本發(fā)明涉及一種醋酸地加瑞克的制備后處理方法。

背景技術(shù)：

美國FDA批準(zhǔn)Ferring Pharmaceuticals公司degarelix粉針（Firmagon）上市，用于治療晚期前列腺癌。化學(xué)名: N-乙?；?3-（2-萘基）-D-丙氨酰 -4-氯-D-苯丙氨酰-3-（3-吡啶基）-D-丙氨酰-L絲氨酰-4-[[[(4S)-六氫-2,6-二氧代-4-嘧啶基]羰基]氨基]-L-苯丙氨酰-4-[(氨基羰基)氨基]-D苯丙氨酰-L-亮氨酰-N6-(1-甲基乙基)-L賴氨酰-L-脯氨酰- D-丙氨酰胺，結(jié)構(gòu)如下：

Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(L-Hor)-D-4Aph(Cbm)-Leu-Lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH2。

其中Ac是乙?；?，2Nal是2-萘基丙氨酸，4Cpa是4-氯苯丙氨酸，3Pal是3-吡啶基丙氨酸，Ser是絲氨酸，4Aph是4-氨基苯丙氨酸，Hor是氫化乳清酸，Cbm是氨基甲酰胺，Leu是亮氨酸，Lys（iPr）是N6-異丙基賴氨酸，Pro是脯氨酸而Ala是丙氨酸。

本品系一促性腺激素釋放激素（GnRH）受體抑制劑類藥物，可逆性抑制垂體GnRH受體來減少促性腺激素釋放繼而抑制睪酮的釋放。本品通過抑制對前列腺癌持續(xù)生長至關(guān)重要的睪酮來延緩前列腺癌的生長和惡化。以激素治療前列腺癌來降低睪酮濃度的初期會造成睪酮濃度激增，此初始刺激該激素受體可暫時性促進(jìn)腫瘤生長而不是抑制它，而地加瑞克則不會。Ⅲ期臨床研究顯示，本品降低睪酮濃度的效果至少可與亮丙瑞林儲庫型控釋注射劑（Lupron Depot）相媲美，而且降低睪酮濃度在統(tǒng)計學(xué)上顯著快。在治療的第3日，本品組96％達(dá)到去生殖腺的睪酮濃度，亮丙瑞林組效果為0％。第14日，本品組99％達(dá)到去生殖腺的睪酮濃度，亮丙瑞林組為18％。在臨床研究中，前列腺特異抗原（PSA）濃度可作為監(jiān)測的第2個療效判斷終點。使用degarelix 2周后降低PSA 64％，1月后85％，3月后95％，在治療的整個1年中始終抑制PSA。

本品劑量規(guī)格：degarelix 80 mg、120 mg/瓶。該劑量規(guī)格在多肽品種較高，所以急需一種中間體易儲存，產(chǎn)品更穩(wěn)定，易于放大，適合規(guī)模化生產(chǎn)的制備方法。

中國專利CN102428097介紹了一種醋酸地加瑞克原料藥的制備方法和CN102204889介紹了一種醋酸地加瑞克凍干粉針劑的制備方法，均未涉及到地加瑞克在原料藥及后續(xù)制劑生產(chǎn)過程中極易產(chǎn)生的自聚集成凝膠現(xiàn)象，因此并未對地加瑞克的原料及制劑的粘度進(jìn)行相應(yīng)的檢測與控制。

中國專利CN104334182公開了一種地加瑞克的制作方法，具體步驟為：純化通過液相或固相肽合成所獲得的地加瑞克以獲得具有至少95%純度的地加瑞克溶液；蒸發(fā)溶劑以濃縮所述地加瑞克溶液以獲得聚集的地加瑞克；將聚集的地加瑞克用乙酸解聚；凍干解聚的地加瑞克以提供所述地加瑞克藥物物質(zhì)。

