本發(fā)明涉及生物醫(yī)學領(lǐng)域，具體的，本發(fā)明涉及一種基因突變序列、基因突變序列的用途、一種試劑盒、試劑盒的用途和一種鑒定膀胱癌干細胞的方法。
背景技術(shù)：
：世界范圍內(nèi)，膀胱癌每年有430,000個病例新增和150,300個死亡病例(Chavanetal.,2014)。膀胱癌干細胞最早在2008年被分選鑒定(Ningetal.,2009；Sheetal.,2008)，當初所采用的方法是側(cè)群細胞分選法(Side-Population,SP)。隨著研究的深入，科學家們陸續(xù)使用CD44v6(YangandChang,2008)，67LR(Heetal.,2009)，CD44(Chanetal.,2009)，ALDH1A1(Suetal.,2010)和CD90/CK14(Volkmeretal.,2012)等分離并鑒定了膀胱癌干細胞。膀胱癌干細胞具有干性維持能力和腫瘤起始的能力，負責膀胱癌的復(fù)發(fā)和耐藥(Hoetal.,2012；Tranetal.,2010)。根據(jù)先前的報道，人的膀胱癌干細胞可能起源于正常膀胱粘膜中表達CK5和CK17的基底層細胞(Heetal.,2009)。隨后連續(xù)兩篇文章利用BBN誘導的方法獲得了小鼠膀胱癌模型，并發(fā)現(xiàn)了小鼠原位膀胱癌和浸潤型膀胱癌起源于正常膀胱粘膜中表達CK5和分泌蛋白shh的基底層細胞(Shinetal.,2014；VanBataviaetal.,2014)；另外，VanBatavia等人還證明了乳頭狀膀胱癌起源于正常膀胱粘膜中表達CK2的中間層細胞，而鱗狀細胞膀胱癌的祖先是表達CK5的基底層干細胞(VanBataviaetal.,2014)。技術(shù)實現(xiàn)要素：依據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與表1中的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述突變的所述基因序列。所稱的基因突變序列可以為一條序列，也可以是多條序列的組合，例如，所稱的基因突變序列為存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列，再例如，所稱的基因突變序列包括存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列和存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列。表1基因核酸突變(基因組HG19)ARID1Achr1:27093001G>AATMchr11:108186754C>ACREBBPchr16:3790519C>AERCC2chr19:45867687T>CETS1chr11:128333418A>GFAT4chr4:126329890T>CGPRC5Achr12:13061979T>GLRP2chr2:170096229G>AMAP3K6chr1:27687466G>TMKL1chr22:40807506G>AMLL2chr12:49420183C>GPAWRchr12:79990409G>TPITX2chr4:111542524C>GRNF213chr17:78293189A>TSIN3Achr15:75664469C>TSTAG2chrX:123220567C>GTP53chr17:7577100T>CUSP24chr1:55638075G>AZBTB17chr1:16270382G>T表1所示的19個基因?qū)?yīng)的19個突變是未報道過的單核苷酸突變，且是經(jīng)發(fā)明人鑒定過的膀胱癌干細胞特有的。表1中的任意一個或者多個都能夠用于判定細胞是否是膀胱癌干細胞，待測細胞中的核酸序列上存在表1中的任意一個基因突變，能夠判定該細胞為膀胱癌干細胞。表1所示的19個膀胱癌特有突變，是發(fā)明人利用單細胞測序方法，對來自三個膀胱癌患者的四類59個單細胞進行了單細胞測序、數(shù)據(jù)分析獲得的，并且經(jīng)過其它單細胞樣本的驗證。來自膀胱組織或者膀胱癌組織的細胞，一般可能為分化的膀胱細胞、分化的膀胱癌細胞、膀胱干細胞或者膀胱癌干細胞。需要說明的是，表1中的SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代與表1一樣的SNP位點或SNP組合，都仍舊是本發(fā)明公開的表1中的SNP，屬于本發(fā)明范圍，比如表1中MKL1基因序列上的基因組序列上的突變chr22:40807506G>A，與其cDNA上的c.C2684T，屬于同一突變，都能致使發(fā)生多肽突變p.S895L。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞中存在表1中的任意一個突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，而不能推定膀胱癌干細胞一定具有表1中的任意一個或者表1中的至少一個突變。依據(jù)本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與ARID1A基因序列相比， 所述基因突變序列包括存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列還包括其它序列。存在chr1:27093001G>A突變的ARID1A基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其ARID1A基因序列上是否存在chr1:27093001G>A突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組ARID1A基因序列上的chr1:27093001G>突變，與其cDNA上的c.G2932A突變，為同一突變，都能致使發(fā)生多肽突變p.A978T。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第三方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與ATM基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列還包括其它序列。存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其ARID1A基因序列上是否存在chr1:27093001G>A突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組ATM基因序列上的chr11:108186754C>A突變，與其cDNA上的c.C6112A突變，指代同一突變，都能致使發(fā)生多肽突變p.H2038N。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第四方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與CREBBP基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr16:3790519C>A的CREBBP基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr16:3790519C>A的CREBBP基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr16:3790519C>A的CREBBP基因序列還包括其它序列。存在chr16:3790519C>A的CREBBP基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其CREBBP基因序列上是否存在chr16:3790519C>A突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組CREBBP基因序列上的chr16:3790519C>A突變，與其cDNA上的c.G3900T突變，指代同一突變，都能致使發(fā)生多肽突變p.L1300F。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第五方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與ERCC2基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列還包括其它序列。存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其ERCC2基因序列上是否存在chr19:45867687T>C突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第六方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與ETS1基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列還包括其它序列。