本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥和保健食品領(lǐng)域，具體涉及O-?；ɡz寡糖螯合鈣的制備方法。
背景技術(shù)：
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寡糖是指由二到十個單糖單元通過糖苷鍵連接形成的直鏈或具支鏈的--類糖。這類糖進入大腸作為雙歧桿菌的增殖因子，能有效地促進人體內(nèi)有益細菌一一雙歧桿菌的生長繁殖，抑制腐敗菌生長，長期食用可減緩衰老、通便、抑菌、防癌、抗癌、減輕肝臟負擔(dān)、提高營養(yǎng)吸收率，特別是對鈣、鐵、鋅離子的吸收，改善乳制品中乳糖消化性和脂質(zhì)代謝。
卡拉膠是一組硫酸化多糖，具有多種生物活性，能降低血清中低密度脂蛋白(LDL)和膽固醇，并可控制實驗性動脈粥狀硬化的形成；卡拉膠的降血脂作用較其他膳食纖維更明顯，因其除了影響膽固醇的吸收外，還可通過形成凝膠吸收膽酸，從而造成膽酸減少，而機體利用膽固醇合成膽酸，使血脂減少；具有抗病毒活性，這種強負電荷硫酸聚陰離子與病毒或細胞表面正電荷分子結(jié)合，從而立體地抑制病毒對細胞的吸附；具有抗癌活性，它不是通過細胞毒作用，而是可能像其它多糖一樣作為一種免疫促進劑，通過作用于某種靶細胞(如促進淋巴細胞的分裂)，并抑制生長調(diào)節(jié)因子的活性，間接地抑制腫瘤細胞的生長。但是，天然卡拉膠的分子量一般為幾十萬甚至上百萬，如此高的分子量使它們很難通過機體不同的屏障，甚至細胞膜，從而使卡拉膠的生物活性不能得以充分發(fā)揮。將卡拉膠降解為小分子寡糖，并以二元有機酸的酸酐為?；瘎?，通過二者之間的單酰化反應(yīng)，在卡拉膠寡糖分子中引入羧基，增大其電荷密度。一方面使卡拉膠寡糖能夠透過機體的屏障，另一方面可使其免疫增強作用和抗病毒活性提高。
鈣是人體所不可或缺的營養(yǎng)素之一，是人體內(nèi)最豐富的礦物質(zhì)，參與人體整個生命過程。從骨骼形成、肌肉收縮、心臟跳動、神經(jīng)以及大腦的思維活動、直至人體的生長發(fā)育、消除疲勞、健腦益智和延緩衰老等等，可以說生命的一切運動都離不開鈣。鈣還能增強人的耐力，使人精力充沛，心理穩(wěn)定。國內(nèi)居民的膳食習(xí)慣是以谷類為主，這導(dǎo)致普遍缺鈣。目前市場的補鈣產(chǎn)品大多是無機鈣，鈣離子在胃腸道內(nèi)容易與某些陰離子結(jié)合，形成沉淀，導(dǎo)致鈣的生物利用率降低。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
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為克服現(xiàn)有產(chǎn)品的缺陷，本發(fā)明提供一種O-?；ɡz寡糖螯合鈣的制備方法，以期為人們提供一種高效的補鈣產(chǎn)品。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：
所述卡拉膠寡糖由任意類型卡拉膠經(jīng)酸降解而獲得，具體步驟為：將卡拉膠溶于0.1M鹽酸中，于60℃-80℃加熱1-5小時后，用0.1M NaOH中和，溶液在蒸餾水中透析6天，經(jīng)微孔膜(GS，0.45μm)過濾，在真空條件下濃縮至小體積。于4℃將濃縮液通過一個732型(H+)陽離子交換樹脂柱(30ml)，再用TBA將該溶液pH調(diào)至8，冷凍干燥得到卡拉膠寡糖的TBA鹽。于真空條件、40℃將其TBA鹽進一步干燥24小時。
