一種超聲波輔助提取灰樹花多糖的方法
【專利摘要】一種超聲波輔助提取灰樹花多糖的方法，其具體步驟為：（1）材料預(yù)處理；（2）超聲提??；（3）酶解提取；（4）制備洗脫液；（5）制備截留液；（7）減壓濃縮；（8）離心得沉降物；（9）真空干燥；本發(fā)明在水提的基礎(chǔ)上，復合超聲提取，使細胞內(nèi)容物更大量的釋放，增加內(nèi)容物的溶出率，同時應(yīng)用樹脂層析柱進行脫色脫蛋白，除去了蛋白質(zhì)等分子雜質(zhì)，使提取的多糖含量更高、更純。
【專利說明】一種超聲波輔助提取灰樹花多糖的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種多糖提取方法，特別是一種超聲波輔助提取灰樹花多糖的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]灰樹花又名粟蘑、蓮花菌，日本稱“舞茸”，是一種珍稀的食、藥兼用真菌?；覙浠ú粌H食用味道鮮美，有“食用菌王子”之美稱，富含維生素，并含有鋅、鈣、磷、鐵、硒等多種對人體有益的礦物質(zhì)，而且具有醫(yī)療保健作用，在日本民間用來治療糖尿病、高血壓等疾病。
[0003]灰樹花的調(diào)節(jié)免疫力、抗腫瘤、治療糖尿病等藥用功效來源于其含有的多種生理活性物質(zhì)，如多糖(糖蛋白)、核酸、多酚、礦物質(zhì)等，尤其灰樹花多糖(糖蛋白復合體)是研究重點?；覙浠ǖ纳锘钚灾饕獊碜云涠嗵浅煞??；覙浠ǘ嗵蔷哂锌鼓[瘤、增強免疫功能、抗HIV等多種生物活性。
[0004]目前常用的灰樹花多糖的提取方法有堿提法、酸提法、鹽提法還有熱水浸提法。稀酸、稀堿法，試劑用量少，儀器均為常規(guī)儀器，因此操作簡單易行。但稀酸、稀堿條件下，易使多糖發(fā)生糖苷鍵的斷裂，部分多糖發(fā)生水解而使多糖的提取率減少，而且雜質(zhì)含量，也比較多，有一定的適用范圍，所以本發(fā)明在水提的基礎(chǔ)上，復合超聲提取，使細胞內(nèi)容物更大量的釋放，同時加入酶解提取，去除了蛋白等雜質(zhì)，大大提高了多糖的提取含量。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種超聲波輔助提取灰樹花多糖的方法，在水提的基礎(chǔ)上，復合超聲提取，使細胞內(nèi)容物更大量的釋放，同時加入酶解提取，去除了蛋白等雜質(zhì)，大大提聞了多糖的提取含量。
[0006]本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn):一種超聲波輔助提取灰樹花多糖的方法，其具體步驟為:
(1)材料預(yù)處理:取干燥灰樹花粉碎，過60?100目篩，得灰樹花干燥粉末，加入5?20倍質(zhì)量的蒸餾水，于50°C?65°C的溫度條件下，浸泡1-5小時；
(2)超聲提取:把步驟(I)的物質(zhì)放入超聲波中，于20?60°C的溫度條件下，用5?20KHz超聲波萃取0.5h?2.0h，過濾，取濾液I ;
(3)酶解提取:調(diào)節(jié)濾液IpH為3?6，加入其質(zhì)量體積0.5-2.5%的纖維素酶和木瓜蛋白酶，于30?60°C的溫度條件下，水解0.5h?3.0h，離心分離，取濾液2 ；
(4)制備洗脫液:濾液2用稀鹽酸調(diào)節(jié)濾液pH為4.0?4.5，上層析柱，柱內(nèi)填充介質(zhì)為HD-3樹脂，4?5BV/h流速下層析脫色脫蛋白，收集6?7BV洗脫液；
(5)制備截留液:調(diào)節(jié)洗脫液pH為6.5?7.5，在0.1?0.25Mpa壓力下，用超濾膜為50KD和1KD的陶瓷膜進行超濾，收集中間截留液；
(7)減壓濃縮:將(6)步驟的截留液進行減壓濃縮，濃縮溫度65-70°C，壓力小于
0.1MPa，濃縮到 500°C熱測比重 1.050—1.080 ；
(8)離心得沉降物:4000rmp高速離心，得沉淀物； (9)真空干燥:沉淀物在真空度-0.095MPa,干燥溫度20_50°C的條件下，干燥20min，得到灰樹花多糖。
[0007]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明在水提的基礎(chǔ)上，復合超聲提取，使細胞內(nèi)容物更大量的釋放，增加內(nèi)容物的溶出率，同時應(yīng)用樹脂層析柱進行脫色脫蛋白，除去了蛋白質(zhì)等分子雜質(zhì)，使提取的多糖含量更高、更純。

【具體實施方式】
[0008]實施例1
