本發(fā)明涉及索菲布韋單晶及制備方法和用途。

背景技術(shù)：

吉利德公司的丙型肝炎藥物索菲布韋(商品名：Sovaldi,通用名：Sofosbuvir,之前名為GS-7977,PSI-7977,400mg片劑)2013年12月6日獲得美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)用于基因1型，2型，3型和4型慢性丙型肝炎(Hepatitis C)成人患者的治療。索菲布韋是首個獲批可用于丙型肝炎全口服治療方案的藥物，在用于特定基因型(2型，3型)慢性丙型肝炎治療時，可消除對傳統(tǒng)注射藥物干擾素(IFN)的需求。

索菲布韋(Sofosbuvir)是丙肝病毒NS5B聚合酶抑制劑，對于HCV基因型2(HCV GT2)、HCV基因型3(HCV GT3)感染，索菲布韋只需與利巴韋林(Ribavirin)聯(lián)用即可，它因此成為用于丙型肝炎治療的全球首個無需同時使用干擾素的全口服組合治療。FDA同時也批準(zhǔn) 索菲布韋聯(lián)合聚乙二醇干擾素(peg-interferon alfa)、利巴韋林(Ribavirin)用于治療基因型1和4(HCV GT1,HCV GT4)的感染。

藥物的晶型研究及其固態(tài)表征在制藥行業(yè)意義重大，因為藥物分子通過弱相互作用所形成的多種復(fù)雜有序的聚集體，其立體結(jié)構(gòu)的差異將導(dǎo)致藥物理化性質(zhì)的改變。同一藥物的不同晶型往往具有不同的生物化學(xué)性質(zhì)，在穩(wěn)定性、溶解度等方面有顯著差異。此外，由于藥物的晶形對藥物的吸收、轉(zhuǎn)運有重大影響，從而改變藥物的生物利用度，會對療效產(chǎn)生較大影響。

藥物的晶型屬于何種晶系、何種點陣結(jié)構(gòu)不僅與藥物分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)，同時亦與制備結(jié)晶時所用溶劑種類、溶液濃度、結(jié)晶析出時冷卻、蒸發(fā)速度、干燥方法等因素密切相關(guān)。藥物多晶型的研究對保證藥品生產(chǎn)儲存過程中的穩(wěn)定性和臨床使用中的安全有效性有極重要的作用，另外，藥物的晶形對劑型的設(shè)計也起關(guān)鍵的作用。藥物晶型與固態(tài)表征的研究在歐美制藥界已經(jīng)比較成熟，在我國也已逐漸引起重視。

在發(fā)明專利WO2010135569、WO2011123645、CN102459299A中，吉列德曾公開并保護(hù)了索菲布韋的三種單晶和六種晶型及其制備方法。本發(fā)明采用不同的結(jié)晶方法，制得了三種索菲布韋的新晶型M、N、O，這些晶型與前述吉列德專利所保護(hù)的索菲布韋之六種晶型皆不同。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供全新的索菲布韋新晶型M、N、O的制備方法及其用途本發(fā)明不僅對其晶體結(jié)構(gòu)進(jìn)行測試，也對其性能進(jìn)行表征。

本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：

本發(fā)明中用到的藥物為索菲布韋，化學(xué)名稱為S-2-(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-氧代-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基-四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷?；?氨基)丙酸異丙酯，分子式為C₂₂H₂₉FN₃O₉P。

一種索菲布韋單晶M，其特征是：其單晶X-射線衍射圖具有如下特征，晶體屬單斜晶系，空間群為P21，晶胞參數(shù)：β＝108.96(3)°。晶胞體積晶胞內(nèi)分子數(shù)Z＝2。

另兩種索菲布韋的新晶型N與O，其粉末X-射線衍射圖譜具有特征衍射角(2θ)、晶面間距(d)和相對強度(％)。晶型N的粉末衍射特征衍射角(2θ)包括8.2，10.5，12.6，13.5，16.4，17.0，17.3，18.2,19.0，19.5，20.2，21.0，22.2，23.4，23.8,25.3,25.5,27.3和28.2±0.2度。

晶型O的粉末衍射特征衍射角包括8.6，9.2，11.8，14.2,15.1，15.6，16.0,16.5，17.1，17.5，18.1，19.8，20.1,22.2,23.5,25.8和27.0±0.2度。