存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其ETS1基因序列上是否存在chr11:128333418A>G突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組ETS1基因序列上的chr11:128333418A>G突變，與其cDNA上的c.T448C突變，指代同一非同義突變，都能致使發(fā)生多肽變異p.S150P。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第七方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與FAT4基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列還包括其它序列。存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其FAT4基因序列上是否存在chr4:126329890T>C突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第八方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與GPRC5A基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列還包括其它序列。存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其GPRC5A基因序列上是否存在chr12:13061979T>G突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組GPRC5A基因序列上的chr12:13061979T>G突變，與其cDNA上的c.T796G突變，指代同一非同義突變，都能致使發(fā)生多肽變異p.W266G。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第九方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與LRP2基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列還包括其它序列。存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其LRP2基因序列上是否存在chr2:170096229G>A突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組LRP2基因序列上的chr2:170096229G>A突變，與其cDNA上的c.C4102T突變，指代同一非同義突變，都能致使發(fā)生多肽變異p.P1368S。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌 干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第十方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與MAP3K6基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列還包括其它序列。存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其MAP3K6基因序列上是否存在chr1:27687466G>T突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第十一方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與MKL1基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列還包括其它序列。存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列是新發(fā)現(xiàn)的、未見報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其MKL1基因序列上是否存在chr22:40807506G>A突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組MKL1基因序列上的chr22:40807506G>A突變，與其cDNA上的c.C2684T突變，指代同一非同義突變，都能致使發(fā)生多肽變異p.S895L。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷 該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第十二方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與MLL2基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列還包括其它序列。存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列是新發(fā)現(xiàn)的、未見報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其MLL2基因序列上是否存在chr12:49420183C>G突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組MLL2基因序列上的chr12:49420183C>G突變，與其cDNA上的c.G15566C突變，指代同一非同義突變，都能致使發(fā)生多肽變異p.G5189A。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第十三方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與PAWR基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列還包括其它序列。存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其PAWR基因序列上是否存在chr12:79990409G>T突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組PAWR基因序列上的chr12:79990409G>T突變，與其cDNA上的c.C713A突變，指代同一非同義突變，都能致 使發(fā)生多肽變異p.S238X。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第十四方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與PITX2基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列還包括其它序列。存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其PITX2基因序列上是否存在chr4:111542524C>G突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組PITX2基因序列上的chr4:111542524C>G突變，與其cDNA上的c.G207C突變，指代同一非同義突變，都能致使發(fā)生多肽變異p.E69D。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第十五方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與RNF213基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列還包括其它序列。存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列是新發(fā)現(xiàn)的、未見報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其RNF213基因序列上是否存在chr17:78293189A>T突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍。還需要說明 的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第十六方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與SIN3A基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列還包括其它序列。