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一種檢測食管癌相關(guān)標(biāo)志物的探針組合及其試劑盒的制作方法

文檔序號:11145668閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種探針組合物,其特征在于,所述探針組合物能夠檢測食管癌相關(guān)標(biāo)志物,所述標(biāo)志物選自hsa-miR-25-3p、hsa-miR-373-3p、hsa-miR-16-5p、hsa-miR-208a-3p、hsa-miR-518b、hsa-miR-138-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-296-5p、hsa-miR-21-5p、hsa-miR-223-3p、hsa-miR-192-5p或hsa-miR-194-5p中一種或以上。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的探針組合物,其特征在于,包括捕獲探針:

所述捕獲探針的核苷酸序列自5’端至3’端依次為P1序列、間隔臂序列、P2序列;

所述P1序列與權(quán)利要求1所述的標(biāo)志物特異性結(jié)合;

所述間隔臂序列為5個~10個T。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的探針組合物,其特征在于,所述P1序列選自SEQ ID NO:1~12,所述P2序列選自SEQ ID NO:13~24。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的探針組合物,其特征在于,所述捕獲探針選自以下序列:

自5’端至3’端順序連接的SEQ ID NO:1、5個T、SEQ ID NO:13;

自5’端至3’端順序連接的SEQ ID NO:2、5個T、SEQ ID NO:14;

自5’端至3’端順序連接的SEQ ID NO:3、5個T、SEQ ID NO:15;

自5’端至3’端順序連接的SEQ ID NO:4、5個T、SEQ ID NO:16;

自5’端至3’端順序連接的SEQ ID NO:5、5個T、SEQ ID NO:17;

自5’端至3’端順序連接的SEQ ID NO:6、5個T、SEQ ID NO:18;

自5’端至3’端順序連接的SEQ ID NO:7、5個T、SEQ ID NO:19;

自5’端至3’端順序連接的SEQ ID NO:8、5個T、SEQ ID NO:20;

自5’端至3’端順序連接的SEQ ID NO:9、5個T、SEQ ID NO:21;

自5’端至3’端順序連接的SEQ ID NO:10、5個T、SEQ ID NO:22;

自5’端至3’端順序連接的SEQ ID NO:11、5個T、SEQ ID NO:23;

自5’端至3’端順序連接的SEQ ID NO:12、5個T、SEQ ID NO:24。

5.一種食管癌相關(guān)標(biāo)志物檢測試劑盒,其特征在于,包括權(quán)利要求2~4任一項所述的捕獲探針和信號放大組合物。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒,其特征在于,所述信號放大組合物為:

一級信號放大探針,在一級信號放大探針的5’端修飾熒光基團(tuán);

或一級信號放大探針,二級信號放大探針,在二級信號放大探針的3’端修飾熒光基團(tuán);

或一級信號放大探針、二級信號放大探針,三級信號放大探針,在三級信號放大探針的5’端修飾熒光基團(tuán);

針對所述捕獲探針中的任一種,所述一級信號放大探針與所述捕獲探針特異性結(jié)合;

針對所述一級信號放大探針中的任一種,所述二級信號放大探針與所述一級信號放大探針特異性結(jié)合;

針對所述二級信號放大探針中的任一種,所述三級信號放大探針與所述二級信號放大探針特異性結(jié)合。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒,其特征在于,所述:

一級信號放大探針自5’端至3’端依次為P4序列、間隔臂序列、P3序列;

二級信號放大探針自5’端至3’端依次為P5序列、間隔臂序列、P6序列;

三級信號放大探針自5’端至3’端依次為P8序列、間隔臂序列、P7序列;

所述P3序列與P2序列特異性結(jié)合;

所述P5序列與P4序列特異性結(jié)合;

所述P6序列與P7序列特異性結(jié)合;

所述間隔臂序列獨立的為2個~20個T;

所述P8序列為5個T。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒,其特征在于,所述P4序列選自SEQ ID NO:25~36。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒,其特征在于,所述P6序列選自SEQ ID NO:49~60。

10.根據(jù)權(quán)利要求5~9任一所述的試劑盒,其特征在于,所述熒光基團(tuán)選自FAM、TET、JOE、HEX、Cy3、TAMRA、ROX、Texas Red、LC RED640、Cy5、LC RED705或Alexa Fluor 488,且針對不同捕獲探針的信號放大探針上修飾的熒光基團(tuán)互不相同。

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