現(xiàn)有的地加瑞克制備過程中，由于地加瑞克的物理化學(xué)特性，極易在水溶液中自聚集，并且最終形成凝膠水溶液。30%醋酸解聚樣品需要更低溫（<-20℃）才能凍實樣品，凍干制冷溫度要求低且凍干效果不是很好。因此對于批量化工業(yè)生產(chǎn)中，地加瑞克中間體的存放及產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性都存在較大影響。本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，雖然有些方法可以解聚自聚集的地加瑞克，但加入大量醋酸的同時會增加凍干難度并影響凍干效果，而長時間地加瑞克水溶液濃縮過程中也容易造成地加瑞克的穩(wěn)定性變差，從而使終產(chǎn)品質(zhì)量水平及收率降低。為此，本發(fā)明人重點研究如何解決地加瑞克自聚集問題的同時而不影響地加瑞克產(chǎn)品的質(zhì)量及收率問題。

本發(fā)明人用現(xiàn)有的制備方法均無法有效防止地加瑞克純化后水溶液自聚集現(xiàn)象產(chǎn)生，即使能夠解聚也對凍干設(shè)備要求高且難以保證凍干效果。為此，本發(fā)明人對地加瑞克的制備方法進(jìn)行了研究，從而得到了本發(fā)明的技術(shù)方案，使得醋酸地加瑞克在生產(chǎn)過程中不產(chǎn)生自聚集，產(chǎn)品穩(wěn)定，易于凍干，最終產(chǎn)品純度高，適合規(guī)?；a(chǎn)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種高效率、高純度以及低雜質(zhì)的地加瑞克的制備后處理方法。本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是：選擇一種地加瑞克的制備方法，解決(1)制備方法過程中自聚集現(xiàn)象，(2) 產(chǎn)品純度不高，(3) 凍干制冷溫度要求高，（4）工藝不穩(wěn)定。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：

使用在地加瑞克中間體每次旋蒸前添加少量醋酸，并采用分批旋蒸冷凍后復(fù)融，再混樣后合并凍干的工藝，可在規(guī)模化生產(chǎn)中有效解決地加瑞克自聚集問題。

為此本發(fā)明提供一種地加瑞克的制備后處理方法，其特征在于，步驟如下：

步驟1，通過對固相合成法所獲得的地加瑞克進(jìn)行純化，從而獲得純度大于99.0%的地加瑞克溶液 ；

步驟2，取轉(zhuǎn)鹽后待旋蒸處理的地加瑞克溶液，加入5～20%的醋酸，后攪拌均勻；

步驟3，將步驟2所得溶液分批次在30～35℃水浴條件下進(jìn)行旋蒸濃縮除去有機(jī)改性劑，使得地加瑞克溶液的濃度達(dá)到30～50g/l；

步驟4， 將步驟3所得濃縮液均置于-20℃下冷凍保存，待所有批次步驟2溶液旋蒸濃縮完后將所有冷凍保存的旋蒸濃縮液均置于20～30℃水浴下進(jìn)行復(fù)融后合并；

步驟5，將步驟4所得合并溶液經(jīng)過冷凍干燥得到純品醋酸地加瑞克。

優(yōu)選的操作步驟如下：

步驟1，純化通過固相合成法所獲得的地加瑞克，從而獲得純度大于99.0%的地加瑞克溶液 ；

步驟2，取轉(zhuǎn)鹽后待旋蒸處理的地加瑞克溶液，加入5%的醋酸，后攪拌均勻；

步驟3，將步驟2所得溶液分批次在30～35℃水浴條件下進(jìn)行旋蒸濃縮除去有機(jī)改性劑，使得地加瑞克溶液的濃度達(dá)到50g/l；

步驟4， 將步驟3所得濃縮液均置于-20℃下冷凍保存，待所有批次步驟2溶液旋蒸濃縮完后將所有冷凍保存的旋蒸濃縮液均置于20℃水浴下進(jìn)行復(fù)融后合并；

