1.用于開發(fā)遺傳標記的成套試劑,由接頭A、接頭B和限制性內(nèi)切酶BcoDI組成;
所述接頭A是由正向鏈和反向鏈組成的接頭,所述接頭A的正向鏈為序列1所示的單鏈DNA,所述接頭A的反向連為在序列2的第8-26位所示單鏈DNA的5’末端添加1-10個核苷酸得到的單鏈DNA,序列2的第8-25位與序列1的第5-22位反向互補;
所述接頭B是由正向鏈和反向鏈組成的接頭,所述接頭B的正向鏈為序列3所示的單鏈DNA,所述接頭B的反向連為在序列4的第1-18位所示單鏈DNA的3’末端添加1-10個核苷酸得到的單鏈DNA,序列4的第1-18位與序列3的第40-57位反向互補。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的成套試劑,其特征在于:所述接頭A的反向連的序列為序列2;所述接頭B的反向鏈的序列為序列4。
3.用于開發(fā)遺傳標記的成套接頭,由權(quán)利要求1或2中所述接頭A和所述接頭B組成。
4.權(quán)利要求1或2中所述接頭A。
5.用于開發(fā)遺傳標記的系統(tǒng),包括權(quán)利要求1或2所述成套試劑和用于開發(fā)遺傳標記的其他試劑和/或儀器。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的系統(tǒng),其特征在于:所述用于開發(fā)遺傳標記的其他試劑為由序列5所示的單鏈DNA和序列6所示的單鏈DNA組成的引物對;所述用于高通量測序的儀器為Illumina測序平臺。
7.高通量測序開發(fā)遺傳標記的方法,包括:將基因組DNA用限制性內(nèi)切酶BcoD I進行酶切后,分步連接權(quán)利要求1或2中所述接頭A和所述接頭B,構(gòu)建DNA文庫;對所述DNA文庫進行高通量測序開發(fā)遺傳標記。
8.高通量測序開發(fā)遺傳標記的方法,包括如下1)-5):
1)將基因組DNA用限制性內(nèi)切酶BcoDI消化,得到消化產(chǎn)物,將權(quán)利要求1或2中所述接頭A與所述消化產(chǎn)物連接,得到含有接頭A的連接產(chǎn)物;
2)將步驟1)得到的連接產(chǎn)物打碎為300-700bp的DNA片段,得到打碎產(chǎn)物;
3)對步驟2)得到的打碎產(chǎn)物依次進行末端補平、加dATP和連接權(quán)利要求1或2中所述接頭B,得到含有接頭B的連接產(chǎn)物;
4)對步驟3)得到的連接產(chǎn)物進行PCR擴增,得到擴增產(chǎn)物,用Illumina測序平臺對所述擴增產(chǎn)物進行測序;
5)進行生物信息分析后,確定遺傳標記。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法,其特征在于:所述基因組DNA為植物、動物或微生物DNA。
10.下述X1或X2的應用:
X1、權(quán)利要求1或2所述成套試劑或所述接頭A、或權(quán)利要求3所述成套接頭、或權(quán)利要求5或6所述系統(tǒng)在開發(fā)遺傳標記中的應用;
X2、權(quán)利要求1或2所述成套試劑或所述接頭A、或權(quán)利要求3所述成套接頭、或權(quán)利要求1或2中所述接頭A、或權(quán)利要求5或6所述系統(tǒng)、或權(quán)利要求7-9中任一所述方法在分子育種中的應用。