本發(fā)明屬于抗腫瘤藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲類化合物及其鹽類化合物的合成方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：
癌癥是嚴(yán)重威脅人類健康的惡性疾病之一。近30年來(lái)，我國(guó)癌癥發(fā)生率正處于快速上升期，癌癥發(fā)病率約為200/10萬(wàn)人，每年新發(fā)病例達(dá)320萬(wàn)例以上，死亡約270多萬(wàn)，在治患者700萬(wàn)人以上。目前癌癥的主要治療手段仍然是手術(shù)治療、放射治療及藥物治療，但在很大程度上仍是以藥物治療為主。因此，研究開(kāi)發(fā)新的抗腫瘤藥物具有重要意義。近年來(lái)，隨著腫瘤分子生物學(xué)研究的進(jìn)展，對(duì)腫瘤發(fā)病機(jī)理有了更多的認(rèn)識(shí)，找到了許多抗腫瘤藥物作用的新靶點(diǎn)，使抗腫瘤藥物的發(fā)展取得許多新的成就，如拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、蛋白激酶抑制劑、PI3K抑制劑，mTOR抑制劑等。在多數(shù)腫瘤細(xì)胞中，一些激酶呈現(xiàn)高表達(dá)或過(guò)度激活。針對(duì)這一特點(diǎn)，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了吉非替尼、伊馬替尼、埃羅替尼、?？颂婺帷⑺骼悄?、舒尼替尼和拉帕替尼等靶向激酶的抗腫瘤藥物。但是，有些藥物應(yīng)用于臨床后發(fā)現(xiàn)其有效率并不高，有些作用于單一靶點(diǎn)的藥物容易產(chǎn)生耐藥性。因此，研發(fā)新的抗腫瘤藥物或同時(shí)作用于多個(gè)靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物具有重要意義。文獻(xiàn)EuropeanJournalofMedicinalChemistry,2013,67:243-251報(bào)道，化合物2-乙酰氨基-6-[2-甲氧基-3-(4-氟苯基磺酰氨基)-5-吡啶基]-1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶(1c)可抑制PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，并且具有很強(qiáng)體外、體內(nèi)抗腫瘤作用，但是，該類化合物毒性較大，口服給藥5mg/kg即可引起小鼠體重明顯下降，口服給藥20mg/kg一次，即可引起小鼠死亡。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲類化合物及其鹽類化合物的合成方法和應(yīng)用，該類化合物具有抗腫瘤活性，可應(yīng)用于抗腫瘤藥物制劑的制備，而且其合成原料易得、合成方法容易實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：本發(fā)明公開(kāi)的1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲類化合物，該類化合物的結(jié)構(gòu)式I如下：其中，R1為烷基或取代烷基，R2為氫、氟、氯或甲基。所述的烷基為甲基、丙基或環(huán)丙基；取代烷基為二甲基氨基乙基、二乙基氨基乙基、4-嗎啉基乙基、4-甲基-1-哌嗪基乙基、1-吡咯烷乙基或1-哌啶基乙基。本發(fā)明還公開(kāi)了1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲類化合物的制備方法，包括以下步驟：1)將2-氨基-6-溴-1,2,4-三唑并吡啶與氫化鈉反應(yīng)后，再與羰基二咪唑反應(yīng)，然后加入胺繼續(xù)反應(yīng)，得到中間體A；2)在四三苯基膦鈀催化下，將2,3-二取代-5-溴吡啶與聯(lián)硼酸頻哪醇酯反應(yīng)，得到中間體B；3)在四三苯基膦鈀催化下，將中間體A、中間體B在溶劑中混合，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，攪拌回流處理，蒸出溶劑，從反應(yīng)混合物中分離得到1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲類化合物。所述的中間體A為1-甲基-3-(6-溴-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲、1-丙基-3-(6-溴-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲、1-環(huán)丙基-3-(6-溴-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲、1-(2-二甲基氨基乙基)-3-(6-溴-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲、1-(2-二乙基氨基乙基)-3-(6-溴-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲、1-(2-(4-嗎啉基)乙基)-3-(6-溴-