(1)材料預(yù)處理:取干燥灰樹花粉碎，過60目篩，得灰樹花干燥粉末，按重量配比加入10倍質(zhì)量的蒸餾水，于50°C?65°C下，侵泡3小時；
(2)超聲提取:接著把步驟(I)的物質(zhì)放入超聲波中，20?60°C下用5?20KHz超聲波萃取0.5h,過濾,取濾液I ;濾洛可重復進行以上操作,濾液進行下一步提??；
(3)酶解提取:調(diào)節(jié)濾液pH為3?6，加入質(zhì)量體積比為0.5-2.5%的纖維素酶和木瓜蛋白酶，30?60°C水解0.5h，離心取濾液2 ;
(4)制備洗脫液:濾液2用稀鹽酸調(diào)節(jié)濾液pH為4.0?4.5，上層析柱，柱內(nèi)填充介質(zhì)為HD-3樹脂，4?5BV/h流速下層析脫色脫蛋白，收集6?7BV洗脫液；
(5)制備截留液:調(diào)節(jié)洗脫液pH為6.5?7.5，在0.1?0.25Mpa壓力下，用超濾膜為50KD和1KD的陶瓷膜進行超濾，收集中間截留液；
(7)減壓濃縮:將(6)步驟的截留液進行減壓濃縮，濃縮溫度65-70°C，壓力小于
0.1MPa0 濃縮到比重 1.050-1.080(500°C熱測)；
(8)離心得沉降物:4000rmp高速離心，得沉淀物；
(9)真空干燥:沉淀物在真空度-0.095MPa，干燥溫度20_50°C下，干燥20min，得到灰樹花多糖。
[0009]實施例2
(1)材料預(yù)處理:取干燥灰樹花粉碎，過60目篩，得灰樹花干燥粉末，按重量配比加入10倍質(zhì)量的蒸餾水，于50°C?65°C下，侵泡4小時；
(2)超聲提取:接著把步驟(I)的物質(zhì)放入超聲波中，20?60°C下用5?20KHz超聲波萃取1.0h,過濾,取濾液I ;濾洛可重復進行以上操作,濾液進行下一步提?。?br> (3)酶解提取:調(diào)節(jié)濾液pH為3?6，加入質(zhì)量體積比為0.5-2.5%的纖維素酶和木瓜蛋白酶，30?60°C水解1.0h，離心取濾液2 ；
(4)制備洗脫液:濾液2用稀鹽酸調(diào)節(jié)濾液pH為4.0?4.5，上層析柱，柱內(nèi)填充介質(zhì)為HD-3樹脂，4?5BV/h流速下層析脫色脫蛋白，收集6?7BV洗脫液；
(5)制備截留液:調(diào)節(jié)洗脫液pH為6.5?7.5，在0.1?0.25Mpa壓力下，用超濾膜為50KD和1KD的陶瓷膜進行超濾，收集中間截留液；
(7)減壓濃縮:將(6)步驟的截留液進行減壓濃縮，濃縮溫度65-70°C，壓力小于
0.1MPa，濃縮到比重 1.050-1.080(500°C熱測)；
(8)離心得沉降物:4000rmp高速離心，得沉淀物；
(9)真空干燥:沉淀物在真空度-0.095MPa,干燥溫度20_50°C下，干燥20min，得到灰樹花多糖。
[0010] 提取的灰樹花多糖得率為22.15%。
【權(quán)利要求】
1.一種超聲波輔助提取灰樹花多糖的方法，其特征在于:其具體步驟為: (1)材料預(yù)處理:取干燥灰樹花粉碎，過60?100目篩，得灰樹花干燥粉末，加入5?.20倍質(zhì)量的蒸餾水，于501?651的溫度條件下，浸泡1-5小時； (2)超聲提取:把步驟(1)的物質(zhì)放入超聲波中，于20?601的溫度條件下，用5?.201(?超聲波萃取0.511?2.011，過濾，取濾液1 ； (3)酶解提取:調(diào)節(jié)濾液為3?6，加入其質(zhì)量體積0.5-2.5%的纖維素酶和木瓜蛋白酶，于30?601的溫度條件下，水解0.51！?3.0匕離心分離，取濾液2 ； (4)制備洗脫液:濾液2用稀鹽酸調(diào)節(jié)濾液邱為4.0?4.5，上層析柱，柱內(nèi)填充介質(zhì)為冊-3樹脂，4?587/1！流速下層析脫色脫蛋白，收集6?78乂洗脫液； (5)制備截留液:調(diào)節(jié)洗脫液邱為6.5?7.5，在0.1?0.251%壓力下，用超濾膜為.50X0和101(0的陶瓷膜進行超濾，收集中間截留液； (7)減壓濃縮:將(6)步驟的截留液進行減壓濃縮，濃縮溫度65-701，壓力小于.0.1腿^，濃縮到5001熱測比重1.050—1.080 ； (8)離心得沉降物:40001'即高速離心，得沉淀物； (9)真空干燥:沉淀物在真空度-0.0951？3？干燥溫度20-501的條件下，干燥20-11,得到灰樹花多糖。
【文檔編號】C08B37/00GK104387492SQ201410700306
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月28日
【發(fā)明者】戴路 申請人:哈爾濱墨醫(yī)生物技術(shù)有限公司