本發(fā)明屬于分離純化技術領域，尤其涉及一種保持胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物活性的純化方法。
背景技術：
胱抑素C(CysC)又稱半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白C，是80年代中期被瑞典的Simonsen等科學家研究發(fā)現(xiàn)的一種低分子量蛋白質(zhì)。研究資料已表明，在腎功能不全、肝硬化、腫瘤等多種疾病的診斷中，CysC能夠很好的替代血清肌酐、肌酐消除率，成為一種新的可反映腎小球的濾過率(GFR)的理想標志物。納米膠乳微球增強透射免疫比濁法(PETIA)是目前臨床測定胱抑素C的最新方法，在該方法的檢測試劑制備過程中，保持胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物活性的快速純化是其核心技術環(huán)節(jié)之一。目前文獻報道的純化技術，均采用高速離心沉淀膠乳顆粒、傾倒除去含雜質(zhì)的上清溶液、往膠乳顆粒中加入緩沖液并超聲懸浮的方法(下稱“離心法”)，該方法可以保持胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物活性，但每次純化的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物數(shù)量有限，不適合大規(guī)模的工業(yè)化應用。因此，需求一種保持胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物活性的快速純化方法，對于實現(xiàn)PETIA法檢測胱抑素C試劑的規(guī)模化生產(chǎn)，就顯得尤為重要。
現(xiàn)有離心法在純化胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物時規(guī)模小、不適合工業(yè)化生產(chǎn)。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種保持胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物活性的純化方法，旨在解決現(xiàn)有離心法在純化胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物時規(guī) 模小、不適合工業(yè)化生產(chǎn)的問題。
本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，一種保持胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物活性的純化方法，所述保持胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物活性的純化方法將待純化的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液轉移至切向流過濾系統(tǒng)，設置剪切力大小，超濾膜設置在中空纖維膜過濾器內(nèi)部，超濾膜為改性聚醚砜膜，截留分子量為500KD，設置剪切力為2000s-1，對應的膜面積為115～2600cm2、泵速為30～1150ml/min；在60min內(nèi)將溶液濃縮，濃縮倍數(shù)為5倍，獲得粗濃縮胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液；通過設置2000s-1的剪切力，在濃縮操作過程中可保持胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物活性；通過設置截留分子量為500KD的改性聚醚砜膜，可使EDAC和胱抑素C抗體穿過聚醚砜膜而胱抑素C抗體-膠乳截留在膜內(nèi)；通過設置115～2600cm2的膜面積、30～1150ml/min的泵速、5倍的濃縮倍數(shù)，可使?jié)饪s操作在60min內(nèi)完成。
進一步，獲得粗濃縮胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液之后，超濾膜設置在中空纖維膜過濾器內(nèi)部，超濾膜為改性聚醚砜膜，截留分子量為500KD，設置剪切力為2000s-1，對應的膜面積為115～2600cm2、泵速為30～1150ml/min；在切向流系統(tǒng)內(nèi)對獲得的粗濃縮胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液進行洗脫操作，在60min內(nèi)用緩沖液洗脫至設定的洗脫倍數(shù)；通過洗脫操作，去除剩余的交聯(lián)劑EDAC和未交聯(lián)的抑素C抗體，達到純化胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物的目的。
進一步，所述洗脫倍數(shù)為5倍；所述緩沖液為pH 7.8甘氨酸緩沖液，濃度20mmol/L；設置5倍的洗脫倍數(shù)、用20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液進行洗脫可保證在最短的時間內(nèi)完成洗脫操作。
進一步，用緩沖液洗脫至設定的洗脫倍數(shù)之后需要用稀釋液將純化后的抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液稀釋至指定體積；經(jīng)過稀釋，將膠乳濃度調(diào)整至0.4g/L。
進一步，所述稀釋液為含有10g/L聚乙二醇6000、9g/L的氯化鈉、5mmol/L 的EDTA、1g/L的疊氮鈉、20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液；得到膠乳濃度為0.4g/L的胱抑素C檢測試劑。
進一步，所述濃縮操作方法為：將需純化的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液裝入樣品容器，關閉過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)泵速至目標流速的一半后開啟蠕動泵，使胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液充滿整個過濾管路，直至過濾管路的回流液端有液體流出，關閉蠕動泵；將泵速調(diào)整至目標值，開啟過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)過濾回路的背壓閥，使跨膜壓恒定在5.0Psi，當達到設定的濃縮倍數(shù)時關閉蠕動泵；經(jīng)過濃縮操作，可去除胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液中大部分交聯(lián)劑EDAC和大部分未交聯(lián)的抑素C抗體。