存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列是新發(fā)現(xiàn)的、未見報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其SIN3A基因序列上是否存在chr15:75664469C>T突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組SIN3A基因序列上的chr15:75664469C>T突變，與其cDNA上的c.G2052A突變，指代同一非同義突變，都能致使發(fā)生多肽變異p.L684L。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第十七方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與STAG2基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chrX:123220567C>G的STAG2基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chrX:123220567C>G的STAG2基因序列還包括其它序列。存在chrX:123220567C>G的STAG2基因序列是新發(fā)現(xiàn)的、未見報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其STAG2基因序列上是否存在chrX:123220567C>G突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍。還需要說明 的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第十八方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與TP53基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列還包括其它序列。存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其TP53基因序列上是否存在chr17:7577100T>C突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組TP53基因序列上的chr17:7577100T>C突變，與其cDNA上的c.A442G突變，指代同一非同義突變，都能致使發(fā)生多肽變異p.R148G。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第十九方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與USP24基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列還包括其它序列。存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其USP24基因序列上是否存在chr1:55638075G>A突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱 的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第二十方面，本發(fā)明提供一種基因突變序列，與ZBTB17基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列，也可以為序列組合，即除了存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列還包括其它序列。存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其ZBTB17基因序列上是否存在chr1:16270382G>T突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。依據(jù)本發(fā)明的第二十方面，本發(fā)明提供上述任一方面的基因突變序列在鑒定膀胱癌干細胞中的用途。表1中的19個基因?qū)?yīng)的19個突變是未報道過的單核苷酸突變，且是經(jīng)發(fā)明人鑒定過的膀胱癌干細胞特有的。表1中的任意一個或者多個都能夠用于判定細胞是否是膀胱癌干細胞，待測細胞中的核酸序列上只要存在表1中的任意一個基因突變，就能夠判定該細胞為膀胱癌干細胞。表1所示的19個膀胱癌特有突變，是發(fā)明人利用單細胞測序方法，對來自三個膀胱癌患者的四類59個單細胞進行了單細胞測序、數(shù)據(jù)分析比較獲得的，并且經(jīng)過其它單細胞樣本的驗證。需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞中存在表1中的任意一個突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，而不能推定膀胱癌干細胞一定具有表1中的任意一個或者表1中的至少一個突變。依據(jù)本發(fā)明的第二十一方面，本發(fā)明提供一種試劑盒，其包括能夠檢測出上述本發(fā)明任一方面的基因突變序列的試劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，檢測SNP突變，可以利用SNP突變所在的位置的參考序列設(shè)計引物，擴增出該位置的序列，對該序列進行測序進而確定 該位置的堿基；也可以利用SNP突變所在的位置的參考序列設(shè)計擴增引物和延伸引物，利用質(zhì)譜檢測該位置的堿基。所以，所稱的試劑包括但不限于引物、擴增體系、測序相關(guān)試劑和/或質(zhì)譜檢測試劑。該試劑盒能夠用來檢測膀胱癌干細胞。利用該試劑盒檢測一個細胞是否是膀胱癌干細胞時，通過檢測該細胞是否存在試劑盒能檢出的任一基因突變序列來判定該細胞是否為膀胱癌干細胞。較佳的，待測細胞來自膀胱組織或者膀胱癌組織，一般的，來自膀胱組織的細胞可能為分化的膀胱細胞、分化的膀胱癌細胞、膀胱干細胞和膀胱癌干細胞。依據(jù)本發(fā)明的第二十二方面，本發(fā)明提供一種鑒定膀胱癌干細胞的方法，該方法包括：檢測待測細胞的基因組中是否存在表1中的任意一個突變，若存在，則判定所述待測細胞為膀胱癌干細胞。較佳的，待測細胞來自膀胱組織包括膀胱癌組織，一般的，來自膀胱/膀胱癌組織的細胞可能為分化的膀胱細胞(differentiatednormalbladdercells,DNBCs)、分化的膀胱癌細胞(differentiatedbladdercancercells,DBCCs)、膀胱干細胞(normalbladderstemcells,NBSCs)和膀胱癌干細胞(bladdercancerstemcells,BCSCs)。一個細胞中存在表1中的至少一個突變是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞中存在表1中的任意一個突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定具有表1中的任意一個或者表1中的至少一個突變。附圖說明本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點從結(jié)合下面附圖對實施方式的描述中將變得明顯和容易理解，其中：圖1是本發(fā)明的一個實施例中的正常膀胱細胞和膀胱癌細胞的流式分選結(jié)果示意圖；圖1A顯示正常膀胱細胞和膀胱癌細胞的流式分選策略；圖1B顯示BCS2、BCS3和BCS5的流式分選結(jié)果。圖2是本發(fā)明的一個實施例中的從BCS2、BCS3和BCS5中獲得的59個單細胞DNA樣品的電泳檢測結(jié)果。圖3是本發(fā)明的一個實施例中的單細胞測序數(shù)據(jù)的評估結(jié)果圖；圖3A顯示從BCS2、BCS3和BCS5中分離的單細胞的平均測序深度，圖3B顯示59個單細胞的測序覆蓋度。圖4是本發(fā)明的一個實施例中的BCS2、BCS3和BCS5中膀胱癌干細胞和分化的膀胱癌腫瘤細胞中特有突變和共有突變的維恩圖。圖5是本發(fā)明的一個實施例中的膀胱癌干細胞特有的19個基因突變的頻率分析結(jié)果示意圖。具體實施方式下面詳細描述本發(fā)明的實施例，所述實施例的示例在附圖中示出，其中，自始至終相同或類似的標號表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過參考附圖描述的實施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。需要說明的，本文中所使用的術(shù)語“第一”、“第二”或者“第一部分”等僅為方便描述，不能理解為指示或暗示相對重要性，也不能理解為之間有先后順序關(guān)系。在本發(fā)明的描述中，除非另有說明，“多個”的含義是兩個或兩個以上。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與表1中的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述突變的所述基因序列。