本發(fā)明制藥領(lǐng)域，涉及新的海洋天然產(chǎn)物環(huán)酯肽(即海洋天然產(chǎn)物L(fēng)argazole)的氟代類似物、其制備方法及含有該化合物的藥物或其組合物作為抗腫瘤治療劑的用途。

背景技術(shù)：

據(jù)資料顯示，癌癥從發(fā)現(xiàn)到今天，已成為繼心腦血管疾病之后的又一危害人類身體健康的重大疾病，從20世紀(jì)70年代以來，我國癌癥發(fā)病及死亡人數(shù)一直曾上升趨勢，預(yù)計(jì)到2020年腫瘤年發(fā)病人數(shù)更將高達(dá)300萬人次，而年死亡人數(shù)也會達(dá)到250萬人次，在我國城鎮(zhèn)居民中癌癥已占死因首位，因此，研究與發(fā)現(xiàn)低毒高效的腫瘤治療藥物，具有重要的商業(yè)價(jià)值。

國際上現(xiàn)已開發(fā)的抗腫瘤藥物眾多，在臨床上常用的抗腫瘤亦有80多種。隨著人們對腫瘤研究的不斷深入，使人們認(rèn)識到傳統(tǒng)的具有細(xì)胞毒性的化療藥物，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，也會對人體某些正常的組織、器官和細(xì)胞如骨髓、消化道、肝、腎等帶來更大的傷害，這些都極大的制約了這些傳統(tǒng)化療藥物的臨床應(yīng)用。目前新型抗腫瘤藥物的開發(fā)正在從傳統(tǒng)細(xì)胞毒藥物轉(zhuǎn)向針對癌癥細(xì)胞內(nèi)異常的信號系統(tǒng)靶點(diǎn)的特異性抗腫瘤藥物，即分子靶向治療藥。隨著對腫瘤信號網(wǎng)絡(luò)的不斷認(rèn)識，已開發(fā)出一些的分子靶向藥物，并進(jìn)入了臨床應(yīng)用，取得了顯著成績。其中，組蛋白去乙?；?Histone deacetylase，HDACs)對腫瘤細(xì)胞生長調(diào)控具有重要作用的一種蛋白。組蛋白乙酰化轉(zhuǎn)移酶(histone acetylases，HATs)和組蛋白去乙?；?histone deacetylases,HDACs)負(fù)責(zé)調(diào)控核心組蛋白乙?；腿ヒ阴；膭?dòng)態(tài)平衡，從而保證人體細(xì)胞的正常功能，不致發(fā)生癌變。但是，研究證實(shí)，在大多腫瘤細(xì)胞內(nèi)HDACs都呈現(xiàn)過度表達(dá)，而導(dǎo)致組蛋白呈現(xiàn)低乙酰化狀態(tài)，組蛋白乙酰化狀態(tài)的失衡與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有這密切關(guān)系，并且發(fā)現(xiàn)HDACs抑制劑主要通過阻滯細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制血 管新生、誘導(dǎo)自我吞噬、發(fā)揮協(xié)同作用等作用機(jī)制，可以達(dá)到治療癌癥的目的。

到目前為止己經(jīng)發(fā)現(xiàn)的HDACs抑制劑按結(jié)構(gòu)主要有以下幾種類型:1.短鏈脂肪酸類，包括丁酸、苯丁酸和異戊酸及其鹽類；2.羥肟酸類，包括trichostatin A(TSA)和伏利諾他(SAHA)及其衍生物CBHA和MM232等；3.不含環(huán)氧酮基的環(huán)四肽類結(jié)構(gòu)，包括FR90I228,apicidin和包含環(huán)氧酮基的環(huán)四肽類結(jié)構(gòu)，包括trapoxin B等；4.酰胺類，包括MS-275,CI-994和cso55等(如圖1所示)。

