本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種檢測大腸癌Septin9基因甲基化的試劑盒。
背景技術(shù)：
：大腸癌是常見惡性腫瘤，全世界每年約90萬人發(fā)病，是最常見的消化道惡性腫瘤之一。大腸惡性腫瘤起源于粘膜上皮或粘膜下間葉組織。其中由大腸粘膜上皮在環(huán)境或遺傳等多種致癌因素作用下發(fā)生的惡性腫瘤統(tǒng)稱為大腸癌。大腸癌發(fā)生部位為盲腸、升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸、乙狀結(jié)腸、直腸，為結(jié)腸癌和直腸癌的總稱，也稱大腸癌。大腸癌是一種嚴(yán)重威脅人類生命健康的惡性腫瘤，世界范圍內(nèi)的流行病學(xué)調(diào)查資料表明，大腸癌在各類惡性腫瘤中的發(fā)病率居第3位。是常見的消化道惡性腫瘤，占胃腸道腫瘤的第二位。直腸癌發(fā)病率僅次于胃和食管癌。在我國，大腸癌的早期診斷率很低，在確診的青年人大腸癌中，已經(jīng)在中晚期的患者占了50％～80％，而20歲以下的患者，一旦確診，幾乎全部是中晚期。美國國家息肉研究工作組提示，切除早期發(fā)現(xiàn)的息肉可明顯減低大腸癌的發(fā)病率。日本應(yīng)用免疫法糞便隱血試驗(FOBT)進(jìn)行的病例對照研究提示，早發(fā)現(xiàn)可使大腸癌死亡率下降81％。以上結(jié)果說明，提高早期診斷率不但能降低大腸癌的死亡率，還可降低其發(fā)病率。目前，對于大腸癌的檢測主要有直腸指檢、大便隱血(FOBT)試驗、內(nèi)鏡檢查、鋇劑灌腸等。FOBT是一種非創(chuàng)傷性的檢測手段，但因其收取糞便樣品不便，準(zhǔn)確性不理想，從而造成依從性差，臨床應(yīng)用不普遍。而作為大腸癌診斷的金標(biāo)準(zhǔn)—腸鏡是一種創(chuàng)傷性的檢測手段，過程痛苦且有感染出血等風(fēng)險，顯然不適合作為篩查手段。大腸癌Septin9基因檢測是一種基于熒光定量PCR方法，針對外周血血漿中生物標(biāo)記物的甲基化進(jìn)行檢測，其樣品采集方便，檢測周期短。該技術(shù)采用了一種基于熒光定量PCR技術(shù)針對EDTA抗凝血血漿中腫瘤細(xì)胞釋放的游離DNA—Septin9基因甲基化進(jìn)行定量分析進(jìn)行大腸癌篩查，已通過歐盟認(rèn)證(CEMARK)并在FDA認(rèn)證中。一項針對中國人群的研究中表明，對1074例受試者(300例大腸癌患者，774例非大腸癌患者)的檢測發(fā)現(xiàn)， Septin9甲基化檢測的靈敏性和特異性分別為73.0％和97.5％。因其靈敏度高，特異性強，無創(chuàng)傷性等特點在美國、歐洲和加拿大廣泛應(yīng)用于臨床和商業(yè)實驗室，在美國有80％的人群愿意定期接受使用外周血篩查方法的檢測。EpigenomicsAG公司的Septin9基因甲基化檢測試劑盒EpiproColon2.0CE提供了一種通過PCR熒光探針法檢測Septin9基因甲基化的方法，但是，該方法在臨床檢測中存在著諸多的不便因素，如對血漿的用量較大，患者存在抵觸情緒，不便于檢測方法的推廣；適用機型為ABI7500fast/fastDX及Roche480I/II，而上述機型的普及率很低，導(dǎo)致很多醫(yī)院無法順利開展該檢測，臨床的推廣和普及更加困難。因此，若想順利推廣Septin9基因甲基化的臨床檢測，血漿需求量和適用機型是兩個必須要解決的問題。技術(shù)實現(xiàn)要素：為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明創(chuàng)新性的將血漿用量縮減至1.5-1.75mL(為EpiproColon2.0CE的一半)，并且完成了國內(nèi)更加普及的ABI7500熒光定量PCR儀(軟件版本2.0.5或1.4)的適用性研究(通過一系列試劑的優(yōu)化篩選，實現(xiàn)了不同機型、不同軟件版本的等效性檢測校準(zhǔn))，實現(xiàn)了低血漿量要求、普通儀器的高靈敏檢測，可有效替代現(xiàn)有的檢測方法。