一種金針菇多糖的分離純化方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種金針菇多糖的分離純化方法,該方法采用DEAE Cellulose-52離子交換柱層析法對金針菇多糖進行分離純化,主要包括DEAE填充料處理、裝柱、上樣、洗滌、收集、透析凍干等步驟。經(jīng)過DEAE Cellulose-52分離得到的金針菇組分,通過葡聚糖凝膠Sephadex G-100進行進一步的分離純化。主要包括:Sephadex G-100預處理、裝柱和平衡、金針菇多糖分級純化,本發(fā)明采用上述分離純化的方法,不但操作簡單,成本低廉,通過分離速度快,純化的濃度高,適合批量化推廣。
【專利說明】一種金針菇多糖的分離純化方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種金針菇多糖的分離純化方法,屬于醫(yī)藥生物檢測【技術領域】。
【背景技術】
[0002]金針菇屬真菌門,是目前國內(nèi)消費量最大的食用菌類之一,其不僅含有豐富的營養(yǎng)物質,而且還含有多種生物活性物質,據(jù)報道,金針菇能夠增強兒童生長和智力發(fā)育,是一種藥食兩用菌類。其不僅營養(yǎng)成分齊全,還含有豐富的粗蛋白、碳水化合物、粗脂肪、粗纖維、煙酸、礦質元素如鐵、鈣、磷、鈉燈,還含有金針菇多糖、免疫調節(jié)蛋白、黃酮類、萜類等多種生物活性成分。
[0003]金針菇多糖(FVP)是一個以葡聚糖為主,由數(shù)個多糖組分構成的混合多糖,采用不同的提取分離方法得到的金針菇多糖,其分子量、單糖組成等分子結構特征有所不同,具有的生物功能活性也各有差異。
[0004]金針菇多糖提取后得到的提取液中含有蛋白類、色素、小分子可溶性物質等,因此需要進一步純化處理,多糖的分離純化主要包括去蛋白、去色素等小分子物質、以及不同特性多糖的進一步分離。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]本發(fā)明的目的是:提供一種金針菇多糖的分離純化方法,提純速度快,純化速度高,以克服現(xiàn)有技術的不足。
[0006]本發(fā)明的技術方案
一種金針菇多糖的分離純化方法,該方法采用采用DEAE Cellulose-52離子交換柱層析法對金針菇多糖進行分離純化,主要包括DEAE填充料處理、裝柱、上樣、洗滌、收集、透析凍干等步驟。經(jīng)過DEAE Cellulose-52分離得到的金針燕組分,通過葡聚糖凝膠SephadexG-100進行進一步的分離純化。主要包括:S^hadex G-100預處理、裝柱和平衡、金針菇多糖分級純化。
[0007]前述的一種金針菇多糖的分離純化方法中,具體步驟如下:
步驟一、DEAE Cellulose-52 預處理
稱取DEAE Cellulose-52離子交換填料100g,用蒸餾水并浸泡使其充分吸水溶脹,并除去上層漂浮的細小顆粒。將充分溶脹后的DEAE纖維素膠體用布氏漏斗抽干,然后用0.5moI/LNaOH溶液浸泡3小時,抽干,用去離子水漂洗至中性,再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡3小時,抽干,用去麗水漂洗至中性;
步驟二、裝柱
將上述處理過得DEAE-52填料用去離子水懸浮攪勻,超聲除去懸液中的氣泡,然后沿壁緩慢加入柱高30cm,內(nèi)徑2.6cm的玻璃柱內(nèi),靜止使膠體沉淀,用3_5倍柱體積的去離子水洗滌,是層析柱達到離子平衡狀態(tài);
步驟三、多糖的初步分離純化金針菇多糖溶于蒸餾水,沿壁加入DEAE Cellulose-52離子交換柱,然后依次用蒸餾水、0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L的NaCI水溶液洗脫,恒流泵控制流速為lmL/min,自動分布收集器收集洗脫液,苯酚-硫酸法追蹤檢測收集液中多糖含量,繪制洗脫曲線。選擇最佳棘手風分段收集樣品,合并收集液后減壓濃縮,透析,東漢后得到金針菇多糖的DEAECellulose-52分離組分;Sephadex G-lOO凝膠色譜分離純化步驟四、Sephadex G-100的預處理
稱取一定量的葡聚糖凝膠Sephadex G-100約20倍凝膠量的蒸餾水,置室溫下12小時進行溶脹,然后用傾斜發(fā)除去表面懸浮的小顆粒;
步驟五、裝柱和平衡;
步驟六、金針菇多糖分級純化
將經(jīng)過DEAE柱分離得到的多糖組分分別配制5mg/mL的水溶液1ml,加入SephadexG-100葡聚糖凝膠柱,去離子水洗脫,自動收集儀收集,用苯酚硫酸法哎波長為490nm檢測各管的吸光度值,繪制洗脫曲線,選擇最佳吸收峰分段收集樣品,減壓濃縮,透析,凍干。
[0008]通過采用上述技術方案,與現(xiàn)有技術相比,本發(fā)明采用上述分離純化的方法,不但操作簡單,成本低廉,通過分離速度快,純化的濃度高,適合批量化推廣。
【具體實施方式】
[0009]下面本發(fā)明進一步的詳細說明,但不作為對本發(fā)明的任何限制。
[0010]本發(fā)明的實施例:
