本發(fā)明涉及含三氮唑雜環(huán)類化合物及其制備方法和應用。

背景技術：

白血病，亦稱作血癌，是一類造血干細胞異常的克隆性惡性疾病。其克隆中的白血病細胞失去進一步分化成熟的能力而停滯在細胞發(fā)育的不同階段。在骨髓和其他造血組織中白血病細胞大量增生積聚并浸潤其他器官和組織，同時使正常造血受抑制，臨床表現(xiàn)為貧血、出血、感染及各器官浸潤癥狀。

白血病通常分為:1)急性白血病；2)慢性白血??；3)特殊類型白血病。

急性白血病是一種造血干細胞異常的克隆性惡性疾病。其克隆中的白血病細胞失去進一步分化成熟的能力而停滯在細胞發(fā)育的不同階段。臨床表現(xiàn)為貧血、出血、感染及各器官浸潤癥狀。已通過引入新治療方案完成最新的改進，如針對Ph-陽性(Ph+)ALL而在早期加入酪氨酸激酶抑制劑伊馬替尼或針對B-系ALL的CD20+病例使用抗-CD20抗體利妥昔單抗(Rituximab)。但是這些藥對復發(fā)性急性淋巴細胞白血病(ALL)患者的療效極差，約30％的患者將最終復發(fā)。

特征類型白血病又可包括早幼粒細胞白血病、漿細胞白血病、淋巴瘤白血病以及中樞性白血病。這種特殊類型白血病，除了具有一般白血病臨床表現(xiàn)(發(fā)熱、出血、貧血、浸潤癥狀、肝脾淋巴結(jié)腫大)外，主要有如下特點：發(fā)病急，進展快，出血明顯，可發(fā)生致命性腦出血或合并彌散性血管內(nèi)凝血，如未能及時診斷和治療，在短時間內(nèi)可因出血導致死亡。因此，是人類健康的隱形殺手。

其中，慢性粒細胞白血病(chronic myelocytic leukemia，CML)又叫 慢性髓細胞白血病，它是血液系統(tǒng)的造血干細胞惡性克隆增殖性疾病，導致病人出現(xiàn)貧血、出血、感染等癥狀。根據(jù)CML患者的疾病進展狀況和嚴重程度分為慢性期(CP)、加速期(AP)和急變期(BP)。CML形成的主要原因是9號和22號染色體發(fā)生異位t(9:22)(q34:q11)(費城染色體Ph)形成一種融合基因即BCR-ABL融合基因，該基因能夠編碼BCR-ABL蛋白，是一種活性酪氨酸激酶。這種BCR-ABL激酶能使下游的一些底物磷酸化，進而激活與細胞增殖有關的信號轉(zhuǎn)導通路，造成成熟粒細胞無限增殖而導致CML的發(fā)生。

目前，臨床上對CML的治療方法主要是傳統(tǒng)的藥物治療、造血干細胞移植和新興的分子靶向治療。普通的藥物治療包括烷化劑白消安、羥基脲、干擾素(IFN-α)、阿糖胞苷及高三尖杉酯堿、阿霉素等。其中，由于白消安副反應比較大，目前在臨床上已經(jīng)停止使用；羥基脲、阿霉素等均是通過非特異地抑制腫瘤細胞與正常細胞的脫氧核糖核酸代謝發(fā)揮抗癌作用，而對CML發(fā)病的分子機理無特異的逆轉(zhuǎn)作用，故對腫瘤組織與正常組織的選擇性較差，毒性較大，療效欠佳；α-干擾素較前兩者毒副作用更小，病人耐受性也好，能夠產(chǎn)生持續(xù)的細胞遺傳學緩解使CML病患者的生存期延長，但是其對加速期和急變期的CML患者效果很差。這種普通藥物治療的一個很大弊端是在對腫瘤細胞產(chǎn)生殺傷作用的同時也能對正常的機體細胞產(chǎn)生損傷。

而造血干細胞移植在實際操作起來存在很多困難，比如對患者的年齡有一定的要求，手術復雜，成功率低，耗費高，而且存在移植配型成功率過低，占病人總數(shù)30％的白血病人對化療藥物完全不敏感，治療后難以清除病人體內(nèi)殘存的微小白血病病灶，導致白血病復發(fā)率高達30-40％，只有少數(shù)年輕患者能長期存活。另外，造血干細胞移植花費較高，動輒花費數(shù)十萬元，一般病人家庭很難接受。

2001年全球第一個與腫瘤發(fā)生相關的信號轉(zhuǎn)導抑制劑伊馬替尼上市，主要用于治療急性和慢性白血病，近年來，隨著伊馬替尼被大量使用，其耐藥性現(xiàn)象也逐漸凸顯，且多發(fā)生在CML加速期或急變期的患者。