本發(fā)明的一個目的是提供一種檢測大腸癌Septin9基因甲基化的試劑盒。一種檢測Septin9基因甲基化的試劑盒，包括PCR反應(yīng)液和聚合酶，所述PCR反應(yīng)液由dNTP、引物、探針和溶劑組成，所述聚合酶為Taq酶BCIUS2。在根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案中，所述試劑盒還包括陰性對照品和陽性對照品；其中，陰性對照品包括牛血清蛋白和Septin9基因非甲基化的正常人基因組DNA，所述陽性對照品包括牛血清白蛋白、Septin9基因甲基化的人基因組DNA和Septin9基因非甲基化的正常人基因組DNA。在根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案中，所述試劑盒還包括提取血漿中游離的DNA，并將提取出來的DNA進(jìn)行亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化的血漿處理試劑和工具。在根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案中，所述血漿處理試劑和工具包括裂解吸附液、濃縮洗液A、濃縮洗液B、磁珠T；其中，所述裂解吸附液和濃縮洗液A由異硫氰酸胍、三羥甲基氨基甲烷和純化水組成，異硫氰酸胍的終濃度為5M，三羥甲基氨基甲烷的終濃度為30nM；所述濃縮洗液B為無核酸酶的水。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種采用上述的試劑盒提取血漿中游離DNA的方法，所述方法包括：1)將1.75ml的裂解吸附液與1.5～1.75ml的血漿樣品混勻，在15～30 ℃的條件下孵育10分鐘；2)以磁珠吸附法提取所述血漿樣品中的游離DNA；3)將步驟2)提取的游離DNA進(jìn)行亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化，得到BisDNA。在根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案中，所述方法的步驟2)中還包括以將濃縮洗液A與等體積的無水乙醇混勻，得到洗液A，所述洗液A用于磁珠吸附法中的洗滌步驟。在根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案中，所述方法還包括以下步驟：4)將步驟3)得到的BisDNA與所述洗液A、磁珠混勻，得到吸附有BisDNA的磁珠；5)以體積比為7：40的比例將濃縮洗液B與無水乙醇混勻，得到洗液B；將步驟4)所述吸附有BisDNA的磁珠以所述洗液B洗滌1次或多次，然后洗脫。優(yōu)選地，步驟2)所述磁珠吸附法中所用的磁珠為磁珠T。本發(fā)明更進(jìn)一步地提供了上述試劑盒在制備檢測Septin9基因甲基化或診斷大腸癌的裝置中的應(yīng)用，所述應(yīng)用包括步驟：a)以20：1的體積比將所述PCR反應(yīng)液與所述聚合酶混勻，得到PCR預(yù)反應(yīng)液；b)將等體積BisDNA與所述PCR預(yù)反應(yīng)液加入到PCR反應(yīng)容器中，并密封；優(yōu)選地，所述BisDNA和PCR反應(yīng)液的體積分別為30μl；更優(yōu)選地，所述BisDNA濃度≥18pg/mL；c)以下述擴(kuò)增程序進(jìn)行PCR擴(kuò)增：階段1：94℃活化20分鐘；階段2：62℃反應(yīng)5秒、55.5℃反應(yīng)35秒、93℃反應(yīng)30秒，循環(huán)45次；階段3：40℃反應(yīng)5秒；其中，熒光信號的收集在階段2完成。更具體地反應(yīng)程序如下表所示：在根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案中，所述方法是通過ABI7500熒光定量PCR儀實現(xiàn)擴(kuò)增的。在根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案中，所述方法中以ACTB為PCR擴(kuò)增的內(nèi)參。