本發(fā)明涉及噻唑雜環(huán)類化合物及其制備方法和應用。

背景技術(shù)：

白血病，亦稱作血癌，是一類造血干細胞異常的克隆性惡性疾病。其克隆中的白血病細胞失去進一步分化成熟的能力而停滯在細胞發(fā)育的不同階段。在骨髓和其他造血組織中白血病細胞大量增生積聚并浸潤其他器官和組織，同時使正常造血受抑制，臨床表現(xiàn)為貧血、出血、感染及各器官浸潤癥狀。

白血病通常分為:1)急性淋巴細胞白血病，2)急性非淋巴白血病(簡稱急非淋)，3)慢性白血病，4)特殊類型白血病，

其中,慢性粒細胞白血病(CML)又叫慢性髓細胞白血病，它是血液系統(tǒng)的造血干細胞惡性克隆增殖性疾病，導致病人出現(xiàn)貧血、出血、感染等癥狀。CML占成人白血病的20％左右，大約每年的發(fā)病率為五萬分之一，其在任何年齡段都有可能發(fā)病，尤其是在老年人中發(fā)病率更高，且男性比女性發(fā)病率高。根據(jù)CML患者的疾病進展狀況和嚴重程度分為慢性期(CP)、加速期(AP)和急變期(BP)。大約85％～90％的慢性粒細胞白血病患者在慢性期被診斷發(fā)現(xiàn)，這個階段癥狀并不明顯，或者僅有乏力、關(guān)節(jié)疼痛或腹脹，如果藥物治療及時，慢性期就會變長，在沒有及時治療的情況下，疾病會進入到加速期。CML形成的主要原因是9號和22號染色體發(fā)生異位t(9:22)(q34:q11)(費城染色體Ph)形成一種融合基因即BCR-ABL融合基因，該基因能夠編碼BCR-ABL蛋白，是一種活性酪氨酸激酶。這種BCR-ABL激酶能使下游的一些底物磷酸化，進而激活與細胞增殖有關(guān)的信號轉(zhuǎn)導通路，造成成熟粒細胞無限增殖而導致CML的發(fā)生。

目前，臨床上對CML的治療方法主要是傳統(tǒng)的藥物治療、造血干細胞 移植和新興的分子靶向治療。普通的藥物治療包括烷化劑白消安、羥基脲、干擾素(IFN-α)、阿糖胞苷及高三尖杉酯堿。其中，由于白消安副反應比較大，目前在臨床上已經(jīng)停止使用；羥基脲雖然價格低廉，治療成本低，毒副作用小，但是其對于處于加速期的CML病人作用效果差，而且對于急變期的CML患者基本沒有效果；α-干擾素較前兩者雖然毒副作用有所減小，但是其對加速期和急變期的CML患者效果很差。這種普通藥物治療的一個很大弊端是在對腫瘤細胞產(chǎn)生殺傷作用的同時也能對正常的機體細胞產(chǎn)生損傷。造血干細胞移植是目前理論上唯一可以治愈CML的方法，它是通過先用大劑量放化療將CML患者體內(nèi)的腫瘤細胞清除，再將自體或異體的造血干細胞移植給患者，使其重新建立正常的的造血免疫系統(tǒng)。但是這種方法在實際操作起來存在很多困難，比如對患者的年齡有一定的要求，手術(shù)復雜，成功率低，耗費高，且必須要有合適的骨髓捐獻者，而且移植后期有可能發(fā)生感染，會使CML患者和家人面臨很大的風險，所以造血干細胞移植在實際應用過程中很受限制。

達沙替尼是新穎的、口服的、多靶點的小分子酪氨酸激酶抑制劑，是第二代TKIs。達沙替尼最初是作為SRC家族(例如Fyn，Yes，Src和Lyk等)激酶抑制劑被研制的，它也可以抑制BCR-ABL、EphA2、血小板生長因子受體及c-Kit。雖然達沙替尼具有一定的治療效果，但其也存在著一些臨床治療的缺點。達沙替尼臨床試驗結(jié)果表明，達沙替尼有存在很普遍的骨髓移植現(xiàn)象，最常見的不良反應包括體液潴留(包括胸腔積液)、腹瀉、頭痛、惡心、皮疹、呼吸困難、出血、疲勞、肌肉骨骼疼痛、感染、嘔吐、咳嗽、腹痛和發(fā)熱，偶爾可見心力衰竭。與藥物相關(guān)的發(fā)熱性中性粒細胞減少癥的發(fā)生率為5％。所以尋找一種對白血病干細胞有殺傷力并且副作用較低的化合物迫在眉睫，而且這也將開啟CML治療的新方向和改變抗CML藥物的臨床評估標準。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中用于治療白血病的藥物療效不佳的問題，根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了一種噻唑雜環(huán)類化合物，該噻唑雜環(huán)類化合物具 有以下結(jié)構(gòu)通式：

在上述噻唑雜環(huán)類化合物中，所述通式中X為：

并且其中，R包括以下基團：

在上述噻唑雜環(huán)類化合物中，所述通式中X為：

并且其中，R包括以下基團：

在上述噻唑雜環(huán)類化合物中，所述通式中X為：

并且其中，R包括以下基團：

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，還提供了一種噻唑雜環(huán)類化合物的制備方法，包括：使2-((6-(4-(2-(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧)乙基)哌嗪-1-基)2-甲基嘧啶-4-基)氨基)-N’-(2-氯-6-甲苯甲酰)噻唑-5-碳酸肼)和叔丁基(2-(4-(6-((5-(2-(2-氯-6-甲苯甲酰)酰基羰基)噻唑-2-基)氨基)2-甲基嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙基)氨基甲酸酯分別發(fā)生脫氫環(huán)化反應來制備N-(6-(4-(2-(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧)乙基)哌嗪-1-基)2-甲基嘧啶-4-基)5-(5-(2-氯6-甲苯基)1，3，4-惡二唑-2-基)噻唑-2-胺和叔丁基(2-(4-(6-((5-(5-(2-氯-6-甲苯1,3,4-惡二唑-2-基)噻唑-2-基)氨基)2-甲基嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙基)氨基甲酸酯