研究發(fā)現(xiàn)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中HDACs共有18個(gè)HDAC的亞型，根據(jù)與酵母菌HDAC序列的同源性，分為以下4大類：第I類HDAC家族包括HDAC1、HDAC2、HDAC3和HDAC8，與酵母菌Rpd3蛋白相似；第II類HDAC家族包括HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC9和HDAC10，與酵母菌Hda1蛋白相似；第III類HDAC家族與酵母菌的轉(zhuǎn)錄抑制因子Sir2序列相近；第IV類只有HDAC11一種；其中I、II和IV類的HDAC家族為Zn2+依賴型靶標(biāo)，而III類HDAC為保守的尼克酰胺腺嘌呤雙核苷酸(NAD+)依賴型靶標(biāo)。

研究顯示，目前的HDACs抑制劑大多數(shù)對于HDACs亞型的選擇性不理想，導(dǎo)致較多的潛在不良反應(yīng)逐漸暴露出來，如伏利諾他(SAHA)對HDAC1～HDAC9顯示的活性基本相當(dāng)，導(dǎo)致如紅細(xì)胞減少、血小板減少及心電圖異常等，這都極大的制約了它們的臨床療效。而隨著對HDAC與腫瘤發(fā)生、發(fā)展研究的不斷深入探討，特別是對HDACs各個(gè)亞型結(jié)構(gòu)和功能的不斷被揭示，單個(gè)亞 型或者是屬于同一類的多個(gè)亞型選擇性組蛋白去乙?；敢种苿┰诎l(fā)揮療效和減少副作用上更具優(yōu)勢。

目前已在臨床應(yīng)用的HDACs抑制劑藥物主要有：伏利諾他(vorinostat,SAHA)，它對HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC6、HDAC7、HDAC9和HDAC10都有較高的抑制活性，該化合物于2006年被美國FDA批準(zhǔn)用于治療皮膚T淋巴細(xì)胞瘤，而同類羥肟酸類HDACs抑制劑Belinostat也于2014年被美國FDA批準(zhǔn)臨床應(yīng)用；羅米地辛(romidepsin,FK-228)歸屬于第I型的選擇性HDAC抑制劑，對HDAC I型具有較好的選擇性抑制作用，它對于HDAC 2和HDAC 1的抑制活性要比對HDAC4和HDAC6抑制活性的要強(qiáng)，其結(jié)構(gòu)中的二硫鍵在體內(nèi)被還原成巰基后發(fā)揮于金屬離子的結(jié)合作用，于2010年被美國FDA批準(zhǔn)用于臨床治療的CTTL患者；西達(dá)苯胺，為酰胺類HDACs抑制劑于2015年1月在中國批準(zhǔn)上市，用于治療外周T細(xì)胞淋巴瘤(PTCL)。

海洋天然產(chǎn)物L(fēng)argazole是由佛羅里達(dá)州立大學(xué)的天然物質(zhì)研究院Hendrink Luesch等人從海洋藍(lán)藻Symploca spp.中首次分離得到的一個(gè)具有十六元環(huán)肽內(nèi)酯結(jié)構(gòu)天然產(chǎn)物，并證實(shí)其是一種強(qiáng)效的組蛋白去乙?；敢种苿?，尤其是對I型的組蛋白去乙?；妇哂袠O好的選擇性抑制作用，能夠有效地抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，臨床前的研究表明合適劑量的Largazole能夠選擇性地殺死腫瘤細(xì)胞而對正常細(xì)胞不產(chǎn)生影響(J.Am.Chem.Soc.2008,130,13506)，它與具有16元大環(huán)結(jié)構(gòu)的羅米地辛(romidepsin,FK-228)相似，水解它的硫酯側(cè)鏈能夠產(chǎn)生一個(gè)與FK228在體內(nèi)發(fā)揮藥物活性結(jié)構(gòu)相似的活化硫醇結(jié)構(gòu)，該活化硫醇可以協(xié)調(diào)到催化Zn2+的組蛋白去乙?；钢?Org.Lett.2010,12,1368)。