所稱的基因突變序列可以為其上存在表1中的一個突變對應(yīng)的基因序列，也可以是表1中任意多個突變或者全部19個突變對應(yīng)的多條基因序列的組合。例如，所稱的基因突變序列為存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列、為存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列、為存在chr16:3790519C>A的CREBBP基因序列、為存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列、為存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列、為存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列、為存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列、為存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列、為存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列、為存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列、為存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列、為存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列、為存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列、為存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列、為存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列、為存在chrX:123220567C>G的STAG2基因序列、為存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列、為存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列或者為存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列。所稱的基因突變序列也可以為上述任意兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個、十八個或者全部十九個帶相應(yīng)突變的基因序列的組合。例如，所稱的基因突變序列為存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列和存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列的組合，或者所稱的基因突變序列為存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列和存在其它任意一個或多個突變的基因序列的組合。再例如，所稱的基因突變序列包括存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列和存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列，任選的，還包括一個或多個其它帶有相應(yīng)突變的基因序列。表1所示的19個基因?qū)?yīng)的19個突變是發(fā)明人新發(fā)現(xiàn)的、未見報道過的單核苷酸突 變，且是經(jīng)發(fā)明人鑒定過的膀胱癌干細胞特有的。表1中的任意一個或者多個都能夠用于判定細胞是否是膀胱癌干細胞，待測細胞中的核酸序列上存在表1中的任意一個基因突變，能夠判定該細胞為膀胱癌干細胞。表1所示的19個膀胱癌特有突變，是發(fā)明人利用單細胞測序方法，對來自三個膀胱癌患者的四類59個單細胞進行了單細胞測序、數(shù)據(jù)分析獲得的，并且經(jīng)過其它單細胞樣本的驗證。來自膀胱組織或者膀胱癌組織的細胞，一般可能為分化的膀胱細胞、分化的膀胱癌細胞、膀胱干細胞或者膀胱癌干細胞。需要說明的是，表1中的SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代與表1一樣的SNP位點或SNP組合，都仍舊是本發(fā)明公開的表1中的SNP，屬于本發(fā)明范圍，比如表1中MKL1基因序列上的基因組序列上的突變chr22:40807506G>A，與其cDNA上的c.C2684T，屬于同一突變，都能致使發(fā)生多肽突變p.S895L。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞中存在表1中的任意一個突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，而不能推定膀胱癌干細胞一定具有表1中的任意一個或者表1中的至少一個突變。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與ARID1A基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列。存在chr1:27093001G>A突變的ARID1A基因序列是新發(fā)現(xiàn)的、未見報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其ARID1A基因序列上是否存在chr1:27093001G>A突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組ARID1A基因序列上的chr1:27093001G>突變，與其cDNA上的c.G2932A突變，為同一突變，都能致使發(fā)生多肽突變p.A978T。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列， 也可以為序列組合，即所稱基因突變序列除了包括存在chr1:27093001G>A的ARID1A基因序列，還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chr1:27093001G>A以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列還包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr1:27093001G>A以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與ATM基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列。存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其ARID1A基因序列上是否存在chr1:27093001G>A突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組ATM基因序列上的chr11:108186754C>A突變，與其cDNA上的c.C6112A突變，指代同一突變，都能致使發(fā)生多肽突變p.H2038N。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列，也可以為序列組合，即所稱的基因突變序列除了包括存在chr11:108186754C>A的ATM基因序列還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chr11:108186754C>A以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變對應(yīng)的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr11:108186754C>A以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與CREBBP基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr16:3790519C>A的CREBBP基因序列。存在chr16:3790519C>A的CREBBP基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其CREBBP基因序列上是否存在chr16:3790519C>A突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組CREBBP基因序列上的chr16:3790519C>A突變，與其cDNA上的c.G3900T突變，指代同一突變，都能致使發(fā)生多肽突變p.L1300F。