本發(fā)明屬于中藥提取技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種水解法制備去苯甲?；炙庈盏姆椒捌溽t(yī)藥用途具體涉及通過芍藥苷堿水解制備去苯甲?；炙庈盏姆椒捌渲苽浯倌幬镏械挠猛?。

背景技術(shù)：

芍藥苷(Paeoniflorin)是一種雙環(huán)單萜糖苷類化合物，是中藥材白芍和赤芍的主要活性成分，具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗、柔肝止痛等功效以及抗腫瘤和增強免疫力等多種藥理作用，并能擴張冠脈血管，對抗急性心肌缺血，治療缺血性腦血管疾病?，F(xiàn)有技術(shù)對芍藥苷的口服藥代動力學研究表明，芍藥苷口服生物利用度很低，僅為3-4％。造成芍藥苷口服生物利用度低的主要原因是芍藥苷口服后在腸道細菌分泌的β-葡萄糖苷酶和酯酶的催化下轉(zhuǎn)化成了芍藥苷的代謝產(chǎn)物Ⅰ和Ⅱ。但是，并沒有證據(jù)表明在體內(nèi)發(fā)揮藥理作用的是芍藥苷還是其代謝產(chǎn)物。因此，為了提高藥物的生物利用度，有必要對芍藥苷進行結(jié)構(gòu)修飾或者其衍生物進行進一步的研究。

沈陽藥科大學的徐秀玲利用羧酸酯酶對芍藥苷進行水解，通過硅膠柱色譜純化了水解產(chǎn)物，鑒定其為去苯甲?；炙庈?Debenzoylpaeoniflorin)，但該制備方法工藝較為繁瑣，工業(yè)適用性低，且并沒有對去苯甲?；炙庈者M行相關(guān)活性研究。本發(fā)明旨在提供一種制備工藝更為簡單，產(chǎn)品純度更高的去苯甲酰基芍藥苷的制備方法及其醫(yī)藥用途。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是通過堿水解的方法對芍藥苷進行結(jié)構(gòu)修飾得到去苯甲酰基芍藥苷，該方法主要包括芍藥苷堿水解、萃取除雜及結(jié)晶等步驟，最終獲得了純度>98％的去苯甲?；炙庈?，通過藥理學研究發(fā)現(xiàn)其具有顯著的促凝血活性。本發(fā)明所述去苯甲?；炙庈盏闹苽浞椒üに嚭唵我仔星夜I(yè)適用性強，制備得到的去苯甲酰基芍藥苷具有顯著的促凝血活性。其可以為該藥物進一步開發(fā)成相關(guān)新藥提供思路及數(shù)據(jù)支持。其中去苯甲?；炙庈盏慕Y(jié)構(gòu)式如下所示：

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：

本發(fā)明提供一種水解法制備去苯甲?；炙庈盏姆椒ǎ渚唧w包括如下步驟：

①芍藥苷堿水解：準確稱取純度98％的芍藥苷并將其加入到0.1～2M的氫氧化鈉溶液中，控制溶液溫度為20～80℃并攪拌反應(yīng)，反應(yīng)30min后即得芍藥苷堿水解液，其中氫氧化鈉溶液與芍藥苷的體積質(zhì)量比為100:1～10:1；

②萃取除雜：將①得到的芍藥苷堿水解液用酸溶液pH調(diào)至1.5，攪拌10min后過濾，濾液加入相同體積的中等極性有機溶劑萃取兩次，萃余相用堿溶液調(diào)節(jié)pH值至中性，得到中性溶液；

③結(jié)晶：將步驟②得到中性溶液濃縮至干膏，用中等極性的有機溶劑回流溶解后過濾，將濾液減壓濃縮至原體積的1/5～1/2，緩慢冷卻析出類白色粉末，過濾、干燥后得到去苯甲?；炙庈铡?/p>

本發(fā)明對步驟①堿水解的溫度進行了優(yōu)選，優(yōu)選地，水解所需的溫度為30～60℃。溫度太低反應(yīng)緩慢，溫度太高容易發(fā)生副反應(yīng)，降低產(chǎn)物收率和純度。

本發(fā)明對步驟②中所用的中等極性有機溶劑進行了優(yōu)選，優(yōu)選地，萃取所用的中等極性有機溶劑為乙酸乙酯、乙酸丁酯或正丁醇中的一種或多種。考慮到溶劑毒性，選擇了毒性較小的這三種溶劑。

本發(fā)明對步驟③中所用的中等極性有機溶劑進行了優(yōu)選，步驟③所述溶解所用中等極性有機溶劑為乙醇、丙酮、氯仿或乙酸乙酯中的一種。優(yōu)選地，溶解所用的中等極性有機溶劑為乙醇或丙酮中的一種或兩種。去苯甲?；炙庈赵谶@兩種溶劑中的溶解度更合適，不僅可以獲得更高的質(zhì)量，而且還可以保證較高的收率。

本發(fā)明還提供一種去苯甲?；炙庈盏尼t(yī)藥用途，即去苯甲?；炙庈赵谥苽浯倌幬镏械挠猛?。本發(fā)明實施例6實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與空白對照組相比，芍藥苷組具有較弱的促凝血活性，而去苯甲?；炙庈站哂酗@著的促凝血活性，凝血時間縮短至原來的60％。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，存在以下優(yōu)點：

1.本發(fā)明所述的水解法制備去苯甲酰基芍藥苷的方法工藝簡單且工業(yè)適用性強，與現(xiàn)有技術(shù)酶解法相比，其反應(yīng)速度更快，制備成本更低；且本發(fā)明通過實驗優(yōu)化了芍藥苷的堿 水解工藝的參數(shù)，其制備方法更經(jīng)濟實用。

