本發(fā)明涉及泊沙康唑的三種雜質(zhì)及其制備方法。

背景技術(shù)：

泊沙康唑2005年10月在歐洲首次上市，商品名為美國FDA于2006年9月批準了泊沙康唑口服混懸液(規(guī)格：40mg/mL)，原研企業(yè)為先靈葆雅，先靈葆雅被默沙東收購后，默沙東后續(xù)開發(fā)了泊沙康唑緩釋片劑及注射劑。2013年11月及2014年3月美國FDA分別批準泊沙康唑緩釋片(規(guī)格為100mg/片)和注射液(規(guī)格為16.7mL:0.3g)。泊沙康唑適用于因重度免疫缺陷而導(dǎo)致侵襲性曲霉菌和念珠菌感染風險增加的患者包括造血干細胞移植(HSCT)后發(fā)生移植物抗宿主病(GVHD)的患者或化療導(dǎo)致長時間中性粒細胞減少癥的血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者的侵襲性真菌感染的預(yù)防治療。同時適用于治療口咽念珠菌病，包括伊曲康唑和/或氟康唑難治性口咽念珠菌病。

泊沙康唑的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式IV所示：

本領(lǐng)域已知，處于對人體給藥安全考慮，在一種有效的藥物成分(API)產(chǎn)品商業(yè)化之前需要由國家和國際的管理建立毒理學(xué)上非特征性雜質(zhì)的鑒定的極低下限。通常每種雜質(zhì)的限量少于約0.15％重量比。未鑒定的和/或非特征性雜質(zhì)的限度明顯更低，通常少于0.1％重量比。

本領(lǐng)域中也已知，泊沙康唑任何有效成分(API)中的雜質(zhì)可能來自于API本身的降解和制造過程，包括化學(xué)合成。工藝雜質(zhì)包括未反應(yīng)的原材料、原材料中所含的雜質(zhì)及其化學(xué)衍生物、合成副產(chǎn)物和降解產(chǎn)物。

關(guān)于泊沙康唑的雜質(zhì)，文獻(Structural characterization of impurities and degradation products 164-177)有過報道，但對于泊沙康唑在氧化降解中形成的氧化雜質(zhì)，尤其是氮氧化雜質(zhì)，目前未有涉及。

因此，對于泊沙康唑的氧化雜質(zhì)的制備和表征，對于泊沙康唑原料藥和制劑的穩(wěn)定性研究和質(zhì)量控制尤為重要。

本申請人在泊沙康唑穩(wěn)定性研究過程中，發(fā)現(xiàn)了三種泊沙康唑的氧化雜質(zhì)，對其色譜行為進行了研究。本發(fā)明提供了三種泊沙康唑氧化雜質(zhì)及其制備方法，并對其進行了結(jié)構(gòu)表征。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的之一是提供一種泊沙康唑的雜質(zhì)，即式I化合物，該雜質(zhì)為1-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-5-(2,4-二氟苯基)四氫呋喃基-3-基)甲氧基)苯基)-4-(4-(1-((2S,3S)-2-羥戊烷基-3-基)-5-氧代-1H-1,2,4-三唑-4(5H)-基)苯基)哌嗪基-1，4-氧化物。

上述式I化合物在一些實施方案中被分離為具有至少50％的純度，或者至少60％的純度，或者至少70％的純度，或者至少80％的純度，或者至少90％的純度，或者至少95％的純度，或者至少96％的純度，或者至少97％的純度，或者至少98％的純度，或者至少99％的純度，該純度一般為HPLC面積歸一化的純度。

本發(fā)明提供一種制備式I化合物的方法，包括：

將泊沙康唑在氧化劑作用下，在溶劑中反應(yīng)得到式I化合物。

其中溶劑包括但不限于N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷、N-甲基吡咯烷酮、四氫呋喃、乙腈、1,4-二氧六環(huán)，乙酸乙酯、二甲亞砜、甲苯、乙醇、水中的一種或幾種。

其中氧化劑包括但不限于過氧化氫、叔丁基過氧化氫、間氯過氧苯甲酸或過氧乙酸中的一種或幾種。

其中反應(yīng)溫度沒有特殊要求，能制備得到雜質(zhì)I～III的溫度范圍均可，優(yōu)選10℃～溶劑沸點。

反應(yīng)時間沒有特殊要求，可根據(jù)TLC或HPLC監(jiān)測反應(yīng)進程。

更進一步的，為幫助泊沙康唑溶解，也可以向反應(yīng)體系中加濃鹽酸。

本發(fā)明的另一目的是提供一種泊沙康唑的雜質(zhì)，即式II化合物，該雜質(zhì)為1-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-5-(2,4-二氟苯基)四氫呋喃基-3-基)甲氧基)苯基)-4-(4-(1-((2S,3S)-2-羥戊烷基-3-基)-5-氧代-1H-1,2,4-三唑-4(5H)-基)苯基)哌嗪基1-氧化物。