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲、1-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基)-3-(6-溴-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲或1-(2-(四氫吡咯-1-基)乙基)-3-(6-溴-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲；所述的中間體B為2-甲氧基-3-對(duì)氟苯磺酰氨基-5-吡啶基硼酸頻哪醇酯、2-甲氧基-3-對(duì)甲苯磺酰氨基-5-吡啶基硼酸頻哪醇酯、2-甲氧基-3-苯磺酰氨基-5-吡啶基硼酸頻哪醇酯、2-甲氧基-3-對(duì)氯苯磺酰氨基-5-吡啶基硼酸頻哪醇酯或2-甲氧基-3-(2,4-二氟苯磺酰氨基)-5-吡啶基硼酸頻哪醇酯；所述的中間體A與中間體B的摩爾比為1:1。步驟1)中，2-氨基-6-溴-1,2,4-三唑并吡啶：羰基二咪唑：胺：氫化鈉的摩爾比為1：3：3.5：2；步驟2)中，2,3-二取代-5-溴吡啶與聯(lián)硼酸頻哪醇酯的摩爾比為1：1.1，四三苯基膦鈀用量為2,3-二取代-5-溴吡啶摩爾量的5％～20％；步驟3)中四三苯基膦鈀的用量為中間體A的摩爾量的5％～20％；步驟3)所述溶劑為二氧六環(huán)、乙二醇二甲醚或者為乙醇和水的按照體積比為7:3配成的混合液。本發(fā)明還公開(kāi)了1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲的鹽類化合物，該鹽類化合物是將權(quán)利要求1所述的1-(2-氨基乙基)-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并吡啶基))脲類化合物與酸按照1:2的摩爾比在醇中回流30～60分鐘后制得。所述的酸為鹽酸或甲磺酸，醇為乙醇或異丙醇。本發(fā)明公開(kāi)的1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲類化合物或1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲的鹽類化合物在制備抗腫瘤藥物制劑中的應(yīng)用。在1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲類化合物或其鹽類化合物中添加輔料制成片劑、膠囊劑或注射劑，其中每片或?；蛑е苿┲泻?-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲類化合物或其鹽類化合物50～500mg。所述的輔料包括穩(wěn)定劑、增溶劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑中的一種或幾種。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果：本發(fā)明公開(kāi)的1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲及其鹽類化合物未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本發(fā)明用烷基脲的結(jié)構(gòu)片段代替了現(xiàn)有技術(shù)公開(kāi)的化合物2-乙酰氨基-6-[2-甲氧基-3-(4-氟苯基磺酰氨基)-5-吡啶基]-1,2,4-三唑并吡啶(1c)中的2-乙酰氨基片段，得到了1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲及其鹽類化合物。該類化合物結(jié)構(gòu)中，脲結(jié)構(gòu)片段中兩個(gè)NH均可與受體形成氫鍵，與受體的作用更強(qiáng)。將嗎啉基、4-甲基-1-哌嗪基、二乙基氨基等氨基取代基的引入1,2,4-三唑并吡啶結(jié)構(gòu)，會(huì)改善化合物的水溶性和藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。將1-(2-氨基乙基)-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲類化合物制備成甲磺酸鹽或鹽酸鹽有利于提高化合物的水溶性和穩(wěn)定性。本發(fā)明提供的化合物毒性小，化合物C5給小鼠灌胃給藥1次，在劑量為400mg/kg時(shí)，小鼠活動(dòng)正常。本發(fā)明提供的化合物具有抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和人肺癌細(xì)胞A549腫瘤細(xì)胞增殖的活性，其中部分化合物的活性與陽(yáng)性藥BEZ235相當(dāng)或優(yōu)于BEZ235，也優(yōu)于文獻(xiàn)Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,2012,22:4546–4549的報(bào)道的化合物9c、9d和11c。附圖說(shuō)明圖1為本發(fā)明的合成工藝路線圖；圖2為本發(fā)明的鹽類化合物的合成工藝路線圖。