所以尋找一種有效治療白血病、復發(fā)率低并且能夠克服伊馬替尼耐藥的化合物迫在眉睫。

技術實現(xiàn)要素：

為了解決現(xiàn)有技術中用于治療白血病的藥物療效不佳的問題，根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了一種含三氮唑雜環(huán)類化合物，所述含三氮唑雜環(huán)類化合物具有以下結(jié)構(gòu)通式：

在上述含三氮唑雜環(huán)類化合物中，所述結(jié)構(gòu)通式中R包括以下基團：

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，還提供了一種含三氮唑雜環(huán)類化合物的制備方法，包括以下合成路線：在氧化亞銅存在下，使4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯疊氮與疊氮化合物(R-N₃)反應，生成所述含三氮唑雜環(huán)類化合物；其中，所述含三氮唑雜環(huán)類化合物具有以下結(jié)構(gòu)通式：

在上述制備方法中，所述結(jié)構(gòu)通式中R包括以下基團：

在上述制備方法中，所述4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯疊氮的制備方法進一步包括：

在硝酸鈉和鹽酸存在下，使4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯胺與疊氮化鈉反應，生成4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯疊氮。

根據(jù)本發(fā)明的又一方面，還提供了上述的含三氮唑雜環(huán)類化合物在用于治療白血病的藥物中的應用。

在上述應用中，所述用于治療白血病的藥物包含所述含三氮唑雜環(huán)類化合物、所述含三氮唑雜環(huán)類化合物在藥學上可接受的鹽、酯、水合物或它們的組合以及輔料。

在上述應用中所述治療白血病的藥物的劑型選自片劑、膠囊劑、丸劑、 栓劑、氣霧劑、口服液體制劑、顆粒劑、散劑、注射劑、糖漿劑、酒劑、酊劑、露劑、膜劑或它們的組合。

在上述應用中所述治療白血病的藥物的給藥方式包括口服、注射、植入、外用、噴霧、吸入或它們的組合。

從而，本發(fā)明提供了一類新的含三氮唑雜環(huán)類化合物及其制備方法和應用，通過細胞水平實驗發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供的含三氮唑雜環(huán)類化合物均可以抑制K562-3d、HL60、KG1a細胞的增殖，通過測定IC₅₀和IC₉₀值發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供的含三氮唑雜環(huán)類化合物對K562-3d、HL60、KG1a細胞的增殖的抑制作用均可達到90％，并且特別是本發(fā)明提供的實例3化合物(化合物15c)在藥物濃度低于陽性對照藥物伊馬替尼的情況下，可以同樣實現(xiàn)抑制K562-3d、HL60、KG1a細胞增殖的效果，因此本發(fā)明提供的含三氮唑雜環(huán)類化合物可以用于治療白血病。

附圖說明

圖1是化合物15a的¹H NMR。

圖2是化合物15a的¹³C NMR。

圖3是化合物15b的¹H NMR。

圖4是化合物15b的¹³C NMR。

圖5是化合物15c的¹H NMR。

圖6是化合物15c的¹³C NMR。

圖7是化合物15d的¹H NMR。

圖8是化合物15d的¹³C NMR。

圖9是化合物15e的¹H NMR。

圖10是化合物15e的¹³C NMR。

圖11是化合物15f的¹H NMR。

圖12是化合物15f的¹³C NMR。

圖13是化合物15g的¹H NMR。

圖14是化合物15g的¹³C NMR。

圖15是化合物15h的¹H NMR。

圖16是化合物15h的¹³C NMR。

圖17是化合物15i的¹H NMR。

圖18是化合物15i的¹³C NMR。

圖19是化合物15j的¹H NMR。

圖20是化合物15j的¹³C NMR。

圖21是化合物15k的¹H NMR。

圖22是化合物15k的¹³C NMR。

圖23是化合物15l的¹H NMR。

圖24是化合物15l的¹³C NMR。

圖25是化合物15m的¹H NMR。

圖26是化合物15m的¹³C NMR。

圖27是化合物15n的¹H NMR。

圖28是化合物15n的¹³C NMR。

圖29示出了伊馬替尼、實例1化合物、實例8-9化合物和實例11-14化合物對K562細胞的抑制。

圖30示出了伊馬替尼、實例1化合物、實例8-10化合物和實例12-13化合物對HL60的抑制。

圖31示出了伊馬替尼、實例1化合物、實例3化合物、實例8-10化合物和實例12-13化合物對KG1a細胞的抑制。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領域普通技術人員所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

實施例1含三氮唑雜環(huán)類化合物的化學合成和結(jié)構(gòu)鑒定

1.本發(fā)明提供的含三氮唑雜環(huán)類化合物具有以下結(jié)構(gòu)通式：

在上述結(jié)構(gòu)通式中，取代基R包括以下結(jié)構(gòu):