步驟5，將步驟4所得合并溶液經(jīng)過冷凍干燥得到醋酸地加瑞克原料藥。

以下通過實驗數(shù)據(jù)進(jìn)一步說明本發(fā)明的有益效果：

采用中國專利CN104334182方法制備的醋酸地加瑞克，精肽純度達(dá)到了97.50%，收率為29%,醋酸地加瑞克的粘度為2.3mPas；

采用本發(fā)明的方法制備的醋酸地加瑞克，精肽純度達(dá)到了99.76%，收率為53.2%，醋酸地加瑞克的粘度為2.5mPas。

本發(fā)明的方法是經(jīng)過篩選獲得的，篩選過程如下：

優(yōu)選實驗一：

加入醋酸的比例選擇：不加入；5%；10%；20%

為此提出了4種實驗條件：

實驗條件1：轉(zhuǎn)鹽后溶液不添加醋酸；

實驗條件2：轉(zhuǎn)鹽后溶液添加5%醋酸；

實驗條件3：轉(zhuǎn)鹽后溶液添加10%醋酸；

實驗條件4：轉(zhuǎn)鹽后溶液添加20%醋酸。

采用實驗條件1的方法制備地加瑞克，在旋蒸的過程中，醋酸地加瑞克溶液開始自聚集，并最終形成凝膠，無法凍干；

采用實驗條件2的方法制備地加瑞克，旋蒸濃縮完后，凍干得到精肽純度達(dá)到了99.70%，收率為52%，醋酸地加瑞克的粘度為2.4mPas；

采用實驗條件3的方法制備地加瑞克，旋蒸濃縮完后，凍干得到精肽純度達(dá)到了99.70%，收率為50%，醋酸地加瑞克的粘度為2.4mPas；

采用實驗條件4的方法制備地加瑞克，旋蒸濃縮完后，凍干中醋酸地加瑞克溶液不易結(jié)晶凍實，較難凍干，對于凍干設(shè)備存在較高要求。

根據(jù)以上實驗現(xiàn)象，優(yōu)選旋蒸濃縮前加入醋酸的量為轉(zhuǎn)鹽后醋酸地加瑞克溶液體積的5%~10%。

優(yōu)選實驗二：

轉(zhuǎn)鹽溶液旋蒸溫度，時間及醋酸地加瑞克凍干前濃度選擇：

溫度：30℃；35℃

時間：2h；4h

濃度：30g/l；50g/l

為此提出了4種實驗條件：

實驗條件5：轉(zhuǎn)鹽后溶液添加5%醋酸，在30℃下旋蒸2小時，使醋酸地加瑞克溶液的濃度為30g/L；

實驗條件6：轉(zhuǎn)鹽后溶液添加5%醋酸，在30℃下旋蒸4小時，使醋酸地加瑞克溶液的濃度為50g/L；

實驗條件7：轉(zhuǎn)鹽后溶液添加5%醋酸，在35℃下旋蒸2小時，使醋酸地加瑞克溶液的濃度為30g/L；

實驗條件8：轉(zhuǎn)鹽后溶液添加5%醋酸，在35℃下旋蒸4小時，使醋酸地加瑞克溶液的濃度為50g/L。

采用實驗條件5的方法制備地加瑞克，旋蒸濃縮完后，凍干得到精肽純度達(dá)到了99.70%，收率為52%，醋酸地加瑞克的粘度為2.4mPas；

采用實驗條件6的方法制備地加瑞克，旋蒸濃縮完后，凍干得到精肽純度達(dá)到了99.68%，收率為51%，醋酸地加瑞克的粘度為2.7mPas；

采用實驗條件7的方法制備地加瑞克，旋蒸濃縮完后，凍干得到精肽純度達(dá)到了99.71%，收率為52%，醋酸地加瑞克的粘度為2.1mPas；

采用實驗條件8的方法制備地加瑞克，旋蒸濃縮完后，凍干得到精肽純度達(dá)到了99.65%，收率為51%，醋酸地加瑞克的粘度為2.4mPas。

根據(jù)以上實驗現(xiàn)象，結(jié)合實際工藝需求，優(yōu)選在溫度為30～35℃，旋蒸2~4h，使得醋酸地加瑞克的濃度為50g/L。

優(yōu)選實驗三：

復(fù)融溫度，時間選擇：

溫度：20℃；30℃

時間：2h；4h

為此提出了2種實驗條件：

實驗條件9：將分批預(yù)凍的濃縮后溶液均置于20℃的水浴中，復(fù)融4h后，合并溶液，進(jìn)行凍干；

實驗條件10：將分批預(yù)凍的濃縮后溶液均置于30℃的水浴中，復(fù)融2h后，合并溶液，進(jìn)行凍干；