使所述N-(6-(4-(2-(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧)乙基)哌嗪-1-基)2-甲基嘧啶-4-基)5-(5-(2-氯6-甲苯基)1，3，4-惡二唑-2-基)噻唑-2-胺和所述叔丁基(2-(4-(6-((5-(5-(2-氯-6-甲苯1,3,4-惡二唑-2-基)噻唑-2-基)氨基)2-甲基嘧啶 -4-基)哌嗪-1-基)乙基)氨基甲酸酯分別發(fā)生取代反應以生成所述噻唑雜環(huán)類化合物；

其中，所述噻唑雜環(huán)類化合物的化學結(jié)構(gòu)式為：

，其中，R為：

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，還提供了一種噻唑雜環(huán)類化合物的制備方法，包括：使叔丁基(5-乙炔噻唑-2-基)氨基甲酸酯與1-疊氮-2-氯苯反應生成叔丁基(5-(1-(2-氯-6-甲苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)噻唑-2-基l)氨基甲酸酯；

使所述叔丁基(5-(1-(2-氯-6-甲苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酸酯與三氟乙酸反應生成5-(1-(2-氯-6-甲苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)噻唑-2-胺；

使5-(1-(2-氯-6-甲苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)噻唑-2-胺與4,6-二氯-2-甲基嘧啶反應生成N-(6-氯-2-甲基嘧啶-4-基)-5-(1-(2-氯-6-甲苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)噻唑-2-胺；

使所述N-(6-氯-2-甲基嘧啶-4-基)-5-(1-(2-氯-6-甲苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)噻唑-2-胺與哌嗪類化合物反應，生成所述噻唑雜環(huán)類化合物；

其中，所述哌嗪類化合物的化學結(jié)構(gòu)式為：

所述噻唑雜環(huán)類化合物的化學結(jié)構(gòu)式為：

并且其中，R至少包括

根據(jù)本發(fā)明的又一方面，還提供了上述噻唑雜環(huán)類化合物在用于治療白血病的藥物中的應用。

在上述應用中，所述用于治療白血病的藥物包含所述噻唑雜環(huán)類化合物、所述噻唑雜環(huán)類化合物在藥學上可接受的鹽、酯、水合物或它們的組 合以及輔料。

在上述應用中，所述治療白血病的藥物的劑型選自片劑、膠囊劑、丸劑、栓劑、氣霧劑、口服液體制劑、顆粒劑、散劑、注射劑、糖漿劑、酒劑、酊劑、露劑、膜劑或它們的組合。

在上述應用中，所述治療白血病的藥物的給藥方式包括口服、注射、植入、外用、噴霧、吸入或它們的組合。

從而，本發(fā)明提供了一類新的噻唑雜環(huán)類化合物及其制備方法和應用，通過細胞水平實驗發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供的噻唑雜環(huán)類化合物均可以抑制K562、HL60、KG1a細胞的增殖，通過測定IC₅₀和IC₉₀值發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供的噻唑雜環(huán)類化合物對K562、HL60、KG1a細胞的增殖的抑制作用均可達到90％，并且特別是本發(fā)明提供的實例3化合物(化合物4c)在藥物濃度低于陽性對照藥物達沙替尼的情況下，可以同樣實現(xiàn)抑制K562、HL60、KG1a細胞增殖的效果，因此本發(fā)明提供的噻唑雜環(huán)類化合物可以用于治療白血病。

附圖說明

圖1示出了化合物4a的1H NMR。

圖2示出了化合物4a的¹³C NMR。

圖3示出了化合物4b的¹H NMR。

圖4示出了化合物4b的¹³C NMR。

圖5示出了化合物4c的¹H NMR。

圖6示出了化合物4c的¹³C NMR。

圖7示出了化合物4d的¹H NMR。

圖8示出了化合物4d的¹³C NMR。

圖9示出了化合物13a的¹H NMR。

圖10示出了化合物13a的¹³C NMR。

圖11示出了化合物13b的¹H NMR。

圖12示出了化合物13b的¹³C NMR。

圖13示出了化合物13c的¹H NMR。

圖14示出了化合物13c的¹³C NMR。

圖15示出了化合物13d的¹H NMR。

圖16示出了化合物13d的¹³C NMR。

圖17示出了化合物13e的¹H NMR。

圖18示出了化合物13e的¹³C NMR。

圖19示出了化合物25a的¹H NMR。

圖20示出了化合物25a的¹³C NMR。

圖21示出了化合物25c的¹H NMR。

圖22示出了化合物25c的¹³C NMR。

圖23示出了化合物25d的¹H NMR。

圖24示出了化合物25d的¹³C NMR。

圖25示出了化合物25e的¹H NMR。

圖26示出了化合物25e的¹³C NMR。

圖27示出了化合物25f的¹H NMR。

圖28示出了化合物25f的¹³C NMR。

圖29示出了達沙替尼、實例1和實例4化合物對K562細胞的抑制作用。

圖30示出了實例2化合物對K562細胞的抑制作用。

圖31示出了實例3化合物對K562細胞的抑制作用。

圖32示出了實例5化合物、實例6化合物、實例7化合物、實例8化合物、實例9化合物對K562細胞的抑制作用。

圖33示出了實例10化合物、實例11化合物、實例12化合物、實例13化合物、實例14化合物對K562細胞的抑制作用。

圖34示出了達沙替尼、實例1化合物、實例4化合物對HL60細胞的抑制作用。

圖35示出了實例2化合物對HL60細胞的抑制作用。

圖36示出了實例3化合物對HL60細胞的抑制作用。

圖37示出了實例5化合物、實例6化合物、實例7化合物、實例8化合物、實例9化合物對HL60細胞的抑制作用。

圖38示出了實例10化合物、實例11化合物、實例12化合物、實例13化合物、實例14化合物對HL60細胞的抑制作用。

圖39示出了達沙替尼、實例1化合物、實例2化合物、實例3化合物、實例4化合物對KG1a細胞的抑制作用。

圖40示出了實例5化合物、實例6化合物、實例7化合物、實例8化合物、實例9化合物對KG1a細胞的抑制作用。

圖41示出了實例10化合物、實例11化合物、實例12化合物、實例13化合物、實例14化合物對KG1a細胞的抑制作用。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

在本發(fā)明中提供的噻唑雜環(huán)類化合物的結(jié)構(gòu)通式為：

其中，通式中

即，上述通式可以為：

實施例1具有通式一的噻唑雜環(huán)類化合物的化學合成和結(jié)構(gòu)鑒定

在上述通式一中：

具有通式一的噻唑雜環(huán)類化合物的化學合成實驗步驟(通式一所包含的實例化合物實驗步驟)如下：

1.通用合成路線

2.具體合成步驟：

2.1：化合物3：N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-((6-(4-(2-(1，3-二氧代異吲哚啉)乙基) 哌嗪)-2-甲基嘧啶)氨基)噻唑-5-甲酰胺的合成

