本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種奧貝膽酸鹽的無定形物和制備方法、包含奧貝膽酸鹽無定形物的藥物及組合物、及所述藥物的治療用途。

背景技術(shù)：

鵝去氧膽酸及衍生物是一類法尼醇X受體的激動劑。在專利WO2010059859和WO2005082925中公開了系列鵝去氧膽酸衍生物，其中，化合物奧貝膽酸(Obeticholic acid)是選擇性的法尼醇X受體激動劑，化學(xué)名為3,7-二羥基-6-乙基-5-膽-24-酸(3,7-dihydroxy-6-ethyl-5-cholan-24-oic acid)，有望開發(fā)成治療非酒精性脂肪肝炎、非酒精性脂肪肝病、膽結(jié)石、原發(fā)性膽汁性肝硬化、肝硬化、肝纖維化、糖尿病、高膽固醇血癥、動脈粥樣硬化、肥胖、高膽固醇癥、高甘油三酯血癥等的藥物。

奧貝膽酸的結(jié)構(gòu)如式A所示：

在國際專利WO2013192097中公開了奧貝膽酸(式A化合物)的多晶型物Form C、Form F、Form G和Form 1，并且公開了通過多晶型物Form C轉(zhuǎn)化得到Form 1的制備方法。在大鼠體內(nèi)研究了多晶型物Form F和Form 1的藥代動力學(xué)行為，顯示多晶型物Form F比Form 1具有更高的血漿暴露濃度和更好的生物利用度，但是多晶型物Form F只能在具有爆炸性和有毒的硝基甲烷溶劑中結(jié)晶得到。

由于藥物的不同晶型和鹽型可能會影響其在體內(nèi)的溶出、吸收，進而可能在一定程度上影響藥物的臨床療效和安全性。為了提高生物利用度、穩(wěn)定性及安全性， 本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)純度高、生物利用度高、易收集、非常穩(wěn)定的式A化合物晶型和鹽形。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的第一方面提供一種結(jié)構(gòu)如式X所示的鹽的無定形物：

其中，n為1或2，M為NH₄⁺、堿金屬離子、堿土金屬離子或過渡金屬離子。

在另一優(yōu)選例中，M可選自下組：NH₄⁺、鈉離子、鉀離子、鎂離子、鈣離子、鐵離子和鋅離子。

在另一優(yōu)選例中，M可選自下組：鈉離子、鉀離子和鎂離子。

在另一優(yōu)選例中，所述式X化合物具有以下特征：式X化合物的熔點比奧貝膽酸的熔點至少高5-40℃，較佳地，高10-40℃。

在另一優(yōu)選例中，式X化合物結(jié)構(gòu)如下式I-IV所示：

在另一優(yōu)選例中，所述無定形物為式I-IV化合物的無定形物。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物I的X射線粉末衍射圖譜基本如圖1a所表征。

在另一優(yōu)選例中，所述無定形物I在X-射線粉末衍射圖的2°-6°和8°-20°具有特定的暈圈圖。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物I還具有以下特征：差示掃描量熱法分析圖譜中，起始溫度為59℃，在93±2℃具有最大峰。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物I差示掃描量熱法分析圖譜基本如圖1b所表征。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物I還具有選自下組5個、7個、9個或全部紅外光譜圖中的吸收峰：3423±5cm^-1、2958±5cm^-1、2935±5cm^-1、2871±5cm^-1、1640±5cm^-1、1559±5cm^-1、1451±5cm^-1、1406±5cm^-1、1378±5cm^-1、1160±5cm^-1、1065±5cm^-1和603±5cm^-1。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物I的紅外光圖譜基本如圖1d所表征。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物I中奧貝膽酸離子和鈉離子的比例為1：1形式。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物II的X射線粉末衍射圖譜基本如圖2a所表征。

在另一優(yōu)選例中，所述無定形物II在X-射線粉末衍射圖的4°-7°和8°-20°具有特定的暈圈圖。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物II還具有以下特征：差示掃描量熱法分析圖譜中，起始溫度為75℃，在108±2℃具有最大峰。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物II差示掃描量熱法分析圖譜基本如圖2b所表征。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物II還具有選自下組5個、7個、9個或全部紅外光譜圖中的吸收峰：3409±5cm^-1、2935±5cm^-1、2871±5cm^-1、1643±5cm^-1、1555±5cm^-1、1465±5cm^-1、1451±5cm^-1、1404±5cm^-1、1378±5cm^-1、1338±5cm^-1、1159±5cm^-1、1065±5cm^-1和603±5cm^-1。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物II的紅外光圖譜基本如圖2d所表征。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物II為奧貝膽酸離子和鉀離子的比例為1：1形式。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物III的X射線粉末衍射圖譜基本如圖3a所表征。

在另一優(yōu)選例中，所述無定形物III在X-射線粉末衍射圖的4°-6°和6°-20°具有特定的暈圈圖

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物III還具有以下特征：差示掃描量熱法分析圖譜中，起始溫度為57℃，在93±2℃具有最大峰。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物III差示掃描量熱法分析圖譜基本如圖3b所表征。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物III還具有選自下組5個、7個、9個或全部紅外光譜圖中的吸收峰：3401±5cm^-1、2935±5cm^-1、2871±5cm^-1、1555±5cm^-1、1449±5cm^-1、1414±5cm^-1、1377±5cm^-1、1159±5cm^-1、1064±5cm^-1和603±5cm^-1。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物III的紅外光圖譜基本如圖3d所表征。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物III為奧貝膽酸離子和鎂離子的比例為2：1形式。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物IV的X射線粉末衍射圖譜基本如圖4a所表征。