采用實驗條件9的方法制備地加瑞克，凍干得到精肽純度達(dá)到了99.67%，收率為51%，醋酸地加瑞克的粘度為2.3mPas；

采用實驗條件10的方法制備地加瑞克，凍干得到精肽純度達(dá)到了99.66%，收率為51%，醋酸地加瑞克的粘度為2.3mPas。

根據(jù)以上實驗現(xiàn)象，優(yōu)選復(fù)融溫度為20~30℃，復(fù)融時間為2~4h。

本發(fā)明的有益效果是：提供了一種高純度（99.76%）、高收率（50%以上）以及成品粘度可控的醋酸地加瑞克制備后處理方法。

附圖說明

圖1 專利CN104334182方法制備后醋酸地加瑞克HPLC檢測圖譜；

圖2 本發(fā)明方法制備后醋酸地加瑞克HPLC檢測圖譜（1mmol）；

圖3 本發(fā)明方法制備后醋酸地加瑞克HPLC檢測圖譜（300mmol）。

具體實施方式

實施例1：

（1）取2.0g（1.0mmol）的Rink amide MBHA (取代度=0.50mmol/g)樹脂加入到反應(yīng)柱中，加入15mlDCM溶脹30min，去保護(hù)：加入15ml的V_哌啶:V_DMF =20:80混合溶液，攪拌反應(yīng)5min后抽去，再次加入上述混合溶液，攪拌反應(yīng)10min后抽去，如此進(jìn)行2次脫保護(hù)，然后用DMF洗滌6次，每次15mL。

（2）偶聯(lián)Fmoc-D-Ala-OH：將0.94g (3.0mmol) Fmoc-D-Ala-OH和0.51g (3.0mmol) 6-Cl-HOBt用溶劑DMF溶解，冰浴冷卻溫度為0～10℃，加入465μl (3.0mmol) DIC，激活5分鐘后加入到反應(yīng)柱中與脫完保護(hù)的載體進(jìn)行反應(yīng)，25～35℃下反應(yīng)2小時，抽除液體，DMF洗滌3次，每次15mL。

（3）重復(fù)偶聯(lián)：重復(fù)去除Fmoc保護(hù)基及接肽反應(yīng)步驟的操作，按照地加瑞克氨基酸序列，依次偶聯(lián)：Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ilys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-4Aph(Dde)-OH、Fmoc-4Aph(Teoc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-D-3Pal-OH、Fmoc-D-Phe(4Cl)-OH、Fmoc-D-2Nal-OH。

（4）醋酐封端：先去保護(hù)基Fmoc，加入15ml的V_哌啶:V_DMF =20:80混合溶液，攪拌反應(yīng)5min后抽去，再次加入上述混合溶液，攪拌反應(yīng)10min后抽去，如此進(jìn)行2次脫保護(hù)，然后用DMF洗滌6次，每次15mL。取1ml醋酐、1ml吡啶和1mlDMF，冰浴冷卻，緩慢加入載體中，25～35℃下反應(yīng)2小時，抽除液體，用DMF洗滌6次，每次15mL。

（5）去Dde保護(hù)基：加入15ml的V_水合肼:V_DMF =2:98混合溶液，攪拌反應(yīng)5min后抽去，再次加入上述混合溶液，攪拌反應(yīng)10min后抽去，如此進(jìn)行2次脫保護(hù)，然后用DMF洗滌6次，每次15mL。

（6）偶聯(lián)Cbm：加入270μl（2mmol）三甲基硅基異氰酸酯的DMF溶液，冰浴冷卻，緩慢加入載體中，低溫反應(yīng)2小時，25～35℃下反應(yīng)24小時，抽除液體，用DMF洗滌3次，每次15mL。

（7）去Teoc保護(hù)基：加入1.04g（4mmol）四丁基氟化銨的DMF混合溶液，25～35℃下反應(yīng)2小時，抽除液體，用DMF洗滌3次，每次15mL。