上述式II化合物在一些實施方案中被分離為具有至少50％的純度，或者至少60％的純度，或者至少70％的純度，或者至少80％的純度，或者至少90％的純度，或者至少95％的純度，或者至少96％的純度，或者至少97％的純度，或者至少98％的純度，或者至少99％的純度，該純度一般為HPLC面積歸一化的純度。

本發(fā)明提供一種制備式II化合物的方法，包括：

將泊沙康唑在氧化劑作用下，在溶劑中反應(yīng)得到式II化合物。

其中溶劑包括但不限于N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷、N-甲基吡咯烷酮、四氫呋喃、乙腈、1,4-二氧六環(huán)，乙酸乙酯、二甲亞砜、甲苯、乙醇、甲醇、水中的一種或幾種。

其中氧化劑包括但不限于過氧化氫、叔丁基過氧化氫、間氯過氧苯甲酸、過氧乙酸中的一種或幾種。

其中反應(yīng)溫度沒有特殊要求，能制備得到雜質(zhì)I～III的溫度范圍均可，優(yōu)選10℃～溶劑沸點。

反應(yīng)時間沒有特殊要求，可根據(jù)TLC或HPLC監(jiān)測反應(yīng)進程。

更進一步的，為幫助泊沙康唑溶解，也可以向反應(yīng)體系中加鹽酸。

更進一步的，為簡化后處理，反應(yīng)結(jié)束后可加堿將溶液調(diào)pH值至8～9，其中，所述堿選自氫氧化鈉溶液。

本發(fā)明還有一個目的是提供一種泊沙康唑的雜質(zhì)，即式III化合物，該雜質(zhì)為4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-5-(2,4-二氟苯基)四氫呋喃基-3-基)甲氧基)苯基)-1-(4-(1-((2S,3S)-2-羥戊烷基-3-基)-5-氧代-1H-1,2,4-三唑-4(5H)-基)苯基)哌嗪基-1-氧化物。

上述式III化合物在一些實施方案中被分離為具有至少50％的純度，或者至少60％的純 度，或者至少70％的純度，或者至少80％的純度，或者至少90％的純度，或者至少95％的純度，或者至少96％的純度，或者至少97％的純度，或者至少98％的純度，或者至少99％的純度，該純度一般為HPLC面積歸一化的純度。

本發(fā)明提供一種制備式III化合物的方法，包括：

將泊沙康唑在氧化劑作用下，在溶劑中反應(yīng)得到式III化合物。

其中溶劑包括但不限于N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷、N-甲基吡咯烷酮、四氫呋喃、乙腈、1,4-二氧六環(huán)，乙酸乙酯、二甲亞砜、甲苯、乙醇、甲醇、水中的一種或幾種。

其中氧化劑包括但不限于過氧化氫、叔丁基過氧化氫、間氯過氧苯甲酸或過氧乙酸中的一種或幾種。

其中反應(yīng)溫度沒有特殊要求，能制備得到雜質(zhì)I～III的溫度范圍均可，優(yōu)選10℃～溶劑沸點。

反應(yīng)時間沒有特殊要求，可根據(jù)TLC或HPLC監(jiān)測反應(yīng)進程。

更進一步的，為幫助泊沙康唑溶解，也可以向反應(yīng)體系中加濃鹽酸。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案的有益效果是操作便捷，反應(yīng)條件溫和可控，反應(yīng)的穩(wěn)定性高，并且，反應(yīng)產(chǎn)物收率高、純度高。

并且，上述式I～式III化合物可以作為雜質(zhì)對照品控制泊沙康唑原料或制劑的純度。

附圖說明

圖1：雜質(zhì)I、II、III HPLC檢測圖譜

圖2:化合物II核磁共振HMBC圖譜

圖3:化合物III核磁共振HMBC圖譜

具體實施方式

本發(fā)明將于下文通過實施例更加詳細的描述，這些實施例示例性地用于進一步說明，且不應(yīng)當視為對本發(fā)明的限制。

雜質(zhì)I、II、III的制備

實施例1：

將泊沙康唑(1.5g)懸浮于水(20.0mL)中，加入乙醇(10.0mL)，使用濃鹽酸調(diào)pH值至1～2，加入30％過氧化氫(2.0mL)，于15～30℃下攪拌24小時，使用25％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至8～9，將析出少量固體濾除，取濾液，用二氯甲烷(每次15.0mL)萃取兩次，合并二氯甲烷層，使用20％亞硫酸鈉溶液(10.0g)洗滌，得到的有機相濃縮后用制備液相純化分離， 得雜質(zhì)I固體0.19g(21.1％)；得雜質(zhì)II固體0.13g(8.5％)；得雜質(zhì)III固體0.15g(9.8％)。