在另一優(yōu)選例中，所述無定形物IV在X-射線粉末衍射圖的4°-6°和6°-18°具有特定的暈圈圖。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物IV還具有以下特征：差示掃描量熱法分析圖譜中，起始溫度為50℃，在87±2℃具有最大峰。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物IV差示掃描量熱法分析圖譜基本如圖4b所表征。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物IV還具有選自下組5個、7個、9個或全部紅外光譜圖中的吸收峰：3407±5cm^-1、2935±5cm^-1、2871±5cm^-1、1553±5cm^-1、1447±5cm^-1、1417±5cm^-1、1377±5cm^-1、1159±5cm^-1、1064±5cm^-1和603±5cm^-1。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物IV的紅外光圖譜基本如圖4d所表征。

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物IV為奧貝膽酸離子和鈣離子的比例為2：1鹽形式。

本發(fā)明的第二方面提供一種制備如本發(fā)明第一方面所述的鹽的無定形物 的方法，

(I)當M為鈉或鉀時，所述方法包括步驟：

(1)將奧貝膽酸溶解在惰性溶劑中，加入氫氧化鈉或氫氧化鉀，濃縮得到固體；和

(2)將固體懸浮在惰性溶劑中，打漿，從而得到本發(fā)明第一方面所述的無定形物；

(II)當M為鎂或鈣時，所述方法包括步驟：

(1)將奧貝膽酸溶解在氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液中，溶清；和

(2)加入氯化鎂水溶液或氯化鈣水溶液，攪拌析出固體，過濾，從而得到本發(fā)明第一方面所述的無定形物；

(III)當M為鎂或鈣時，所述方法包括步驟：

(1)將奧貝膽酸鈉鹽或奧貝膽酸鉀鹽溶解在水溶液中，溶清；

(2)加入氯化鎂水溶液或氯化鈣水溶液，攪拌析出固體，過濾，從而得到本發(fā)明第一方面所述的無定形物。

在另一優(yōu)選例中，所述惰性溶劑選自下組：指甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、乙酸丁酯、1，4-二氧六環(huán)、甲基叔丁基醚、水及其組合。

本發(fā)明第三方面提供一種如本發(fā)明第一方面所述的無定形物的用途，用于制備法尼醇X受體激動劑的藥物及其組合物或預(yù)防及治療肝膽相關(guān)疾病和心血管疾病的藥物。

在另一優(yōu)選例中，所述相關(guān)疾病選自下組：非酒精性脂肪肝炎、非酒精性脂肪肝病、膽結(jié)石、原發(fā)性膽汁性肝硬化、肝硬化、肝纖維化、糖尿病、動脈粥樣硬化和肥胖。

本發(fā)明第四方面提供一種藥物組合物，包含：

(a)本發(fā)明第一方面所述的無定形物；和

(b)藥學(xué)上可接受的載體。

在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物施用方式是口服。

在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物為固體劑型。

在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物為液體劑型。

本發(fā)明第五方面提供一種如本發(fā)明第四方面所述的藥物組合物的用途，所述的藥物組合物用于制備用于治療和預(yù)防以下疾病的藥物：非酒精性脂肪肝炎、非酒精性脂肪肝病、膽結(jié)石、原發(fā)性膽汁性肝硬化、肝硬化、肝纖維化、糖尿病、動脈粥樣硬化和肥胖。

附圖說明

圖1a顯示了無定形物I的X-射線粉末衍射圖。

圖1b顯示了無定形物I的差示掃描量熱法圖。

圖1c顯示了無定形物I的¹HNMR圖。

圖1d顯示了無定形物I的紅外光譜圖。

圖2a顯示了無定形物II的X-射線粉末衍射圖。

圖2b顯示了無定形物II的差示掃描量熱法圖。

圖2c顯示了無定形物II的¹HNMR圖。

圖2d顯示了無定形物II的紅外光譜圖。

圖3a顯示了無定形物III的X-射線粉末衍射圖。

圖3b顯示了無定形物III的差示掃描量熱法圖。

圖3c顯示了無定形物III的¹HNMR圖。

圖3d顯示了無定形物III的紅外光譜圖。

圖4a顯示了無定形物IV的X-射線粉末衍射圖。

圖4b顯示了無定形物IV的差示掃描量熱法圖。

圖4c顯示了無定形物IV的¹HNMR圖。

圖4d顯示了無定形物IV的紅外光譜圖。

其中，在上述各圖中，onset表示初始(初始值)，peak表示峰(峰值)。

具體實施方式

本發(fā)明人通過長期而深入的研究，意外地發(fā)現(xiàn)了一系列式A化合物藥學(xué)上可接受的鹽的無定形物，包括如式X所示的藥學(xué)上可接受的鹽的無定形物，更佳地為如式I-IV所述的鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽和鈣鹽，所述無定形物具有更佳的藥物生物利用度，且所述無定形物純度高、非常穩(wěn)定，適合用于制備法尼醇X受體激動劑的藥物組合物，從而更有利于治療或預(yù)防非酒精性脂肪肝炎、非酒精性脂肪肝病、膽結(jié)石、原發(fā)性膽汁性肝硬化、肝硬化、高膽固醇和高甘油三 酯血癥等疾病。此外，本發(fā)明的無定形物在分裝等藥品制造過程中，不易揚起，易收集，不易造成浪費，且有助于保護操作人員的身體健康。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。