（8）偶聯(lián)L-Hor：將0.73g (3.0mmol) L-Hor-OH和0.51g (3.0mmol) 6-Cl-HOBt用溶劑DMF溶解，冰浴冷卻溫度為0～10℃，加入465μl (3.0mmol) DIC，激活5分鐘后加入到反應(yīng)柱中與脫完保護(hù)的載體進(jìn)行反應(yīng)，25-35℃下反應(yīng)2小時，抽除液體，DMF洗滌3次，每次15mL。

（9）裂解：將上述肽樹脂用15ml V_TIS:V_PhSMe:V_TFA=5:5:90裂解液裂解，裂解時間：2小時，過濾，旋蒸，旋蒸母液加入90ml的乙醚中，沉降后離心洗滌5次，每次45mL。制得地加瑞克粗肽1.72g。

（10）第一次純化：將色譜柱用50%乙腈沖洗干凈后用5%乙腈平衡系統(tǒng)5min，以1-3g/次的上樣量進(jìn)行HPLC純化，流動相：A為0.1%TFA水溶液；流動相B為乙腈，梯度程序為：初始狀態(tài)流動相B為10%，保持5分鐘，然后在60分鐘內(nèi)將流動相B比例增至50%，流速為：20 mL／min。于226nm波長處檢測，根據(jù)色譜峰分段收集餾分，并將收集的餾分用分析液相色譜儀進(jìn)行檢測，純度≥99.0%且單雜≤0.2%餾分即為第一步合格餾分。其余為不合格餾分，不合格餾分中純度大于80%部分再進(jìn)行回收純化，純度小于80%舍棄。

（11）第二次純化：將色譜柱用50%乙腈沖洗干凈后用5%乙腈平衡系統(tǒng)5min，以1-3g/次的上樣量進(jìn)行HPLC純化，流動相：A為0.3%醋酸水溶液，流動相B為乙腈，梯度程序為：初始狀態(tài)流動相B為10%，保持5分鐘，然后在60分鐘內(nèi)將流動相B比例增至50%，流速為：20 mL／min。于226nm波長處檢測，根據(jù)色譜峰分段收集餾分，并將收集的餾分用分析液相色譜儀進(jìn)行檢測，純度≥99.5%且單雜≤0.1%餾分即為第二步合格餾分。其余為不合格餾分，不合格餾分中純度大于80%部分再進(jìn)行回收純化，純度小于80%舍棄。

（12）轉(zhuǎn)鹽的條件：流 動 相：A相：50 mmol/L乙酸銨的水溶液:乙腈=95:5；B相：0.1 %醋酸的水溶液:乙腈=95:5；C相：0.1 %醋酸的水溶液:乙腈=50:50，梯度程序為：以流動相A等梯度洗脫20分鐘， 轉(zhuǎn)換成流動相B等梯度洗脫10分鐘, 轉(zhuǎn)換成流動相C等梯度洗脫25分鐘。以1-3g/次的上樣量進(jìn)行轉(zhuǎn)鹽，按照上述梯度要求進(jìn)行洗脫，于226nm波長處檢測，將有紫外吸收值的樣品收集合并。

（13）濃縮及凍干：轉(zhuǎn)鹽后合并餾分加入5%的乙酸，分兩批分別旋蒸濃縮1h，至地加瑞克濃度為50mg/ml左右，每批旋蒸完后均放入冰箱于-20℃下冷凍保存，待凍干前，將兩批濃縮液均置于20℃水浴復(fù)融2h后合并，凍干后得到醋酸地加瑞克精肽：0.90g，純度：99.76%，收率：53.2%。醋酸地加瑞克的粘度為2.5mPas。

實施例2：

（1）取600.0g（300.0mmol）的Rink amide MBHA (取代度=0.50mmol/g)樹脂加入到反應(yīng)柱中，加入4000mlDCM溶脹30min，去保護(hù)：加入4000ml的V_哌啶:V_DMF =20:80混合溶液，攪拌反應(yīng)5min后抽去，再次加入上述混合溶液，攪拌反應(yīng)10min后抽去，如此進(jìn)行2次脫保護(hù)，然后用DMF洗滌6次，每次4000mL。