2.本發(fā)明提供的含三氮唑雜環(huán)類化合物的化學合成實驗步驟

2.1通用合成路線為:

2.2實驗部分

2.2.1化合物4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯疊氮(2)的合成

取100ml三口圓底燒瓶，在0℃下，依次加入N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-氨基嘧啶(反應底物1，500mg)，亞硝酸鈉(250mg)，水(15ml)(注意此時最好使用機械攪拌，因為以水作溶劑當溫度過低時反應液會凝固，且機械攪拌的攪拌槳不能為金屬材質(zhì)，否則會與疊氮化鈉劇烈反應出現(xiàn)危險)。當攪拌充分后，滴加HCl(192mg)，速度不能過快，滴加完畢后，保持反應體系的溫度在0-5℃繼續(xù)反應1.5小時。反應液的顏色加深。然后再加入疊氮化鈉(141mg)的水溶液，一定要滴加，且速度不能過快，滴加過程中會產(chǎn)生大量的泡沫，此時需補加反應溶劑-水。滴加完畢保持溫度不變繼續(xù)反應3小時。反應過程中通過TLC監(jiān)測反應進程。在反應的過程中會發(fā)現(xiàn)反應液的顏色由深黃色又變回淺黃色且伴有黃色的泡沫^[68]。反應結(jié)束，將反應液用乙酸乙酯萃取(40ml×3)，有機相飽和食鹽水水洗三次，合并有機相，無水硫酸鎂干燥，濃縮得到粗品，通過柱層析分得化合物2的純品，產(chǎn)率為95％。該化合物的MS：[M+H]⁺304.12；¹H NMR(400 MHz，CDCl₃)：δppm 9.27(s，1H)，8.75(d，J＝4.0Hz，1H)，8.54(d，J＝4.0Hz，1H)，8.42(d，J＝8.0Hz，1H)，8.23(s，1H)，7.45(m，1H)，7.24(d，J＝5.2Hz，1H)，7.18(d，J＝8.0Hz，1H)，7.12(s，1H)， 6.69(m，1H)，2.36(s，3H)。

2.2.2化合物5a-5n的合成

2.2.2.1化合物5a的合成

路線1

取250ml三口燒瓶，放入原料胺3(1.00g，4.15mmol)，加入20ml水，使反應體系的溫度降至0℃，0.23g的HCl于5ml水中稀釋滴加到反應體系中，隨著HCl的加入，反應體系的黏度不斷增加，因此我們在進行此步反應時最好使用機械攪拌，滴加完畢后繼續(xù)維持0℃攪拌1小時，再向反應體系中加入0.28g亞硝酸鈉的20ml水溶液，繼續(xù)攪拌0.5小時。將上述的反應溶液體系在0℃下加入到KI(0.83g)，CuI(0.97g)的20ml水溶液中，加畢，將整個反應體系慢慢升溫至75℃，反應體系中不斷有氣泡產(chǎn)生，是生成的氮氣，當氣泡不再產(chǎn)生，向反應體系中加入50ml的乙酸乙酯將產(chǎn)物萃取出來，該反應過程收率不高，原因是因為化合物3生成的重氮鹽不穩(wěn)定，隨著溫度的升高，部分重氮鹽在未與碘離子完成置換前就已經(jīng)分解。過硅膠柱得純品，即得化合物14。該化合物的MS：[M+H]⁺353.09；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 8.46 (s，2H)，7.99(s，1H)，7.98(s，1H)，7.17(s，1H)，2.35(s，3H)。

在氮氣保護下，取50ml三口瓶，將該步反應含碘的底物4(280mg)，三甲基硅基乙炔(156mg)，雙三苯基膦二氯化鈀(1％mmol)，CuI(1％mmol)，加入到反應體系中，向反應體系中加入6ml的三乙胺(三乙胺預先干燥除氧除水)，再加入5ml的四氫呋喃做為底物的助溶劑，常溫25℃反應4小時，將反應液直接旋干，水洗用乙酸乙酯(20ml×3)進行萃取，合并有機相，濃縮得到含有三甲基硅炔的中間產(chǎn)物^[66]。

取25ml三口圓底燒瓶保持干燥，不能有水，在室溫下，依次加入碳酸鉀(276mg)，所得的含三甲基硅炔的中間產(chǎn)物(230mg)，將整個反應體系用氮氣保護，再向反應體系中加入20ml重蒸的甲醇，室溫下繼續(xù)反應3小時^[67]。反應過程中通過TLC監(jiān)測反應進程。反應結(jié)束，將反應液過濾，除去碳酸鉀固體，加入20ml超純水，用乙酸乙酯萃取(20ml×3)，飽和食鹽水水洗3次，合并有機相，無水硫酸鎂干燥，濃縮的到產(chǎn)物的粗品，通過柱層析分得產(chǎn)物的純品化合物5a。該化合物的MS：[M+H]⁺251.23；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 7.81(s，1H)，7.69(s，1H)，7.66(s，1H)，7.58(s，1H)，7.05(s，1H)，3.27(s，1H)，2.31(s，3H)。