術(shù)語

“式I化合物”是指結(jié)構(gòu)式如式I所示的奧貝膽酸鈉鹽。

“式II化合物”是指結(jié)構(gòu)式如式II所示的奧貝膽酸鉀鹽。

“式III化合物”是指結(jié)構(gòu)式如式III所示的奧貝膽酸鎂鹽。

“式IV化合物”是指結(jié)構(gòu)式如式IV所示的奧貝膽酸鈣鹽。

“式A化合物”是指結(jié)構(gòu)式如式A所示的奧貝膽酸。

“奧貝膽酸”是指晶態(tài)的或無定形的奧貝膽酸。

多晶型物

固體不是以無定形的形式就是以結(jié)晶的形式存在。在結(jié)晶形式的情況下，分子定位于三維晶格格位內(nèi)。當化合物從溶液或漿液中結(jié)晶出來時，它可以不同的空間點陣排列結(jié)晶(這種性質(zhì)被稱作“多晶型現(xiàn)象”)，形成具有不同的結(jié)晶形式的晶體，這各種結(jié)晶形式被稱作“多晶型物”。給定物質(zhì)的不同多晶型物可在一個或多個物理屬性方面(如溶解度和溶解速率、真比重、晶形、堆積方式、流動性和/或固態(tài)穩(wěn)定性)彼此不同。

無定形物或非晶態(tài)固體

非晶態(tài)固體或無定形物不具有長程有序結(jié)構(gòu)、原子排列不具有周期性，因而不能夠像晶態(tài)物質(zhì)那樣確定地描述其中原子的排列情況。X射線衍射實驗表明，非晶態(tài)固體具有短程秩序，由一個原子出發(fā)，在任何方向、任何距離處找到其他原子的幾率完全相同；非晶態(tài)固體結(jié)構(gòu)的另一特點是：它的結(jié)構(gòu)參數(shù)呈現(xiàn)著某種統(tǒng)計分布，而不像晶體中那樣具有確定的數(shù)值。

結(jié)晶

可以通過操作溶液，使得感興趣化合物的溶解度極限被超過，從而完成生產(chǎn)規(guī)模的結(jié)晶。這可以通過多種方法來完成，例如，在相對高的溫度下溶解化合物，然后冷卻溶液至飽和極限以下。或者通過沸騰、常壓蒸發(fā)、真空干燥或 通過其它的一些方法來減小液體體積?？赏ㄟ^加入抗溶劑或化合物在其中具有低的溶解度的溶劑或這樣的溶劑的混合物，來降低感興趣化合物的溶解度。另一種可選方法是調(diào)節(jié)pH值以降低溶解度。有關(guān)結(jié)晶方面的詳細描述請參見Crystallization,第三版,J W Mullens,Butterworth-Heineman Ltd.，1993,ISBN 0750611294。

假如期望鹽的形成與結(jié)晶同時發(fā)生，如果鹽在反應(yīng)介質(zhì)中比原料溶解度小，那么加入適當?shù)乃峄驂A可導(dǎo)致所需鹽的直接結(jié)晶。同樣，在最終想要的形式比反應(yīng)物溶解度小的介質(zhì)中，合成反應(yīng)的完成可使最終產(chǎn)物直接結(jié)晶。

結(jié)晶的優(yōu)化可包括用所需形式的晶體作為晶種接種于結(jié)晶介質(zhì)中。另外，許多結(jié)晶方法使用上述策略的組合。一個實施例是在高溫下將感興趣的化合物溶解在溶劑中，隨后通過受控方式加入適當體積的抗溶劑，以使體系正好在飽和水平之下。此時，可加入所需形式的晶種(并保持晶種的完整性)，將體系冷卻以完成結(jié)晶。

如本文所用，術(shù)語“室溫”一般指4-30℃，較佳地指20±5℃。

本發(fā)明的奧貝膽酸鹽

式X化合物

在本發(fā)明中，式X化合物為奧貝膽酸鹽，尤其是無定形物，其對原發(fā)性膽汁性肝硬化、非酒精性脂肪肝炎和非酒精性脂肪性肝病治療效果極佳。

本發(fā)明中，所述的藥學(xué)上可接受的鹽選自下組：NH₄⁺、鈉離子、鉀離子、鎂離子、鈣離子、鐵離子和鋅離子。

如本文所用，“惰性溶劑”是指甲醇、乙醇、異丙醇、二甲亞砜、N-甲基吡咯烷酮、N、N-二甲基甲酰胺、丙酮、乙腈、醋酸、甲酸、正己烷、正庚烷、甲苯、四氫呋喃、乙酸乙酯、乙酸丁酯、1，4-二氧六環(huán)、甲基叔丁基醚、水或上述溶劑的混合物。

如本文所用，術(shù)語“本發(fā)明的奧貝膽酸鹽”包括式A化合物與堿金屬離子，如鋰、鈉、鉀、銣、銫等離子；堿土金屬離子，如鎂、鈣、鍶、鋇等離子；過渡金屬離子，如鐵、鋅等離子；季銨根離子，如銨根(NH₄⁺)等形成的式X所示奧貝膽酸鹽。

