氯仿和乙腈溶液中預(yù) 聚合，然后依次加入上述活化修飾的Fe30 4@Si02微粒、交聯(lián)劑和引發(fā)劑，通氮回流反應(yīng)，洗 滌、干燥并收集產(chǎn)物；產(chǎn)物用甲醇和乙酸溶液進行索氏提取以洗脫17β_雌二醇，干燥即得 雌二醇分子印跡磁性微球。
[0010] 更進一步的說，
[0011] a. Fe304磁材料制備：將FeCl3 · 6Η20溶于乙二醇中，并以無水乙酸鈉作為還原劑， 聚乙二醇為表面活性劑，充分混勻后于密閉水熱釜中反應(yīng)，洗滌后干燥收集黑色產(chǎn)物即得 Fe304磁材料；
[0012] b. Fe304@Si02核層材料的制備：將上述粒子分散在無水乙醇和去離子水中，加入氨 水、正硅酸乙酯，攪拌反應(yīng)，洗滌后干燥收集產(chǎn)物即得Fe 304@Si02 ;
[0013] c. Fe304@Si02核層材料的表面修飾：
[0014] (1)表面活化：加入鏈轉(zhuǎn)移劑4-氯甲基苯基三氯硅烷，將上述所得Fe30 4@Si02粒子 分散于無水甲苯中，再加入三乙胺反應(yīng)，洗滌、干燥并收集產(chǎn)物；
[0015] (2)活性自由基引入：苯基溴化鎂與四氫呋喃混勻，加入二硫化碳后反應(yīng)，向其中 加入上述所得活化產(chǎn)物，在氮氣氛圍中回流反應(yīng)，洗滌、干燥并收集產(chǎn)物；
[0016] d.印跡殼層的制備：首先將模板分子17 β_雌二醇與功能單體丙烯酰胺加入到氯 仿和乙腈溶液中自組裝預(yù)聚合，然后依次加入上述活化修飾的Fe30 4@Si02微粒、交聯(lián)劑二乙 烯苯，引發(fā)劑偶氮二異丁腈，通氮回流反應(yīng)，洗滌、干燥并收集產(chǎn)物，產(chǎn)物用甲醇和乙酸溶 液進行索氏提取以洗脫17 β-雌二醇，干燥即得雌二醇分子印跡磁性微球。
[0017] 所述步驟a.中將1. 0-2. 0g的FeCl36H20充分溶解于80-120mL乙二醇中，加入 2. 0-3. 0g無水乙酸鈉，攪拌均勻后加入2. 0-4. 0g聚乙二醇4000,在40-70°C的水浴中攪 拌至充分溶解；然后將溶液全部轉(zhuǎn)移至聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，在160-240°C的烘箱中反應(yīng) 8-14h ;反應(yīng)后冷卻至室溫，分別用無水乙醇和去離子水洗滌3-6次，然后20-30°C真空干燥 即得到黑色Fe30 4磁性材料。
[0018] 所述步驟b.中稱取1. 0-2. 0g上述Fe304磁性材料，分散于40-80mL乙醇和10-30mL 去離子水中，超聲處理l〇_30min ;然后邊機械攪拌邊逐滴加入0. 5-2mL氨水、l-3mL正硅酸 乙酯，繼續(xù)反應(yīng)18-26h ;然后洗滌干燥，即得Fe304@Si02核層材料，將所得產(chǎn)物密封保存，待 用。
[0019] 所述Fe304@Si02核層材料用去離子水洗滌3-6次，用無水乙醇洗3-6次，再用去離 子水洗3-6次，30-50°C真空干燥20-28h，收集待用。
[0020] 所述步驟c.中將l-3mL的4-氯甲基苯基三氯硅烷加入到50-60mL的無水甲苯中 并搖勻，然后加入〇. 5-2g所述的Fe304@Si02并超聲處理10-30min后，緩慢加入0. 5-2mL三 乙胺與3-6mL無水甲苯的混合溶液，在氮氣保護下50-70°C回流18-28h進行表面活化反應(yīng)， 反應(yīng)后洗滌、干燥、收集表面活化產(chǎn)物；