0℃下，將化合物1(500mg，1.02mmol)，三苯基磷PPh₃(349mg，1.33mmol)，鄰苯二甲酰亞胺2(195.7mg，1.33mg)加入到有10mL重蒸的無水四氫呋喃中，然后在攪拌條件下加入偶氮二甲酸二異丙酯DIAD(226.4mg，1.33mmol)，低溫攪拌10min后移至室溫反應，直至原料1反應完全(有時反應不能進行到底)。反應結(jié)束后，低壓濃縮除去反應溶劑，然后柱層析純化即可得到化合物3(白色固體，555mg)。產(chǎn)率為87.8％。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 8.04(br，1H)，7.83-7.85(m，2H)，7.70-7.72(m，2H)，7.45(s，1H)，7.30(dd，J＝0.8，7.2Hz，1H)，7.14-7.20(m，2H)，5.78(s，1H)，3.85(t，J＝6.4Hz，2H)，3.56(br，4H)，2.68(t，J＝6.4Hz，2H)，2.60(br，4H)，2.50(s，3H)，2.35(s，3H)。

實例1化合物4a:N-(2-氯-(6-甲基苯基)-2-[[6-[4-(2-氨乙基)-1-哌嗪基]-2-甲基-4-嘧啶基]氨基]-5-噻唑甲酰胺的合成

將化合物3(606mg，0.98mmol)加入到有10mL乙醇的圓底燒瓶中，然后加入5mL水合肼，加熱至78℃回流兩個小時即可反應完全，減壓濃縮除去反應溶劑，然后加氯化鈉飽和溶液，用四氫呋喃萃取3次，有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。柱層析進一步純化得化合物4a(白色固體)。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm9.88(br，1H)，8.23(s，1H)，7.40(dd，J＝7.2Hz，1H)，7.24-7.30(m，2H)，6.06(s，1H)，3.52(br，4H)，2.68(t，J＝6.4Hz，2H)，2.44(t，J＝4.4Hz，4H)，2.41(s，3H)，2.36(t，J＝6.4Hz，2H)，2.24(s，3H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆)δ165.61，163.11，162.84，160.42，157.47，141.32，139.29，134.02，132.92，129.48，128.62，127.47，126.11，83.14，60.63，52.89，44.09，38.72， 26.05，18.77；

HRMS-ESI(+)：C₂₂H₂₈ClN₈OS計算值487.1759，檢測到487.1805[M+H]⁺。

實例2化合物4b:N-(2-氯-(6-甲基苯基)-2-[[6-[4-(2-異硫氰酸酯)-1-哌嗪基]-2-甲基-4-嘧啶基]氨基]-5-噻唑甲酰胺的合成

0℃下，將化合物4a(100mg，0.21mmol)加入到有3mL二氯甲烷圓底燒瓶中，然后加入二環(huán)己基碳二亞胺DCC(1.1eq)，然后攪拌條件下，緩慢滴加二硫化碳CS₂(15eq)，滴加完后，在低溫下攪拌5min后，移去冰水浴，然后常溫攪拌至反應完全。減壓濃縮除去反應溶劑，硅膠柱層析純化即可得到化合物4b(白色固體)。該化合物的¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm11.47(s，1H)，9.88(s，1H)，8.23(s，1H)，7.40(dd，J＝1.2，7.2Hz，1H)，7.24-7.30(m，2H)，6.07(s，1H)，3.80(t，J＝6.0Hz，2H)，3.54(br，4H)，2.66(t，J＝6.0Hz，2H)，2.54(br，4H)，2.42(s，3H)，2.24(s，3H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆)δ165.67，163.02，162.81，160.39，157.44，141.30，139.29，134.00，132.91，130.09，129.49，128.63，127.47，126.19，83.17，56.80，52.24，44.11，43.07，26.05，18.77；

HRMS-ESI(+)：C₂₃H₂₆ClN₈OS₂計算值，529.1359；檢測到529.1356.[M+H]⁺。

實例3化合物4c：N-(2-氯-(6-甲基苯基)-2-[[6-[4-(2-丙烯酰胺)-1-哌嗪基]-2-甲基-4-嘧啶基]氨基]-5-噻唑甲酰胺的合成

0℃下，將化合物4a(150mg，0.31mmol)加入到有3mL二氯甲烷的圓底燒瓶中，然后攪拌條件下加入上述制備的丙烯酰氯(3mL，0.35mmol)和Et₃N(47mg，0.46mmol)，加畢，在低溫下攪拌5min后，移去冰水浴，然后常溫攪拌至反應完全。反應液用飽和食鹽水洗滌2次，有機相用無水Na₂SO₄干燥，過濾，濃縮，硅膠柱層析純化即可得到化合物4c(白色固體)。該化合物的 ¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm11.48(s，1H)，9.89(s，1H)，8.23(s，1H)，8.08(s，1H)，7.40(dd，J＝1.2，7.2Hz，1H)，7.24-7.31(m，2H)，7.25(dd，J＝10，16.8Hz，1H)，6.11(d，J＝1.2Hz，1H)，6.07(s，1H)，5.59(dd，J＝0.4，9.6Hz，1H)，3.52(br，4H)，3.31(s，2H)，2.50-2.51(m，9H)，2.42(s，1H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆)δ165.64，165.07，163.02，162.82，160.41，157.44，141.34，139.29，134.02，133.03，132.29，129.47，128.61，127.46，126.19，125.43，83.16，57.30，52.67，43.93，36.51，26.04，18.78；HRMS-ESI(+)：C₂₅H₃₀ClN₈O₂S計算值541.1901；檢測到541.1879[M+H]⁺。