優(yōu)選的本發(fā)明奧貝膽酸鹽包括(但并不限于)：

(i)式I所示的奧貝膽酸鈉鹽；

(ii)式II所示的奧貝膽酸鉀鹽；

(iii)式III所示的奧貝膽酸鎂鹽；

(iv)式IV所示的奧貝膽酸鈣鹽。

本發(fā)明的無定形物

如本文所用，術(shù)語“本發(fā)明的無定形物”包括式X所示鹽的無定形物。

優(yōu)選的本發(fā)明無定形物包括(但并不限于)：

(i)式I所示的奧貝膽酸鈉鹽的無定形物I；

(ii)式II所示的奧貝膽酸鉀鹽的無定形物II；

(iii)式III所示的奧貝膽酸鎂鹽的無定形物III；

(iv)式IV所示的奧貝膽酸鈣鹽的無定形物IV。

無定形物的鑒定和性質(zhì)

本發(fā)明在制備式X化合物的無定形物后，采用如下多種方式和儀器對其性質(zhì)進行了研究。

X射線粉末衍射

測定晶型的X射線粉末衍射的方法在本領(lǐng)域中是已知的。例如使用Rigaku D/max 2550VB/PC型號的X射線粉末衍射儀，以2°每分鐘的掃描速度，采用銅輻射靶獲取圖譜。

本發(fā)明的式I化合物的無定形物，具有特定的非晶體形態(tài)，在X-射線粉末衍射(XRPD)圖中具有特定的暈圈圖(halo pattern)。優(yōu)選如下：

(1)無定形物I

所述無定形物I在X-射線粉末衍射圖的2°-6°和8°-20°具有特定的暈圈圖(halo pattern)。

在另一優(yōu)選例中，所述無定形物I具有基本如圖1a所示的X-射線粉末衍射譜圖。

(2)無定形物II

所述無定形物II在X-射線粉末衍射圖的4°-7°和8°-20°具有特定的暈圈圖(halo pattern)。

在另一優(yōu)選例中，所述無定形物II具有基本如圖2a所示的X-射線粉末衍射 譜圖。

(3)無定形物III

所述無定形物III在X-射線粉末衍射圖的4°-6°和6°-20°具有特定的暈圈圖(halo pattern)。

在另一優(yōu)選例中，所述無定形物III具有基本如圖3a所示的X-射線粉末衍射譜圖。

(4)無定形物IV

所述無定形物IV在X-射線粉末衍射圖的4°-6°和6°-18°具有特定的暈圈圖(halo pattern)。

在另一優(yōu)選例中，所述無定形物IV具有基本如圖4a所示的X-射線粉末衍射譜圖。

差示掃描量熱分析

又稱“差示掃描量熱分析”(DSC)，是在加熱過程中，測量被測物質(zhì)與參比物之間的能量差與溫度之間關(guān)系的一種技術(shù)。DSC圖譜上的峰位置、形狀和峰數(shù)目與物質(zhì)的性質(zhì)有關(guān)，故可以定性地用來鑒定物質(zhì)。本領(lǐng)域常用該方法來檢測物質(zhì)的相變溫度、玻璃化轉(zhuǎn)變溫度、反應(yīng)熱等多種參數(shù)。

DSC測定方法在本領(lǐng)域中是已知的。例如可使用NETZSCH DSC 204 F1差示掃描量熱計，以10℃每分鐘的升溫速率，從25℃升溫至300℃，獲得多晶型物或無定形物的DSC掃描圖譜。

本發(fā)明的式I-IV化合物的無定形物，在差示量熱掃描分析(DSC)圖中具有特定的特征峰。

(1)無定形物I

所述無定形物I的差示掃描量熱法圖譜在93±2℃(或±1℃，或±0.5℃)有最大峰值。

在另一優(yōu)選例中，所述無定形物I具有基本如圖1b所示的差示掃描量熱法圖譜(DSC)。

(2)無定形物II

所述無定形物II的差示掃描量熱法圖譜在在108±2℃(或±1℃，或±0.5℃)有最大峰值。

在另一優(yōu)選例中，所述無定形物II具有基本如圖2b所示的差示掃描量熱 法圖譜(DSC)。

(3)無定形物III

所述無定形物III的差示掃描量熱法圖譜在93±2℃(或±1℃，或±0.5℃)有最大峰值。

在另一優(yōu)選例中，所述無定形物III具有基本如圖3b所示的差示掃描量熱法圖譜。

(4)無定形物IV

所述無定形物IV的差示掃描量熱法圖譜在87±2℃(或±1℃，或±0.5℃)有最大峰值。

在另一優(yōu)選例中，所述無定形物IV具有基本如圖4b所示的差示掃描量熱法圖譜。

核磁共振分析

也可采用核磁共振(NMR)來輔助確定晶型結(jié)構(gòu)，其測定方法在本領(lǐng)域中是已知的。本發(fā)明優(yōu)選地采用Bruker Avance III plus-400MHz。

紅外光譜

紅外光譜(IR)是分子吸收光譜的一種，利用物質(zhì)對紅外光區(qū)的電磁輻射的選擇性吸收來進行結(jié)構(gòu)分析及對各種吸收紅外光的化合物的定性和定量分析，其測定方法在本領(lǐng)域中是已知的。本發(fā)明優(yōu)選地采用溴化鉀壓片法。