2.2.2.2化合物5b的合成

路線2

具體操作

在50ml的圓底燒瓶中加入25ml甲醇，冰浴冷卻下滴加二氯亞砜(874mg，7.35mmol)，滴畢加入4-甲基-3-三氟甲基苯甲酸6(500mg，2.45mmol)，將體系移至室溫反應，TLC監(jiān)測反應。反應結(jié)束，減壓濃縮，產(chǎn)品為油狀液體，即化合物7。¹H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 8.29(s，1H)，8.09(d，J＝8Hz，1H)，7.37(d，J＝8Hz，1H)，3.95(s，3H)，2.55(s，3H)。

取50ml的三口圓底燒瓶，加入15ml的四氯化碳，加入化合物7(436mg，2.00mmol)和N-溴丁二酰亞胺(NBS)(392mg，2.20mmol)，在氮氣保護下加熱至回流，回流15分鐘后緩慢加入過氧苯甲酰(BPO)(50mg，0.22mmol)(溶于5ml的四氯化碳)，加熱回流6小時，TLC監(jiān)測反應^[78]。反應液冷卻至室溫，有固體析出，過濾，乙酸乙酯洗滌，濾液用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮得到化合物8的粗品，直接用于下一步。取25mL的三口圓底燒瓶，加入10mL的四氫呋喃，加入化合物8的粗品，氮甲基哌嗪(600mg，6.00mmol)碳酸鉀(800mg，5.79mmol)室溫下攪拌3小時，TLC監(jiān)測反應^[79]。反應結(jié)束后，旋干，水洗，二氯甲烷萃取，無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮硅膠柱層析純化得化合物9純品210mg，產(chǎn)率為33.4％。該化合物的 ¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 8.31(s，1H)，8.18(d，J＝8Hz，1H)，7.94(d，J＝8Hz，1H)，3.96(s，3H)，3.72(s，2H)，2.52(s，8H)，2.32(s，3H)。

取25ml的三口圓底燒瓶，加入15ml四氫呋喃，加入化合物9(610mg，1.93mmol)和硼氫化鈉(511mg，13.44mmol)加熱至回流，回流15分鐘后，緩慢的加入甲醇，有氣泡產(chǎn)生，繼續(xù)滴加甲醇直至不在產(chǎn)生氣泡，繼續(xù)加熱回流6小時，TLC監(jiān)測反應。反應結(jié)束后，加入水淬滅，旋蒸旋走四氫呋喃，二氯甲烷萃取，無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮硅膠柱層析純化得化合物10 ¹HNMR，7.66(s，1H)，7.53(d，J＝8Hz，1H)，4.76(s，2H)，3.68(s，2H)， 2.56(s，8H)，2.35(s，3H)。

取25ml的三口圓底燒瓶，加入15ml二氯甲烷，加入化合物10(352mg，1.22mmol)和氯鉻酸吡啶鹽(PCC)(523mg，2.44mmol)室溫下攪拌3小時，TLC監(jiān)測反應^[81]。反應結(jié)束后，過濾除去黑色沉淀，水洗有機相，無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮硅膠柱層析純化得化合物11純品291mg，產(chǎn)率為83.3％。 ¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 10.04(s，1H)，8.13(s，1H)，8.07-8.02(m，2H)，3.74(s，2H)，2.52(s，8H)，2.32(s，3H)。

取25ml的三口圓底燒瓶，加入15ml無水甲醇，加入化合物11(110mg，0.38mmol)化合物a(1-重氮基-2-氧代-丙基)-磷酸二甲酯)(113mg，0.59mmol)和碳酸鉀(106mg，0.77mmol)室溫下攪拌12小時，TLC監(jiān)測反應。反應結(jié)束后，旋干，水洗，二氯甲烷萃取，無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮得到化合物5b粗品70mg，由于化合物5b的極性較11的極性相差不大，很難分離，為了避免溶劑的浪費和簡化實驗操作，將本步所得粗品直接用于下一步反應。