具體實(shí)施方式以下通過(guò)本發(fā)明的一些代表性化合物的合成過(guò)程對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，本發(fā)明公開(kāi)的1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲類化合物，結(jié)構(gòu)式如下：代表性的化合物編號(hào)、結(jié)構(gòu)及HRMS數(shù)據(jù)(目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)經(jīng)HRMS確定)，具體見(jiàn)表1。表1.一些代表性的化合物編號(hào)、結(jié)構(gòu)及HRMS數(shù)據(jù)本發(fā)明公開(kāi)的1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲的鹽類化合物的制備方法，包括以下步驟：步驟1)2-氨基-6-(或7-)溴-1,2,4-三唑并吡啶與氫化鈉作用后再與羰基二咪唑(CDI)反應(yīng)，再加入胺反應(yīng)，可獲得中間體A；步驟2)在四三苯基膦鈀催化下，2-甲氧基-3-磺酰氨基-5-溴吡啶(按照文獻(xiàn)方法合成)與聯(lián)硼酸頻哪醇酯作用可獲得中間體B；步驟3)在四三苯基膦鈀催化下，將中間體A、中間體B在溶劑中混合，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌回流，蒸出溶劑，從反應(yīng)混合物中分離得到1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲類化合物，其合成路線參見(jiàn)圖1。1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并吡啶基))脲的鹽類化合物的合成方法，包括如下步驟：1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并吡啶基))脲與酸在醇中回流40分鐘左右，可制備1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲的鹽類化合物，反應(yīng)式參見(jiàn)圖2。1、下面給出上述化合物的合成實(shí)施例實(shí)施例1：1-環(huán)丙基-3-(6-(2-甲氧基-3-對(duì)氟苯磺酰氨基-5-吡啶基)-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲(表1中編號(hào)C1)的合成步驟1)中間體A1，1-環(huán)丙基-3-(6-溴-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲的制備：于100mL茄形瓶?jī)?nèi)加入二甲基甲酰胺(15mL)，氫化鈉(80％，0.17g)、2-氨基-6-溴-1,2,4-三唑并吡啶(0.60g)和羰基二咪唑(1.37g)，混合物于60℃攪拌2h，加入環(huán)丙胺(0.69mL)，繼續(xù)于60℃攪拌5h，減壓蒸除溶劑，殘余物中加入水30mL，靜置，抽濾、固體用水洗，干燥得近白色固體0.72g，產(chǎn)率91.4％。步驟2)化合物C1的合成：(1)于100mL圓底燒瓶中加入2-甲氧基-3-對(duì)氟苯磺酰氨基-5-溴吡啶0.14g、聯(lián)硼酸頻哪醇酯0.11g、乙酸鉀0.11g，Pd(PPh3)445mg和干燥的1,4-二氧六環(huán)10mL，混合物在氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌回流2h；減壓除去溶劑，得到粗中間體B1；(2)向中間體B1中加入A10.09g，Pd(PPh3)437mg，碳酸鈉0.13g，乙二醇二甲醚7mL、乙醇3mL和水2mL，反應(yīng)混合物在氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌回流2h，減壓蒸出溶劑，殘余物用硅膠柱色譜分離(氯仿：甲醇＝15:1)得到粗產(chǎn)物，用乙醇重結(jié)晶，得到近白色固體79mg，產(chǎn)率49.5％。實(shí)施例2：1-丙基-3-(6-(2-甲氧基-3-對(duì)氟苯磺酰氨基-5-吡啶基)-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲(表1中編號(hào)C2)的合成步驟1)中間體A2：1-丙基-3-(6-溴-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲的制備，同A2的合成，用丙胺代替環(huán)丙胺；產(chǎn)率89.0％步驟2)化合物C2的合成：同實(shí)施例1編號(hào)C1化合物的合成，用A2代替A1；產(chǎn)率44.7％。實(shí)施例3：1-甲基-3-(6-(2-甲氧基-3-對(duì)氟苯磺酰氨基-5-吡啶基)-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲(表1中編號(hào)C3)的合成步驟1)中間體A3：1-甲基-3-(6-溴-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲的制備，同A2的合成，用甲胺鹽酸鹽代替環(huán)丙胺；產(chǎn)率89.0％。步驟2)化合物C3的合成：同實(shí)施例1編號(hào)C1化合物的合成，用A3代替A1；產(chǎn)率43.2％。