Largazole因其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)、良好的藥理活性以及特異的靶向性，其一經(jīng)發(fā)現(xiàn)報(bào)道，就掀起了對其進(jìn)行的結(jié)構(gòu)修飾的熱潮，到目前為止已有大量關(guān)于其合成改造和代謝活性的相關(guān)報(bào)道(Nat.Prod.Rep.2012,29,449)，同時(shí)，Largazole游離硫醇與HDAC8復(fù)合物的X-衍射晶體結(jié)構(gòu)也公開報(bào)道(J.Am.Chem.Soc.2011,133,12474)。但關(guān)于Largazole氟代類似物的研究尚未見報(bào)道，大量的新藥開發(fā)研究發(fā)現(xiàn)，在活性分子中引入F元素往往可以增加其活性及體內(nèi)代謝穩(wěn)定性，其原因在于：1.氟原子和氫原子的大小很接近，引入后分子大小和形狀幾乎沒有發(fā)生變化；2.氟原子的引入使非極性的碳碳雙鍵(C＝C)產(chǎn)生了極性；3.強(qiáng)負(fù)電性的F原子可以參與形成氫鍵；4.氟原子的引入可以產(chǎn)生強(qiáng)親脂性作用，尤其利于透過細(xì)胞膜；5.在雙鍵上引入一個(gè)F原子會比普通的C＝C雙鍵更穩(wěn)定，對酶的耐受性更強(qiáng)。因而在活性分子開發(fā)中，尤其是在烯烴雙鍵上引入氟原子，往往產(chǎn)生意想不到的效果。

盡管Largazole因已被證實(shí)是一個(gè)抗腫瘤治療劑，但進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)修飾以改善其抑制HDACs效果、降低其毒性和理化性質(zhì)仍是必要的?；诖耍旧暾埖陌l(fā)明人擬提供一種具有抗腫瘤作用的Largazole氟代類似物、其制備方法和含有該化合物的藥物或其組合物作為抗腫瘤治療劑的用途。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供新的海洋天然產(chǎn)物環(huán)酯肽(即海洋天然產(chǎn)物L(fēng)argazole)的氟代類似物、其制備方法及含有該化合物的藥物或其組合物作為抗腫瘤治療劑的用途。

本發(fā)明提供了一種由通式(I)表示的化合物或其鹽：

其中：

R¹選自H，R²，R²S，R²CO，R²NHCO，(R³O)2P(O)；

R²選自C₁-C₁₀的烷基，或者C₁-C₁₀的烷基鏈上碳原子可被1-5個(gè)氧原子代替；

R³選自氫，C₁-C₁₀的烷基，芳香基，其中C₁-C₁₀的烷基上可以連接著芳香基；或者R³也可選自C₁-C₁₀的烷基和芳基的組合，或者C₁-C₁₀的烷基和芳基成環(huán)的組合；

通式(I)的大環(huán)側(cè)鏈中含氟雙鍵可以是Z或E-式構(gòu)型；

通式(I)的大環(huán)的內(nèi)酯立體構(gòu)型可以是R或S-構(gòu)型。

另外，本發(fā)明還提供了通式(I)所述化合物的制備方法，按如下合成路線和步驟進(jìn)行：

第一步，制備化合物2，

干燥反應(yīng)瓶中加入化合物三苯甲硫醇和無水二氯甲烷，室溫?cái)嚢枞芙?，加入三乙胺后滴加丙烯醛，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1h(TLC跟蹤)，停止攪拌，旋干溶劑，得白色粗品，直接用于制備得化合物2；R_f＝0.13(PE:EA＝40:1).¹H-NMR(400MHz,CDCl3):δ9.56(brs,1H),7.23–7.43(m,15H),2.47(t,J＝7.0Hz,2H),2.37(t,J＝6.7Hz,2H).