一種金針菇多糖的分離純化方法,該方法采用采用DEAE Cellulose-52離子交換柱層析法對金針菇多糖進行分離純化,主要包括DEAE填充料處理、裝柱、上樣、洗滌、收集、透析凍干等步驟。經(jīng)過DEAE Cellulose-52分離得到的金針燕組分,通過葡聚糖凝膠SephadexG-100進行進一步的分離純化。主要包括:S^hadex G-100預處理、裝柱和平衡、金針菇多糖分級純化。
[0011]具體步驟如下:
步驟一、DEAE Cellulose-52 預處理
稱取DEAE Cellulose-52離子交換填料100g,用蒸餾水并浸泡使其充分吸水溶脹,并除去上層漂浮的細小顆粒。將充分溶脹后的DEAE纖維素膠體用布氏漏斗抽干,然后用0.5moI/LNaOH溶液浸泡3小時,抽干,用去離子水漂洗至中性,再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡3小時,抽干,用去麗水漂洗至中性;
步驟二、裝柱
將上述處理過得DEAE-52填料用去離子水懸浮攪勻,超聲除去懸液中的氣泡,然后沿壁緩慢加入柱高30cm,內(nèi)徑2.6cm的玻璃柱內(nèi),靜止使膠體沉淀,用3_5倍柱體積的去離子水洗滌,是層析柱達到離子平衡狀態(tài);
步驟三、多糖的初步分離純化
金針菇多糖溶于蒸餾水,沿壁加入DEAE Cellulose-52離子交換柱,然后依次用蒸餾水、0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L的NaCI水溶液洗脫,恒流泵控制流速為lmL/min,自動分布收集器收集洗脫液,苯酚-硫酸法追蹤檢測收集液中多糖含量,繪制洗脫曲線。選擇最佳棘手風分段收集樣品,合并收集液后減壓濃縮,透析,東漢后得到金針菇多糖的DEAECellulose-52分離組分;Sephadex G-lOO凝膠色譜分離純化步驟四、Sephadex G-100的預處理
稱取一定量的葡聚糖凝膠Sephadex G-1OO約20倍凝膠量的蒸餾水,置室溫下12小時進行溶脹,然后用傾斜發(fā)除去表面懸浮的小顆粒;
步驟五、裝柱和平衡;
步驟六、金針菇多糖分級純化
將經(jīng)過DEAE柱分離得到的多糖組分分別配制5mg/mL的水溶液1ml,加入SephadexG-100葡聚糖凝膠柱,去離子水洗脫,自動收集儀收集,用苯酚硫酸法哎波長為490nm檢測各管的吸光度值,繪制洗脫曲線,選擇最佳吸收峰分段收集樣品,減壓濃縮,透析,凍干。
【權利要求】
1.一種金針菇多糖的分離純化方法,其特征在于:該方法采用采用DEAECellulose-52離子交換柱層析法對金針菇多糖進行分離純化,主要包括DEAE填充料處理、裝柱、上樣、洗滌、收集、透析凍干等步驟, 經(jīng)過DEAE Cellulose-52分離得到的金針燕組分,通過葡聚糖凝膠Sephadex G-1OO進行進一步的分離純化, 主要包括:S印hadex G-100預處理、裝柱和平衡、金針菇多糖分級純化。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種金針菇多糖的分離純化方法,其特征在于:具體步驟如下: 步驟一、DEAE Cellulose-52 預處理 稱取DEAE Cellulose-52離子交換填料100g,用蒸餾水并浸泡使其充分吸水溶脹,并除去上層漂浮的細小顆粒, 將充分溶脹后的DEAE纖維素膠體用布氏漏斗抽干,然后用0.5mol/LNaOH溶液浸泡3小時,抽干,用去離子水漂洗至中性,再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡3小時,抽干,用去麗水漂洗至中性; 步驟二、裝柱 將上述處理過得DEAE-52填料用去離子水懸浮攪勻,超聲除去懸液中的氣泡,然后沿壁緩慢加入柱高30cm,內(nèi)徑2.6cm的玻璃柱內(nèi),靜止使膠體沉淀,用3_5倍柱體積的去離子水洗滌,是層析柱達到離子平衡狀態(tài); 步驟三、多糖的初步分離純化 金針菇多糖溶于蒸餾水,沿壁加入DEAE Cellulose-52離子交換柱,然后依次用蒸餾水、0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L的NaCI水溶液洗脫,恒流泵控制流速為lmL/min,自動分布收集器收集洗脫液,苯酚-硫酸法追蹤檢測收集液中多糖含量,繪制洗脫曲線, 選擇最佳棘手風分段收集樣品,合并收集液后減壓濃縮,透析,東漢后得到金針菇多糖的DEAE Cellulose-52分離組分;Sephadex G-100凝膠色譜分離純化步驟四、Sephadex G-100的預處理 稱取一定量的葡聚糖凝膠Sephadex G-100約20倍凝膠量的蒸餾水,置室溫下12小時進行溶脹,然后用傾斜發(fā)除去表面懸浮的小顆粒; 步驟五、裝柱和平衡; 步驟六、金針菇多糖分級純化 將經(jīng)過DEAE柱分離得到的多糖組分分別配制5mg/mL的水溶液1ml,加入SephadexG-100葡聚糖凝膠柱,去離子水洗脫,自動收集儀收集,用苯酚硫酸法哎波長為490nm檢測各管的吸光度值,繪制洗脫曲線,選擇最佳吸收峰分段收集樣品,減壓濃縮,透析,凍干。
【文檔編號】C08B37/00GK104497156SQ201410794357
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月21日 優(yōu)先權日:2014年12月21日
【發(fā)明者】曾丹 申請人:曾丹