實例4化合物4d：N-(2-氯-(6-甲基苯基)-2-[[6-[4-(2-氯乙酰胺)-1-哌嗪基]-2-甲基-4-嘧啶基]氨基]-5-噻唑甲酰胺的合成

0℃下，將化合物4a(100mg，0.20mmol)加入到有2mL二氯甲烷的圓底燒瓶中，然后攪拌條件下加入氯乙酰氯(44mg，0.39mmol)和Et₃N(45.5mg，0.45mmol)，加畢，在低溫下攪拌5min后，移去冰水浴，然后常溫攪拌至反應完全。反應液用飽和食鹽水洗滌2次，有機相用無水Na₂SO₄干燥，過濾，濃縮，硅膠柱層析純化即可得到化合物4d(米白色固體)。該化合物的 ¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm9.95(s，1H)，8.27(s，2H)，7.40(d，J＝7.2Hz，1H)，7.23-7.30(m，2H)，6.09(s，1H)，4.08(s，2H)，3.52(br，4H)，3.25(q，J＝6，12Hz，1H)，2.41-2.48(m，9H)，2.24(s，3H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆)δ165.86，162.79，162.44，161.47，160.37，157.78，141.42，139.30，134.05，132.96， 129.47，128.60，127.46，126.51，84.03，59.44，58.19，53.07，43.16，37.88，26.01，18.81；HRMS-ESI(+)：C₂₄H₂₉Cl₂N₈O₂S計算值563.1511；檢測到563.1542[M+H]⁺。

實施例2具有通式二的噻唑雜環(huán)類化合物的化學合成和結(jié)構(gòu)鑒定

具有通式二的噻唑雜環(huán)類化合物的化學合成實驗步驟(通式二所包含的實例化合物實驗步驟)如下：

1.通用路線

2.具體合成步驟：

2.1化合物9a-9b的制備

將化合物7(5.67g，18.98mmol)，不同R基團的哌嗪(2-5eq)以及DIPEA(4.91g，37.99mmol)加入到攪拌的1，4-二氧六環(huán)(95mL)中，然后加熱至100-105℃回流3-12h，反應完全后冷卻至室溫(一般過夜)，有大量固體析出，抽濾，然后用蒸餾水洗滌濾餅得化合物9(白色固體)。產(chǎn)率90％左右。

化合物9a的核磁數(shù)據(jù)如下：¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δppm8.01(s，1H)，7.71(dd，J＝1.2，7.6Hz，4H)，7.35-7.46(m，6H)，5.74(s，1H)，4.33(q，J＝7.2Hz，2H)，3.84(t，J＝6.0Hz，2H)，3.59(br，4H)，2.63(t，J＝6.0Hz，2H)，2.57(br，4H)，2.54(s，3H)，1.35(t，J＝7.2Hz，3H)，1.071(s，9H)；¹³CNMR(100MHz，CDCl₃)δ166.31，165.51，162.94，162.30，156.567，143.36，135.63，133.68，129.73，127.73，121.44，82.93，62.09，60.86，60.32，53.34，44.09，26.89，25.80，19.21，14.45。

化合物9b的核磁數(shù)據(jù)如下：¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)：δppm10.72(s，1H)，8.05(s，1H)，5.79(s，1H)，5.02(br，1H)，4.36(q，J＝7.2Hz，2H)，3.64(s，4H)，3.28(br，2H)，2.54(s，9H)，1.46(s，9H)，1.38(t，J＝7.2Hz，3H)； ¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆)：δ165.62，164.22，162.85，162.30，157.23，156.03，145.98，120.59，83.32，78.01，60.89，57.75，52.71，44.06，37.83，28.73，26.03，14.78。

1.2.化合物10a-10b的制備

將化合物9加入兩口圓底燒瓶中，加入213mL乙醇，攪拌下加入80％的水合肼106.5mL，加熱至78℃回流反應2h。反應后，冷卻至室溫，有大量固體析出。然后抽濾，濾餅用大量水洗滌，真空干燥得化合物10(白色固體)。

化合物10b的核磁數(shù)據(jù)如下：¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)：δppm11.33(s，1H)，9.56(s，1H)，7.92(s，1H)，6.69(t，J＝4.8Hz，1H)，6.03(s，1H)，4.51(s，1H)，3.49(br，1H)，3.07(q，J＝6.0Hz，2H)，2.45(br，4H)，2.41(s，3H)，2.36(t，J＝6.8Hz，2H)，1.38(s，9H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆)：δ165.60，162.84，162.26，161.94，157.48，156.03，139.41，125.39，82.95，78.01，57.74，52.71，44.06，37.81，28.72，26.05。

2.3酸銨縮合制備雙酰肼化合物11a-11b

0℃下將化合物10(1.0eq)和三乙胺(8.7g，8.60mmol)分批緩慢加入到29的二氯甲烷溶液中，約4h后反應完畢。直接向反應體系中加入20mL蒸餾水，抽濾，濾餅用蒸餾水洗滌，干燥即可得化合物11(白色固體)。產(chǎn)率50％-80％。

化合物11a：2-((6-(4-(2-(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧)乙基)哌嗪-1-基)2- 甲基嘧啶-4-基)氨基)-N’-(2-氯-6-甲苯甲酰)噻唑-5-碳酸肼)的結(jié)構(gòu)式如下：

化合物11a的核磁數(shù)據(jù)如下：¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)：δppm11.64(s，1H)，10.49(s，1H)，10.40(s，1H)，8.18(s，1H)，7.66(dd，J＝1.2，7.2Hz，4H)，7.45-7.53(m，6H)，7.33-7.38(m，2H)，7.27(dd，J＝2.4，6.4Hz，1H)，6.20(s，1H)，4.36(dd，J＝0.8，12.4Hz，2H)，4.07(br，2H)，3.64(d，J＝10.8Hz，2H)，3.47(t，J＝12.4Hz，2H)，3.38(s，2H)，3.22(d，J＝9.6Hz，2H)，2.48(s，3H)，2.46(s，3H)，1.02(s，9H)；

化合物11b：叔丁基(2-(4-(6-((5-(2-(2-氯-6-甲苯甲酰)?；驶?噻唑-2-基)氨基)2-甲基嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙基)氨基甲酸酯的結(jié)構(gòu)式如下：

化合物11b的核磁數(shù)據(jù)如下：¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)：δppm11.45(s，1H)，10.44(s，1H)，10.38(s，1H)，8.14(s，1H)，7.33-7.38(m，2H)，7.27(dd，J＝6.4HZ，1H)，6.69(t，J＝1.2Hz，1H)，6.06(s，1H)，3.51(br，4H)，3.08(q，J＝6.4Hz，2H)，2.46(s，7H)，2.433(s，3H)，2.37(t，J＝6.4Hz，2H)，1.39(s，9H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆)：δ166.01，165.61，163.04，162.87，161.32，157.39，156.04，141.29，138.34，135.79，130.67，130.51，129.16，126.85，124.49，83.17，78.02，57.72，52.70，45.99，44.07，37.80，28.73，26.00，19.54。