2.2.2.3化合物5c-5n的合成

路線三

實驗步驟(以5c為例)：

取50ml三口圓底燒瓶，加入溶劑二氯甲烷(20ml)，在0℃下，依次加入4-(4-甲基-哌嗪基-1-基)甲基-苯甲酸12(0.76g，3.25mmol)、HOBt(0.49g，3.63mmol)、EDCI(0.69g，3.60mmol)、和4-甲基嗎啡啉(0.99g，9.79mmol)，使反應體系保持0℃不變，攪拌20分鐘。然后加入N,O-二甲基羥胺鹽酸鹽(0.47g，4.82mmol)，保持0℃不變，反應3小時。待反應結(jié)束后，將反應液直接旋干，加入30ml 5％的氫氧化鈉水溶液，調(diào)節(jié)溶液的pH至12，然后用乙酸乙酯(30ml×3)萃取，合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，將殘留物經(jīng)硅膠柱層析(V_二氯甲烷/V_甲醇＝20:1)純化，得到0.82g預期產(chǎn)物13，為淺黃色油狀液體，收率為90.80％。該化合物的MS：[M+H]⁺278.18；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 7.59(d，J＝8.0Hz，2H)，7.32(d，J＝8.0Hz，2H)，3.53(s，3H)，3.51(s，2H)，3.32(s，3H)，2.46(s，8H)，2.27(s，3H)。

取25ml三口圓底燒瓶，加入四氫呋喃(15ml)，在0℃下，依次加入步驟中得到的化合物13(0.82g，2.96mmol)和四氫鋁鋰(0.32g，8.42mmol)，使反應體系保持0℃不變，反應3小時。待反應結(jié)束后，將反應液滴加到飽和的氫氧化鈉水溶液中，會看到有大量的白色絮狀物生成，用乙酸乙酯(30ml×3)萃取，用飽和食鹽水(30ml×3)洗滌，合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，將殘留物經(jīng)硅膠柱層析(V_二氯甲烷/V_甲醇＝20:1)純化，得到0.53g預期產(chǎn)物14，為黃色油狀液體，收率為82.02％。該化合物的MS：[M-H]^-217.14；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm9.99(s，1H)，7.83(d，J＝8.0Hz，2H)，7.50(d，J＝8.0Hz，2H)，3.59(s，2H)，2.52(s，8H)，2.32(s，3H)。

取25ml干燥的三口圓底燒瓶，在室溫下，依次加入碳酸鉀(276mg，2.00mmol)、第二步中得到的產(chǎn)物14(218mg，1.00mmol)、(1-重氮基-2-氧代-丙基)-磷酸二甲酯a(192mg，1.00mmol)，最后將V_甲醇/V_四氫呋喃＝1:1(14ml)加入到反應體系中，在室溫下反應18小時。在反應的過程中發(fā)現(xiàn)反應液的顏色由淺黃色變?yōu)樘O果青色。待反應結(jié)束后，將反應液過濾，除去碳酸鉀固體，加入20ml超純水，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，用飽和食鹽水(30ml×3)洗滌，合并有機相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，得到214mg粗標題化合物，將該粗品經(jīng)硅膠柱層析(V_二氯甲烷/V_甲醇＝20:1)純化，得到170mg預期產(chǎn)物，為黃色固體，即為化合物5c，收率為79.22％。該化合物的MS：[M+H]⁺215.31；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 7.45(d，J＝8.0Hz，2H)， 7.29(d，J＝8.0Hz，2H)，3.52(s，2H)，3.06(s，1H)，2.51(s，8H)，2.33(s，3H)。

按照5c的反應路線和操作方法得到了系列化合物5d-5n

實例1-14 化合物15a-15n的合成

實例1化合物15a的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

取25ml三口圓底燒瓶，在室溫下，依次加入乙醇-水混合體系(V_乙醇：V _水＝2:1，15ml)，所得化合物5a(0.18g，0.70mmol)，所得化合物2(0.25g，0.83mmol)，再加入納米Cu₂O(0.19g，1.00mmol)，反應12小時，反應過程中通過TLC來監(jiān)控反應進程。反應結(jié)束，將反應液過濾后濃縮，經(jīng)硅膠柱層析純化得產(chǎn)品0.23g，即為化合物15a。該化合物的MS：[M+H]⁺554.54；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 9.46(m，1H)，9.12(s，1H)，8.76-8.74(m，1H)，8.60(d，J＝4.4Hz，1H)，8.44(d，J＝7.2Hz，2H)，8.30(s，1H)，8.16(s，1H)，7.61(s，1H)，7.51(d，J＝7.2Hz，2H)，7.41(d，J＝8.0Hz，1H)，7.30(s，1H)，7.25(s，1H)，2.49(s，3H)，2.36(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.7，160.0，159.3，151.9，148.6，145.9，138.8，135.4，134.5，133.5，132.9，131.5，127.1，121.0，120.9，120.9，118.6，117.0，114.3，111.6，109.1，17.8。

反應路線和操作方法和化合物15a的制備過程相似，所得系列化合物如下：

實例2化合物15b的結(jié)構(gòu)鑒定:

為淡黃色狀固體，收率為89.20％。該化合物的MS：[M+H]⁺518.27；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 9.32(d，J＝2.0Hz，1H)，9.50(d，J＝2.4Hz，1H)，8.78(dd，J＝1.6，4.8Hz，1H)，8.59(d，J＝5.2Hz，1H)，8.54(dt，J＝2.0，8.0Hz，1H)，8.23(s，1H)，7.90(d，J＝8.4Hz，2H)，7.51(dd，J＝4.8，7.6Hz，1H)，7.43-7.45(m，3H)，7.38(d，J＝8.4Hz，1H)，7.30(s，1H)，7.28(s，1H)，3.59(s，2H)，2.58(bs，8H)，2.47(s，3H)，2.36(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.3，160.0，159.0，151.5，148.3，147.9，138.6，138.4，135.4，134.6，132.2，131.1，129.6，129.1，127.1，125.6，123.7，117.3，113.8，111.9，108.6，62.7，55.1，53.0，46.0，17.7。

實例3化合物15c的結(jié)構(gòu)鑒定:

為淡黃色狀固體粉末。兩步總收率為56.3％。該化合物的MS：[M+H]⁺586.54；¹H NMR(400MHz，CDCl₃):δppm 9.32(s，1H)，9.04(d，J＝2.0Hz，1H)，8.75(d，J＝3.6Hz，1H)，8.56(d，J＝5.2Hz，1H)，8.49(dt，J＝1.6，8.0Hz，1H)，8.28(s，1H)，8.14(s，1H)，8.11(d，J＝8.0Hz，1H)，7.89(d，J＝8.0Hz，1H)，7.48(dd，J＝4.8，8.0Hz，1H)，7.42(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.35(d，J＝8.0Hz，1H)，7.27(s，1H)，7.25(s，1H)，3.71(s，2H)，2.54(bs，8H)，2.44(s，3H)，2.33(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.6，160.1，159.2，151.8，148.5，146.9，138.8，137.8，135.5，134.7， 132.4，131.3，131.1，129.4，129.2，129.1，128.9，127.2，123.8，123.2，123.2，117.8，114.1，112.1，108.9，58.0，55.2，53.1，46.0，17.8。

實例4化合物15d：(2-甲基-5-{4-(2-萘基)-基-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物收率為56.2％。MS：[M+H]⁺:456.32；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δppm 9.42(s，1H)，9.34(s，1H)，9.19(s，1H)，8.71(d，J＝4.0Hz，1H)，8.60(d，J＝4.0Hz，1H)，8.52(s，1H)，8.51(s，1H)，8.47(d，J＝2.0Hz，1H)，8.11-7.95(m，4H)，7.69-7.66(m，1H)，7.57-7.50(m，5H)，2.39(s，3H)。¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)：δ162.1，161.2，160.1，152.0，148.7，147.7，139.6，135.2，134.9，133.6，133.2，132.6，132.3，131.9，129.1，128.5，128.4，128.2，127.2，126.8，124.3，124.2，124.2，120.3，116.0，115.6，108.8，18.3。

實例5化合物15e：(2-甲基-5-{4-[3,4-二甲氧基-苯基]-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為49.6％。MS：[M+H]⁺466.34；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 9.31(bs，1H)，9.01(s，1H)，8.75(d，J＝4.0Hz，1H)，8.57 (d，J＝5.2Hz，1H)，8.52(d，J＝8.0Hz，1H)，8.17(s，1H)，7.58(d，J＝1.6Hz，1H)，7.49(t，J＝4.0，1H)，7.44-7.35(m，3H)，7.22(s，1H)，6.95(d，J＝8.0Hz，1H)，4.01(s，3H)，3.95(s，3H)，2.45(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ162.6，160.2，159.2，151.7，149.4，149.3，148.4，148.2，138.7，135.7，134.8，132.5，131.3，127.1，123.9，123.4，118.4，116.9，114.3，112.3，111.4，109.1，108.9，56.1，55.9，17.8。

實例6化合物15f：(2-甲基-5-{4-[4-甲氧基-苯基]-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-嘧啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為62.7％。MS：[M+H]⁺436.35；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 9.30(s，1H)，9.02(d，J＝1.6Hz，1H)，8.76(d，J＝1.6Hz，1H)，8.57-8.51(m，1H)，8.14(s，1H)，7.86(d，J＝8.8Hz，2H)，7.51-7.48(m，1H)，7.42-7.40(m，1H)，7.34(d，J＝8.0Hz，1H)，7.26(d，J＝5.2Hz，1H)，7.23(s，1H)，7.00(d，J＝8.8Hz，2H)，3.87(s，3H)，2.44(s，3H)。 ¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ162.6，160.1，159.7，159.2，151.6，148.4，148.1，138.7，135.8，134.9，132.5，131.3，127.2，127.0，123.9，123.1，116.7，114.3，114.2，112.2，108.9，55.4，17.8。