進一步，所述保持胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物活性的純化方法具體包括以下步驟：
步驟一，將600ml待純化的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液轉移至切向流過濾系統(tǒng)的樣品容器中，將超濾膜設置在中空纖維膜過濾器內(nèi)部，超濾膜為改性聚醚砜膜，截留分子量為500KD，膜面積為115cm2，設置目標泵速為30ml/min，剪切力為2000s-1，關閉過濾回路的濾過液夾，先調(diào)節(jié)泵速至15ml/min，開啟蠕動泵，使胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液充滿整個過濾管路，直至過濾管路的回流液端有液體流出，關閉蠕動泵；將泵速調(diào)整至30ml/min，開啟過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)過濾回路的背壓閥，使跨膜壓恒定在5.0Psi，在達到5倍的濃縮倍數(shù)時關閉蠕動泵，得到120ml粗濃縮胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液，總需時25分鐘；
步驟二，選擇與步驟一相同的中空纖維膜組件、泵速和剪切力，將洗脫用的600ml濃度為20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液裝入清洗液容器，關閉過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)泵速至15ml/min，開啟蠕動泵，使胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液充滿整個過濾管路，直至過濾管路的回流液端有液體流出，關閉蠕動泵；將泵速調(diào)整至30ml/min，開啟過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)過濾回路的背壓閥，使跨膜壓恒定在5.0Psi，當達到5倍的洗脫倍數(shù)時關閉蠕動泵， 總需時36分鐘；
步驟三，收集步驟二純化后的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液120ml，用含有10g/L聚乙二醇6000、9g/L的氯化鈉、5mmol/L的EDTA、1g/L的疊氮鈉、20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液稀釋至3.0L，得到胱抑素C檢測試劑A1。
進一步，所述保持胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物活性的純化方法具體包括以下步驟：
步驟一，將4L待純化的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液轉移至切向流過濾系統(tǒng)的樣品容器中，將超濾膜設置在中空纖維膜過濾器內(nèi)部，超濾膜為改性聚醚砜膜，截留分子量為500KD，膜面積為790cm2，設置目標泵速為420ml/min，剪切力為2000s-1，關閉過濾回路的濾過液夾，先調(diào)節(jié)泵速至210ml/min，開啟蠕動泵，使胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液充滿整個過濾管路，直至過濾管路的回流液端有液體流出，關閉蠕動泵；將泵速調(diào)整至420ml/min，開啟過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)過濾回路的背壓閥，使跨膜壓恒定在5.0Psi，在達到5倍的濃縮倍數(shù)時關閉蠕動泵，得到800ml粗濃縮胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液，總需時31分鐘；
步驟二，選擇與步驟一相同的中空纖維膜組件、泵速和剪切力，將洗脫用的4L濃度為20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液裝入清洗液容器，關閉過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)泵速至210ml/min，開啟蠕動泵，使胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液充滿整個過濾管路，直至過濾管路的回流液端有液體流出，關閉蠕動泵；將泵速調(diào)整至420ml/min，開啟過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)過濾回路的背壓閥，使跨膜壓恒定在5.0Psi，當達到5倍的洗脫倍數(shù)時關閉蠕動泵，總需時44分鐘；
步驟三，收集步驟二純化后的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液800ml，用含有10g/L聚乙二醇6000、9g/L的氯化鈉、5mmol/L的EDTA、1g/L的疊氮鈉、20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液稀釋至20L，得到胱抑素C檢測 試劑B1。
進一步，所述保持胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物活性的純化方法具體包括以下步驟：
步驟一，將10L待純化的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液轉移至切向流過濾系統(tǒng)的樣品容器中，將超濾膜設置在中空纖維膜過濾器內(nèi)部，超濾膜為改性聚醚砜膜，截留分子量為500KD，膜面積為2600cm2，設置目標泵速為1.15L/min，剪切力為2000s-1，關閉過濾回路的濾過液夾，先調(diào)節(jié)泵速至575ml/min，開啟蠕動泵，使胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液充滿整個過濾管路，直至過濾管路的回流液端有液體流出，關閉蠕動泵；將泵速調(diào)整至1.15L/min，開啟過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)過濾回路的背壓閥，使跨膜壓恒定在5.0Psi，在達到5倍的濃縮倍數(shù)時關閉蠕動泵，得到2L粗濃縮胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液，總需時35分鐘；