2.4脫氫環(huán)化反應制備噁二唑化合物12a-12b

將化合物11(5.78mmol)溶于30mL二氯甲烷中，然后加入3eq的DIPEA(2.24g，17.34mmol)和1.5eq的TsCl(1.65g，8.68mmol)，常溫攪拌至化合物11反應完全，大約3h，反應體系由懸浮液變?yōu)辄S色澄清溶液。反應完全后加入氨的水溶液除去過量的TSCl，有機相用無水Na₂SO₄干燥，過濾，濃縮，粗品過柱純化得到化合物12(白色固體)。產(chǎn)率76.3％-79％。

化合物12a：N-(6-(4-(2-(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧)乙基)哌嗪-1-基)2-甲基嘧啶-4-基)5-(5-(2-氯6-甲苯基)1，3，4-惡二唑-2-基)噻唑-2-胺的結(jié)構(gòu)式如下：

化合物12a的¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)：δppm10.13(br，1H)，8.10(s，1H)，7.68(d，J＝6.4Hz，4H)，7.32-7.45(m，8H)，7.22-7.25(m，1H)，5.81(s，1H)，3.83(t，J＝5.2Hz，2H)，3.60(br，4H)，2.55-2.60(m，9H)，1.05(s，9H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆):δ166.34，164.14，162.88，160.65，160.45，156.30，141.48，140.14，135.56，134.91，133.59，132.04，129.69，128.86，127.69，127.35，123.72，113.31，82.85，61.90，60.19，53.20，44.00，26.81，25.61，20.59，19.15。

化合物12b：叔丁基(2-(4-(6-((5-(5-(2-氯-6-甲苯1,3,4-惡二唑-2-基)噻唑-2-基)氨基)2-甲基嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙基)氨基甲酸酯的結(jié)構(gòu)式如下：

化合物12b的制備方法同上。其核磁數(shù)據(jù)如下：¹HNMR(400MHz，CDCl3)：δppm10.87(br，1H)，8.07(s，1H)，7.38-7.42(m，2H)，7.28(d，J＝4Hz， 1H)，5.84(s，1H)，4.99(br，1H)，3.63(br，4H)，3.26(d，J＝3.2Hz，2H)，2.51(s，9H)，2.40(s，3H)，1.47(s，9H)；¹³CNMR(100MHz，CDCl₃):δ166.39，164.04，162.85，160.56，160.51，156.33，156.00，141.57，139.98，134.92，132.14，128.98，127.46，123.76，113.42，82.82，79.31，57.30，52.49，43.94，37.04，29.69，28.48，25.57，20.64。

2.5噁二唑化合物13a-13e的合成

實例5化合物：13a的合成

將化合物12a(3.00g，4.00mmol)加入到有40mL四氫呋喃的圓底燒瓶中，然后加入固體TBAF(3.14g，12.01mmol)，常溫攪拌3h，反應完全后用120mL飽和食鹽水洗滌3次，有機相用無水Na₂SO₄干燥，過濾，濃縮，粗品進一步柱層析純化得到化合物13a(白色固體，1.974g)。產(chǎn)率為96.3％。化合物的 ¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆):δppm11.77(s，1H)，8.17(s，1H)，7.55-7.61(m，2H)，7.46(d，J＝7.2Hz，1H)，6.07(s，1H)，4.45(t，J＝5.2Hz，1H)，3.53(br，6H)，3.33(s，6H)，2.42-2.45(m，9H)，2.30(s，3H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆)：165.53，162.97，162.82，160.83，160.14，156.97，142.50，141.84，134.15，133.40，129.85，127.79，123.64，112.04，83.24，60.63，58.94，53.16，44.06，25.94，20.30；HRMS-ESI(+)：C₂₃H₂₆ClN₈O₂S，計算值513.1588；檢測到513.1607[M+H]⁺。

實例6化合物13b:N-(6-(4-(2-氨基乙基)哌嗪基)-2-甲基嘧啶基)-2-(5-(2-氯-6-甲基苯基)-1，3，4-噁二唑基)氨基噻唑的合成

將化合物12b(173mg，0.28mmol)溶于2.5mL二氯甲烷中，常溫攪拌下加入 CF₃COOH，室溫反應至化合物12b完全消失。低壓濃縮除去反應中的溶劑，然后加入飽和食鹽水，用飽和的NaHCO₃調(diào)節(jié)pH9～10，用四氫呋喃萃取三次，合并有機相，有機相用無水Na₂SO₄干燥，過濾，濃縮，粗品進一步柱層析純化得到化合物13b(白色固體，144.5mg)。產(chǎn)率為83％。該化合物的 ¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆):δppm8.17(s，1H)，7.55-7.61(s，1H)，7.45(d，J＝6.4Hz，1H)，6.15(s，1H)，3.56(br，4H)，2.92(t，J＝6.4Hz，2H)，2.56(t，J＝6.4Hz，2H)，2.50(s，4H)，2.45(s，3H)，2.30(s，3H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆)：165.54，162.97，162.80，160.84，160.15，157.06，142.53，141.85，134.15，133.41，129.86，127.80，123.65，112.01，83.37，55.06，52.47，43.98，36.34，25.95，20.29；HRMS-ESI(+)：C₂₃H₂₇ClN₉O_S，計算值512.1748；檢測到512.1733[M+H]⁺。

從化合物13b進一步合成其它衍生物13c-13e(實例7-9化合物)：具體合成方法見上述4b-4d。

實例7化合物

合成化合物13c的產(chǎn)率為37％。該化合物的¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆):δppm11.77(s，1H)，8.18(s，1H)，7.61-7.55(m，2H)，7.48-7.46(dd，J＝7.2，0.8Hz，1H)，6.10(s，1H)，3.80(t，J＝6.4Hz，2H)，3.56(br，4H)，2.66(t，J＝6.4Hz，2H)，2.54(br，4H)，2.46(s，3H)，2.30(s，3H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆):δ165.57，162.97，162.80，160.84，160.16，157.02，142.49，141.85，134.17，133.39，129.85，127.80，123.66，112.08，88.33，56.80，52.23，44.13，43.08，25.95，20.30；HRMS-ESI(+)：C₂₄H₂₅ClN₉OS₂，計算值554.1311；檢測到554.1332[M+H]⁺。