[0021] 上述所得產(chǎn)物依次用丙酮洗滌3-6次，甲醇洗滌3-6次，然后35-50°C真空干 燥18-28h ;第二步自由基活化反應(yīng)結(jié)束后用甲醇洗滌3-6次，用氯仿洗滌3-6次，然后 35-50°C真空干燥18-28h，待用。
[0022] 將10-16mL苯基溴化鎂加入到100-150mL精制過的四氫呋喃中，再加入3-4mL二 硫化碳后于40-50°C下反應(yīng)l_3h ;而后加入0. 3-1. 0g的上述表面活化產(chǎn)物，在氮氣保護下 55-70°C自由基活化反應(yīng)36-50h，洗滌干燥并收集產(chǎn)物。
[0023] 所述表面活化反應(yīng)后依次用丙酮洗滌3-6次，甲醇洗滌3-6次，然后35_50°C真 空干燥18-28h ;所述自由基活化反應(yīng)結(jié)束后用甲醇洗滌3-6次，用氯仿洗滌3-6次，然后 35-50°C 真空干燥 18-28h。
[0024] 所述步驟d.中將6-10mmol丙烯酰胺和l_3mmol的17 β -雌二醇溶解于40_60mL 氯仿/乙腈溶液（v/v, 1:4)中，在冰水浴中反應(yīng)攪拌過夜，然后加入200-250mg上述活化 修飾的Fe304@Si0 2，在50-70°C緩慢加入30-50mmol二乙烯苯和40-60mg偶氮二異丁腈， 25-40min后升溫至60-80°C，通氮氣反應(yīng)18-30h ;
[0025] 將上述產(chǎn)物分別用丙酮和氯仿清洗3-6次，然后用濾紙包好進行索氏提取 30-40h，以甲醇和乙酸溶液（v/v，9 :1)為洗脫液，每隔10-16h更換上述洗脫液（S卩，甲醇和 乙酸溶液（v/v，9 :1))，最后25-50°C烘干，待用。
[0026] 所述微球用于對17 β -雌二醇的檢測。
[0027] 本發(fā)明所具有的優(yōu)點：
[0028] 本發(fā)明采用可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移（RAFT)可控活性沉淀聚合一鍋法制備雌二醇 分子印跡聚合物，操作簡單快速、反應(yīng)條件溫和、經(jīng)濟環(huán)保，并且產(chǎn)率較高、結(jié)果穩(wěn)定可靠。 所得微球?qū)?7 β -雌二醇具有高的吸附容量、快速的動態(tài)特性、優(yōu)異的識別選擇性，并在外 加磁場左右下方便、快速分離，重復(fù)使用性能好。并且17 β -雌二醇印跡磁性微球形貌規(guī) 貝1J、粒徑均一，單分散性好。磁性核使得該微球在外加磁場作用下能方便快速的分離；印跡 殼層對17-β雌二醇顯示出很高的選擇性吸附能力。
[0029] 本發(fā)明采用分子印跡磁固相萃取擺脫傳統(tǒng)固相萃取柱的束縛，直接將吸附材料分 散在樣品中，傳質(zhì)速率加快，利于達到平衡；磁場控制更加簡便，可進行定位富集，快速、經(jīng) 濟，且重復(fù)使用性能好；可以對復(fù)雜基質(zhì)中痕量17-β雌二醇進行高效的富集和凈化。
[0030] 另外，本發(fā)明充分利用可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移可控活性聚合的特性，采用分步投 料一鍋操作，制備核殼結(jié)構(gòu)印跡微球，有效簡化了表面印跡過程、縮短了實驗周期，大大提 高了識別速率和增加了印跡容量。本發(fā)明操作簡便快捷、成本低、重現(xiàn)性好，具有廣闊的應(yīng) 用前景。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0031] 圖1Α為本發(fā)明實施例提供的雌二醇印跡磁性微球制備的實驗操作過程示意圖。