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr16:3790519C>A的CREBBP基因序列，也可以為序列組合，即所稱的基因突變序列除了包括存在chr16:3790519C>的CREBBP基因序列還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chr16:3790519C>A以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr16:3790519C>A以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與ERCC2基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列。存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其ERCC2基因序列上是否存在chr19:45867687T>C突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7 位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列，也可以為序列組合，即所稱基因突變序列除了包括存在chr19:45867687T>C的ERCC2基因序列，還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chr19:45867687T>C以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr19:45867687T>C以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與ETS1基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列。存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其ETS1基因序列上是否存在chr11:128333418A>G突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組ETS1基因序列上的chr11:128333418A>G突變，與其cDNA上的c.T448C突變，指代同一非同義突變，都能致使發(fā)生多肽變異p.S150P。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列，也可以為序列組合，即所稱基因突變序列除了包括存在chr11:128333418A>G的ETS1基因序列，還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、 九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chr11:128333418A>G以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr11:128333418A>G以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與FAT4基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列。存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其FAT4基因序列上是否存在chr4:126329890T>C突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列，也可以為序列組合，即該基因突變序列除了包括存在chr4:126329890T>C的FAT4基因序列，還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chr4:126329890T>C以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr4:126329890T>C以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與GPRC5A基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列。存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過 檢測其GPRC5A基因序列上是否存在chr12:13061979T>G突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組GPRC5A基因序列上的chr12:13061979T>G突變，與其cDNA上的c.T796G突變，指代同一非同義突變，都能致使發(fā)生多肽變異p.W266G。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列，也可以為序列組合，即該基因突變序列除了包括存在chr12:13061979T>G的GPRC5A基因序列，還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chr12:13061979T>G以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr12:13061979T>G以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與LRP2基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列。存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其LRP2基因序列上是否存在chr2:170096229G>A突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組LRP2基因序列上的chr2:170096229G>A突變，與其cDNA上的c.C4102T突變，指代同一非同義突變，都能致使發(fā)生多肽變異p.P1368S。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌 干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列，也可以為序列組合，即所稱基因突變序列除了存在chr2:170096229G>A的LRP2基因序列，還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chr2:170096229G>A以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr2:170096229G>A以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與MAP3K6基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列。存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其MAP3K6基因序列上是否存在chr1:27687466G>T突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列，也可以為序列組合，即該基因突變序列除了存在chr1:27687466G>T的MAP3K6基因序列，還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chr1:27687466G>T以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr1:27687466G>T以外的任意多個 突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與MKL1基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列。存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其MKL1基因序列上是否存在chr22:40807506G>A突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組MKL1基因序列上的chr22:40807506G>A突變，與其cDNA上的c.C2684T突變，指代同一非同義突變，都能致使發(fā)生多肽變異p.S895L。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列，也可以為序列組合，即該基因突變序列除了包括存在chr22:40807506G>A的MKL1基因序列，還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，30.