步驟二，選擇與步驟一相同的中空纖維膜組件、泵速和剪切力，將洗脫用的10L濃度為20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液裝入清洗液容器，關閉過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)泵速至575ml/min，開啟蠕動泵，使胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液充滿整個過濾管路，直至過濾管路的回流液端有液體流出，關閉蠕動泵；將泵速調(diào)整至1.15L/min，開啟過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)過濾回路的背壓閥，使跨膜壓恒定在5.0Psi，當達到5倍的洗脫倍數(shù)時關閉蠕動泵，總需時48分鐘；
步驟三，收集步驟二純化后的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液2L，用含有10g/L聚乙二醇6000、9g/L的氯化鈉、5mmol/L的EDTA、1g/L的疊氮鈉、20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液稀釋至50L，得到胱抑素C檢測試劑C1。
本發(fā)明提供的保持胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物活性的純化方法，采用控制剪切力的切向流過濾方法對胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物的純化，所需時間短，純化后的抗體-膠乳復合物反應活性高，不僅適合實驗室的小型制 備，也適合工業(yè)化的大規(guī)模生產(chǎn)。
附圖說明
圖1是本發(fā)明實施例提供的保持胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物活性的純化方法流程圖。
具體實施方式
為了使本發(fā)明的目的、技術方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
本發(fā)明將待純化的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液轉移至切向流過濾系統(tǒng)，選擇合適的中空纖維膜組件、泵速、剪切力，進行濃縮操作。此步驟通過將胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液濃縮至一定體積，縮短后續(xù)洗脫操作所需要的時間，通過控制剪切力的大小避免胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物在濃縮過程中的分解，在60分鐘內(nèi)去除胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液中大部分交聯(lián)劑EDAC和大部分未交聯(lián)的抑素C抗體；在切向流系統(tǒng)內(nèi)對第一步所獲得的粗濃縮胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液進行洗脫操作，在60分鐘內(nèi)用緩沖液洗脫至設定的洗脫倍數(shù)，通過控制剪切力的大小避免胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物在濃縮過程中的分解，通過洗脫倍數(shù)的設定在60分鐘內(nèi)洗脫去除剩余的交聯(lián)劑EDAC和未交聯(lián)的抑素C抗體，達到純化胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物的目的；用稀釋液將純化后的抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液稀釋至指定體積。
下面結合附圖1對本發(fā)明的應用原理作進一步描述。
S101：將待純化的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液轉移至切向流過濾系統(tǒng)，設置剪切力大小，并選擇對應的中空纖維膜組件和泵速，進行濃縮操作，在60min內(nèi)將溶液濃縮到設定的濃縮倍數(shù)，獲得粗濃縮胱抑素C抗體-膠 乳共價偶聯(lián)復合物溶液；
S102：選擇與步驟S101相同的中空纖維膜組件、泵速和剪切力，在切向流系統(tǒng)內(nèi)對獲得的粗濃縮胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液進行洗脫操作，在60min內(nèi)用緩沖液洗脫至設定的洗脫倍數(shù)；
S103：用稀釋液將純化后的抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液稀釋至指定體積。
步驟S101中所述的中空纖維膜組件由中空纖維膜過濾器和超濾膜組成，超濾膜設置在中空纖維膜過濾器內(nèi)部，超濾膜為改性聚醚砜膜，截留分子量為500KD，設置剪切力為2000s-1，對應的膜面積為115～2600cm2、泵速為30～1150ml/min；所述的濃縮倍數(shù)為5倍。
步驟S101中所述的濃縮操作為：將需純化的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液裝入樣品容器，關閉過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)泵速至目標流速的一半后開啟蠕動泵，使胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液充滿整個過濾管路，直至過濾管路的回流液端有液體流出，關閉蠕動泵；將泵速調(diào)整至目標值，開啟過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)過濾回路的背壓閥，使跨膜壓恒定在5.0Psi，當達到設定的濃縮倍數(shù)時關閉蠕動泵。
步驟S102中所述的所述的洗脫倍數(shù)為5倍；所述的緩沖液為pH 7.8甘氨酸緩沖液，其濃度20mmol/L。