本發(fā)明的式I化合物的無定形物，具有特定的非晶體形態(tài)，在紅外光譜圖(IR)中具有特定的圖樣。優(yōu)選如下：

(1)無定形物I

所述的無定形物I還具有選自下組5個、7個、9個或全部紅外光譜圖中的吸收峰：3423±5cm^-1、2958±5cm^-1、2935±5cm^-1、2871±5cm^-1、1640±5cm^-1、1559±5cm^-1、1451±5cm^-1、1406±5cm^-1、1378±5cm^-1、1160±5cm^-1、1065±5cm^-1和603±5cm^-1。

在另一優(yōu)選例中，所述無定形物I具有基本如圖1d所示的紅外譜圖。

(2)無定形物II

所述的無定形物II還具有選自下組5個、7個、9個或全部紅外光譜圖中的吸收峰：3409±5cm^-1、2935±5cm^-1、2871±5cm^-1、1643±5cm^-1、1555±5cm^-1、1465 ±5cm^-1、1451±5cm^-1、1404±5cm^-1、1378±5cm^-1、1338±5cm^-1、1159±5cm^-1、1065±5cm^-1和603±5cm^-1。

在另一優(yōu)選例中，所述無定形物II具有基本如圖2d所示的紅外光譜圖。

(3)無定形物III

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物III還具有選自下組5個、7個、9個或全部紅外光譜圖中的吸收峰：3401±5cm^-1、2935±5cm^-1、2871±5cm^-1、1555±5cm^-1、1449±5cm^-1、1414±5cm^-1、1377±5cm^-1、1159±5cm^-1、1064±5cm^-1和603±5cm^-1。

在另一優(yōu)選例中，所述無定形物III具有基本如圖3d所示的紅外光譜圖。

(4)無定形物IV

在另一優(yōu)選例中，所述的無定形物IV還具有選自下組5個、7個、9個或全部紅外光譜圖中的吸收峰：3407±5cm^-1、2935±5cm^-1、2871±5cm^-1、1553±5cm^-1、1447±5cm^-1、1417±5cm^-1、1377±5cm^-1、1159±5cm^-1、1064±5cm^-1和603±5cm^-1。

在另一優(yōu)選例中，所述無定形物IV具有基本如圖4d所示的紅外光譜圖。

活性成分

如本文所用，術(shù)語“活性成分”或“活性化合物”指本發(fā)明的奧貝膽酸鹽及其無定形物，即式I-IV化合物的無定形物。

生物利用度

進行了結(jié)晶奧貝膽酸F型(制備方法參見公開專利WO2013192097)與本發(fā)明的奧貝膽酸鹽X的無定形物的大鼠生物利用度研究。口服給藥的藥代動力學(xué)行為和藥物吸收試驗按照本領(lǐng)域已知的方法進行，即口服給藥結(jié)晶奧貝膽酸F型或本發(fā)明的奧貝膽酸鹽的無定形物I、II、III或IV，通過LC/MS/MS方法測得不同時間點的血藥濃度，計算Tma、Cmax、T1/2和血漿暴露量AUC。相對于結(jié)晶型的奧貝膽酸，本發(fā)明奧貝膽酸鹽無定形物I-IV在動物體內(nèi)具有更高的血漿暴露量和更好的生物利用度。

藥物組合物和施用方法

由于本發(fā)明的無定形物具有優(yōu)異的法尼醇X受體激動活性，因此本發(fā)明的無定形物以及含有本發(fā)明的無定形物為主要活性成分的藥物組合物可用于治療、預(yù)防以及緩解由法尼醇X受體介導(dǎo)的疾病。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明所述的 無定形物可用于治療以下疾?。悍蔷凭灾靖窝住⒎蔷凭灾靖尾?、膽結(jié)石、原發(fā)性膽汁性肝硬化、肝硬化、高膽固醇和高甘油三酯血癥等等。

本發(fā)明的藥物組合物包含安全有效量范圍內(nèi)的本發(fā)明的無定形物及藥學(xué)上可以接受的賦形劑或載體。

其中，“安全有效量”指的是：化合物(或無定形物)的量足以明顯改善病情，而不至于產(chǎn)生嚴重的副作用。通常，藥物組合物含有1-2000mg本發(fā)明的無定形物/劑，更佳地，含有1-100mg本發(fā)明的無定形物/劑。較佳地，所述的“一劑”為一個膠囊或藥片。

“藥學(xué)上可以接受的載體”指的是：一種或多種相容性固體或液體填料或凝膠物質(zhì)，它們適合于人使用，而且必須有足夠的純度和足夠低的毒性?！跋嗳菪浴痹诖酥傅氖墙M合物中各組份能和本發(fā)明的活性成分以及它們之間相互摻和，而不明顯降低活性成分的藥效。藥學(xué)上可以接受的載體部分例子有纖維素及其衍生物(如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素鈉、纖維素乙酸酯等)、明膠、滑石、固體潤滑劑(如硬脂酸、硬脂酸鎂)、硫酸鈣、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄欖油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化劑(如吐溫)、潤濕劑(如十二烷基硫酸鈉)、著色劑、調(diào)味劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑、防腐劑、無熱原水等。