[0032] 圖1Β為本發(fā)明實施例提供的印跡原理和磁分離過程示意圖。
[0033] 圖2為本發(fā)明實施例提供的紅外譜圖。
[0034] 圖3為本發(fā)明實施例提供的磁滯回線圖，插圖為本發(fā)明實施例提供的磁分離效果 實物圖（左側(cè)為澄清的17 β -雌二醇溶液，中間為將該溶液中分散有M-MIPs，右側(cè)為在溶液 瓶旁邊放置磁鐵）。
[0035] 圖4為本發(fā)明實施例提供的對17-β雌二醇的靜態(tài)吸附曲線。
[0036] 圖5為本發(fā)明實施例提供的對17-β雌二醇及其類似物的吸附容量柱狀圖。

【具體實施方式】
[0037] 實施例1
[0038] a. Fe304磁材料制備：準(zhǔn)確稱取1. 35g的FeCl36H20放于100mL的小燒杯中，加入 40mL的乙二醇。攪拌均勻后加入2. 17g無水乙酸鈉，超聲處理30min，待溶解完全后加入3g 聚乙二醇4000,在60°C的水浴中攪拌至溶解。然后將溶液轉(zhuǎn)移至50mL的反應(yīng)釜中，置于 200°C的烘箱中反應(yīng)10h，自然冷卻后取出，產(chǎn)物分別用無水乙醇和去離子水清洗5次，然后 放在通風(fēng)櫥中自然風(fēng)干，將得到的純黑色的Fe 304產(chǎn)物密封保存。
[0039] b. Fe304@Si02核層材料的制備：將2. 0g上述Fe304分散于60mL乙醇和10mL去離 子水中，放于250mL的單口圓底燒瓶中，超聲處理15min，接著邊機械攪拌邊逐滴加入lmL氨 水，然后室溫條件下以每分鐘5滴的速度加入2mL正硅酸乙酯，然后密封好，繼續(xù)攪拌反應(yīng) 24h。反應(yīng)結(jié)束后用大量的乙醇和去離子水清洗，然后40°C真空干燥24h，將獲得的褐黑色 Fe304@Si02產(chǎn)物密封保存。
[0040] c. Fe304@Si02核層材料的表面修飾：（一）先對Fe30 4@Si02微球的表面進行活化。 稱取lg的上述Fe304@Si0 2微球分散于50mL的無水甲苯中，放于100mL三頸燒瓶中，超聲處 理15min混勻，然后依次往其中以每分鐘5滴的速度逐滴加入2mL的4-氯甲基苯基三氯硅 烷和lmL的三乙胺。然后在氮氣保護下將混合溶液加熱至回流狀態(tài)并回流反應(yīng)24h，反應(yīng)結(jié) 束后，用丙酮洗滌5次并儲存?zhèn)溆?，所得產(chǎn)物記為Fe 304@Si02-Cl。（二）引入自由基進行活 化改性。將3mL的二硫化碳分散到100mL的四氫呋喃和10mL的苯基溴化鎂的混合溶液中， 在45°C下攪拌反應(yīng)2h。隨后，準(zhǔn)確稱取0. 5g上述活化產(chǎn)物Fe304@Si02-Cl分散到混合溶液 中，氮氣保護65°C下攪拌反應(yīng)48h，產(chǎn)物分別用丙酮和甲苯重復(fù)洗滌5次，50°C下真空干燥 24h，將獲得的棕色產(chǎn)物密封儲存?zhèn)溆?，記為Fe 304@Si02-RAFT。