本發(fā)明的有益效果在于：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點：(1)更高的檢測靈敏度相比較于EpiProColon試劑盒，本發(fā)明將檢測體積擴(kuò)大，通過本發(fā)明的反應(yīng)體系，將靈敏度提高到了79.3％，比EpiProColon試劑盒提高了6.3％，更加適用于腫瘤的臨床篩查。(2)更少的血漿用量本發(fā)明將檢測的重復(fù)數(shù)量減少一半以上，從而減少血漿用量，比EpiProColon試劑盒的血漿用量減半，同時檢測性能還優(yōu)于EpiProColon試劑盒。(3)降低了檢測的復(fù)雜性和成本本發(fā)明將檢測的重復(fù)數(shù)量減少一半以上，從而減少人為操作和試劑耗材用量。(4)提高了檢測效率，性價比和順應(yīng)性本發(fā)明使檢測Septin9基因的甲基化的靈敏度提高，人工試劑成本降低，減少受試者血漿用量。(5)優(yōu)化的血漿游離DNA處理方法本發(fā)明通過更換EpiProColon試劑盒中的磁珠、裂解吸附液和濃縮洗液A等試劑，相對于EpiProColon試劑盒，本方法具有成本低、提取效率高的優(yōu)勢。(6)更優(yōu)化的檢測體系本發(fā)明通過優(yōu)化反應(yīng)體系和適用儀器的適用性研究，本發(fā)明通過采用單管60μlPCR反應(yīng)體系和ABI7500熒光定量PCR儀實現(xiàn)了擴(kuò)增甲基化的Septin9基因，而EpiProColon的適用機型為ABI7500fast/fastDX及Roche480I/II，由于ABI7500fast/fastDX及Roche480I/II的普及率非常低，絕大部分的臨床機構(gòu)并沒有配備這些設(shè)施，造成很多醫(yī)院無法順利開展該檢測，臨床的推廣和普及非常困難。目前國內(nèi)臨床檢測機構(gòu)普遍配備的機型為ABI7500熒光PCR儀，儀器的軟件版本多為SDS2.0.5/SDS1.4，為建立不同軟件版本的ABI7500熒光PCR儀的適用性和等效性研究，本發(fā)明建立了適用2種常見軟件的ABI7500熒光PCR儀檢測方法。(7)更高擴(kuò)增效率PCR聚合酶的應(yīng)用本發(fā)明采用的PCR聚合酶為Taq酶BCIUS2，相比較于EpiProColon試劑盒，本發(fā)明具有更加高效的擴(kuò)增效率，而且成本遠(yuǎn)低于EpiProColon試劑盒。附圖說明圖1為磁珠T與適用裂解吸附液、濃縮洗液A的替換測試結(jié)果圖；其中，曲線二表示Septin9的擴(kuò)增曲線；曲線一表示ACTB的擴(kuò)增曲線。圖2為酶替換的測試結(jié)果圖；其中，曲線二表示Septin9的擴(kuò)增曲線；曲線一表示ACTB的擴(kuò)增曲線。具體實施方式下面結(jié)合實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，應(yīng)當(dāng)理解，實施例僅用于進(jìn)一步說明和闡釋本發(fā)明，并非用于限制本發(fā)明。以下實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法，如Sambrook等人，分子克?。簩嶒炇沂謨?NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的方法。。Taq酶(BCIUS2)購自BioChainInstitute，Inc.。以下實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。實施例1：試劑盒組成檢測實驗所需材料如表1和表2所示。1.試劑盒組成：表1試劑盒I：血漿處理試劑盒表2試劑盒II：大腸癌甲基化基因檢測試劑盒說明：1)試劑盒I中除其中裂解吸附液、濃縮洗液A和磁珠為本發(fā)明替換的優(yōu)選試劑外，其他試劑購自Epigenomics的EpiProColon；試劑盒II中除Taq酶為本發(fā)明替換的優(yōu)選試劑，其他均購自Epigenomics的EpiProColon。2)磁珠T購自BioChainInstitute，Inc.。