本發(fā)明涉及一種冬蟲夏草的培育技術(shù)，特別涉及一種能夠以人工的方法穩(wěn)定批次量產(chǎn)培養(yǎng)冬蟲夏草子實體的方法，以及含冬蟲夏草子實體的組合物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：
冬蟲夏草(Ophiocordycepssinensis)菌是藥用真菌中的一大類，屬真菌門(Eumycota)、子囊菌亞門(Ascmycotina)、核菌綱(Pyenomycetes)、麥角菌科(Clavicipiracese)、蟲草屬(Cordyceps)。冬蟲夏草無性型中華被毛孢，可在人工培養(yǎng)基、人工培養(yǎng)條件下持續(xù)繁殖，當(dāng)進(jìn)行有性生殖時需要兩個同源菌絲體進(jìn)行核融合形成一個雙核菌絲體，及在特定環(huán)境下誘導(dǎo)菌絲分化，形成子實體。冬蟲夏草中兩個同源菌絲體由交配型基因決定菌絲親合性，其可分為MAT1型和MAT2型。MAT1型和MAT2型的等位基因分別為MAT1-1和MAT1-2。MAT1-1含有MAT1-1-1和MAT1-1-2兩個基因(部分還包含基因MAT1-1-3)，MAT1-2包含一個基因MAT1-2-1。在MAT1-1-1編碼的蛋白質(zhì)中有一個稱為“α框”的保守區(qū)域，而在MAT1-2-1編碼的蛋白質(zhì)中有一個稱為“HMG框”的保守區(qū)域，通過保守序列設(shè)計引子對編碼“α框”的核酸序列(屬于MAT1-1)和編碼“HMG框”的核酸序列(屬于MAT1-2)進(jìn)行擴(kuò)增、克隆、測序，可以得到MAT1和MAT2交配型基因的保守區(qū)域(HU.Xiaoetal.,2013)。冬蟲夏草的交配型基因的核苷酸序列相似性很低，但其兩端側(cè)翼序列具有高度同源性，可作為分子生物標(biāo)記，提供快速篩選優(yōu)勢菌株的方法。冬蟲夏草自古即為名貴中藥材，具有提高免疫功能、抗腫瘤、保肺益腎、壯陽等作用，廣被大眾食用。冬蟲夏草主要產(chǎn)于四川、西藏、云南、青海等地，海拔3,000公尺以上的寒冷地帶，由于生長條件的限制以及過度開挖，造成冬蟲夏草價格昂貴，分布地區(qū)范圍逐漸縮小?；诙x夏草的藥用及食用性的重要性，因此極需開發(fā)出人工栽培子實體的技術(shù)，目前現(xiàn)有技術(shù)是將冬蟲夏草的無性型中華被毛孢菌株，接種在人工培養(yǎng)基上長出蟲草復(fù)合體或子座；而目前揭露以人工培養(yǎng)基培育冬蟲夏草子實體的文獻(xiàn)有：(1)申請?zhí)枺?0108486.0，授權(quán)公告號：CN1274006A，發(fā)明名稱：人工培育冬蟲夏草的方法。此發(fā)明公開了人工培育冬蟲夏草的方法：將菌種接種入大米、玉米、谷糠等人工培養(yǎng)基中，在12-17℃避光環(huán)境下培養(yǎng)20-25天，并于200勒克斯(LUX)光照下刺激10天轉(zhuǎn)色，然后在晝夜溫差10℃下刺激子實體生長。(2)申請?zhí)枺?00910075839.0，授權(quán)公告號：CN101695255A，發(fā)明名稱：用中華被毛孢培育冬蟲夏草子座的方法。此發(fā)明公開了人工培育冬蟲夏草的方法：該方法將菌種接種入玉米渣、黃豆粉、小麥粒谷粒等人工培養(yǎng)基中，經(jīng)避光培養(yǎng)、濾液、溫室培養(yǎng)，最后可得冬蟲夏草子座；而以中華被毛孢培育冬蟲夏草子座，其生物轉(zhuǎn)化率在40％左右。但此發(fā)明的特征為需在1800公尺以上的高海拔及晝夜溫差大于等于15℃的環(huán)境中進(jìn)行。與冬蟲夏草同屬不同種的蛹蟲草，為子囊菌亞門，麥角菌目，麥角菌科、蟲草屬，其學(xué)名為Cordycepsmilitaris，又名北冬蟲夏草、北蟲草等。蛹蟲草人工培育常用的培養(yǎng)基含有白米、PDB、蛋白胨、家蠶蛹、黃豆粉；其培養(yǎng)條件為：溫度20℃、光照強(qiáng)度1500～2000lux、相對濕度70％，然后于固態(tài)培養(yǎng)90～120天后采收其子實體。由上敘述可知，蛹蟲草的培育方式與冬蟲夏草的培育方式差異很大，從菌種、培養(yǎng)基到培養(yǎng)條件通通不同，所以無法直接將成功培育出蛹蟲草子實體的方法移植至冬蟲夏草。