實(shí)施例4：步驟1)中間體A4，1-(2-二甲基氨基乙基)-3-(6-溴-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲的制備：同A1的合成，用2-二甲基氨基乙胺代替環(huán)丙胺；產(chǎn)率77.7％。步驟2)化合物C4的合成：同實(shí)施例1編號(hào)C1化合物的合成，用A4代替A1；產(chǎn)率73.7％。實(shí)施例5：1-(2-二乙基氨基乙基)-3-(6-(2-甲氧基-3-對(duì)氟苯磺酰氨基-5-吡啶基)-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲(表1中編號(hào)C5)的合成：步驟1)中間體A5：1-(2-二乙基氨基乙基)-3-(6-溴-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲的制備，同A1的合成，用2-二乙基氨基乙胺代替環(huán)丙胺；產(chǎn)率78.0％。步驟2)化合物C4的合成：同實(shí)施例1編號(hào)1化合物的合成，用A4代替A1；產(chǎn)率49.3％。實(shí)施例6：1-(2-(1-吡咯烷基)乙基)-3-(6-(2-甲氧基-3-對(duì)氟苯磺酰氨基-5-吡啶基)-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲(表1編號(hào)C6)的合成：步驟1)中間體A6：1-(2-(1-吡咯烷基)乙基)-3-(6-溴-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲的制備，同A1的合成，用2-(1-吡咯烷基)乙胺代替環(huán)丙胺；產(chǎn)率79.2％。步驟2)化合物C6的合成：同實(shí)施例1編號(hào)C1化合物的合成，用A6代替A1。產(chǎn)率48.2％。實(shí)施例7：1-(2-(1-哌啶基)乙基)-3-(6-(2-甲氧基-3-對(duì)氟苯磺酰氨基-5-吡啶基)-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲(表1編號(hào)C7)的合成：步驟1)中間體A7：1-(2-(1-哌啶基)乙基)-3-(6-溴-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲的制備，同A1的合成，用2-(1-哌啶基)乙胺代替環(huán)丙胺。產(chǎn)率71.1％。步驟2)化合物C7的合成：同實(shí)施例1編號(hào)1化合物的合成，用A7代替A1；產(chǎn)率54.6％。實(shí)施例8：1-(2-(4-嗎啉基)乙基)-3-(6-(2-甲氧基-3-對(duì)氟苯磺酰氨基-5-吡啶基)-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲(表1編號(hào)8)的合成：步驟1)中間體A8：1-(2-(4-嗎啉基)乙基)-3-(6-溴-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲的制備：同A1的合成，用2-(4-嗎啉基)乙胺代替環(huán)丙胺。產(chǎn)率92.3％。步驟2)化合物C8的合成：同實(shí)施例1編號(hào)C1化合物的合成，用A8代替A1；產(chǎn)率70.4％。實(shí)施例9：1-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基)-3-(6-(2-甲氧基-3-對(duì)氟苯磺酰氨基-5-吡啶基)-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲(結(jié)構(gòu)式見(jiàn)表1編號(hào)C9)的合成步驟1)中間體A9：1-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基)-3-(6-溴-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲的制備，同A1的合成，用2-(1-哌嗪基)乙胺代替環(huán)丙胺。產(chǎn)率81.0％。步驟2)化合物C9的合成：同實(shí)施例1編號(hào)1化合物的合成，用A9代替A1；產(chǎn)率62.5％。實(shí)施例10：1-(2-二乙基氨基乙基)-3-(6-(2-甲氧基-3-苯磺酰氨基-5-吡啶基)-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲(表1中編號(hào)C10)的合成：同實(shí)施例5化合物C5的合成；用2-甲氧基-3-苯磺酰氨基-5-溴吡啶代替2-甲氧基-3-對(duì)氟苯磺酰氨基-5-溴吡啶，產(chǎn)率60.2％。實(shí)施例11：1-(2-二乙基氨基乙基)-3-(6-(2-甲氧基-3-對(duì)氯苯磺酰氨基-5-吡啶基)-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲(表1中編號(hào)C10)的合成：同實(shí)施例5化合物C5的合成；用2-甲氧基-3-對(duì)氯苯磺酰氨基-5-溴吡啶代替2-甲氧基-3-對(duì)氟苯磺酰氨基-5-溴吡啶，產(chǎn)率59.5％。