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誘導(dǎo)多能干細(xì)胞、制備誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的方法與流程

文檔序號(hào):12346263閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種誘導(dǎo)多能干細(xì)胞,其來源于絨毛細(xì)胞。

2.一種制備權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的方法,其特征在于,包括:

(1)使多能干細(xì)胞誘導(dǎo)因子在絨毛細(xì)胞中表達(dá);以及

(2)將步驟(1)中所得到的絨毛細(xì)胞在適于去分化的條件下進(jìn)行培養(yǎng),以便獲得所述誘導(dǎo)多能干細(xì)胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,在步驟(1)中,所述多能干細(xì)胞誘導(dǎo)因子包括0CT4、S0X2、SV40LT、KLF4以及microRNA302-367。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,在步驟(1)中,將攜帶表達(dá)所述多能干細(xì)胞誘導(dǎo)因子的核酸分子的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入所述絨毛細(xì)胞中,

優(yōu)選地,采用電轉(zhuǎn)染法,將攜帶表達(dá)所述多能干細(xì)胞誘導(dǎo)因子的核酸分子的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入所述絨毛細(xì)胞中。

5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法,其特征在于,在步驟(1)中,所述質(zhì)粒包括:

第一質(zhì)粒,所述第一質(zhì)粒攜帶表達(dá)所述0CT4、S0X2、SV40LT和KLF4的核酸分子;以及

第二質(zhì)粒,所述第二質(zhì)粒攜帶表達(dá)所述microRNA302-367的核酸分子。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,在步驟(1)中,所述電轉(zhuǎn)染采用200V或300V的電壓并且電擊200或300微秒,優(yōu)選地,所述電轉(zhuǎn)染采用200V的電壓,電擊300微秒。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,在步驟(2)中,將所述步驟(1)中所得到的絨毛細(xì)胞依次在絨毛細(xì)胞培養(yǎng)基和誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于,所述絨毛細(xì)胞培養(yǎng)基為CHANG AmnioTM培養(yǎng)基。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于,所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為mTeSRTM1,

任選地,所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)一步含有:

終濃度為0.5微摩爾/升的A83-01;

終濃度為0.5微摩爾/升的Thiazovivin;

終濃度為1微摩爾/升的PD0325901;

終濃度為3微摩爾/升的CHIR99021。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于,利用所述絨毛細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時(shí),利用所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)20天。

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