本發(fā)明的無定形物或藥物組合物的施用方式?jīng)]有特別限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤內(nèi)、直腸、腸胃外(靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下)、和局部給藥。

用于口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在這些固體劑型中，活性成分與至少一種常規(guī)惰性賦形劑(或載體)混合，如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，或與下述成分混合：(a)填料或增容劑，例如，微晶纖維素、淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合劑，例如，羥甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；(c)保濕劑，例如，甘油；(d)崩解劑，例如，瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些復(fù)合硅酸鹽、碳酸鈉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉；(e)緩溶劑，例如石蠟；(f)吸收加速劑，例如，季胺化合物；(g)潤濕劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(h)吸附劑，例如，高嶺土；和(i)潤滑劑，例如，滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉，或其混合物。膠囊劑、片劑和丸劑中，劑型也可包含緩沖劑。

固體劑型如片劑、糖丸、膠囊劑、丸劑和顆粒劑可采用包衣和殼材制備，如腸衣和其它本領(lǐng)域公知的材料。它們可包含不透明劑，并且，這種組合物中活性成分的釋放可以延遲的方式在消化道內(nèi)的某一部分中釋放?？刹捎玫陌窠M分的實例是聚合物質(zhì)和蠟類物質(zhì)。必要時，活性成分也可與上述賦形劑中的一種或多種形成微膠囊形式。

用于口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳液、溶液、懸浮液、糖漿或酊劑。除了活性成分外，液體劑型可包含本領(lǐng)域中常規(guī)采用的惰性稀釋劑，如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，例知，乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特別是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油或這些物質(zhì)的混合物等。

除了這些惰性稀釋劑外，組合物也可包含助劑，如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、矯味劑和香料。

除了活性成分外，懸浮液可包含懸浮劑，例如，乙氧基化異十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、甲醇鋁和瓊脂或這些物質(zhì)的混合物等。

用于腸胃外注射的組合物可包含生理上可接受的無菌含水或無水溶液、分散液、懸浮液或乳液，和用于重新溶解成無菌的可注射溶液或分散液的無菌粉末。適宜的含水和非水載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑包括水、乙醇、多元醇及其適宜的混合物。

用于局部給藥的本發(fā)明的無定形物的劑型包括軟膏劑、散劑、貼劑、噴射劑和吸入劑?；钚猿煞衷跓o菌條件下與生理上可接受的載體及任何防腐劑、緩沖劑，或必要時可能需要的推進劑一起混合。

本發(fā)明的無定形物可以單獨給藥，或者與其他藥學(xué)上可接受的化合物聯(lián)合給藥。

使用藥物組合物時，是將安全有效量的本發(fā)明的無定形物適用于需要治療的哺乳動物(如人)，其中施用時劑量為藥學(xué)上認為的有效給藥劑量，對于60kg體重的人而言，日給藥劑量通常為1-2000mg，優(yōu)選1-200mg。當然，具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。

本發(fā)明的主要優(yōu)點包括：

1.本發(fā)明的無定形物，相比游離酸形式具有更高的熔點，穩(wěn)定性極好。

2.本發(fā)明的無定形物具有更佳的藥物生物利用度，純度非常高，從而更有利于治療或預(yù)防非酒精性脂肪肝炎、非酒精性脂肪肝病、膽結(jié)石、原發(fā)性膽汁性肝硬化、肝硬化、高膽固醇和高甘油三酯血癥等疾病。

3.本發(fā)明的無定形物的制備過程相較于晶型的制備更加容易，過程易于控制。

4.本發(fā)明的無定形物在分裝等藥品制造過程中，不易揚起，易收集，不易造成浪費，且有助于保護操作人員的身體健康。

下面結(jié)合具體實施，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計算。

實施例1：制備奧貝膽酸鈉鹽無定形物I

方法1：

5.0g奧貝膽酸固體,加10ml無水甲醇攪拌溶清后緩慢滴到氫氧化鈉甲醇溶液(1.0eq NaOH溶于2.0ml甲醇)中，室溫攪拌2h。40℃真空濃縮，加入丙酮(15ml x 3)濃縮帶干,殘留物最后加入30ml丙酮打漿2h,過濾，室溫真空干燥8h。

取樣經(jīng)¹H NMR、離子色譜分析(IC)、X-射線粉末衍射、DSC、紅外光譜圖(IR)等檢測證明為標題化合物，得到4.6g白色固體，收率：87％，純度99.1％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:4.38(s,1H),4.08(s,1H),3.50(s,1H),3.17-3.13(m,1H),1.93-0.81(m,36H),0.61(s,3H)。

紅外光譜圖(IR)特征吸收峰：3423±5cm^-1、2958±5cm^-1、2935±5cm^-1、2871±5cm^-1、1640±5cm^-1、1559±5cm^-1、1451±5cm^-1、1406±5cm^-1、1378±5cm^-1、1160±5cm^-1、1065±5cm^-1和603±5cm^-1。

離子色譜IC(Na⁺):5.19％(理論值：5.19％)。

其X-射線粉末衍射圖見圖1a，差示掃描量熱法圖(DSC)見圖1b，¹H NMR的圖譜見1c，紅外光譜圖(IR)見1d。

方法2：

取2.0g奧貝膽酸固體,加10ml無水甲醇溶清，再加入1.05eq NaOH固體，攪拌2h。混合液均分為4份，1份混合液在40度真空濃縮干，殘余物加入8ml乙酸乙酯打漿0.5h,過濾抽干。得到白色固體為標題無定形物，稱重420mg，收率：84％，純度99.3％。

