本發(fā)明屬于藥物結晶領域，涉及氘代核苷衍生物的結晶，具體涉及氘代索非布韋的結晶。
背景技術：
：吉利德在收購法莫賽特后，開發(fā)并上市了索非布韋(sofosbuvir)，2013年12月，F(xiàn)DA批準索非布韋作為聯(lián)合抗病毒治療方案的一部分治療丙肝病毒感染；2014年1月，EC批準索非布韋聯(lián)合其它抗病毒藥物(利巴韋林和聚乙二醇化干擾素α)治療基因型1-6慢性HCV感染。索非布韋的治療周期較長，通常需要12周-24周的療程，治療費用極其昂貴，目前全球僅有極少數(shù)患者能夠承受該治療并獲益，故仍需治療丙肝感染的化合物。中國專利申請CN201410335039.9提供了一類氘代的核苷衍生物，其中實施例2制備的化合物5除了具有與索非布韋類似的體外細胞毒性和抗丙肝病毒活性外，其藥代動力學參數(shù)更是顯著優(yōu)于索非布韋，有望降低臨床的使用劑量，從而降低成本以讓更多患者受益。藥用化合物晶型的變化通常導致化合物具有不同的熔點、溶解度、吸濕性、穩(wěn)定性、生物活性等，這些均是影響藥物制備的難易、儲存穩(wěn)定性、制劑難易和生物利用度等的重要因素。當化合物存在多晶型時，由于特定多晶型物具有特異性的熱力學性質和穩(wěn)定性，因此在制備的過程中，了解在各個劑型中應用的化合物的晶型是重要的，以保證生產(chǎn)過程應用相同形態(tài)的藥物。因此，保證化合物是單一的晶型或是一些晶型的已知混合物是必要的。在判斷何種多晶型物是優(yōu)選的時候，必須比較它們的許多性質并且優(yōu)選的多晶型物是基于許多物理性質做出選擇的。完全可能的是一種多晶型在某些方面如制備的難易、穩(wěn)定性等被認為是關鍵性的條件下是優(yōu)選的。在其它情況下，不同的多晶型物可能因更高的溶解度或優(yōu)良的藥代動力學而優(yōu)選。藥用化合物的新的多晶型物的發(fā)現(xiàn)提供了改善藥物物理特性的機會，即擴展了物質的全部性質，從而可以更好地指導化合物及其制劑的研究，因此本發(fā)明提供的式5化合物的多晶型物在藥物的制造及其它應用中有商業(yè)價值。技術實現(xiàn)要素：在一方面，本發(fā)明提供一種如式5所示化合物的Ⅰ型結晶，使用Cu-Kα輻射，其在X-射線粉末衍射(XRD)圖譜中，在2θ度數(shù)約為6.87、7.31、20.90處有衍射峰；典型地在2θ度數(shù)約為4.99、6.87、7.31、9.49、18.14、20.90處有衍射峰；進一步典型地在2θ度數(shù)約為4.78、4.99、6.60、6.87、7.31、8.22、8.84、9.49、18.14、20.64、20.90、21.97、23.49處有衍射峰。使用Cu-Kα輻射，Ⅰ型結晶的典型的XRD的譜圖具有如下特征：編號2θ(度)相對強度(％)14.783.924.9911.936.602.146.8743.357.31100.068.224.278.845.889.4913.7918.1411.91020.645.91120.9050.41221.976.31323.494.1在本發(fā)明的一個實施方案中，Ⅰ型結晶具有基本上如圖1所示的粉末X-射線衍射圖譜。在本發(fā)明的一個實施方案中，Ⅰ型結晶具有基本上如圖2所示的DSC圖譜。再一方面，本發(fā)明提供一種Ⅰ型結晶的制備方法，包括：a)將無定形的索非布韋用二氯甲烷溶解；b)從二氯甲烷中分離出Ⅰ型結晶。其中步驟a)中二氯甲烷的量以能完全溶解索非布韋為宜。視需要，可進行攪拌析晶或靜置析晶。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，在室溫下靜置析晶兩天。視需要，亦可加入少量Ⅰ型結晶的晶種進行析晶。步驟b)中分離得到結晶后，可進一步干燥。在本發(fā)明的一個實施方案中，在50-60℃進行真空干燥，干燥時間優(yōu)選為6-10小時。另一方面，本發(fā)明提供一種如式5所示化合物的Ⅱ型結晶，使用Cu-Kα輻射，其在X-射線粉末衍射(XRD)圖譜中，在2θ度數(shù)約為6.11、8.21、10.39、12.71、20.85處有衍射峰； 典型地在2θ度數(shù)約為6.11、8.21、10.39、10.87、12.19、12.71、13.76、14.11、16.85、17.19、17.70、17.98、18.83、19.39、19.81、20.14、20.85處有衍射峰；進一步典型地在2θ度數(shù)約為6.11、8.21、10.39、10.87、12.19、12.71、13.76、14.11、15.90、16.85、17.19、17.70、17.98、18.83、19.39、19.81、20.14、20.85、21.84、25.55、26.96、27.74、28.13處有衍射峰。