所述O-?；ɡz寡糖衍生物由卡拉膠寡糖與有機二元酸的酸酐經(jīng)單酰化反應(yīng)獲得，具體步驟為：將卡拉膠寡糖的TBA鹽溶于DMF中，通入氮氣，向溶液中順序加入4-二甲氨基吡啶、二元有機酸的酸酐和三丁胺。將反應(yīng)混合物加熱到60℃-100℃，并使反應(yīng)持續(xù)6-10小時，然后將混合物在冰水浴中冷卻至4℃，將冷的飽和醋酸鈉的乙醇溶液加入到該溶液中，維持4℃達1-4小時。離心沉降，沉淀物用無水乙醇洗滌3次，再將其溶于蒸餾水中，將該溶液在5％的NaHCO3水溶液中透析兩天，再在蒸餾水中透析4天。將透析后的溶液冷凍干燥，得到O-?；ɡz寡糖。
所述O-酰基化卡拉膠寡糖螯合鈣由O-?；ɡz寡糖與可溶性鈣反應(yīng)制得，具體步驟為：將O-酰基化卡拉膠寡糖用去蒸餾水溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)解pH值為7-10，邊攪拌邊滴加可溶性鈣水溶液，其中O-?；ɡz寡糖與鈣離子的質(zhì)量比為8∶1-1∶1，室溫下，繼續(xù)攪拌1h，即得O-?；ɡz寡糖螯合鈣溶液。該溶液在蒸餾水中透析4天。將透析后的溶液冷凍干燥，得到O-酰基化卡拉膠寡糖螯合鈣。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點和技術(shù)效果：O-酰基化卡拉膠寡糖螯合鈣是O-?；ɡz寡糖與鈣離子反應(yīng)合成的有機鈣化合物，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。該產(chǎn)品中含有的寡糖成分，有利于促進腸道內(nèi)雙歧桿菌等有益菌的繁殖，抑制腐敗菌的生長；還具有抗病毒、抗腫瘤等多種生理活性；同時對人體對鈣的吸收有促進作用。
具體實施方式：
下面結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明做進一步詳細的說明，但具體實施方式不應(yīng)理解為對本發(fā)明保護范圍的限定。
實施例1：由κ-卡拉膠和氯化鈣制備有機螯合鈣的具體步驟如下：
(1)將2.5gκ-卡拉膠溶于250ml、0.1M鹽酸中，于60℃加熱1h后，用0.1M NaOH中和，溶液在蒸餾水中透析6天，經(jīng)微孔膜(GS，0.45m)過濾，在真空條件下濃縮至小體積。
(2)于4℃將(1)中的濃縮液通過一個732型(H+)陽離子交換樹脂柱(30ml)，再用TBA將該溶液pH調(diào)至8，冷凍干燥得到低分子量κ-卡拉膠的TBA鹽。于真空條件、40℃將其TBA鹽進一步干燥24h。
(3)將(2)中的低分子量κ-卡拉膠的TBA鹽(547mg，對應(yīng)2.87mmol羥基)溶于20ml DMF中，通入氮氣，向溶液中加入81.3mg 4-二甲氨基吡啶(81.3mg，0.82mmol)、琥珀酸酐(847mg，8.63mmol)和三丁胺(2.1ml，8.6mmol)。將反應(yīng)混合物加熱到80℃，并使反應(yīng)持續(xù)6h。
(4)將(3)中的混合物在冰水浴中冷卻至4℃，將150ml冷的飽和醋酸鈉的乙醇溶液加入到該溶液中，維持4℃達1h。離心沉降，沉淀物用無水乙醇洗滌3次。
(5)將(4)中的沉淀溶于蒸餾水中，將該溶液在5％的NaHCO3水溶液中透析兩天，再在蒸餾水中透析4天。
(6)將(5)中透析后的溶液冷凍干燥，得到白色的O-琥珀酰化κ-卡拉膠寡糖。
(7)稱取50mgO-琥珀?；?卡拉膠寡糖溶于50mL蒸餾水中，配制成濃度約為0.1％的溶液。
(8)用蒸餾水分別配制1mol/L的氯化鈣溶液和氫氧化鈉溶液。
(9)將氫氧化鈉溶液滴加到O-琥珀酰基化κ-卡拉膠寡糖水溶液中，調(diào)節(jié)pH值為7-10。邊攪拌邊滴加氯化鈣溶液，直至鈣離子與O-琥珀?；?卡拉膠寡糖的質(zhì)量比為1∶1，室溫下繼續(xù)攪拌1h。
(10)步驟(3)中的溶液用截留分子量為500Da的透析袋透析4天，除去游離的鈣離子，再將溶液冷凍干燥，即得O-琥珀?；?卡拉膠寡糖螯合鈣。