步驟S102中所述的洗脫操作為：將洗脫用的緩沖液裝入清洗液容器，關閉過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)泵速至目標流速的一半后開啟蠕動泵，使胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液充滿整個過濾管路，直至過濾管路的回流液端有液體流出，關閉蠕動泵；將泵速調(diào)整至目標值，開啟過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)過濾回路的背壓閥，使跨膜壓恒定在5.0Psi，當達到設定的洗脫倍數(shù)時關閉蠕動泵。
步驟S103中所述的稀釋液為含有10g/L聚乙二醇6000、9g/L的氯化鈉、5mmol/L的EDTA、1g/L的疊氮鈉、20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液。
以下結合本發(fā)明的具體實施例對本發(fā)明的應用效果做詳細的說明：
本發(fā)明實施例中胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液的制備：配制含有氯化鈉的濃度為9g/L的50mmol/L pH 7.2HEPES-NaOH緩沖液10L，加入直徑為80～120nm的聚苯乙烯膠乳使其濃度為2g/L，按膠乳顆粒與胱抑素C抗體質(zhì)量比為5∶1的比例加入胱抑素C抗體，按膠乳顆粒與EDAC質(zhì)量比為10∶1的比例加入EDAC，混合均勻，室溫25℃反應2小時，加入200g/L牛血清白蛋白200ml，繼續(xù)反應1小時。離心法純化胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液步驟：(1)取胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液50ml，4℃15000rpm離心10min，去上清；(2)加入20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液50ml，超聲懸浮后4℃15000rpm離心12min，去上清；(3)加入20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液50ml，超聲懸浮后4℃15000rpm離心15min，去上清；(4)加入20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液50ml，超聲懸浮后，再用含有10g/L聚乙二醇6000、9g/L的氯化鈉、5mmol/L的EDTA、1g/L的疊氮鈉、20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液定容至250ml。
實施例1：
600ml胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液的純化；用直徑為80nm的聚苯乙烯膠乳制備胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液，按下述步驟進行純化：
1)將600ml待純化的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液轉移至切向流過濾系統(tǒng)的樣品容器中，將超濾膜設置在中空纖維膜過濾器內(nèi)部，超濾膜為改性聚醚砜膜，截留分子量為500KD，膜面積為115cm2，設置目標泵速為30ml/min，剪切力為2000s-1，關閉過濾回路的濾過液夾，先調(diào)節(jié)泵速至目標流速的一半(15ml/min)，開啟蠕動泵，使胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液充滿整個過濾管路，直至過濾管路的回流液端有液體流出，關閉蠕動泵；將泵速調(diào)整至目標值(30ml/min)，開啟過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)過濾回路的背壓閥，使跨膜壓恒定在5.0Psi，在達到5倍的濃縮倍數(shù)時關閉蠕動泵，得到120ml 粗濃縮胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液，總需時25分鐘；
2)選擇與步驟(1)相同的中空纖維膜組件、泵速和剪切力，將洗脫用的600ml濃度為20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液裝入清洗液容器，關閉過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)泵速至目標流速的一半(15ml/min)，開啟蠕動泵，使胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液充滿整個過濾管路，直至過濾管路的回流液端有液體流出，關閉蠕動泵；將泵速調(diào)整至目標值(30ml/min)，開啟過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)過濾回路的背壓閥，使跨膜壓恒定在5.0Psi，當達到5倍的洗脫倍數(shù)時關閉蠕動泵，總需時36分鐘；
3)收集步驟(2)純化后的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液120ml，用含有10g/L聚乙二醇6000、9g/L的氯化鈉、5mmol/L的EDTA、1g/L的疊氮鈉、20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液稀釋至3.0L，得到胱抑素C檢測試劑A1。
取上述胱抑素C檢測試劑A1與離心法制備的抑素C檢測試劑A2對同一組胱抑素校準品進行測定，測試方法為：樣本10μl加入試劑300μl，37℃水浴反應10分鐘，以去離子水為參比，測定546nm處吸光度，測定結果見表1。
表1
在表1所示的結果中，C1組數(shù)據(jù)和C2組數(shù)據(jù)的相關系數(shù)為0.9984，可以看出，兩組胱抑素C試劑檢測的吸光度具有很好的一致性。
實施例2：
4L胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液的純化；用直徑為100nm的聚苯乙烯膠乳制備胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液，按下述步驟進行 純化：