權(quán)利要求29的基因突變序列，其特征在于，與表1中的chr22:40807506G>A以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr22:40807506G>A以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與MLL2基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列。存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其MLL2基因序列上是否存在chr12:49420183C>G突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP 位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組MLL2基因序列上的chr12:49420183C>G突變，與其cDNA上的c.G15566C突變，指代同一非同義突變，都能致使發(fā)生多肽變異p.G5189A。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列，也可以為序列組合，即所稱基因突變序列除了包括存在chr12:49420183C>G的MLL2基因序列，還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chr12:49420183C>G以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr12:49420183C>G以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與PAWR基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列。存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其PAWR基因序列上是否存在chr12:79990409G>T突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組PAWR基因序列上的chr12:79990409G>T突變，與其cDNA上的c.C713A突變，指代同一非同義突變，都能致使發(fā)生多肽變異p.S238X。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列，也 可以為序列組合，即除了包括存在chr12:79990409G>T的PAWR基因序列，該基因突變序列還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chr12:79990409G>T以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr12:79990409G>T以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與PITX2基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列。存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其PITX2基因序列上是否存在chr4:111542524C>G突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組PITX2基因序列上的chr4:111542524C>G突變，與其cDNA上的c.G207C突變，指代同一非同義突變，都能致使發(fā)生多肽變異p.E69D。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列，也可以為序列組合，即包括除了存在chr4:111542524C>G的PITX2基因序列，該基因突變序列還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chr4:111542524C>G以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr4:111542524C>G以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與RNF213基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列。存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列是新發(fā)現(xiàn)的、未見報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其RNF213基因序列上是否存在chr17:78293189A>T突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列，也可以為序列組合，即除了包括存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列，該基因突變序列還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chr17:78293189A>T以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr17:78293189A>T以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與SIN3A基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列。存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其SIN3A基因序列上是否存在chr15:75664469C>T突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位 點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組SIN3A基因序列上的chr15:75664469C>T突變，與其cDNA上的c.G2052A突變，指代同一非同義突變，都能致使發(fā)生多肽變異p.L684L。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列，也可以為序列組合，即除了包括存在chr15:75664469C>T的SIN3A基因序列，該基因突變序列還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chr15:75664469C>T以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr15:75664469C>T以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與STAG2基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chrX:123220567C>G的STAG2基因序列。存在chrX:123220567C>G的STAG2基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其STAG2基因序列上是否存在chrX:123220567C>G突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr17:78293189A>T的RNF213基因序列，也可以為序列組合，即除了包括存在chrX:123220567C>G的STAG2基因序列，該基因突變序列還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突 變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chrX:123220567C>G以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chrX:123220567C>G以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與TP53基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列。存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其TP53基因序列上是否存在chr17:7577100T>C突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍，基因組TP53基因序列上的chr17:7577100T>C突變，與其cDNA上的c.A442G突變，指代同一非同義突變，都能致使發(fā)生多肽變異p.R148G。