實(shí)施例12：1-(2-二乙基氨基乙基)-3-(6-(2-甲氧基-3-對(duì)甲苯磺酰氨基-5-吡啶基)-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲(表1中編號(hào)C12)的合成：同實(shí)施例5化合物C5的合成；用2-甲氧基-3-對(duì)甲苯磺酰氨基-5-溴吡啶代替2-甲氧基-3-對(duì)氟苯磺酰氨基-5-溴吡啶，產(chǎn)率59.3％。實(shí)施例13：1-(2-二乙基氨基乙基)-3-(6-(2-甲氧基-3-(2,4-二氟苯磺酰氨基)-5-吡啶基)-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲(結(jié)構(gòu)式見(jiàn)表1中編號(hào)9)的合成：同實(shí)施例5化合物C5的合成；用2-甲氧基-3-(2,4-二氟苯磺酰氨基)-5-溴吡啶代替2-甲氧基-3-對(duì)氟苯磺酰氨基-5-溴吡啶，產(chǎn)率41.5％。實(shí)施例14：1-(2-(4-嗎啉基乙基)-3-(6-(2-甲氧基-3-對(duì)氟苯磺酰氨基-5-吡啶基)-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲二鹽酸鹽的合成(C8二鹽酸鹽)的合成：編號(hào)C8化合物(0.3g)溶解于異丙醇(10mL)中，加入濃鹽酸(0.1mL)，混合物于50℃攪拌30分鐘，冷卻，靜置，抽濾，干燥，得固體0.30g。收率87％。實(shí)施例15：1-(2-(4-嗎啉基乙基)-3-(6-(2-甲氧基-3-對(duì)氟苯磺酰氨基-5-吡啶基)-2-(1,2,4-三唑并吡啶基))脲二甲磺酸鹽的合成(C8二甲磺酸鹽)的合成：同化合物C8鹽酸鹽的合成；用乙醇代替異丙醇，用甲磺酸代替濃鹽酸。收率86.0％。2、體外抗腫瘤活性的驗(yàn)證為了驗(yàn)證本發(fā)明合成的1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲及其鹽類化合物的抗腫瘤活性，以BEZ235為陽(yáng)性對(duì)照藥物，采用體外MTT法測(cè)定了化合物對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116和人肺癌細(xì)胞A549的生長(zhǎng)抑制作用。驗(yàn)證方法：將腫瘤細(xì)胞HCT116培養(yǎng)在含10％小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中，內(nèi)含青霉素有100U·mL-1，鏈霉素100g·mL-1，于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)。取0.3％胰酶消化貼壁的腫瘤細(xì)胞，含10％小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液配制細(xì)胞懸液，濃度為6×103個(gè)細(xì)胞/毫升。于96孔培養(yǎng)板內(nèi)每孔接種200L(約含1000個(gè)腫瘤細(xì)胞)，37℃培養(yǎng)24h。給藥組加入不同濃度藥物，每藥設(shè)定10-5、10-6、10-7、10-8mol·L-14個(gè)濃度梯度，每組設(shè)3個(gè)平行孔。對(duì)照組加入與藥等體積的溶劑，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h后棄去培養(yǎng)液，每孔加入20L5mg/mL的MTT溶液，孵育4h后，棄去上清液，每孔加入DMSO150L，輕度振蕩后用酶標(biāo)儀在570nm下測(cè)定光密度值(OD)。3、結(jié)果計(jì)算以溶劑對(duì)照處理的腫瘤細(xì)胞為對(duì)照組，按照下式求藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率：并采用線性回歸法求出半數(shù)抑制濃度(IC50)。測(cè)定結(jié)果顯示，化合物1-15對(duì)MCF-7的IC50值為0.20～-0.74μmol/L；對(duì)HCT116的IC50為0.09～0.23μmol/L；對(duì)A549的IC50為0.21～0.96μmol/L。而在同樣條件下，陽(yáng)性藥BEZ235對(duì)MCF-7、HCT116和A549的IC50分別為0.26μmol/L、0.29μmol/L和0.40μmol/L。4、體內(nèi)抗腫瘤活性的驗(yàn)證為了驗(yàn)證本發(fā)明提供化合物的體內(nèi)抗腫瘤活性，我們采用小鼠S180移植瘤模型，灌胃給藥，考察了化合物C1的體內(nèi)抗腫瘤活性。驗(yàn)證方法：昆明種小鼠，雄性，體重18～22g。取出小鼠腹腔接種S180后第8天的腹水，用生理鹽水以1:1.5比例稀釋，制成S180細(xì)胞混懸液。用注射器在每只小鼠右腋窩皮下接種0.1mL。接種次日，將小鼠隨機(jī)分為3組，每組8只，分別為：1)空白對(duì)照組(NMP/PEG400/H2O)2)化合物C1低劑量組(5mg/kg)3)化合物C1高劑量組(10mg/kg)將化合物C1用NMP/PEG400/H2O(體積比為1:7:2)溶解。接種后第二天開(kāi)始按上述給藥方案灌胃給藥，一日一次，連續(xù)給藥10天。給藥當(dāng)日記為d1，給藥體積為20mL/kg體重。每日給藥前記錄小鼠體重。停藥次日(d11)將小鼠處死，剝離出瘤塊，剔除其他組織后稱重。