索菲布韋單晶M和兩種索菲布韋的新晶型N與O的制備方法，其特征是：將索菲布韋溶于有機(jī)溶劑中，溶解溫度在30-80℃的范圍內(nèi)， 溶解后自然冷卻至室溫，加入或不加入溶析劑，冷卻析出晶體，過濾即得。

所述索菲布韋藥物的用量與有機(jī)溶劑用量的重量體積比為1g∶1～50ml。

所述的索菲布韋新晶型M、N、O的制備方法，其特征是：所述有機(jī)溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醇、異丙醇、乙腈、C1-C5短鏈羧酸的C3-C7的烷基酯(如C3-C7的烷基乙酸酯)、C3-C7的烷基氰乙酸酯、雙C3-C7的烷基碳酸酯或雙C3-C7烷基草酸酯。

所述的索菲布韋新晶型M、N、O的制備方法，其特征是：所述的溶析劑為選自水、二氯甲烷、氯仿、乙腈、正戊烷、正己烷、環(huán)己烷、雙C3-C7的烷基碳酸酯、雙C3-C7烷基草酸酯、雙C3-C7的烷基丙二酸酯、C3-C7的烷基氰乙酸酯、異丙醇、叔丁醇、四氫呋喃、甲基叔丁基醚中的一種或任意兩種以上的組合，且溶析劑與所述有機(jī)溶劑不同。

所述的溶析劑的用量與溶劑用量的體積比為0～20∶1。

索菲布韋單晶M，采用Rigaku MicroMax 002+單晶衍射儀收集衍射強度數(shù)據(jù)，CuKα輻射，共聚焦單色器，準(zhǔn)直管直徑φ＝0.30mm，晶體與CCD探測器距離d＝45mm，管壓45kv，管流0.88mA,w與k掃描方式，可觀察點為3478個，數(shù)據(jù)完整度為96.5％。

在計算機(jī)上用直接法(Shelx97)解析晶體結(jié)構(gòu)，從E圖上獲得36個非氫原子位置，使用最小二乘法修正結(jié)構(gòu)參數(shù)和判別原子種類，最終確定不對稱單位分子式為C₂₂H₂₉N₃O₉FP,分子量為529.46，計算晶體 密度1.275g/cm³。晶態(tài)下分子排列屬第一空間群，故樣品應(yīng)具有旋光活性。經(jīng)計算晶體結(jié)構(gòu)的Flack系數(shù)為0.03(3),獲得分子絕對構(gòu)型。

化合物理論粉末X衍射峰值表

本發(fā)明所述的三種索菲布韋藥物新晶型M、N、O的制備方法可以是加熱-室溫?fù)]發(fā)法，具體步驟如下：

(1)將索菲布韋和有機(jī)溶劑按一定比例混合，置于容器中攪拌下加熱；

(2)回流30-60分鐘使索菲布韋完全溶解后停止攪拌和加熱；

(3)將索菲布韋溶液過濾，濾液置于室溫下?lián)]發(fā)結(jié)晶。

釆用本發(fā)明所提供方法制備索菲布韋新晶型，進(jìn)行穩(wěn)定性研究。在加速穩(wěn)定性條件下(溫度40±20℃)放置6個月，分別于第0月、第1月、第2月、第3月、第4月、第5月、第6月進(jìn)行液相檢測，樣品在六個月后仍然保持穩(wěn)定，含量在99.6％以上。

本發(fā)明所制得的索菲布韋新晶型在治療丙肝病毒感染的過程中有非常好的應(yīng)用前景。

附圖說明

下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。

圖1是本發(fā)明單晶M分子晶胞堆積圖。

圖2是單晶M分子立體結(jié)構(gòu)投影圖。

該化合物分子骨架有1個五元呋喃糖環(huán)A(信封式)，1個六元嘧啶環(huán)B(平面式)和1個苯環(huán)C組成。計算環(huán)間最小二乘二面角為：A/B:95.9°、B/C:102.7°、A/C:18.4°。

圖3是單晶M理論粉末衍射圖譜。

具體實施方式

下面對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但不以任何形式對本發(fā)明加以限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所做的任何變換或替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實施例1：索菲布韋單晶M的制備