[0041] d. -鍋法合成磁性印跡微球：將6mmol的功能單體丙烯酰胺和lmmol的模板分子 17 β -雌二醇混合，溶解于50mL的氯仿/乙腈溶液（v/v，1:4)中，放于250mL三頸燒瓶中， 在冰水浴中預(yù)反應(yīng)過夜。接著一次性加入220mgFe 304@Si02-RAFT，用恒壓滴液漏斗緩慢加入 20mmol的二乙烯苯，待體系溫度升高至60°C后加入50mg的偶氮二異丁腈，將體系溫度升高 至70°C后并恒溫，在氮氣保護下攪拌反應(yīng)24h。產(chǎn)物現(xiàn)用丙酮和氯仿分別清洗5次，然后用 甲醇/乙酸（v/v，9 :1)溶液作為洗脫液進行索氏提取36h，且每隔12h更換一次洗脫液（甲 醇/乙酸（v/v，9 :1))，進行充分洗脫至不再檢測出模板分子為止。經(jīng)40°C真空干燥24h， 將獲得的灰色磁性17 β -雌二醇分子印跡聚合產(chǎn)物密封保存，記為M-MIPs。操作過程參見 圖1A。印跡原理和磁分離過程原理參見圖1B。
[0042] 非印跡聚合物磁性微球的制備：按照上述操作規(guī)程，除了不加模板離子17β_雌 二醇之外，其他步驟同上，記為M-NIPs。
[0043] 上述制備所得M-MIPs進行電鏡掃描，表明制備得到500nm粒徑均一、形貌規(guī)則的 微球顆粒。由圖2紅外譜圖所示，表明通過可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移活性聚合表面印跡成功 制備了 17 雌二醇的分子印跡磁性微球。
[0044] 實施例2
[0045] 室溫條件下，稱取17 β -雌二醇標(biāo)準(zhǔn)品0. 5mg，用乙腈溶解并定容至100mL的容量 瓶中，得到5mg/L的17 β -雌二醇溶液，儲存?zhèn)溆?。?0mg的磁性分子印跡聚合物（M-MIPs) 投入到含有上述5mg/L的17 β -雌二醇的2mL乙腈溶液中，在室溫下經(jīng)過3h振蕩吸附后， 用磁鐵在小瓶的一側(cè)吸附lOmin，即可把印跡微球吸附到一側(cè)，重新得到澄清的溶液。如圖 3插圖所示，該微球?qū)?7 β -雌二醇具有強吸附能力，且分離過程快速、簡單。參見圖3磁滯 回線，表明該M-MIPs磁強度較高。
[0046] 實施例3
[0047] 室溫條件下，稱取17- β雌二醇標(biāo)準(zhǔn)品20mg，用乙腈溶解并定容至100mL的容量 瓶中，得到200mg/L的17β-雌二醇溶液，儲存?zhèn)溆?。然后用乙腈溶液分別稀釋到1、10、 20、40、60、80、10011^/1，分別取21^置于7支101^的磨口帶塞試管中，往其中加入2011^的 磁性分子印跡聚合物（M-MIPs)。作為對比，往另外7支中加入20mg的磁性非印跡聚合物 (M-NIPs)。室溫下，振蕩吸附12h，接著將此混合液離心分離，用0. 45μπι的微孔濾膜過濾， 上清液中17 β -雌二醇的濃度用HPLC-UV測定，原始17 β -雌二醇濃度減去上清液中剩余 濃度即為印跡微球的吸附量，每組實驗平行測定3次。結(jié)果如圖4所示，隨著初始濃度增 大，M-MIPs和M-NIPs對17 β -雌二醇的吸附容量都增大，其中M-MIPs的吸附容量顯著高 于M-NIPs，表明M-MIPs中存在選擇性位點，對17 β -雌二醇具有特異性吸附。
[0048] 實施例4
[0049] 稱取20mg的M-MIPs，置于10mL的磨口具塞試管中，分別加入2mL濃度為50mg/L的 17 β -雌二醇及其7種結(jié)構(gòu)類似物（雌三醇、17 α -雌二醇、雌酮、己烯雌酚、雙烯雌酚、己烷 雌酚和雙酚Α)的乙腈溶液，室溫下振蕩24h，然后將此混合液離心分離，用HPLC-UV測定上 清液中17 β -雌二醇及其結(jié)構(gòu)類似物的濃度，并依此計算出M-MIPs對各種酚類雌激素的吸 附容量，每組實驗平行測定3次。作為對照，稱取20mg的M-NIPs進行同樣的實驗。結(jié)果如 圖5所示，M-MIPs對17 β -雌二醇的吸附容量明顯高于其他7種酚類雌激素，表明M-MIPs 對17 β -雌二醇有高的選擇性；而M-NIPs對8種酚類雌激素的吸附容量沒有明顯差異，說 明M-NIPs中不存在選擇性位點，屬于非特異性吸附。
