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用于克隆全長基因的成套試劑及方法與流程

文檔序號:11899185閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.用于克隆全長基因的成套試劑,由接頭A和通用引物組成;

所述接頭A是由正向鏈和反向鏈組成的接頭,所述接頭A的正向鏈為序列1所示的單鏈DNA,所述接頭A的反向連為為序列2所示的單鏈DNA,序列2與序列1的第22-37位反向互補;

所述通用引物為序列1的第1-26位所示的單鏈DNA。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的成套試劑,其特征在于:所述接頭A的反向鏈的5’末端被磷酸化修飾。

3.權(quán)利要求1或2所述接頭A或所述通用引物。

4.用于克隆全長基因的系統(tǒng),包括權(quán)利要求1或2所述成套試劑和用于克隆全長基因的其他試劑和/或儀器。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的系統(tǒng),其特征在于:所述用于克隆全長基因的其他試劑和/或儀器為提取RNA、合成cDNA第一鏈或第二鏈、DNA片段的連接、對含有粘性末端的DNA片段進(jìn)行末端補平、對DNA片段加dATP、DNA純化和/或PCR擴增所需的試劑和/或儀器。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的成套試劑、或權(quán)利要求4或5所述的系統(tǒng),其特征在于:所述基因的來源為植物、動物、微生物或病毒。

7.克隆目的基因的方法,包括如下1)-3):

1)以生物總RNA為模板獲得雙鏈cDNA;

2)對步驟1)的雙鏈cDNA依次進(jìn)行末端補平、加dATP和連接權(quán)利要求1或2中所述接頭A,得到含有接頭A的連接產(chǎn)物;

3)以步驟2)的連接產(chǎn)物為模板,用目的基因的特異引物和權(quán)利要求1所述通用引物進(jìn)行PCR擴增,得到目的基因。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于:所述1)包括如下11)和12):

11)以生物總RNA為模板進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,獲取第一鏈cDNA;

12)以步驟11)的第一鏈cDNA為模板合成第二鏈cDNA,得到雙鏈cDNA。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法,其特征在于:所述生物為植物、動物、微生物或病毒。

10.權(quán)利要求1或2所述成套試劑、所述接頭A或所述通用引物、權(quán)利要求4或5所述系統(tǒng)在基因克隆中的應(yīng)用。

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