將1g索菲布韋溶于20mL 50℃的氯仿-異丙醇(體積比50:1)混合溶液中，攪拌溶解，然后將溶有索菲布韋的溶液冷卻至室溫，同時攪拌析晶，至不再有固體析出后過濾，以少量冷溶劑(己烷或二氯甲烷)(4℃)洗滌，送樣作單晶X衍射測定晶體結(jié)構(gòu)。將得到的索菲布韋采用HPLC檢測，含量為99.9％；采用氣相色譜檢測，殘留溶劑含量低于40ppm。

其單晶X-射線衍射圖具有如下特征，晶體屬單斜晶系，空間群為P21，晶胞參數(shù)：β＝108.96(3)°。晶胞體積晶胞內(nèi)分子數(shù)Z＝2。

本發(fā)明中用到的藥物為索菲布韋，化學(xué)名稱為S-2-(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-氧代-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基-四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸異丙酯，分子式為C₂₂H₂₉FN₃O₉P。

所述的索菲布韋單晶M，其粉末X-射線衍射圖具有特征衍射角2θ、晶面間距d和相對強度％，2θ誤差為0.2。

實施例2：索菲布韋單晶的制備

將1g索菲布韋溶于6mL 50℃的碳酸二甲酯中，攪拌之下緩緩析晶，過濾收集晶體，以少量冷溶劑(己烷或二氯甲烷)洗滌，選取晶體送樣測定單晶X衍射，確定所獲索菲布韋新晶型M的立體結(jié)構(gòu)。

其單晶X-射線衍射圖具有如下特征，晶體屬單斜晶系，空間群為P21，晶胞參數(shù)：β＝108.96(3)°。晶胞體積晶胞內(nèi)分子數(shù)Z＝2。

本發(fā)明中用到的藥物為索菲布韋，化學(xué)名稱為S-2-(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-氧代-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基-四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷?；?氨基)丙酸異丙酯，分子式為C₂₂H₂₉FN₃O₉P。

實施例3：索菲布韋單晶M的制備

將1g索菲布韋溶于50℃的10mL草酸二乙酯中，緩慢冷卻至室溫，揮發(fā)結(jié)晶。待不再有固體析出，過濾收集晶體，以少量冷溶劑(己烷或二氯甲烷)洗滌，隨后送樣測定單晶X衍射。

其單晶X-射線衍射圖具有如下特征，晶體屬單斜晶系，空間群為P21，晶胞參數(shù)：β＝108.96(3)o。晶胞體積晶胞內(nèi)分子數(shù)Z＝2。

本發(fā)明中用到的藥物為索菲布韋，化學(xué)名稱為S-2-(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-氧代-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基-四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷?；?氨基)丙酸異丙酯，分子式為C₂₂H₂₉FN₃O₉P。

實施例4：索菲布韋晶型N的制備：

將1克索菲布韋溶解在15毫升的乙酸異丙酯和四氫呋喃的混合液中(比例為1:1),過濾除去不溶物,濃縮，加入10毫升的乙酸異丙酯，繼續(xù)濃縮至3毫升，加入4毫升乙酸異丙酯，升溫至75度，攪拌至溶液變混，接著冷卻至15度，放置過夜，在該溫度下緩慢加入2毫升正戊烷，放置3小時，過濾，粘稠的濾餅用2毫升乙酸異丙酯 洗滌，接著用1毫升正戊烷洗滌，在40度的恒溫干燥箱中干燥得到晶型N。

其粉末X-射線衍射圖譜具有特征衍射角(2θ)、晶面間距(d)和相對強度(％)。粉末衍射特征衍射角(2θ)包括8.2，10.5，12.6，13.5，16.4，17.0，17.3，18.2,19.0，19.5，20.2，21.0，22.2，23.4，23.8,25.3,25.5,27.3和28.2±0.2度。

實施例5：索菲布韋晶型O的制備：

索菲布韋1克溶于20毫升的乙酸異丙酯中，加熱到70度，過濾，濾液冷卻到40度，加入晶型6的晶種，在20度放置至晶型出現(xiàn)，過濾，得到晶型O。

其粉末X-射線衍射圖譜具有特征衍射角(2θ)、晶面間距(d)和相對強度(％)。晶型O的粉末衍射特征衍射角包括8.6，9.2，11.8，14.2,15.1，15.6，16.0,16.5，17.1，17.5，18.1，19.8，20.1,22.2,23.5,25.8和27.0±0.2度。

另外，晶型N和晶型O可以用他們的晶種來大量的制備，溶液選用乙酸異丙酯或乙酸異丙酯和正戊烷的混合液。