1)將4L待純化的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液轉移至切向流過濾系統(tǒng)的樣品容器中，將超濾膜設置在中空纖維膜過濾器內(nèi)部，超濾膜為改性聚醚砜膜，截留分子量為500KD，膜面積為790cm2，設置目標泵速為420ml/min，剪切力為2000s-1。關閉過濾回路的濾過液夾，先調(diào)節(jié)泵速至目標流速的一半(210ml/min)，開啟蠕動泵，使胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液充滿整個過濾管路，直至過濾管路的回流液端有液體流出，關閉蠕動泵；將泵速調(diào)整至目標值(420ml/min)，開啟過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)過濾回路的背壓閥，使跨膜壓恒定在5.0Psi，在達到5倍的濃縮倍數(shù)時關閉蠕動泵，得到800ml粗濃縮胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液，總需時31分鐘；
2)選擇與步驟(1)相同的中空纖維膜組件、泵速和剪切力，將洗脫用的4L濃度為20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液裝入清洗液容器，關閉過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)泵速至目標流速的一半(210ml/min)，開啟蠕動泵，使胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液充滿整個過濾管路，直至過濾管路的回流液端有液體流出，關閉蠕動泵；將泵速調(diào)整至目標值(420ml/min)，開啟過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)過濾回路的背壓閥，使跨膜壓恒定在5.0Psi，當達到5倍的洗脫倍數(shù)時關閉蠕動泵，總需時44分鐘；
3)收集步驟(2)純化后的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液800ml，用含有10g/L聚乙二醇6000、9g/L的氯化鈉、5mmol/L的EDTA、1g/L的疊氮鈉、20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液稀釋至20L，得到胱抑素C檢測試劑B1。
取上述胱抑素C檢測試劑B1與離心法制備的抑素C檢測試劑B2對同一組胱抑素校準品進行測定，測試方法同實施例1，測定結果見表2。
表2
在表2所示的結果中，C1組數(shù)據(jù)和C2組數(shù)據(jù)的相關系數(shù)為0.9957，可以看出，兩組胱抑素C試劑檢測的吸光度具有很好的一致性。
實施例3：
10L胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液的純化；用直徑為120nm的聚苯乙烯膠乳制備胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液，按下述步驟進行純化：
1)將10L待純化的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液轉移至切向流過濾系統(tǒng)的樣品容器中，將超濾膜設置在中空纖維膜過濾器內(nèi)部，超濾膜為改性聚醚砜膜，截留分子量為500KD，膜面積為2600cm2，設置目標泵速為1.15L/min，剪切力為2000s-1。關閉過濾回路的濾過液夾，先調(diào)節(jié)泵速至目標流速的一半(575ml/min)，開啟蠕動泵，使胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液充滿整個過濾管路，直至過濾管路的回流液端有液體流出，關閉蠕動泵；將泵速調(diào)整至目標值(1.15L/min)，開啟過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)過濾回路的背壓閥，使跨膜壓恒定在5.0Psi，在達到5倍的濃縮倍數(shù)時關閉蠕動泵，得到2L粗濃縮胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液，總需時35分鐘；
2)選擇與步驟(1)相同的中空纖維膜組件、泵速和剪切力，將洗脫用的10L濃度為20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液裝入清洗液容器，關閉過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)泵速至目標流速的一半(575ml/min)，開啟蠕動泵，使胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液充滿整個過濾管路，直至過濾管路的回流液端有液體流出，關閉蠕動泵；將泵速調(diào)整至目標值(1.15L/min)，開啟過濾回路的濾過液夾，調(diào)節(jié)過濾回路的背壓閥，使跨膜壓恒定在5.0Psi，當達到5倍的洗脫倍數(shù)時關閉蠕動泵，總需時48分鐘；
3)收集步驟(2)純化后的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物溶液2L，用 含有10g/L聚乙二醇6000、9g/L的氯化鈉、5mmol/L的EDTA、1g/L的疊氮鈉、20mmol/L的pH 7.8甘氨酸緩沖液稀釋至50L，得到胱抑素C檢測試劑C1。
取上述胱抑素C檢測試劑C1與離心法制備的抑素C檢測試劑C2對同一組胱抑素校準品進行測定，測試方法同實施例1，測定結果見表3。
表3
在表3所示的結果中，C1組數(shù)據(jù)和C2組數(shù)據(jù)的相關系數(shù)為0.9994，可以看出，兩組胱抑素C試劑檢測的吸光度具有很好的一致性。
實施例4：
采用本發(fā)明純化和離心法純化所需時間比較，使用市售的大容量冷凍離心機1臺(最高轉速20000rpm)、6支50ml離心管、離心法純化的方法對實施例1～3所述的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液進行了純化，所需時間與實施例1～3所需時間的比較見表4。
表4
從表4可以看出，對于大容量的胱抑素C抗體-膠乳共價偶聯(lián)復合物粗溶液的純化，本發(fā)明所需時間要遠少于離心法所需時間，進一步證實了本發(fā)明的優(yōu)點和有益效果。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發(fā)明 的保護范圍之內(nèi)。