（2）偶聯(lián)Fmoc-D-Ala-OH：將283.6g (900.0mmol) Fmoc-D-Ala-OH和153.6g (900.0mmol) 6-Cl-HOBt用溶劑DMF溶解，冰浴冷卻溫度為0～10℃，加入144ml (900.0mmol) DIC，激活5分鐘后加入到反應(yīng)柱中與脫完保護(hù)的載體進(jìn)行反應(yīng)，25-35℃下反應(yīng)2小時，抽除液體，DMF洗滌3次，每次4000mL。

（3）重復(fù)偶聯(lián)：重復(fù)去除Fmoc保護(hù)基及接肽反應(yīng)步驟的操作，按照地加瑞克氨基酸序列，依次偶聯(lián)：Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ilys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-4Aph(Dde)-OH、Fmoc-4Aph(Teoc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-D-3Pal-OH、Fmoc-D-Phe(4Cl)-OH、Fmoc-D-2Nal-OH。

（4）醋酐封端：先去保護(hù)基Fmoc，加入4000ml的V_哌啶:V_DMF =20:80混合溶液，攪拌反應(yīng)5min后抽去，再次加入上述混合溶液，攪拌反應(yīng)10min后抽去，如此進(jìn)行2次脫保護(hù)，然后用DMF洗滌6次，每次4000mL。取300ml醋酐、300ml吡啶和300mlDMF，冰浴冷卻，緩慢加入載體中，25-35℃下反應(yīng)2小時，抽除液體，用DMF洗滌6次，每次4000mL。

（5）去Dde保護(hù)基：加入4000ml的V_水合肼:V_DMF =2:98混合溶液，攪拌反應(yīng)5min后抽去，再次加入上述混合溶液，攪拌反應(yīng)10min后抽去，如此進(jìn)行2次脫保護(hù)，然后用DMF洗滌6次，每次4000mL。

（6）偶聯(lián)Cbm：加入84ml（600mmol）三甲基硅基異氰酸酯的DMF溶液，冰浴冷卻，緩慢加入載體中，低溫反應(yīng)2小時，25～35℃下反應(yīng)24小時，抽除液體，用DMF洗滌3次，每次4000mL。

（7）去Teoc保護(hù)基：加入312g（1200mmol）四丁基氟化銨的DMF混合溶液，25～35℃下反應(yīng)2小時，抽除液體，用DMF洗滌3次，每次4000mL。

（8）偶聯(lián)L-Hor：將220.2g (900.0mmol) L-Hor-OH和153.6g (900.0mmol) 6-Cl-HOBt用溶劑DMF溶解，冰浴冷卻溫度為0～10℃，加入144ml (900.0mmol) DIC，激活5分鐘后加入到反應(yīng)柱中與脫完保護(hù)的載體進(jìn)行反應(yīng)，25～35℃下反應(yīng)2小時，抽除液體，DMF洗滌3次，每次4000mL。

（9）裂解：將上述肽樹脂用4500ml V_TIS:V_PhSMe:V_TFA=5:5:90裂解液裂解，裂解時間：2小時，過濾，旋蒸，旋蒸母液加入9000ml的乙醚中，沉降后離心洗滌5次，每次13500mL。制得地加瑞克粗肽534g。

（10）第一次純化：將色譜柱用50%乙腈沖洗干凈后用5%乙腈平衡系統(tǒng)5min，以20-35g/次的上樣量進(jìn)行HPLC純化，流動相：A為0.1%TFA水溶液；流動相B為乙腈，梯度程序為：初始狀態(tài)流動相B為10%，保持5分鐘，然后在60分鐘內(nèi)將流動相B比例增至50%;流速為：80 mL／min。于226nm波長處檢測，根據(jù)色譜峰分段收集餾分，并將收集的餾分用分析液相色譜儀進(jìn)行檢測，純度≥99.0%且單雜≤0.2%餾分即為第一步合格餾分。其余為不合格餾分，不合格餾分中純度大于80%部分再進(jìn)行回收純化，純度小于80%舍棄。