使用Cu-Kα輻射，Ⅱ型結晶的典型的XRD的譜圖具有如下特征：編號2θ(度)相對強度(％)16.1196.528.21100310.3955.1410.8714.9512.1914.5612.7155.2713.7614.6814.1114.9915.904.21016.8510.81117.1913.61217.7028.41317.9821.61418.8325.81519.3916.11619.8125.61720.1436.31820.8567.51921.8415.12025.5510.52126.9610.02227.745.32328.1312.9在本發(fā)明的一個實施方案中，Ⅱ型結晶具有基本上如圖3所示的粉末X-射線衍射圖譜。在本發(fā)明的一個實施方案中，Ⅱ型結晶具有基本上如圖4所示的DSC圖譜。再一方面，本發(fā)明提供一種Ⅱ型結晶的制備方法，包括：a)將無定形的索非布韋用乙酸乙酯溶解；b)從乙酸乙酯中分離出Ⅱ型結晶。其中步驟a)中乙酸乙酯的量以能完全溶解索非布韋為宜。視需要，可進行攪拌析晶或靜置析晶。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，攪拌析晶3小時。步驟b)中分離得到結晶后，可進一步干燥。在本發(fā)明的一個實施方案中，在50-60℃進行真空干燥，干燥時間優(yōu)選為6-10小時。需要說明的是，在XRD中，由結晶化合物得到的衍射譜圖對于特定的晶型往往是特征性的，其中譜帶(尤其是在低角度)的相對強度可能會因為結晶條件、粒徑和其它測定條件的差異而產(chǎn)生的優(yōu)勢取向效果而變化。因此，衍射峰的相對強度對所針對的晶型并非是特征性的，判斷是否與已知的晶型相同時，更應該注意的是峰的相對位置而不是它們的相對強度。在XRD圖譜中通常用2θ角或晶面距d表示峰位置，由于2θ角與入射X射線的波長有關，兩者之間具有簡單的換算關系：d＝λ/2sinθ，其中d代表晶面距，λ代表入射X射線的波長(對于Cu-Ka，)，θ為衍射角。對于同種化合物的同種晶型，其XRD譜圖在整體上具有相似性，表征峰位置的2θ角誤差一般在±2％之內，例如由于分析樣品時溫度的變化、樣品移動或儀器的標定等，峰的位置可能移動；相對強度誤差可較大，但變化趨勢一致。另外，判斷晶型是否一樣時應注意保持整體觀念，因為并不是一條衍射線代表一個物相，而是一套特定的“d-I/I1”數(shù)據(jù)才代表某一物相。還應指出的是，在混合物的鑒定中，由于含量下降等因素會造成部分衍射線的缺失，此時，無需依賴高純試樣中觀察到的全部譜帶，甚至幾條譜帶也可能對給定的結晶是特征性的。又一方面，本發(fā)明提供上述Ⅰ型結晶或Ⅱ型結晶的結晶組合物。其中Ⅰ型結晶的結晶組合物是指，組合物中Ⅰ型結晶占組合物重量的50％以上，優(yōu)選在80％以上，更優(yōu)選在90％以上，最優(yōu)選在95％以上，該組合物中可含有少量化合物5的其他結晶或無定形物，包括但不限于化合物5的Ⅱ型結晶或無定形物。Ⅱ型結晶的結晶組合物是指，組合物中Ⅱ型結晶占組合物重量的50％以上，優(yōu)選在80％以上，更優(yōu)選在90％以上，最優(yōu)選在95％以上，該組合物中可含有少量化合物5的其他結晶或無定形物，包括但不限于化合物5的Ⅰ型結晶或無定形物。再一方面，本發(fā)明提供一種藥物組合物，其包含上述結晶或結晶組合物。任選的，所述藥物組合物還可包括藥學上可接受的輔料。藥學上可接受的輔料是本領域技術人員所公知的，例如參見崔福德主編的《藥劑學》第6版里面列舉的常用輔料。本發(fā)明的藥物組合物可通過多種方式給藥，給藥方式包括但不限于靜脈內、腹膜內、皮下、肌內或口服給藥，優(yōu)選采用口服給藥的方式。給藥頻率為每天兩次、每天一次、每周一次或兩周一次，優(yōu)選為每天一次。給藥劑量為每次100-1000mg，優(yōu)選為每次400mg。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述藥物組合物的劑型為片劑，其包含400mg的索非布韋I型結晶、膠態(tài)二氧化硅、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂、甘露醇和微晶纖維素。