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列，也可以為序列組合，即除了包括存在chr17:7577100T>C的TP53基因序列，該基因突變序列還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chr17:7577100T>C以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr17:7577100T>C以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與USP24基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列。存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其 USP24基因序列上是否存在chr1:55638075G>A突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列，也可以為序列組合，即除了包括存在chr1:55638075G>A的USP24基因序列，該基因突變序列還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chr1:55638075G>A以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr1:55638075G>A以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例公開的基因突變序列，與ZBTB17基因序列相比，所述基因突變序列包括存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列。存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列是新發(fā)現(xiàn)的未報道過的突變序列，該突變序列是膀胱癌干細胞特有的，可以用來鑒定一個細胞是否為膀胱癌干細胞。特別是對來自膀胱/膀胱癌組織的細胞，通過檢測其ZBTB17基因序列上是否存在chr1:16270382G>T突變，能準確判斷該細胞是否為膀胱癌干細胞。需要說明的是，該SNP突變的表示方式是根據(jù)HGVS命名法標注該位點在參考基因組DNA(gDNA，HG19版本)上的位置來顯示的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠知道，一個SNP位點還可以有其它表示方式，例如以GenBankSNP數(shù)據(jù)庫的命名方法——以rs加7位阿拉伯數(shù)字來表示一個SNP，例如以該SNP在參考cDNA上的位置來標注指代一樣的SNP位點或SNP組合，仍屬于本發(fā)明公開的范圍。還需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞的核酸序列上存在該突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定存在該突變序列。該基因突變序列可以是一條序列——存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列，也可以為序列組合，即除了包括存在chr1:16270382G>T的ZBTB17基因序列，該基因突變序列還包括帶有表1中其它的任意一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個或者十八個突變對應(yīng)的一條或多條基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，與表1中的chr1:16270382G>T以外的任意一個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括存在所述任意一個突變的所述基因序列。在本發(fā)明的一些實施例中，分別與表1中的chr1:16270382G>T以外的任意多個突變所在的基因序列相比，所述基因突變序列包括分別存在所述多個突變的所述基因序列。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例，提供了上述任一實施例中的基因突變序列在鑒定膀胱癌干細胞中的用途。表1中的19個基因?qū)?yīng)的19個突變是發(fā)明人新發(fā)現(xiàn)的、未見報道過的單核苷酸突變，且是經(jīng)發(fā)明人鑒定過的膀胱癌干細胞特有的。表1中的任意一個或者多個都能夠用于判定細胞是否是膀胱癌干細胞，待測細胞中的核酸序列上只要存在表1中的任意一個基因突變，就能夠判定該細胞為膀胱癌干細胞。表1所示的19個膀胱癌特有突變，是發(fā)明人利用單細胞測序方法，對來自三個膀胱癌患者的四類59個單細胞進行了單細胞測序、數(shù)據(jù)分析比較獲得的，并且經(jīng)過其它單細胞樣本的驗證。需要說明的是，一個細胞中存在所稱的基因突變序列是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞中存在表1中的任意一個突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，而不能推定膀胱癌干細胞一定具有表1中的任意一個或者表1中的至少一個突變。因為表1中的19個突變是基于比較這四類細胞，排除其它三類細胞中存在的突變，而確定下來的、只發(fā)現(xiàn)存在膀胱癌干細胞的，即膀胱癌干細胞特有，所以較佳的，待測細胞來自膀胱組織或者膀胱癌組織，一般的，膀胱/膀胱癌組織的細胞一般包括四類：分化的膀胱細胞、分化的膀胱癌細胞、膀胱干細胞和膀胱癌干細胞，。依據(jù)本發(fā)明的一些實施例，提供一種包括能夠檢測出上述本發(fā)明任一實施例的基因突變序列的試劑的試劑盒。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，檢測SNP突變，可以利用SNP突變所在的位置的參考序列設(shè)計引物，擴增出該位置的序列，對該序列進行測序進而確定該位置的堿基；也可以利用SNP突變所在的位置的參考序列設(shè)計擴增引物和延伸引物，利用質(zhì)譜檢測該位置的堿基。所以，所稱的試劑包括但不限于引物、擴增體系、測序相關(guān)試劑和/或質(zhì)譜檢測試劑。該試劑盒能夠用來檢測膀胱癌干細胞。利用該試劑盒檢測一個細胞是否是膀胱癌干細胞時，通過檢測該細胞是否存在試劑盒能檢出的任一基因突變序列來判定該細胞是否為膀胱癌干細胞。因為表1中的19個突變是基于比較膀胱/膀胱癌組織中的四類細 胞，排除大量的其它三類細胞中存在的突變，而確定下來的、只可能存在于膀胱癌干細胞的，所以較佳的，待測細胞來自膀胱組織和/或膀胱癌組織，一般的，來自膀胱/膀胱癌組織的細胞可能為分化的膀胱細胞、分化的膀胱癌細胞、膀胱干細胞和膀胱癌干細胞。依據(jù)本發(fā)明的一個實施例公開的鑒定膀胱癌干細胞的方法，該方法包括：檢測待測細胞的基因組中是否存在表1中的任意一個突變，若存在，則判定所述待測細胞為膀胱癌干細胞。因為表1中的19個突變是基于比較膀胱/膀胱癌組織中的四類細胞，排除大量的其它三類細胞中存在的突變，而確定下來的、只可能存在于膀胱癌干細胞的，所以較佳的，待測細胞來自膀胱組織，一般的，來自膀胱組織的細胞可能為分化的膀胱細胞、分化的膀胱癌細胞、膀胱干細胞和膀胱癌干細胞。需要說明的是，一個細胞中存在表1中的至少一個突變是判斷該細胞是膀胱癌干細胞的必要非充分條件，即待測細胞中存在表1中的任意一個突變序列，則判定該細胞為膀胱癌干細胞，反之，不能推定膀胱癌干細胞一定具有表1中的任意一個或者表1中的至少一個突變。以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的基因突變序列和檢測膀胱癌干細胞的方法進行詳細的描述。除另有交待，以下實施例中涉及的未特別交待的試劑、序列(接頭、標簽和引物)、軟件及儀器，都是常規(guī)市售產(chǎn)品或者開源的。實施例一1.組織樣本處理獲得單細胞樣本膀胱組織或者膀胱癌組織樣本獲自深圳市第二人民醫(yī)院。原代的膀胱癌組織和正常的膀胱組織取自膀胱全切的膀胱癌患者，獲得新鮮的組織經(jīng)過無菌剪碎和膠原酶消化，過濾獲得單細胞懸液。利用CD31、CD45、CD44和Pan-CK抗體，對三例膀胱癌患者的膀胱癌組織和正常的膀胱組織進行染色標記。然后通過流式分選的方法，分選出正常膀胱干細胞(normalbladderstemcells,NBSCs,pan-CK+CD44+)，分化的膀胱細胞(differentiatednormalbladdercells,DNBCs,pan-CK+CD44-)，膀胱癌干細胞(bladdercancerstemcells,BCSCs,CD31-CD45-CD44+)和分化的膀胱癌細胞(differentiatedbladdercancercells,DBCCs,CD31-CD45-CD44-)四類不同的細胞，圖1顯示正常膀胱細胞和膀胱癌細胞的流式分選結(jié)果。