3)裂解吸附液和濃縮洗液A為自行配制，裂解吸附液配方如表3所示，濃縮洗液A如表4所示：表3裂解吸附液配方名稱添加量終濃度/體積異硫氰酸胍590.8g5M三羥甲基氨基甲烷2.425g30nM純化水定容至1000ml---表4濃縮洗液A配方名稱添加量終濃度異硫氰酸胍590.8g5M三羥甲基氨基甲烷2.428g30nM純化水定容至1000ml---4)Taq酶(BCIUS2)購自BioChainInstitute,Inc.2.儀器設(shè)備檢測實驗所需設(shè)備如下所示：15ml磁力架、2.0ml磁力架、恒溫震蕩儀、旋轉(zhuǎn)混合器、ABI7500熒光PCR儀、-20℃冰箱、高速離心機、微量移液器和連續(xù)加樣器、超凈工作臺。實施例2：血漿游離DNA的提取針對相比于EpiProColon3.5mL血漿量的提取方法，本發(fā)明將血漿量減至1.5-1.75mL，一方面降低了臨床抽血時病人的抵觸心理，同時本發(fā)明對DNA提取方法進(jìn)行了技術(shù)改進(jìn)，有效提高了DNA的回收率，更加利于PCR檢測。具體改進(jìn)包括：1)每一步驟最優(yōu)試劑用量的建立，通過測試陰陽性對照品和血漿對比試驗，建立了最適于1.5-1.75mL血漿量的檢測方法，顯著降低了對同樣樣本進(jìn)行檢測的試劑成本。2)通過步驟39)的引入，有效提高了回收DNA溶液的純度，提高了PCR反應(yīng)的效率和檢測的靈敏性。具體方法如下：1)加60ml無水乙醇到60ml洗液A濃縮液中，顛倒混勻5次。2)加40ml無水乙醇到7ml洗液B濃縮液中，顛倒混勻5次。3)融化陰陽性對照品以及樣本，并做好標(biāo)記。4)加入1.75ml裂解吸附液，蓋好管蓋，震蕩混勻，室溫(15℃-30℃)孵育10分鐘。5)加入45μl磁珠(新鮮懸浮)，1.25ml無水乙醇，蓋好管蓋，顛倒混勻5-6次，在旋轉(zhuǎn)混合器上室溫孵育45分鐘，振蕩速度10-20rpm，旋轉(zhuǎn)角度約35-45°。6)預(yù)設(shè)恒溫振蕩器至80℃。7)放置15ml管子在DynaMagTM-15磁性試管架上吸附5-10分鐘，使磁珠形成沉淀顆粒小心倒掉上清液，不要倒掉磁粒，在干凈的紙上控干液體。8)加入0.75ml洗液A,震蕩混勻磁珠用22cm超長一次性移液管將磁珠懸浮液移至2.0ml管中,再一次用移液管吸取殘留磁珠懸浮液并將其轉(zhuǎn)移至2.0ml管。9)放置2.0ml離心管在DynaMagTM-2磁性試管架上吸附2-6分鐘。10)保持離心管在磁架上，用干凈的移液管盡量去除液體，小心不要丟棄磁性顆粒(沉淀物)，短暫離心，去除管蓋上的液體。11)放置2.0ml離心管在DynaMagTM-2磁性試管架上吸附2-6分鐘。12)保持離心管在DynaMagTM-2磁性試管架上，用10-100ul槍頭除去殘余液體。13)加入0.75ml洗液A,震蕩混勻磁珠用22cm超長一次性移液管將磁珠懸浮液移至2.0ml管中,再一次用移液管吸取殘留磁珠懸浮液并將其轉(zhuǎn)移至2.0ml管。14)放置2.0ml離心管在DynaMagTM-2磁性試管架上吸附2-6分鐘。15)保持離心管在磁架上，用干凈的移液管盡量去除液體。16)短暫離心，去除管蓋上的液體，放置2.0ml離心管在DynaMagTM-2磁性試管架上吸附2-6分鐘。17)保持離心管在DynaMagTM-2磁性試管架上，用10-100ul槍頭除去殘余液體。18)將離心管移至無磁性試管架上，加入50μl洗脫液。19)蓋好管蓋，振蕩混勻重懸磁珠，將離心管置于恒溫振蕩器上1000rpm80℃孵育10分鐘。20)短暫離心，去除管蓋上的液體，將離心管置于DynaMagTM-2磁性試管架上2-6分鐘。21)保持離心管在磁架上，將全部洗脫液轉(zhuǎn)移(約50μl)到一個新的2.0ml管中。22)加入75μl亞硫酸鹽溶液、12.5μl保護(hù)液到含有DNA洗脫物的2.0ml離心管中。23)蓋好管蓋，震蕩混勻，短暫離心，去除管蓋上的液體，將離心管置于恒溫振蕩器上，80℃孵育45分鐘，不要振蕩。24)將上述含有亞硫酸鹽反應(yīng)液的離心管進(jìn)行短暫離心。25)加入500μl洗液A、10μl磁珠(新鮮懸浮)到2ml離心管中，蓋好管蓋，震蕩混勻。26)將離心管置于恒溫振蕩器上，23℃孵育45分鐘，振蕩速度1,000rpm。