（11）第二次純化：將色譜柱用50%乙腈沖洗干凈后用5%乙腈平衡系統(tǒng)5min，以20-35g/次的上樣量進(jìn)行HPLC純化，流動相：A為0.1%醋酸水溶液；流動相B為乙腈，梯度程序為：初始狀態(tài)流動相B為10%，保持5分鐘，然后在60分鐘內(nèi)將流動相B比例增至50%，流速為：80 mL／min。于226nm波長處檢測，根據(jù)色譜峰分段收集餾分，并將收集的餾分用分析液相色譜儀進(jìn)行檢測，純度≥99.5%且單雜≤0.1%餾分即為第二步合格餾分。其余為不合格餾分，不合格餾分中純度大于80%部分再進(jìn)行回收純化，純度小于80%舍棄。

（12）轉(zhuǎn)鹽的條件：流 動 相：A相：50 mmol/L乙酸銨的水溶液:乙腈=95:5； B相：0.1 %醋酸的水溶液:乙腈=95:5；C相：0.1 %醋酸的水溶液：乙腈=50:50，梯度程序為：以流動相A等梯度洗脫25分鐘， 轉(zhuǎn)換成流動相B等梯度洗脫15分鐘, 轉(zhuǎn)換成流動相C等梯度洗脫40分鐘。以20-35g/次的上樣量進(jìn)行轉(zhuǎn)鹽，按照上述梯度要求進(jìn)行洗脫，于226nm波長處檢測，將有紫外吸收值的樣品收集合并。

（13）濃縮及凍干：轉(zhuǎn)鹽后合并餾分加入5%的醋酸，分十批分別旋蒸濃縮4h，至地加瑞克濃度為50g/l左右，每批旋蒸完后均放入冰箱于-20℃下冷凍保存，待凍干前，將十批濃縮液均置于20℃水浴復(fù)融4h后合并，凍干后得到醋酸地加瑞克精肽：286.1g，純度：99.89%，收率：56.4%。醋酸地加瑞克的粘度為2.1mPas。

實施例3：

（1）向不銹鋼溶液制備罐中加入3.528L的注射用水，

（2）加入220.5g的甘露醇，保持?jǐn)嚢枋刮锪先芙猓?/p>

（3）加入88.2g的醋酸地加瑞克原料藥，保持?jǐn)嚢枋刮锪先芙猓?/p>

（4）加0.882L注射用水至全量。分別經(jīng)過0.45μm和0.22μm微孔濾膜過濾，分裝。冷凍干燥，加塞。

實施例4：

（1）向不銹鋼溶液制備罐中加入5.120L的注射用水，

（2）加入160.0g的甘露醇，保持?jǐn)嚢枋刮锪先芙猓?/p>

（3）加入128.0g的醋酸地加瑞克原料藥，保持?jǐn)嚢枋刮锪先芙猓?/p>

（4）加1.280L的注射用水至全量。分別經(jīng)過0.45μm和0.22μm微孔濾膜過濾，分裝。冷凍干燥，加塞。

實施例5：

采用BROOKFIELD DV-II型旋轉(zhuǎn)黏度計，對于醋酸地加瑞克及注射用地加瑞克的黏度進(jìn)行測量，方法如下所示：

（1）供試品的配置：分別取醋酸地加瑞克用純凈水溶解配制成20mg/ml的均一溶液或注射用地加瑞克用注射用水配制成20mg/ml的均一溶液。

（2）把盛有供試品的容器浸入20℃水浴。

（3）將轉(zhuǎn)子浸入樣品中至轉(zhuǎn)子桿上的凹槽刻痕處。

（4）設(shè)定轉(zhuǎn)速值為50rpm，開啟攪拌檢測供試品黏度，待儀器讀數(shù)穩(wěn)定后，記錄數(shù)據(jù)。

其中實施例2中醋酸地加瑞克黏度值為：2.1mPas，實施例3中注射用地加瑞克黏度值為9.8mPas，實施例4中注射用地加瑞克黏度值為10.4mPas。