2.本發(fā)明通過芍藥苷堿水解、萃取除雜及結(jié)晶工藝步驟的組合的工藝制備得到去苯甲酰基芍藥苷，其中得到的去苯甲?；炙庈盏漠a(chǎn)品純度更高，且本發(fā)明通過結(jié)晶的方法獲得高純度的去苯甲?；炙庈?，與硅膠柱色譜純化法相比制備成本更低，制備時間更節(jié)省。

3.本發(fā)明通過藥理實驗發(fā)現(xiàn)去苯甲?；炙庈站哂酗@著的促凝血活性，與芍藥苷相比，其促凝血活性更強。大鼠凝血時間測定實驗顯示，凝血時間縮短至空白對照組的60％。

具體實施方式

下面通過實施例對本發(fā)明作進一步說明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實施例中。本發(fā)明下述實施例中，如無特別說明，所述的去苯甲?；炙庈盏纳V檢測方法為：色譜柱：Phenomenex C18(4.6mm×250mm)；流動相：乙腈-0.1％磷酸(20：80)；柱溫：30℃；流速1ml/min；進樣量：10μl。蒸發(fā)光散射檢測器條件：Impactor：On，漂移管溫度：45℃，氮氣流速：1.5L/min。通過面積歸一化方法計算純度。

實施例1一種水解法制備去苯甲?；炙庈盏姆椒?/p>

稱取純度98％的芍藥苷10g，加入0.1M的氫氧化鈉溶液500ml，在30℃條件下攪拌反應(yīng)30min得到芍藥苷堿水解液。水解液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1.5，攪拌10min后過濾，濾液再加入相同體積的乙酸乙酯萃取兩次，水相再用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至中性。濃縮干，加入1400mL氯仿回流溶解后過濾，將濾液減壓濃縮至280ml，緩慢冷卻析出類白色粉末，過濾、干燥后得到去苯甲?；炙庈?.2g，純度98.3％。

實施例2一種水解法制備去苯甲?；炙庈盏姆椒?/p>

稱取純度98％的芍藥苷10g，加入1M的氫氧化鈉溶液1000ml，在60℃條件下攪拌反應(yīng)30min得到芍藥苷堿水解液。水解液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1.5，攪拌10min后過濾，濾液再加入相同體積的乙酸丁酯萃取兩次，水相再用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至中性。濃縮干，加入360mL無水乙醇回流溶解后過濾，將濾液減壓濃縮至130ml，緩慢冷卻析出類白色粉末，過濾、干燥后得到去苯甲?；炙庈?.4g，純度99.0％。

實施例3一種水解法制備去苯甲酰基芍藥苷的方法

稱取純度98％的芍藥苷10g，加入2M的氫氧化鈉溶液100ml，在20℃條件下攪拌反應(yīng)30min得到芍藥苷堿水解液。水解液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1.5，攪拌10min后過濾，濾液再加入相同體積的正丁醇萃取兩次，水相再用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至中性。濃縮干， 加入720mL乙酸乙酯回流溶解后過濾，將濾液減壓濃縮至220ml，緩慢冷卻析出類白色粉末，過濾、干燥后得到去苯甲?；炙庈?.7g，純度98.2％。

實施例4一種水解法制備去苯甲酰基芍藥苷的方法

稱取純度98％的芍藥苷10g，加入0.1M的氫氧化鈉溶液200ml，在30℃條件下攪拌反應(yīng)30min得到芍藥苷堿水解液。水解液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1.5，攪拌10min后過濾，濾液再加入相同體積的乙酸乙酯萃取兩次，水相再用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至中性。濃縮干，加入500mL丙酮回流溶解后過濾，將濾液減壓濃縮至180ml，緩慢冷卻析出類白色粉末，過濾、干燥后得到去苯甲?；炙庈?.5g，純度99.2％。

實施例5一種水解法制備去苯甲?；炙庈盏姆椒?/p>

稱取純度98％的芍藥苷10g，加入0.5M的氫氧化鈉溶液200ml，在80℃條件下攪拌反應(yīng)30min得到芍藥苷堿水解液。水解液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1.5，攪拌10min后過濾，濾液再加入相同體積的氯仿萃取兩次，水相再用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至中性。濃縮干，加入450mL無水乙醇回流溶解后過濾，將濾液減壓濃縮至150ml，緩慢冷卻析出類白色粉末，過濾、干燥后得到去苯甲?；炙庈?.0g，純度98.3％。

實施例6去苯甲酰基芍藥苷的促凝血活性研究

取15只大鼠，隨機分三組，每組五只，分別設(shè)空白對照組、芍藥苷組、去苯甲酰基芍藥苷組。其中芍藥苷的純度為98％，去苯甲?；炙庈諡榘凑毡景l(fā)明實施例4制備得到的去苯甲酰基芍藥苷。按30mg/kg靜脈注射，連續(xù)給藥2周。用毛細采血管從大鼠眼眶靜脈叢取血10cm，每隔20S掰掉0.5cm，待出現(xiàn)拉絲時表明凝血，通過凝血時間的長短來計算促凝血活性，試驗結(jié)果如表1所示。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與空白對照組相比，芍藥苷組具有較弱的促凝血活性，而去苯甲?；炙庈站哂酗@著的促凝血活性，凝血時間縮短至原來的60％，P<0.05。

表1 各組別促凝血試驗結(jié)果數(shù)據(jù)表(以凝血時間s為指標)

注：＊：P<0.05，與空白對照組比較。