結(jié)果：化合物4在劑量為5mg/kg和10mg/kg時(shí)，對(duì)小鼠體內(nèi)S180移植瘤的生長(zhǎng)抑制率分別為60.5％和87.6％。結(jié)論：本發(fā)明提供的化合物C1具有明顯的體內(nèi)抗腫瘤活性。5、急性毒性試驗(yàn)化合物用NMP、PEG400和水溶解，以不同的劑量，給昆明種小鼠灌胃給藥一次，觀察7天，確定引起小鼠死亡的最小劑量。結(jié)果表明：2-乙酰氨基-6-[2-甲氧基-3-(4-氟苯基磺酰氨基)-5-吡啶基]-1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶(文獻(xiàn)化合物)給藥15mg/kg引起小鼠死亡，測(cè)得的LD50為25mg/kg；而本發(fā)明中編號(hào)C1的化合物給藥150mg/kg，小鼠活動(dòng)正常；本發(fā)明中編號(hào)C5的化合物給藥400mg/kg，小鼠活動(dòng)正常。試驗(yàn)結(jié)果表明，與已經(jīng)報(bào)道的類似物比較，本發(fā)明提供的化合物毒性明顯降低。本發(fā)明公開(kāi)的化合物，脲結(jié)構(gòu)片段中兩個(gè)NH均可與受體形成氫鍵，與受體的作用更強(qiáng)。將嗎啉基、4-甲基-1-哌嗪基、二乙基氨基等氨基取代基的引入1,2,4-三唑并吡啶結(jié)構(gòu)，會(huì)改善化合物的水溶性和藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。將1-(2-氨基乙基)-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基))脲類化合物制備成甲磺酸鹽或鹽酸鹽有利于提高化合物的水溶性和穩(wěn)定性。文獻(xiàn)EuropeanJournalofMedicinalChemistry,2013,67:243-251活性最好的化合物(1c)給小鼠灌胃給藥1次，20mg/kg可引起小鼠死亡。本發(fā)明提供的化合物毒性小，化合物C5給小鼠灌胃給藥1次，在劑量為400mg/kg時(shí)，小鼠活動(dòng)正常。文獻(xiàn)Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,2012,22:4546–4549的報(bào)道的化合物抑制PI3Kγ的活性較強(qiáng)。而本發(fā)明提供的化合物在吡啶環(huán)2-位增加了甲氧基，磺酰胺結(jié)構(gòu)發(fā)生了反轉(zhuǎn)，這些改變?cè)鰪?qiáng)了本發(fā)明提供化合物抑制PI3Kα的活性及抗腫瘤活性。本發(fā)明提供的化合物具有抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和人肺癌細(xì)胞A549腫瘤細(xì)胞增殖的活性，其中部分化合物的活性與陽(yáng)性藥BEZ235相當(dāng)或優(yōu)于BEZ235，也優(yōu)于上述文獻(xiàn)報(bào)道的化合物9c、9d和11c。比如化合物1-(2-(4-嗎啉基)乙基)-3-(6-(2-甲氧基-3-對(duì)氟苯磺酰氨基-5-吡啶基)-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲(表1中編號(hào)C8化合物)對(duì)MCF-7、HCT116和A549的IC50分別為0.21μmol/L、0.13μmol/L和0.42μmol/L。而在同樣條件下，陽(yáng)性藥BEZ235對(duì)MCF-7、HCT116和A549的IC50分別為0.26μmol/L、0.29μmol/L和0.40μmol/L。本發(fā)明提供的1-烷基-3-(6-取代-2-(1,2,4-三唑并[1,5-a]吡啶基)脲及其鹽類化合物，能夠用于制備抗腫瘤藥物制劑，其中每片或?；蛑г撍幬镏苿┲泻?0～500mg。在利用本發(fā)明給出的活性化合物制備抗腫瘤藥物制劑時(shí)，可以將該藥物制成片劑、膠囊劑或注射劑。這些藥物制劑可按照各種制劑的常規(guī)制備工藝制成。對(duì)于片劑或膠囊劑，優(yōu)選的含量為50～300mg。并且本發(fā)明涉及的口服制劑中可含有藥用輔料，包括添加劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑等，如淀粉、糊精、葡萄糖、乳糖、纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、果膠、環(huán)糊精、土溫-80、聚乙烯醇、硬脂酸鎂、滑石粉等。以上實(shí)例僅僅是對(duì)本發(fā)明的舉例說(shuō)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍的限制，盡管用較佳的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，但本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，在不脫離本發(fā)明的范圍下可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行修改、變形或等同替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。