綜合前述研究，雖然目前已可實現(xiàn)以人工培養(yǎng)基培育冬蟲夏草子實體，但現(xiàn)有技術(shù)仍有其不足之處，該不足之處包括：生物轉(zhuǎn)化率低、工業(yè)化效率有待提高、誘導(dǎo)轉(zhuǎn)色時間長、低海拔平地培養(yǎng)條件及穩(wěn)定量產(chǎn)等問題需要克服。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種可在平地低海拔環(huán)境，以人工培養(yǎng)基培育冬蟲夏草子實體的方法，該方法具有提高生物轉(zhuǎn)化率至100％、縮短誘導(dǎo)轉(zhuǎn)色時間及批次穩(wěn)定量產(chǎn)冬蟲夏草子實體的優(yōu)點。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取如下技術(shù)方案。一種培養(yǎng)冬蟲夏草子實體的方法，包括如下步驟：A.篩選優(yōu)勢菌株，所述優(yōu)勢菌株可用以快速及穩(wěn)定生產(chǎn)冬蟲夏草子實體；B.將所述優(yōu)勢菌株接種到人工培養(yǎng)基，所述人工培養(yǎng)基成分包括但不限定于蠶蛹萃取液、蛋白胨、酵母萃取物、葡萄糖、特砂、食品級羧甲基纖維素、微量元素及食品級寒天粉或洋菜膠；C.所述優(yōu)勢菌株于所述人工培養(yǎng)基上培育，得到長滿菌絲的人工培養(yǎng)基；D.將所述長滿菌絲的人工培養(yǎng)基移到一可變溫度和具LED光照的環(huán)境中培養(yǎng)，得所述冬蟲夏草子實體。于培養(yǎng)時采用LED燈管或相等強(qiáng)度燈源照射，以縮短子實體轉(zhuǎn)色時間5-7天。依據(jù)上述方法還可以進(jìn)行工業(yè)級批次量產(chǎn)所述冬蟲夏草子座。在其中一個實施例中，步驟(A)所述篩選優(yōu)勢菌株是利用冬蟲夏草菌交配型基因序列(Matingtype)(分子生物技術(shù))篩選出具M(jìn)AT1-1基因(SEQIDNO:1)且不具M(jìn)AT1-2基因(SEQIDNO:2)的優(yōu)勢菌株。在其中一個實施例中，步驟(B)所述人工培養(yǎng)基包括質(zhì)量百分比為：3-5％的蠶蛹萃取液、1-3％的蛋白胨、1-3％的酵母萃取物、2-6％的葡萄糖、4-6％的特砂、0.2-0.6％的食品級羧甲基纖維素、0.05-0.2％的微量元素及1-3％的食品級寒天粉或洋菜膠。在其中一個實施例中，步驟(C)所述培育為將所述優(yōu)勢菌株以14-20℃的溫度培養(yǎng)。在其中一個實施例中，步驟(D)所述可變溫度的環(huán)境是指可變溫度為6-20℃。在其中一個實施例中，步驟(D)所述可變溫度的環(huán)境是指溫差時間為10-14小時。在其中一個實施例中，步驟(D)所述具LED光照的環(huán)境是指以LED或相等強(qiáng)度的燈源照射6-12小時。在其中一個實施例中，步驟(D)所述具LED光照的環(huán)境是指LED或相等強(qiáng)度的燈源以2,000-6,000勒克斯照度照射。在其中一個實施例中，步驟(D)所述可變溫度和具LED光照的環(huán)境的相對濕度為根據(jù)所述可變溫度和具LED光照的環(huán)境的溫度而調(diào)控的，當(dāng)所述溫度介于14-20℃時，相對濕度設(shè)定為85-90％；當(dāng)所述溫度介于6-10℃時，相對濕度設(shè)定為50-70％。藉此加速誘導(dǎo)冬蟲夏草子實體生長，并縮短子實體培育時間。此外，本發(fā)明所述培養(yǎng)冬蟲夏草子實體的方法，可簡述如下(流程圖如圖1所示):利用分子生物技術(shù)篩選出具特定基因型的優(yōu)勢菌株，將所述優(yōu)勢菌株培養(yǎng)于人工培養(yǎng)基，并于可變溫度和具LED或相等強(qiáng)度的燈源光照的環(huán)境中培養(yǎng)，最后所述優(yōu)勢菌株被培育成為冬蟲夏草子實體。本發(fā)明還提供一種冬蟲夏草子實體組合物，包含所述冬蟲夏草子實體，及藥學(xué)上可接受的載體。其中，所述冬蟲夏草子實體是以上述培養(yǎng)冬蟲夏草子實體的方法所培養(yǎng)得到的冬蟲夏草子實體。在...