實例8化合物

化合物13d的¹HNMR(400MHz，CDCl₃):δppm10.09(br，1H)，8.10(s，1H)，7.39(m，2H)，7.30(d，J＝2Hz，1H)，6.34(dd，J＝1.2，17.2Hz，1H)，6.14-6.21(m，2H)，6.88(dd，J＝1.2，10Hz，1H)，33.68(br，4H)，3.51(q，J＝5.6，11.2Hz，2H)，2.56-2.61(m，9H)，2.41(s，3H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆):δ165.57，165.05，162.98，162.82，160.84，160.16，157.00，142.51，141.85，134.17，133.40，132.30，129.85，127.80，125.43，123.66，112.07，83.29，57.33，52.70，44.01，36.54，25.95，20.30；HRMS-ESI(+)：C₂₆H₂₉ClN₉O₂S，計算值566.1848；檢測到566.1868[M+H]⁺。

實施例9化合物

化合物13e的¹HNMR(400MHz，CDCl₃):δ9.62(br，1H)，8.10(s，1H)，7.40-7.44(m，2H)，7.22(d，J＝0.8Hz，1H)，5.82(s，1H)，4.10(s，2H)，3.68(br，4H)，3.46(q，J＝5.6，11.2Hz，2H)，2.55-2.62(m，9H)，2.40(s，3H)；¹³C-NMR(100MHz，DMSO-d₆):166.54，165.61，162.92，162.70，160.82，160.16，157.09，142.51，141.84，134.16，133.40，129.85，127.80，123.64，112.11，83.54，58.24，56.61，52.21，43.15，37.89，25.93，20.30；HRMS-ESI(+)：C₂₅H₂₈Cl₂N₉O₂S，計算值588.1459；檢測到588.1359[M+H]⁺。

實施例3具有通式三的噻唑雜環(huán)類化合物的化學合成和結(jié)構(gòu)鑒定

具有通式三的噻唑雜環(huán)類化合物的化學合成實驗步驟(通式三所包含的實 例化合物實驗步驟)如下：

1.通用路線

2.具體合成步驟：

2.1化合物15的合成

取100mL兩口燒瓶，加入化合物14(5.00g，49.93mmol)，THF(50mL)，在0℃下攪拌，然后分別加入三乙胺(10.10g，99.81mmol)和DMAP(30mg，0.25mmol)。10min后，向燒瓶中滴加(Boc)₂O(13.08g，59.93mmol)。滴加完畢，撤掉冰浴，升至室溫，繼續(xù)攪拌3h，TLC檢測反應完全，滴加蒸餾水淬滅。抽濾，將濾液旋干，與濾餅合并到一起，加入100mL二氯甲烷稀釋，用飽和的檸檬酸溶液(100mL)洗滌有機相3-5次，再用飽和氯化鈉溶液(100mL)洗有機相1-2次，無水硫酸鈉干燥，濃縮得到化合物15(白色固體，7.65g)。產(chǎn)率為76.4％。該化合物的¹HNMR(400MHz，CDCl₃):δppm12.71(bs，1H)，7.41(d，J＝3.5Hz，1H)，6.90(d，J＝3.5Hz，1H)，1.61(s，9H)；¹³CNMR(100MHz，CDCl₃)δ162.17，153，13，136.67，111.94，81.73，28.33；MS:[M+H]⁺201.01。

2.2化合物16的合成

化合物15(7.65g，38.20mmol)，二氯甲烷(76mL)置于燒瓶中，攪拌下分批加入NIS(8.6g，38.22mmol)，溶液迅速由無色變?yōu)樯钭仙?，加畢，室溫攪?h，TLC檢測反應完全。混合液加入二氯甲烷稀釋至100mL，用Na₂S₂O₃飽和溶液(100mL/次)洗滌有機相2-3次，分離出有機相，然后有機相用無水Na₂SO₄干燥，濃縮得到粗品，黃色固體11.42g；然后進一步經(jīng)硅膠柱層析純化得到化合物16(白色固體粉末，8.32g)。產(chǎn)率為66.8％。該化合物的¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δppm12.19(bs，1H)，7.38(s，1H)，1.60(s，9H)；¹³CNMR(100MHz，CDCl₃)δ165.77，152.96，143.94，82.49，62.56，28.26；MS:[M+H]⁺326.85。

2.3化合物17的合成

化合物16(2.00g，6.13mmol)置于一干燥兩口燒瓶，在手套箱中加入CuI(116.7mg，0.61mmol)，PdCl₂(PPh₃)₂(215mg，0.31mmol)，然后抽真空，充氮氣(重復2-3次)；用注射器分別加入干燥三乙胺(1.86g，18.38mmol)，重蒸THF(20mL)和三甲基硅基乙炔(1.20g，12.26mmol)，溶液很快變?yōu)楹谏覝財嚢?2h。反應結(jié)束后，用蒸餾水淬滅。砂芯漏斗鋪一層硅藻土，過濾除去反應混合液中的固體，加壓濃縮除去有機溶劑，用二氯甲烷溶解，分別用蒸餾水，飽和氯化鈉溶液洗滌有機相2-3次，無水硫酸鈉干燥，濃縮，硅膠柱層析分離純化。2.5％EtOAc/PE洗脫得到化合物17(黃色固體粉末，2.02g)。產(chǎn)率為55.5％。該化合物的¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δppm12.11(bs，1H)，δ7.46(s，1H)，δ1.60(s，9H)，0.26(s，9H)；¹³CNMR(100MHz，CDCl₃)δ161.44，152.63，141.83，111.78，101.17，94.33，82.53，53.42，28.27；MS:[M+H]⁺297.02。

2.4化合物18：叔丁基(5-乙炔噻唑-2-基)氨基甲酸酯的合成

化合物17(2.22g，7.49mmol)懸浮在溶劑甲醇(70mL)中，邊攪拌邊加入無水碳酸鉀(2.07g，15.00mmol)，30min后反應結(jié)束，將溶劑旋干。加入二氯甲烷溶解，用蒸餾水洗滌有機相3次，飽和氯化鈉溶液洗滌有機相1-2次，無水硫酸鈉干燥，濃縮得到化合物18(黃色粉末，1.64g)。產(chǎn)率為97.6％。該化合物 ¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δppm11.84(bs，1H)，7.53(s，1H)，3.39(s，1H)，1.61(s，9H)；¹³CNMR(100MHz，CDCl₃)δ161.94，152.75，142.42，110.49，83.27，82.59，73.96，28.26。