實施例2：

將泊沙康唑(1.5g)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6.0mL)中，加入70％叔丁基過氧化氫(2.0mL)，于70～80℃下攪拌5小時，降溫至25～30℃后加入水(20.0mL)，使用25％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至8～9，濾除析出的固體，將所得濾液使用二氯甲烷(每次10.0mL)萃取兩次，合并二氯甲烷層，使用20％亞硫酸鈉溶液(10.0g)洗滌，得到的有機相濃縮后用制備液相分離，得雜質(zhì)I固體0.20g(12.8％)；得雜質(zhì)II固體0.12g(7.8％)；得雜質(zhì)III固體0.16g(10.4％)。

實施例3：

將泊沙康唑(1.0g)懸浮于水(10.0mL)中，升溫至50℃溶清，加入間氯過氧苯甲酸(0.6g)，于室溫反應(yīng)48小時。攪拌下用25％NaOH水溶液調(diào)pH至8-9，用二氯甲烷(每次10.0mL)萃取兩次，合并二氯甲烷層后用8％亞硫酸鈉溶液(10.0mL)洗一次，并用無水硫酸鈉干燥。將有機相濃縮后用制備液相分離，得雜質(zhì)I固體0.132g(12.6％)；得雜質(zhì)II固體0.085g(8.3％)；得雜質(zhì)III固體0.091g(8.9％)。

實施例4：

將泊沙康唑懸(2.0g)懸浮于甲醇(10.0mL)中，用稀鹽酸將體系調(diào)至pH2-3，升溫至50℃溶清，加入20％過氧乙酸(2.0mL)，于室溫反應(yīng)12小時。攪拌下用25％NaOH水溶液調(diào)pH至8-9，濾除析出的固體，濾液中加入水(20.0mL)，用二氯甲烷(每次10.0mL)萃取兩次，合并二氯甲烷層后用8％亞硫酸鈉溶液(10.0mL)洗一次，并用無水硫酸鈉干燥。將有機相濃縮后用制備液相純化分離，得雜質(zhì)I固體0.31g(14.8％)；得雜質(zhì)II固體0.16g(7.8％)；得雜質(zhì)III固體0.18g(8.8％)。

雜質(zhì)I：

MS-ESI(M+1)：732.9¹H NMR:(400MHz,d6-DMSO)δ:8.59(s,1H),8.37(s,1H),8.33(d,2H),8.08(d,2H),7.94(d,2H),7.80(s,1H),7.31(m,1H),7.29(m,1H),7.04(d,2H),7.01(m,1H),4.85(m,2H),4.61(d,2H),4.06(d,1H),3.84(m,1H),3.83(m,1H),3.82(m,1H),3.80(m,1H),3.78(m,1H),3.13(m,2H),2.61(m,1H),2.43(m,1H),2.19(m,1H),1.13(m,2H),1.15(d,3H),0.76(t,3H)；

雜質(zhì)II：

MS-ESI(M+1)：716.9

¹H NMR:(400MHz,d6-DMSO)δ:8.35(s,1H),8.35(s,1H),8.11(d,2H),7.78(s,1H),7.56(d,2H),7.33(m,1H),7.28(m,1H),7.16(d,2H),7.02(m,1H),6.97(d,2H),4.68(d,1H),4.60(m,2H),4.09(m,2H),4.07(m,1H),3.83(m,1H),3.82(m,1H),3.81(m,1H),3.79(m,1H),3.76(m,1H),3.68(m,4H),2.98(m,2H),2.58(m,1H),2.42(m,1H),2.16(m,1H),1.72(m,2H),1.13(d,3H),0.56(t,3H)；

雜質(zhì)III：

MS-ESI(M+1)：716.9

¹H NMR:(400MHz,d6-DMSO)δ:8.56(s,1H),8.38(s,2H),8.36(s,1H),7.88(d,2H),7.79(s,1H),7.32(m,1H),7.26(m,1H),7.02(m,1H),6.98(d,2H),6.84(d,2H),4.75(d,1H),4.60(d,2H),4.15(t,2H),4.04(m,1H),3.83(m,1H),3.81(m,1H),3.76(m,2H),3.70(m,2H),3.62(t,2H),3.45(d,2H),3.01(d,2H),2.55(m,1H),2.45(m,1H),2.18(m,1H),1.72(m,2H),1.14(d,3H),0.76(t,3H)；

I、II、III的制備液相方法：

儀器：依利特(P270泵-U230檢測器)

色譜柱：Boston C18 50*250mm 10um

流動相：A乙腈 B水 流速：80ml/min

波長：260nm 溶樣溶劑：甲醇

雜質(zhì)I、II、III HPLC分析方法：

色譜柱：ZORBAX SB-Phenyl 4.6×75mm,3.5um

流動相A：水-四氫呋喃-磷酸(1550：450：3)

流動相B：水-乙腈-四氫呋喃-磷酸(250：500：250：1.5)

溶劑：水-乙腈-磷酸(75：25：1)

樣品濃度：1mg/ml

波長：260nm；柱溫：40℃；進樣量：10ul；流速：1.5ml/min

梯度洗脫：