27)短暫離心，去除管蓋上的液體，放置離心管在DynaMagTM-2磁性試管架上2-6分鐘。28)保持管子在DynaMagTM-2磁性試管架上，用干凈的一次性移液管盡量去除液體，注意不要吸取磁珠！29)將樣品從磁性試管架取下，加入400μl洗液A，震蕩重懸。30)短暫離心，去除管蓋上的液體.放置離心管在DynaMagTM-2磁性試管架上2-6分鐘。31)保持離心管在DynaMagTM-2磁性試管架上，用干凈的一次性移液管盡量去除液體，不要吸取磁珠！32)將樣品從磁性試管架取下，加入400μl洗液B，震蕩重懸。33)短暫離心，去除管蓋上的液體，放置管子在DynaMagTM-2磁架上2-6分鐘。34)保持離心管在DynaMagTM-2磁性試管架上，用干凈的一次性移液管盡量去除液體，注意不要吸取磁珠！35)將樣品從磁性試管架取下，加入200μl洗液B，震蕩重懸。36)短暫離心，去除管蓋上的液體，放置管子在DynaMagTM-2磁性試管架中2-6分鐘。37)保持離心管在DynaMagTM-2磁性試管架上，用干凈的一次性移液管盡量去除液體，注意不要吸取磁珠！38)重復(fù)步驟36-37。39)再次重復(fù)步驟36-37。40)打開管蓋，將離心管放在恒溫振蕩器上，靜孵育23℃,10分鐘，不要振蕩。41)將離心管移至無磁性的試管架上，加入40μl洗脫液。42)將離心管放在恒溫振蕩器上，23℃孵育10分鐘，振蕩速度1,000rpm。43)短暫離心，去除管蓋上的液體，放置管子在DynaMagTM-2磁性試管架上2-6分鐘。44)用10-100μl槍頭，將所有的洗脫液(大約35μl)移至EP管中。實施例3：甲基化Septin9基因的檢測相比于EpiProColon，本發(fā)明減少了血漿樣品用量，通過擴(kuò)大檢測體積、優(yōu)化反應(yīng)體系，降低了檢測的復(fù)雜性和成本，提高了檢測效率、性價比和順應(yīng)性。本發(fā)明的檢測方法如下所述：1)按照表5配制PCR預(yù)反應(yīng)液表5PCR預(yù)反應(yīng)液配制2)震蕩混勻PCR預(yù)反應(yīng)液，加30μl至選定好的96孔板中。3)將30μl亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化的DNA(BisDNA)加入至PCR板對應(yīng)的孔中，用OpticalAdhesiveFilm膠膜密封。4)轉(zhuǎn)速1000rcf離心1分鐘。5)運行ABI7500熒光PCR儀，打開7500SoftwareV2.0.5軟件。6)點擊“NewDocument”→點擊“ExperimentProperties”標(biāo)簽進(jìn)行以下設(shè)置：7500(96Wells)、Quantitation-StandardCurve、Reagents、Standard(～2hourstocompletearun)。7)點擊“PlateSetup”標(biāo)簽→點擊“DefineTargetsandSamples”，設(shè)置如下：8)點擊“AddNewTarget”然后設(shè)置如下：9)點擊“AssignTargetsandSamples”→點擊“ViewPlateLayout”選擇板的所有96孔，在Target的Septin9與ACTB的Assign框中對應(yīng)。10)檢查PassiveReference選項是否為“(none)”→到“RunMethod”標(biāo)簽中打開“GraphicalView”選項→ReactionVolumePerWell：60μl。11)設(shè)置運行程序如下，在標(biāo)識“X”階段收集熒光信號：12)打開PCR托盤，將PCR反應(yīng)板放入，注意A1孔在左上角，關(guān)閉PCR托盤，點擊“Start”開始運行，并將文件儲存于相應(yīng)的文件夾中。