2.5化合物21：叔丁基(5-(1-(2-氯-6-甲苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酸酯的合成

0℃下，化合物19(425mg，3.00mmol)，NaNO₂(414mg，6.00mmol)和5mLH₂O加至圓底燒瓶中，邊攪拌邊緩慢滴加3N鹽酸(3mL，9.00mmol)，加畢，繼續(xù)攪拌1h。稱取NaN₃(214.5mg，3.30mmol)，溶于2mLH₂O中，緩慢滴加至上述燒瓶中，繼續(xù)攪拌1.5h，TLC檢測，原料已消失，反應完全。用二氯甲烷萃取反應混合液，合并有機相，旋轉(zhuǎn)除去部分溶劑，加入乙腈溶液，繼續(xù)將二氯甲烷旋干，得到20的混合物，產(chǎn)物溶于乙腈，直接投下一步；

取另一燒瓶，加入化合物18，抽真空，充氮氣，在氮氣流中加入化合物20(1-疊氮-2-氯苯)的乙腈溶液和催化量的納米Cu₂O(懸浮于H₂O中)，在氮氣保護下，室溫攪拌反應過夜。反應結(jié)束后，柱層析分離純化產(chǎn)品，先用P:E＝5:1洗脫除去部分雜點，2％甲醇/二氯甲烷洗脫得到產(chǎn)品，即化合物21(751mg，85.8％)。該化合物的¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δppm10.91(bs，1H)，7.86(s，1H)，7.77(s，1H)，7.32-7.46(m，3H)，2.17(s，3H)，1.64(s，9H)；¹³CNMR(100MHz，CDCl₃)δ161.260，152.824，140.00，138.18，134.16，133.97，131.80，131.15，129.54，127.90，121.35，82.49，28.34，17.92；MS:[M+H]⁺391.78。

2.6化合物22：5-(1-(2-氯-6-甲苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)噻唑-2-胺的合成

化合物21(2.3g，5.88mmol)溶于CH₂Cl₂(30mL)中，常溫下邊攪拌邊加入 CF₃COOH(6mL)，室溫繼續(xù)攪拌3h，TLC檢測反應完全，旋蒸除去溶劑和部分CF₃COOH，加入飽和碳酸氫鈉溶液至pH8～9。二氯甲烷萃取2-3次，合并有機相，有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾，低壓濃縮得到產(chǎn)品，即化合物22(棕黃色固體，1.67g)。產(chǎn)率為97.6％。該化合物的¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δppm7.77(s，1H)，7.40-7.45(m，3H)，7.32(s，1H)，5.33(bs，2H)，2.14(s，3H)；¹³CNMR(100MHz，CDCl₃)δ140.43，138.20，135.85，133.99，131.83，131.15，129.49，127.85，120.78，17.88。

2.7化合物24：N-(6-氯-2-甲基嘧啶-4-基)-5-(1-(2-氯-6-甲苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)噻唑-2-胺的合成

0℃下，將化合物22(1.67g，5.74mmol)加入到60％的NaH(1148mg，28.70mmol使用前用石油醚洗滌3次)的四氫呋喃溶液(57mL)中，攪拌下，將化合物23(1.12g，6.89mmol)分批加入到上述懸浮液中，加畢，低溫攪拌30min后移至室溫反應過夜。旋蒸除去四氫呋喃溶液，加入60mL蒸餾水，用檸檬酸調(diào)節(jié)pH5～6.5，二氯甲烷萃取3次，合并有機相，用無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。柱層析進一步純化得化合物24(乳白色固體，1.8g)。產(chǎn)率為75.3％。該化合物的¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm12.06(br，1H)，8.86(s，1H)，7.88(s，1H)，7.57-7.64(m，2H)，7.52(d，J＝7.2Hz，1H)，6.94(s，1H)，2.61(s，3H)，2.07(s，3H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆)δ167.86，158.79，158.22，158.08，140.20，138.37，135.62，134.10，132.24，131.13，130.37，128.22，123.50，121.50，103.51，25.64，17.66；MS:[M+H]⁺418.03。

實例10至實例11化合物：25a-25b的合成

將化合物24(1.8g，4.30mmol)，哌嗪類化合物(21.51mmol)，DIPEA(1.11g，8.59mmol)均加入到圓底燒瓶中，然后加入反應溶劑1，4-二氧六環(huán)43mL，加熱103℃回流攪拌3h，反應完畢。冷卻至室溫(一般過夜)，有固體析出，抽濾，用水和乙酸乙酯分別洗滌2次，干燥后即可得到化合物25(白色固體)，產(chǎn)率為73-88％。注：反應時間主要取決于哌嗪的量，反應時間隨哌嗪量的增多而減少，大概可在3-20h浮動。

實例10化合物

該化合物的¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm11.26(s，1H)，8.78(s，1H)，7.76(s，1H)，7.50-7.63(m，3H)，6.05(s，1H)，4.47(bs，1H)，3.54(t，J＝5.6Hz，6H)，2.43-2.50(m，9H)，2.06(s，H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆)δ165.58，162.84，159.56，157.60，140.64，138.37，135.34，134.16，132.18，131.13，130.34，128.20，123.04，119.99，82.65，60.61，58.89，53.15，44.01，26.05，17.64；HRMS-ESI(+)：C₂₃H₂₇ClN₉OS，計算值512.1748；檢測到512.1744[M+H]⁺。

該化合物的¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm9.89(br，1H)，7.86(s，1H)，7.84(s，1H)，7.40-7.47(m，2H)，7.33(dd，J＝0.8，7.2Hz，1H)，5.87(s，1H)，5.03(br，1H)，3.66(br，4H)，3.29(d，J＝5.2Hz，2H)，2.51-2.56(m，9H)，2.18(s，3H)，1.48(s，9H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆)δ165.59，162.86，159.59，157.62，156.04，140.64，138.38，135.35，134.18，132.18，131.15，130.34，128.20，123.04，120.01，82.67，78.02，66.83，57.76，52.74，44.11，37.84，28.73，26.05，17.65；MS:[M+H]⁺611.16。