其X-射線粉末衍射與圖1a、差示掃描量熱分析(DSC)圖與圖1b相同。

實施例2：制備奧貝膽酸鉀鹽無定形物II

5.0g奧貝膽酸固體,加10ml甲醇攪拌溶清后緩慢滴到氫氧化鉀甲醇溶液(0.65g NaOH溶于2.0ml甲醇)中，室溫攪拌2h；40℃真空濃縮干，加入丙酮(10ml x 3)濃縮帶干,殘留物加30ml丙酮打漿1.5h,過濾，室溫真空干燥8h，得白色固體4.9g；收率：90％，純度99％。

取樣經(jīng)¹H NMR、離子色譜分析(IC)、X-射線粉末衍射、DSC、紅外光譜圖(IR)等檢測證明為標題化合物，得到4.9g白色固體，收率：90％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:4.51(s,1H),4.18(s,1H),3.50(s,1H),3.15-3.10(m,1H),1.93-0.81(m,36H),0.60(s,3H)；

紅外光譜圖(IR)特征吸收峰：3409±5cm^-1、2935±5cm^-1、2871±5cm^-1、1643±5cm^-1、1555±5cm^-1、1465±5cm^-1、1451±5cm^-1、1404±5cm^-1、1378±5cm^-1、1338±5cm^-1、1159±5cm^-1、1065±5cm^-1和603±5cm^-。

離子色譜IC(K⁺):8.50％(理論值：8.52％)。

其X-射線粉末衍射圖見圖2a，差示掃描量熱法圖(DSC)見圖2b，¹H NMR的圖譜見2c，紅外光譜圖(IR)見2d。

實施例3：制備奧貝膽酸鎂鹽無定形物III

方法1：

取840mg奧貝膽酸固體,加2.5ml水和氫氧化鈉水溶液(1.0eq NaOH溶于1.0ml水)，攪拌溶清；緩慢滴入六水合氯化鎂水溶液(820mg固體溶于2.0ml水)，析出固體，過濾，純水洗滌抽干，35度真空干燥8h。

取樣經(jīng)¹H NMR、離子色譜分析(IC)、X-射線粉末衍射、DSC、紅外光譜圖(IR)等檢測證明為標題化合物，得到720mg白色固體，收率：84％，純度99.2％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:4.32(s,1H),4.03(d,J＝4.0Hz,1H),3.50(s,1H),3.13(s,1H),1.93-0.81(m,36H),0.61(s,3H)

紅外光譜圖(IR)特征吸收峰：3401±5cm^-1、2935±5cm^-1、2871±5cm^-1、1555±5cm^-1、1449±5cm^-1、1414±5cm^-1、1377±5cm^-1、1159±5cm^-1、1064±5cm^-1和603±5cm^-1。

離子色譜(Mg²⁺):2.82％(理論值：2.81％)。

其X-射線粉末衍射圖見圖3a，差示掃描量熱法圖(DSC)見圖3b，¹H NMR的圖譜見3c，紅外光譜圖(IR)見3d。

方法2：

取200mg奧貝膽酸鈉鹽固體,加2.0ml水，攪拌溶清；滴入六水合氯化鎂水溶液(45mg固體溶于0.5ml水)，析出固體，攪拌3h,過濾，純水洗滌，室溫干燥，得白色固體為標題無定形物，稱重150mg，收率：77％，純度99.2％。其X-射線粉末衍射與圖3a、差示掃描量熱分析(DSC)圖與圖3b相同。

方法3：

取200mg奧貝膽酸鉀鹽固體,加2.0ml水，攪拌溶清；滴入六水合氯化鎂水溶液(45mg固體溶于0.5ml水)，析出固體，攪拌3h,過濾，純水洗滌，室溫干燥，得白色固體為標題無定形物，稱重152mg，收率：81％，純度99.3％。其X-射線粉末衍射與圖3a、差示掃描量熱分析(DSC)圖與圖3b相同。

實施例4：制備奧貝膽酸鈣鹽無定形物IV

方法1：

取840mg奧貝膽酸固體,加3.0ml水和氫氧化鈉水溶液(85mg固體溶于2.0ml水)，攪拌溶清；滴入氯化鈣水溶液(888mg固體溶于2.5ml水)，析出固體，室溫攪拌16h,過濾，純水洗滌抽干，室溫真空干燥8h。

取樣經(jīng)¹H NMR、離子色譜分析(IC)、X-射線粉末衍射、DSC、紅外光譜圖(IR)等檢測證明為標題化合物，得到735mg白色固體，收率：84％，純度99.1％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:4.32(s,1H),4.02(s,1H),3.50(s,1H),3.14(s，1H)，2.09-0.81(m，36H)，0.61(s，3H)；

紅外光譜圖(IR)特征吸收峰：3407±5cm^-1、2935±5cm^-1、2871±5cm^-1、1553±5cm^-1、1447±5cm^-1、1417±5cm^-1、1377±5cm^-1、1159±5cm^-1、1064±5cm^-1和603±5cm^-1。