在本發(fā)明的另一個具體實施方案中，所述藥物組合物的劑型為片劑，其包含400mg的索非布韋Ⅱ型結晶、膠態(tài)二氧化硅、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂、甘露醇和微晶纖維素。又一方面，本發(fā)明提供上述結晶、結晶組合物或藥物組合物在制備抗慢性丙肝(CHC)的藥物中的用途，尤其是在制備抗基因型1、2、3或4的慢性丙肝的藥物中的用途。本發(fā)明提供的結晶，不僅純度高，而且穩(wěn)定性好，滿足藥物制備、生產(chǎn)的要求。附圖說明圖1：化合物5的I型結晶的粉末X-射線衍射圖譜。圖2：化合物5的I型結晶的DSC圖譜。圖3：化合物5的Ⅱ型結晶的粉末X-射線衍射圖譜。圖4：化合物5的Ⅱ型結晶的DSC圖譜。圖5：化合物5的無定形形式的粉末X-射線衍射圖譜。具體實施方式下面將結合實施例對本發(fā)明作進一步的說明，可以使本領域技術人員更全面的理解本發(fā)明，它們不應該被認為是對本發(fā)明范圍的限制，而只是本發(fā)明的示例性說明和典型代表。實施例1化合物5的無定形形式的制備參照CN201410335039.9實施例2的方法，以10倍規(guī)模制備化合物5，得到化合物5(6.8g)，對其進行粉末X-射線衍射圖譜表征，為無定形形式，具體參見圖5。實施例2化合物5的Ⅰ型結晶的制備稱取1g實施例1獲得的無定形化合物5，將其用8ml二氯甲烷溶解，靜置兩天，析出固體后抽濾，濾餅50℃真空干燥8小時。其粉末X-射線衍射圖譜具體參見圖1；其DSC圖譜具體參見圖2。實施例3化合物5的Ⅱ型結晶的制備稱取1g實施例1獲得的無定形化合物5，將其用8ml乙酸乙酯溶解，室溫攪拌3小時，析出固體后抽濾，濾餅50℃真空干燥8小時。其粉末X-射線衍射圖譜具體參見圖3；其DSC圖譜具體參見圖4。實施例4體外抗肝病毒活性評價實驗方法：化合物進行1:3系列稀釋8個濃度點，雙復孔，加入96孔板中。將HCV-1b復制子細胞懸浮在含10％FBS的培養(yǎng)液中，以每孔8000個細胞的密度種到含有化合物的96孔板中。細胞在5％CO2、37℃條件下培養(yǎng)3天。加入細胞活力檢測試劑，半小時后檢測熒光信號(RFU，細胞活力原始數(shù)據(jù))。隨后向每孔細胞中加入熒光素酶發(fā)光底物Bright-Glo，5分鐘后用化學發(fā)光檢測系統(tǒng)檢測化學發(fā)光信號值RLU。分析原始數(shù)據(jù)RFU和RLU，計算HCV-1b復制子細胞的活力百分比及化合物對HCVGT1b基因型復制子的抑制活性百分比。應用GraphPadPrism軟件對抑制活性和細胞活力百分比數(shù)據(jù)進行非線性擬合，計算化合物的EC50和CC50。實驗結果：索非布韋、化合物5體外抑制細胞活力的CC50均大于1000nM，對HCVGT1b基因型復制子抑制活性的EC50分別為104.9、119.2nM(見表1)。表1化合物體外細胞毒性與抗丙肝病毒活性實施例5大鼠體內的藥代動力學評價實驗方法：9只雄性SD大鼠隨機分成3組，每組3只，自由飲水，禁食約16h后分別灌胃給予50mg/kg的索非布韋、化合物5，給藥后保持禁食4小時。分別于給藥后0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、24h于眼眶取血0.1mL，EDTA-K2抗凝，4℃，4000rpm，10min離心分離血漿。采用LC-MS/MS法測定血漿中主要代謝產(chǎn)物GS-331007。本方法使用地西泮作為內標，采用蛋白沉淀法從20μl大鼠血漿中提取出GS-331007和內標，采用反相色譜柱分離GS-331007和內標，并使用串聯(lián)四級桿質譜儀的電噴霧離子化方式(ESI)進行定量分析。GS-331007的標準曲線范圍為5.00-5000ng/ml。實驗結果：大鼠分別灌胃給予50mg/kg索非布韋、化合物5后，GS-331007的AUC0-24h分別為4640和6392ng*h/mL，Cmax分別為873和1159ng/mL。以代謝物GS-331007計，化合物5的相對生物利用度分別為137.75％(見表2)。表2大鼠灌胃給予50mg/kg索非布韋、化合物5后GS-331007的藥代動力學參數(shù)當前第1頁1 2 3