【權(quán)利要求】
1. 一種制備雌二醇分子印跡磁性微球的方法，其特征在于：微球利用可逆加成-斷裂 鏈轉(zhuǎn)移可控活性自由基聚合與沉淀聚合的一鍋合成方式，以17 β -雌二醇為模板的分子印 跡與磁敏感材料相結(jié)合，即得到雌二醇分子印跡聚合物磁性微球。
2. 按權(quán)利要求1所述的制備雌二醇分子印跡磁性微球的方法，其特征在于： 將Fe304磁材料經(jīng)Si02修飾，而后在Si02修飾的Fe 304磁材料表面活化同時引入活性自 由基，得活化修飾的Fe304@Si02微粒，待用； 以17 β -雌二醇作為模板分子與功能單體丙烯酰胺加入到氯仿和乙腈溶液中預(yù)聚合， 然后依次加入上述活化修飾的Fe304@Si02微粒、交聯(lián)劑和引發(fā)劑，通氮回流反應(yīng)，洗滌、干燥 并收集產(chǎn)物；產(chǎn)物用甲醇和乙酸溶液進行索氏提取以洗脫17β-雌二醇，干燥即得雌二醇 分子印跡磁性微球。
3. 按權(quán)利要求2所述的制備雌二醇分子印跡磁性微球的方法，其特征在于： a. Fe304磁材料制備：將FeCl3 · 6Η20溶于乙二醇中，并以無水乙酸鈉作為還原劑，聚乙 二醇為表面活性劑，充分混勻后于密閉水熱釜中反應(yīng)，洗滌后干燥收集黑色產(chǎn)物即得Fe 304 磁材料； b. Fe304@Si02核層材料的制備：將上述粒子分散在無水乙醇和去離子水中，加入氨水、 正硅酸乙酯，攪拌反應(yīng)，洗滌后干燥收集產(chǎn)物即得Fe 304@Si02 ; c. Fe304@Si02核層材料的表面修飾： (1) 表面活化：加入鏈轉(zhuǎn)移劑4-氯甲基苯基三氯硅烷，將上述所得Fe304@Si02S子分散 于無水甲苯中，再加入三乙胺反應(yīng)，洗滌、干燥并收集產(chǎn)物； (2) 活性自由基引入：苯基溴化鎂與四氫呋喃混勻，加入二硫化碳后反應(yīng)，向其中加入 上述所得活化產(chǎn)物，在氮氣氛圍中回流反應(yīng)，洗滌、干燥并收集產(chǎn)物； d. 印跡殼層的制備：首先將模板分子17 β -雌二醇與功能單體丙烯酰胺加入到氯仿 和乙腈溶液中自組裝預(yù)聚合，然后依次加入上述活化修飾的Fe30 4@Si02微粒、交聯(lián)劑二乙烯 苯，引發(fā)劑偶氮二異丁腈，通氮回流反應(yīng)，洗滌、干燥并收集產(chǎn)物，產(chǎn)物用甲醇和乙酸溶液 進行索氏提取以洗脫17 β-雌二醇，干燥即得雌二醇分子印跡磁性微球。
4. 按權(quán)利要求3所述的制備雌二醇分子印跡磁性微球的方法，其特征在于： 所述步驟a.中將1. 0-2. Og的FeCl36H20充分溶解于80-120mL乙二醇中，加入2. 0-3. Og 無水乙酸鈉，攪拌均勻后加入2. 0-4. 0g聚乙二醇4000,在40-70°C的水浴中攪拌至充分溶 解；然后將溶液全部轉(zhuǎn)移至聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，在160-240°C的烘箱中反應(yīng)8-14h;反應(yīng) 后冷卻至室溫，分別用無水乙醇和去離子水洗滌3-6次，然后20-30°C真空干燥即得到黑色 Fe304磁性材料。