圖1A顯示正常膀胱細胞和膀胱癌細胞的流式分選策略：正常膀胱干細胞(normalbladderstemcells,NBSCs,pan-CK+CD44+)，分化的膀胱細胞(differentiatednormalbladdercells,DNBCs,pan-CK+CD44-)，膀胱癌干細胞(bladdercancerstemcells,BCSCs,CD31-CD45-CD44+)和分化的膀胱癌細胞(differentiatedbladdercancercells,DBCCs, CD31-CD45-CD44-)。CD31為內(nèi)皮細胞標志物，CD45為造血譜系細胞標志物，CD44為干細胞標志物，pan-CK為上皮細胞標志物；圖1B顯示膀胱癌全切的患者BCS2,BCS3和BCS5的流式分選結(jié)果。2.單細胞的基因組提取和鑒定為了在單細胞水平獲得不同類型細胞的基因背景和它們之間的進化關(guān)系，我們對分選的細胞進行了單細胞化，并通過多重置換擴增(MDA:multipledisplacementamplification)的方法對單細胞的基因組進行了DNA的提取和擴增。經(jīng)過PCR鑒定，共獲得了59個合格的單細胞DNA樣品，如表2和圖2所示。表2顯示原代膀胱癌BCS2,BCS3和BCS5中獲得的59個單細胞DNA樣品。圖2顯示原代膀胱癌BCS2,BCS3和BCS5中獲得的59個單細胞DNA樣品的電泳檢測結(jié)果，這些樣本的DNA樣品均通過了管家基因的質(zhì)量檢測，合格的DNA樣品需要擴增出至少6個管家基因。表23.單細胞DNA樣品的外顯子測序?qū)ι鲜?9個合格的單細胞DNA樣品，進行了建庫和外顯子測序。在外顯子區(qū)域的的平均測序深度有43×，平均覆蓋度有95.21％，如圖3所示。圖3顯示單細胞測序數(shù)據(jù)的評估結(jié)果，圖3A顯示原代膀胱癌BCS2,BCS3和BCS5中分離的單細胞的平均測序深度(Depth，×)，圖3B顯示59個單細胞的測序覆蓋度(Coverage，％)。4.膀胱癌單細胞測序的突變分析首先，對測序的數(shù)據(jù)進行生物信息學分析(Houetal.,2012；Xuetal.,2012)。在獲得了可靠的單個核苷酸的變異數(shù)據(jù)庫后，保留了那些在正常細胞中相同基因型、并且在兩個以上腫瘤細胞中相同的突變。如此，在三個樣本中分別獲得了757、499和166這樣的個體突變。過濾掉上述突變位點中與單個核苷酸多態(tài)性數(shù)據(jù)庫(TheSingleNucleotidePolymorphismdatabase,dbSNP)相同的位點以及同義突變的位點，在三個樣本中分別篩選到147、253和6個非同義突變的基因，在所有的突變中，隨機挑選了200基因做技術(shù)驗證，通過大量的Sanger測序驗證，測序的準確率是97.22％(1188/1222)。然后，分析膀胱干細胞和分化膀胱腫瘤細胞相同的突變和互斥的突變基因，結(jié)果如圖4所示。圖4的維恩圖同時也能說明膀胱癌干細胞中基因突變的數(shù)量更多。進一步分析發(fā)現(xiàn)，來自BCS2和BCS3的膀胱癌干細胞共有的遺傳突變基因包括BRF1,ETS1,LTBP3和USH2A；BCS2和BCS5的膀胱癌干細胞共有MUC2和RGS9BP基因突變；來自BCS2和BCS5的分化膀胱腫瘤細胞共有的突變基因是LAMA5。然而，我們并沒有發(fā)現(xiàn)三例不同膀胱癌患者的膀胱癌干細胞和分化膀胱腫瘤細胞共有的遺傳突變，這可能是腫瘤的異質(zhì)性和病理分期分級的不同所導致。為了找到那些能夠決定干細胞形成和重編程的關(guān)鍵基因突變，我們關(guān)注了那些在膀胱癌干細胞中的特有突變，尤其是那些具有轉(zhuǎn)錄調(diào)控，染色質(zhì)重塑調(diào)節(jié)和細胞自我更新/細胞發(fā)育調(diào)節(jié)的關(guān)鍵基因。從滿足以上功能的基因中，驗證篩選到19個膀胱癌干細胞特有突變，如表1所示。19個膀胱癌特有突變所在的基因為：CREBBP,ETS1,GPRC5A,MKL1,MLL2,PAWR,PITX2,STAG2,RNF213,USP24,ARID1A,ATM,ERCC2,FAT4,LRP2,SIN3A,TP53,MAP3K6和ZBTB17。對以上19個膀胱癌干細胞特有的突變基因進行了突變頻率分析，突變頻率小于50％的為MAP3K6，RNF213，USP24和ZBTB17四個基因，余下15個突變基因的特有突變的突變頻率不小于50％，如圖5所示。圖5顯示膀胱癌干細胞特有19個基因突變的頻率分析，19個基因按照字母表的順序在橫坐標依次排開，縱坐標顯示每個基因的體突變頻率，圓的大小代表發(fā)生基因突變的細胞數(shù)目的相對多寡。實施例二為了驗證上述發(fā)現(xiàn)確定的表1中的19個突變基因可以用于鑒定區(qū)分出膀胱癌干細胞，發(fā)明人收集了另外45例膀胱癌組織樣本和100例正常膀胱組織樣本，按照實施例一的方法分離鑒定得249個膀胱癌干細胞、782個正常膀胱干細胞、750個分化的正常膀胱細胞和278個分化的膀胱癌細胞單細胞樣本。檢測各類細胞基因組存在上述表1所列的19個突變基因的情況，統(tǒng)計結(jié)果顯示：782個正常膀胱干細胞中有1個細胞的基因組檢測存在表1中的突變FAT4基因chr4:126329890T>C，750個分化的正常膀胱細胞的基因組均為被檢測到19個突變基因中的任何一個，278個分化的膀胱癌細胞中有兩個細胞的基因組各存在表1中的一個不同突變基因，而249個膀胱癌干細胞中有206個的基因組被檢測到存在表1中的1個或多個突變基因。實施例三為了進一步驗證上述發(fā)現(xiàn)確定的19個突變基因中的ARID1A，GPRC5A和MLL2突變基因可以用來檢測鑒定膀胱癌干細胞，發(fā)明人收集分離了另外51例膀胱癌樣本，對其進行了膀胱癌干細胞的分選，從每個病例樣本分離鑒定共獲得51個膀胱癌干細胞。提取每個病例 的膀胱癌干細胞的DNA，再利用檢測ARID1A，GPRC5A和MLL2三個基因的引物來確定膀胱癌干細胞中的這三個基因是否存在表1中的突變，突變檢測引物可以基于突變所在位置的參考基因序列設(shè)計合成。經(jīng)過統(tǒng)計，在51例膀胱癌干細胞單細胞樣本中，有12個膀胱癌干細胞具有ARID1A(23.53％)突變，10個膀胱癌干細胞具有GPRC5A(19.61％)突變，11個膀胱癌的干細胞具有MLL2(21.57％)突變，如表3所示。表3基因(gene)突變率(Mutationrate)ARID1A12/51＝23.53％GPRC5A10/51＝19.61％MLL211/51＝21.57％通過對每個樣本的突變情況進行了仔細的分析，發(fā)現(xiàn)有三個樣本同時具有ARID1A和GPRC5A上的表1中的突變(3/51＝5.88％)；有另外三個樣本同時具有GPRC5A和MLL2上的表1中的突變(3/51＝5.88％)；有4四個樣本同時具有ARID1A和MLL2上的表1中的突變(4/51＝7.84％)；有2兩個樣本同時具有ARID1A，GPRC5A和MLL2上的表1中的突變(2/51＝3.92％)。實施例四為了進一步驗證上述發(fā)現(xiàn)確定的19個突變基因中可以用來檢測鑒定膀胱癌干細胞，發(fā)明人收集了485例正常膀胱組織樣本和45例膀胱癌組織樣本，參照實施例一從所說的組織樣本中分離鑒定得到2051個分化的膀胱細胞、179個膀胱癌干細胞、205個分化的膀胱癌細胞和889個膀胱干細胞。利用表1中的突變所在的基因的參考序列設(shè)計合成各個突變的檢測引物，檢測上述各類單細胞樣本的基因組是否存在表1中的19個突變基因，統(tǒng)計結(jié)果。統(tǒng)計結(jié)果表明，在上述2051個正常膀胱細胞未檢測到表1中的19個突變基因中的任一個，205個分化的膀胱癌細胞中檢測到1個細胞的基因組存在表1所列的1個突變基因，899個膀胱干細胞中檢測到兩個細胞的基因組分別存在表1所列的不同的1個突變基因。179個膀胱癌干細胞中有148個細胞的基因組檢測到存在一個或幾個表1所列的19個突變基因，其中有35個檢測到只存在19個突變基因中的一個，113個膀胱癌干細胞檢測到存在多個表1中的突變基因，而且，在這撥膀胱癌干細胞的基因組中均未檢測到表1中的帶有USP24基因chr1:55638075G>A的USP24突變基因序列。在本說明書的描述中，參考術(shù)語“一個實施例”、“一些實施例”、“示例”、“具體示例”、 或“一些示例”等的描述意指結(jié)合該實施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點包含于本發(fā)明的至少一個實施例或示例中。在本說明書中，對上述術(shù)語的示意性表述不一定指的是相同的實施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點可以在任何的一個或多個實施例或示例中以合適的方式結(jié)合。盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實施例，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以理解：在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨的情況下可以對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由權(quán)利要求及其等同物限定。當前第1頁1 2 3