2.9化合物25c-25f的合成

實例11化合物：25c的合成

將化合物25b(500mg，0.82mmol)加入到含有8mL二氯甲烷的圓底燒瓶中，攪拌下加入2mLCF₃COOH，加畢室溫反應3h，TLC監(jiān)測反應完全。低壓濃縮除去二氯甲烷，然后向體系中加入5mL甲醇，再加入固體碳酸鈉調(diào)節(jié)pH9～10，過濾除去不溶的固體，濾液濃縮，進一步通過柱層析純化得化合物25c(334mg，白色固體)。產(chǎn)率為80％。該化合物的¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.78(s，1H)，7.76(s，1H)，7.56-7.64(m，2H)，7.51(dd，J＝0.4，7.2Hz，1H)，6.06(s，1H)，3.52(br，4H)，2.69(t，J＝6.4Hz，2H)，2.44-2.45(m，7H)，2.37(t，J＝6.4Hz，2H)，2.07(s，3H)，1.83(s，1H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆)δ165.58，162.85，159.61，157.63，140.66，138.37，135.36，134.17，132.18，131.14，130.34，128.20，123.04，119.99，82.67，60.41，52.89，44.11，38.60，26.06，17.64；HRMS-ESI(+)：C₂₃H₂₈ClN₁₀S，計算值511.1908；檢測到511.1905[M+H]⁺。

實例12-14化合物：25d-25f的合成

在化合物25c基礎(chǔ)上采用與4b-4d同樣的方法合成了一系列的衍生物，如下示：

化合物25d：

實例12化合物

¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm11.25(s，1H)，8.79(s，1H)，7.76(s，1H)，7.64-7.56(m，2H)，7.51(d，J＝7.2Hz，1H)，6.06(s，1H)，3.80(t，J＝5.6Hz，2H)，3.54(br，4H)，2.66(t，J＝5.6Hz，2H)，2.54(t，J＝4.4Hz，4H)，2.44(s，3H)， 2.07(s，3H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆)δ165.62，162.82，159.59，157.65，140.65，138.37，135.36，134.18，132.16，131.15，130.33，130.19，128.19，123.04，120.03，82.75，56.83，52.26，44.14，43.09，26.06，17.65；HRMS-ESI(+)：C₂₄H₂₆ClN₁₀S₂，計算值553.1472；檢測到553.1387[M+H]⁺。

化合物25e：

實例13化合物

¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm9.95(s，1H)，8.27(s，2H)，7.40(d，J＝7.2Hz，1H)，7.23-7.30(m，2H)，6.09(s，1H)，4.08(s，2H)，3.52(br，4H)，3.25(q，J＝6，12Hz，2H)，2.41-2.48(m，9H)，2.24(s，3H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆)δ172.39，165.55，165.12，162.77，159.53，157.70，140.67，138.35，135.41，134.16，132.37，132.17，131.12，130.34，128.19，125.33，123.10，119.98，82.88，57.17，52.55，43.77，36.30，26.05，17.64；HRMS-ESI(+)：C₂₆H₃₀ClN₁₀OS，計算值565.2014；檢測到565.1992[M+H]⁺。

化合物25f：

實例14化合物

¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm11.26(s，1H)，8.79(s，1H)，8.18(t，J＝5.2Hz，1H)，7.76(s，1H)，7.51-7.64(m，1H)，6.05(s，1H)，4.08(s，2H)，3.52(br，1H)，3.263(q，J＝6.4Hz，2H)，2.42-2.49(m，9H)，2.07(s，3H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆)δ165.82，162.40，161.48，159.35，157.94，140.58，138.36，135.43，134.15，132.21，131.13，130.36，128.21，123.17，120.27，83.59，59.45，58.20，53.05，43.15，37.89，26.02，17.65；HRMS-ESI(+)：C₂₆H₃₀ClN₁₀OS，計算值587.1624；檢測到587.1640[M+H]⁺。

實施例4由實施例1至實施例3制備的實例1至實例14化合物的活性測試

MTT粉末購買于Sigma公司，用磷酸緩沖液(PBS)將其配制成濃度為5毫克/毫升的溶液，選取0.22μm濾膜進行過濾，然后于4℃下避光保存。K562細胞(慢性粒細胞白血病細胞系)購于自北京金紫晶生物科技有限公司。實驗中所使用的細胞培養(yǎng)基為改良型RPMI-1640(Hyclone)基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加10％的胎牛血清(Hyclone)。

MTT比色法測定細胞活性包括下面幾個步驟(以K562細胞的測試方法為例，KG1aHL60細胞的測試方法與K562細胞的方法一致)：

(1)選取處于對數(shù)生長期的K562細胞，按每孔3×10³接種于96孔板，5％CO₂，37℃孵育培養(yǎng)過夜。

(2)加藥，本實驗中設置了9個濃度梯度，體系中藥物終濃度梯度為：30μM，15μM，7.5μM，3.7μM，1.8μM，0.9μM，0.5μM，0.2μM，0.1μM。每個濃度5個復孔，同時設置對照組(不加藥僅接種細胞)及空白孔(未接種細胞僅加培養(yǎng)基)，5％CO₂，37℃培養(yǎng)箱孵育72小時。

(3)每孔再加入20μLMTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)4小時。若藥物與MTT能夠反應，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖洗2-3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。

(4)4小時后終止培養(yǎng)，小心地吸去孔內(nèi)的液體。并向每孔加入150μL的二甲基亞砜。然后置于搖床上低速振蕩15分鐘左右，使結(jié)晶物充分溶解。采用酶聯(lián)免疫檢測儀MULTISKANFC(Thermoscientific)測定490nm處及570nm各孔的吸光度值，測量時以空白孔作為調(diào)零孔。

(5)處理數(shù)據(jù)。以藥物濃度為橫坐標，細胞數(shù)為縱坐標，用數(shù)據(jù)處理軟件SPSS軟件(IBM公司)進行幾率單位加權(quán)回歸法(Bliss法)進行數(shù)據(jù)處理，作圖，得到IC₅₀和IC₉₀值，見表1。

表1 實例1至實例14化合物對K562，KG1a，HL60細胞的抑制作用

通過表1，可以看出在實施例中制備的實例1至實例14化合物(分別對應于化合物4a-4d，13a-13e，25a以及25c-25f)均可以有效地抑制K562，HL60，KG1a細胞的增殖，特別是實例3化合物(化合物4c)在藥物濃度低于陽性對照藥物達沙替尼的情況下，仍可以同樣實現(xiàn)有效抑制K562，HL60，KG1a細胞增殖的效果，因此，本發(fā)明提供的實例1至實例14化合物可以用于治療白血病。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改，等同替換，改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。