5. 按權(quán)利要求3所述的制備雌二醇分子印跡磁性微球的方法，其特征在于： 所述步驟b.中稱取1. 0-2. Og上述Fe304磁性材料，分散于40-80mL乙醇和10-30mL 去離子水中，超聲處理l〇_3〇min ;然后邊機械攪拌邊逐滴加入0. 5-2mL氨水、l-3mL正硅酸 乙酯，繼續(xù)反應(yīng)18-26h ;然后洗滌干燥，即得Fe304@Si02核層材料，將所得產(chǎn)物密封保存，待 用。
6. 按權(quán)利要求5所述的制備雌二醇分子印跡磁性微球的方法，其特征在于： 所述Fe304@Si02核層材料用去離子水洗滌3-6次，用無水乙醇洗3-6次，再用去離子水 洗3-6次，30-50°C真空干燥20-28h，收集待用。
7. 按權(quán)利要求3所述的制備雌二醇分子印跡磁性微球的方法，其特征在于： 所述步驟c.中將l-3mL的4-氯甲基苯基三氯硅烷加入到50-60mL的無水甲苯中并搖 勻，然后加入〇. 5-2g所述的Fe304@Si02并超聲處理10-30min后，緩慢加入0. 5-2mL三乙胺 與3-6mL無水甲苯的混合溶液，在氮氣保護下50-70°C回流18-28h進行表面活化反應(yīng)，反應(yīng) 后洗滌、干燥、收集表面活化產(chǎn)物； 將10-16mL苯基溴化鎂加入到100-150mL精制過的四氫呋喃中，再加入3-4mL二硫 化碳后于40-50°C下反應(yīng)l_3h ;而后加入0. 3-1. 0g的上述表面活化產(chǎn)物，在氮氣保護下 55-70°C自由基活化反應(yīng)36-50h，洗滌干燥并收集產(chǎn)物。
8. 按權(quán)利要求7所述的制備雌二醇分子印跡磁性微球的方法，其特征在于： 所述表面活化反應(yīng)后依次用丙酮洗滌3-6次，甲醇洗滌3-6次，然后35-50°C真空干燥 18-28h ;所述自由基活化反應(yīng)結(jié)束后用甲醇洗滌3-6次，用氯仿洗滌3-6次，然后35-50°C 真空干燥18-28h。
9. 按權(quán)利要求3所述的制備雌二醇分子印跡磁性微球的方法，其特征在于： 所述步驟d.中將6-10mmol丙烯酰胺和l-3mmol的17 β -雌二醇溶解于40-60mL氯仿 /乙腈溶液（v/v，l:4)中，在冰水浴中反應(yīng)攪拌過夜，然后加入200-250mg上述活化修飾的 Fe304@Si02，在 50-70°C緩慢加入 30-50mmol 二乙烯苯和 40-60mg偶氮二異丁腈，25-40min后 升溫至60-80°C，通氮氣反應(yīng)18-30h ; 將上述產(chǎn)物分別用丙酮和氯仿清洗3-6次，然后用濾紙包好進行索氏提取30-40h，以 甲醇和乙酸溶液（v/v，9 :1)為洗脫液，每隔10-16h更換上述洗脫液（S卩，甲醇和乙酸溶液 (v/v，9 :1))，最后 25-50°C烘干，待用。
10. 按權(quán)利要求3所述的制備雌二醇分子印跡磁性微球的方法，其特征在于：所述微球 用于對17 β-雌二醇的檢測。
【文檔編號】C08K3/22GK104140487SQ201410351344
【公開日】2014年11月12日 申請日期:2014年7月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月22日
【發(fā)明者】李金花, 陳令新, 董瑞晨 申請人:中國科學(xué)院煙臺海岸帶研究所