實例7化合物15g：(2-甲基-5-{4-[3-甲氧基-苯基]-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-嘧啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為58.9％。MS：[M+H]⁺436.37；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δppm 9.31(s，1H)，9.05(d，J＝2.0Hz，1H)，8.77(d，J＝3.2Hz，1H)，8.59(d，J＝4.8Hz，1H)，8.55(d，J＝8.0Hz，1H)，8.23(s，1H)，7.57(s，1H)，7.48(m，3H)，7.39(t，J＝7.8Hz，2H)，7.22(s，1H)，6.94(m，1H)，3.92(s，3H)，2.47(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.7，160.1，160.1，159.2，151.6，148.3，148.1，138.7，135.7，134.9，132.5，131.7，131.3，129.9，127.1，124.0，118.3，117.8，114.3，114.3，112.3，111.0，108.9，55.4，17.8。

實例8化合物15h：(2-甲基-5-{4-[3,5-二三氟甲基-苯基]-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為30.6％。MS：[M+H]⁺542.45；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 9.40(m，1H)，9.12(s，1H)，8.79(d，J＝3.2Hz，1H)，8.60(d，J＝5.2Hz，1H)，8.50-8.41(m，2H)，8.36(d，J＝5.6Hz，1H)，7.54-7.47(m，2H)，7.40(d，J＝8.0Hz，1H)，7.31-7.28(m，3H)，2.49(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.7，160.0，159.3，151.9，148.5，146.0，138.8，135.4，134.6，132.4，132.2，131.8，131.4，127.2，126.3，124.8，123.9，118.6，118.4，118.2，114.2，113.6，111.8，109.1，84.28，29.7，17.8。

實例9化合物15i：(2-甲基-5-{4-[3-三氟甲基-4-甲基-苯基]-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為37.2％。MS：[M+H]⁺488.48；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 9.35(s，1H)，9.07(d，J＝2.0Hz，1H)，8.79(s，1H)，8.60(d，J＝5.2Hz，1H)，8.57(d，J＝8.0Hz，1H)，8.28(s，1H)，8.14(s，1H)，8.05(d，J＝8.0Hz，1H)，7.54(m，1H)，7.44-7.28(m，3H)，7.31(s，1H)，2.56(d，J＝1.2Hz，3H)，2.48(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.6，160.1，159.2，151.4，148.1，147.1，138.7，136.6，135.6，135.1，132.6，131.4，130.9，129.6，128.8，128.3，127.3，125.8，123.2，117.7，114.3，112.3，108.9，29.7，19.2，17.8。

實例10化合物15j：(2-甲基-5-{4-[3-三氟甲基-4-甲氧基-苯基]-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為40.1％。MS：[M+H]⁺504.48；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 9.35(s，1H)，9.32(d，J＝1.6Hz，1H)，9.18(s，1H)，8.70(dd，J＝1.6，4.8Hz，1H)，8.59(d，J＝5.2Hz，1H)，8.51(dt，J＝2.0，8.0Hz，1H)，8.41(d，J＝2.0Hz，1H)，8.21(dd，J＝2.0，8.8Hz，1H)，8.16(d，J＝1.6Hz，1H)，7.63(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.55-7.48(m，3H)，7.43(d，J＝8.8Hz，1H)，2.51(t，J＝1.6Hz，3H)，2.38(s，3H)。¹³C NMR(100MHz， CDCl₃)δ162.1，161.2，160.1，157.3，152.0，148.6，146.4，139.6，135.1，134.8，132.5，132.4，131.9，131.2，124.3，124.0，123.2，122.7，119.7，118.0，117.7，115.9，115.5，114.1，108.8，56.8，18.3。

實例11化合物15k：(2-甲基-5-{4-甲醇基-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為47.2％。MS：[M+H]⁺360.28；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 9.28-9.27(m，1H)，9.03(d，J＝12Hz，1H)，8.76(d，J＝4.4Hz，1H)，8.68(s，1H)，8.65(d，J＝4.8Hz，1H)，8.57(t，J＝8.8Hz，2H)，8.31-8.29(d，J＝8.0Hz，1H)，7.85(t，J＝8.0Hz，1H)，7.57-7.54(m，1H)，7.47-7.45(m，1H)，7.38(d，J＝8.0Hz，1H)，7.31(d，J＝5.2Hz，1H)，7.22(s，1H)，2.47(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.7，160.2，159.2，151.7，150.1，149.3，148.7，138.8，137.1，135.7，134.9，132.5，131.4，127.2，124.0，123.0，120.5，114.2，112.3，108.9，17.8。