實施例4：檢測結(jié)果的判讀1、適用于SDSv2.05或V1.4版本1)SDSv2.05設(shè)置：基線10-22個循環(huán)，設(shè)置Septin9閾值30000，ACTB閾值14000；SDSV1.4設(shè)置：基線10-22個循環(huán)，設(shè)置Septin9閾值100000，ACTB閾值60000；2)用對照樣品驗證PCR反應(yīng)的有效性：陽性對照septin9的Ct值≤41.1，ACTB的Ct值≤29.8；陰性對照septin9的Ct值無，ACTB的Ct值≤37.2；任何一個條件不符合，本次定義本次實驗結(jié)果“無效”。3)樣本結(jié)果解釋：如果ACTB的Ct值≤32.1，Septin9的Ct值≤41.0，定義該樣本為陽性；如果ACTB的Ct值≤32.1，Septin9的Ct值>41.0，定義該樣本為陰性；如果ACTB的Ct值＞32.1，定義該PCR反應(yīng)為“無效”。2、以下以2例血漿的實際檢測結(jié)果為例進(jìn)行判讀(如表6所示)：表6檢測結(jié)果判讀示例1)PC的ACTB的Ct值為28.47小于29.8，Septin9的Ct為35.33小于41.1，PC檢測有效；NC的ACTB的Ct值為32.01小于37.2，Septin9無Ct值，NC檢測有效；PC/NC均有效，因此樣本1和樣本2的數(shù)據(jù)可做進(jìn)一步分析。2)樣本1的ACTB的Ct值為28.27，小于32.1，因此該樣本的數(shù)據(jù)有效，可進(jìn)一步分析Septin9的數(shù)據(jù)，而其Ct值無，因此判定該樣本為陰性；樣本2的ACTB的Ct值為28.96，小于32.1，因此該樣本的數(shù)據(jù)有效，可進(jìn)一步分析Septin9的數(shù)據(jù)，而其Ct值為38.67，小于41.0，因此判定該樣本為陽性。實施例5：磁珠和適用Buffer的替換根據(jù)實施例2的技術(shù)方案，使用磁珠T以及優(yōu)選的裂解吸附液和濃縮洗液A及其他試劑對RC(模擬血漿)進(jìn)行處理，然后按照實施例3的技術(shù)方案進(jìn)行PCR擴(kuò)增，比較替換磁珠、裂解吸附液和濃縮洗液A后Ct值與Epigenomics公司的EpiProColon試劑盒的大小。從表3的結(jié)果可以看出磁珠T與裂解吸附液和濃縮洗液A共同替換后其性能優(yōu)于EpiProColon試劑盒。測試結(jié)果如表7所示。使用本發(fā)明提供的裂解吸附液和濃縮洗液A，對3個批次磁珠T的批間差性能進(jìn)行了評價，結(jié)果顯示3批磁珠T間無明顯差異，性能優(yōu)于Epi試劑盒，其檢測結(jié)果如表8所示。表7磁珠和適用Buffer替換后的測試結(jié)果表8不同操作人、不同批次磁珠T的檢測結(jié)果實施例6：酶的替換根據(jù)實施例2及實施例3的技術(shù)方案，使用實施例2的提取方法處理RC，然后使用BCIUS2酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增測試，并與Epigenomics公司的EpiProColon試劑盒對比，結(jié)果顯示BCIUS2的重復(fù)性良好，檢測結(jié)果優(yōu)于EpiProColon試劑盒，詳見表9所示，擴(kuò)增曲線見圖2。表9酶替換后的測試結(jié)果實施例7：臨床樣本的檢測共收集到218例臨床樣本，其中包括：53例腸道未發(fā)現(xiàn)異常樣本、50例非腫瘤性病變樣本、39例非進(jìn)展期腺瘤樣本、35例高危低級別樣本、12例高級別瘤變樣本、2例I期樣本、6例II期樣本、15例III期樣本、4例IV期樣本和2例分期不明的樣本(均有腸鏡和病理結(jié)果)，符合消化內(nèi)科的樣本自然分布。依據(jù)技術(shù)方案對磁珠T、裂解吸附液、濃縮洗液A和BCIUS2酶的替換進(jìn)行實驗驗證。臨床樣本的檢測結(jié)果顯示其檢測的特異性為94.3％，靈敏度為79.3％(如表10、表11所示)。表10與腸鏡結(jié)果的比較表11.真實性計算分析盡管本發(fā)明已進(jìn)行了一定程度的描述，明顯地，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的條件下，可進(jìn)行各個條件的適當(dāng)變化?？梢岳斫?，本發(fā)明不限于所述實施方案，而歸于權(quán)利要求的范圍，其包括所述每個因素的等同替換。當(dāng)前第1頁1 2 3