離子色譜(Ca²⁺):4.58％(理論值：4.56％)。

其X-射線粉末衍射圖見圖4a，差示掃描量熱法圖(DSC)見圖4b，¹H NMR的圖譜見4c，紅外光譜圖(IR)見4d。

方法2：

取200mg奧貝膽酸鈉鹽固體,加2.0ml水，攪拌溶清；滴入氯化鈣水溶液(25mg固體溶于0.5ml水)，析出固體，攪拌3h,過濾，純水洗滌，室溫干燥，得白色固體為標題無定形物，稱重170mg，收率：85％，純度99.3％。其X-射線粉末衍射與圖4a、差示掃描量熱分析(DSC)圖與圖4b相同。

方法3：

取200mg奧貝膽酸鉀鹽固體,加2.0ml水，攪拌溶清；滴入氯化鈣水溶液(25mg固體溶于0.5ml水)，析出固體，攪拌3h,過濾，純水洗滌，室溫干燥，得白色固體為標題無定形物，稱重172mg，收率：89％，純度99.3％。其X-射線粉末衍射與圖4a、差示掃描量熱分析(DSC)圖與圖4b相同。

實施例5：奧貝膽酸鈉鹽的無定形物I的穩(wěn)定性

在經(jīng)過6個月的加速試驗(試驗條件40±2℃、75％±5％RH)后，結(jié)果表明：無定形物I十分穩(wěn)定，且相比較新制備的(0月)無定形物I而言，無定形物I的純度基本沒有變化，始終在99％以上，未見明顯降解雜質(zhì)，且XRPD圖樣沒有改變。

實施例6：奧貝膽酸鉀鹽無定形物II的穩(wěn)定性

在經(jīng)過6個月的加速試驗(試驗條件40±2℃、75％±5％RH)后，結(jié)果表明：無定形物II十分穩(wěn)定，且相比較新制備的(0月)無定形物II而言，無定形物II的純度基本沒有變化，始終在99％以上，未見明顯降解雜質(zhì)，且XRPD圖樣沒有改變。

實施例7：奧貝膽酸鎂鹽無定形物III的穩(wěn)定性

在經(jīng)過6個月的加速試驗(試驗條件40±2℃、75％±5％RH)后，結(jié)果表明：無定形物III十分穩(wěn)定，且相比較新制備的(0月)無定形物III而言，無定形物III的純度基本沒有變化，始終在99％以上，未見明顯降解雜質(zhì)，且XRPD圖樣沒有改變。

實施例8：奧貝膽酸鈣鹽無定形物IV的穩(wěn)定性

在經(jīng)過6個月的加速試驗(試驗條件40±2℃、75％±5％RH)后，結(jié)果表明：無定形物IV十分穩(wěn)定，且相比較新制備的(0月)無定形物IV而言，無定形物IV的純度基本沒有變化，始終在99％以上，未見明顯降解雜質(zhì)，且XRPD圖樣沒有改變。

實施例9：生物利用度研究

雄性Sprague-Dawley大鼠，7-8周齡，體重約210g，每組6只，口服給藥30mg/kg劑量的(a)對照組：結(jié)晶型的奧貝膽酸(Form F，制備方法參見公開專利WO2013192097)或(b)試驗組：實施例1-4制備的一種奧貝膽酸鹽無定形物。比較其血漿藥代動力學(xué)差異。

大鼠采用標準飼料飼養(yǎng)，給予水。試驗前16小時開始禁食。藥物用PEG400和二甲亞砜溶解。眼眶采血，采血的時間點為給藥后0.083小時，0.25小時、0.5小時、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時、12小時和24小時。

大鼠吸入乙醚后短暫麻醉，眼眶采集300μL血樣于試管。試管內(nèi)有30μL1％肝素鹽溶液。使用前，試管于60℃烘干過夜。

血樣采集后，立即溫和地顛倒試管至少5次，保證混合充分后放置于冰上。血樣在4℃5000rpm離心5分鐘。吸出100μL血漿到干凈的塑料離心管中，表明化合物的名稱和時間點。血漿在進行分析前保存在-80℃。用LC-MS/MS測定血漿中本發(fā)明化合物的濃度。藥代動力學(xué)參數(shù)基于每只動物在不同時間點的血藥濃度進行計算。

從結(jié)果看出，相對于結(jié)晶型的奧貝膽酸，本發(fā)明奧貝膽酸鹽無定形物I-IV在動物體內(nèi)具有更高的血漿暴露量，因而具有更好的藥效學(xué)和治療效果。

實施例10：藥物組合物

奧奧貝膽酸鈉鹽無定形物I或奧貝膽酸鉀鹽無定形物II或奧貝膽酸鎂鹽無定形物III或奧貝膽酸鈣鹽無定形物IV(實施例1-4) 50g

淀粉 160g

微晶纖維素 30g

按常規(guī)方法，將上述物質(zhì)混合均勻后，裝入普通明膠膠囊，得到1000顆膠囊。

實施例11：藥物組合物

奧貝膽酸鈉鹽無定形物I或奧貝膽酸鉀鹽無定形物II(實施例1-2) 5g

注射水 1000g

按常規(guī)方法，將上述物質(zhì)混合均勻得到注射劑。

因此，本發(fā)明所述的無定形物非常適合用于藥物組合物。而且本發(fā)明的無定形物在分裝等藥品制造過程中，不易揚起，易收集，不易造成浪費，有助于保護操作人員的身體健康。

在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。