實例12化合物15l：(2-甲基-5-{4-乙醇基-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為42.7％。MS：[M+H]⁺374.43；¹H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 9.32(bs，1H)，8.96(d，J＝2.0Hz，1H)，8.71(s，1H)，8.50 (d，J＝5.2Hz，1H)，8.35(d，J＝8.0Hz，1H)，8.00(s，1H)，7.48(s，1H)，7.39(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.26(s，1H)，7.19(d，J＝5.2Hz，1H)，4.04(t，J＝5.6Hz，2H)，3.09(t，J＝5.6Hz，2H)，2.40(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl3)：δ162.6，160.1，159.7，159.2，151.6，148.4，148.1，138.7，135.8，134.9，132.5，131.3，127.2，127.0，123.9，123.1，116.7，114.3，114.2，112.2，108.9，55.4，17.8。

實例13化合物15m：(2-甲基-5-{4-(2-羥基)-乙醇基-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為46.4％。MS：[M+H]⁺374.41；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 9.37(s，1H)，9.12(s，1H)，8.76(s，1H)，8.58(d，J＝5.2Hz，1H)，8.46(d，J＝8.0Hz，1H)，8.05(s，1H)，7.54(m，1H)，7.42(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.35(s，1H)，5.23(q，J＝6.4Hz，1H)，2.47(s，3H)，1.71(d，J＝6.4Hz，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.3，160.0，159.2，153.6，151.3，148.2，138.6，135.8，135.0，131.3，126.6，124.1，118.7，114.3，112.4，108.8，63.3，29.7，23.3，17.7。

實例14化合物15n：(2-甲基-5-{4-丁醇基-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為36.3％。MS：[M+H]⁺402.46；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 9.32(m，1H)，8.92(s，1H)，8.55(d，J＝5.2Hz，1H)，8.47(d，J＝7.6Hz，1H)，7.79(s，1H)，7.53(bs，1H)，7.37-7.31(m，2H)，7.24(d，J＝4.4Hz，2H)，3.73(t，J＝6.4Hz，2H)，2.87(t，J＝7.6Hz，2H)，1.91-1.84(m，2H)，1.75-1.68(m，2H)，2.43(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.7，160.1，159.2，138.6，135.9，134.9，131.2，126.8，118.9，114.2，112.1，108.9，62.3，32.2，25.6，25.3，17.8。

實施例2由實施例1制備的實例1至實例14化合物的活性測試

MTT粉末購買于Sigma公司，用磷酸緩沖液(PBS)將其配制成濃度為5毫克/毫升的溶液，選取0.22μm濾膜進行過濾，然后于4℃下避光保存。K562細胞(慢性粒細胞白血病細胞系)購于自北京金紫晶生物科技有限公司。實驗中所使用的細胞培養(yǎng)基為改良型RPMI-1640(Hyclone)基礎培養(yǎng)基，添加10％的胎牛血清(Hyclone)。

MTT比色法測定細胞活性包括下面幾個步驟(以K562細胞的測試方法為例，KG1a HL60細胞的測試方法與K562細胞的方法一致)：

(1)選取處于對數(shù)生長期的K562細胞，按每孔3×10³接種于96孔板，5％CO₂，37℃孵育培養(yǎng)過夜。

(2)加藥，本實驗中設置了9個濃度梯度，體系中藥物終濃度梯度為：30μM，15μM，7.5μM，3.7μM，1.8μM，0.9μM，0.5μM，0.2μM，0.1μM。每個濃度5個復孔，同時設置對照組(不加藥僅接種細胞)及空白孔(未接種細胞僅加培養(yǎng)基)，5％CO₂，37℃培養(yǎng)箱孵育72小時。

(3)每孔再加入20μL MTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)4小時。若藥物與MTT能夠反應，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖洗2-3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。

(4)4小時后終止培養(yǎng)，小心地吸去孔內(nèi)的液體。并向每孔加入150μL的二甲基亞砜。然后置于搖床上低速振蕩15min左右，使結(jié)晶物充分溶解。采用酶聯(lián)免疫檢測儀MULTISKAN FC(Thermo scientific)測定490nm處及570nm各孔的吸光度值，測量時以空白孔作為調(diào)零孔。

(5)處理數(shù)據(jù)。以藥物濃度為橫坐標，細胞數(shù)為縱坐標，用數(shù)據(jù)處理軟 件SPSS軟件(IBM公司)進行幾率單位加權(quán)回歸法(Bliss法)進行數(shù)據(jù)處理，作圖，得到IC₅₀和IC₉₀值，IC₅₀和IC₉₀值見表1。

表1實例1-14化合物對K562-3d、HL60、KG1a細胞的IC₅₀和IC₉₀值

通過表1，可以看出實例1至實例14化合物(分別對應于化合物15a-15n)均可以抑制K562-3d、HL60、KG1a細胞的增殖，特別是實例3化合物(化合物25c)在藥物濃度低于陽性對照藥物伊馬替尼的情況下，仍可以同樣實現(xiàn)有效抑制K562-3d、HL60、KG1a細胞增殖的效果，因此實例1至實例14化合物可以用于治療白血病。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。