第二步：化合物醛2與二溴氟乙酸乙酯在合適溶劑和反應(yīng)溫度條件下，通過 三苯基膦(PPh3)和二乙基鋅的作用，生成相應(yīng)的氟代烯烴類化合物3，以及制備相應(yīng)的E式或Z式異構(gòu)體3，所述的溶劑為四氫呋喃、乙醚等非質(zhì)子性有機(jī)溶劑，所述的反應(yīng)溫度為0-100℃；

第三步：氟代烯烴酯類化合物3，可以是E式和Z式異構(gòu)體的混合物，也可以是其中之一的異構(gòu)體，經(jīng)還原反應(yīng)制備相應(yīng)的氟代烯烴醛4，或者是相應(yīng)單一的E式或Z式異構(gòu)體，所述的還原反應(yīng)是指E式或Z式氟代烯烴酯類化合物3或者是二者的混合物，在合適溶劑和反應(yīng)溫度條件下，經(jīng)還原劑二異丁基氫化鋁還原，制備E式或Z式氟代烯烴醛4，或者制備二者的混合物、再經(jīng)分離純化制備E式或Z式氟代烯烴醛4；所述的溶劑為四氫呋喃、乙醚、二氯甲烷、甲苯等非質(zhì)子性有機(jī)溶劑，所述的反應(yīng)溫度為-78-100℃；

第四步：E式或Z式氟代烯烴醛4經(jīng)不對稱羥醛縮合反應(yīng)制備相應(yīng)的氟代烯烴醇5，所述的不對稱羥醛縮合反應(yīng)是指E式或Z式氟代烯烴醛4，在合適溶劑和反應(yīng)溫度條件下，經(jīng)四氯化鈦、DIPEA和帶有手性輔基的乙酰亞胺，制備E式或Z式氟代烯烴醇的R-5或S-5異構(gòu)體，其中所述的溶劑為四氫呋喃、乙醚、二氯甲烷等非質(zhì)子性有機(jī)溶劑，所述的反應(yīng)溫度為-100-50℃；

第五步：E式或Z式氟代烯烴、羥基為R-或S-構(gòu)型的醇5經(jīng)胺解反應(yīng)制備相應(yīng)的氟代烯烴醇6，所述的胺解反應(yīng)是指E式或Z式氟代烯烴、羥基為R-或S-構(gòu)型的醇5，在合適溶劑和反應(yīng)溫度條件下，經(jīng)DIPEA作用下與取代的噻唑胺類化合物或其復(fù)合鹽反應(yīng)，制備相應(yīng)構(gòu)型的氟代烯烴醇6，其中所述的溶劑為四氫呋喃、乙醚、二氯甲烷、DMF等非質(zhì)子性有機(jī)溶劑，所述的反應(yīng)溫度為-10-100℃；

第六步：E式或Z式氟代烯烴、羥基為R-或S-構(gòu)型的醇6經(jīng)縮合反應(yīng)制備相應(yīng)的含噻唑類雜環(huán)的氟代烯烴酯7，所述的縮合反應(yīng)是指E式或Z式氟代烯烴、羥基為R-或S-構(gòu)型的醇6，在合適溶劑和反應(yīng)溫度條件下，經(jīng)DIPEA、DMAP和2,4,6-三氯苯甲酰氯的作用下，與帶有保護(hù)基的纈氨酸反應(yīng)，制備相應(yīng)構(gòu)型的含噻唑類雜環(huán)的氟代烯烴酯7，其中所述的溶劑為四氫呋喃、乙醚、二氯甲烷、DMF等非質(zhì)子性有機(jī)溶劑，所述的反應(yīng)溫度為-10-100℃；

第七步：E式或Z式氟代烯烴、酯氧基為R-或S-構(gòu)型的酯7經(jīng)水解反應(yīng)、脫保護(hù)基反應(yīng)、分子內(nèi)縮合關(guān)環(huán)反應(yīng)制備相應(yīng)構(gòu)型的氟代烯烴取代的大環(huán)化合物 8；其中，

所述的水解反應(yīng)是指E式或Z式氟代烯烴且分子內(nèi)的酯氧基為R-或S-構(gòu)型的酯7，在堿性條件下發(fā)生選擇性的甲酯水解，經(jīng)中和獲得相應(yīng)中間體酸，所述的堿性條件是指用堿如KOH、NaOH、LiOH、Ba(OH)2或Bu3SnOH等，在極性溶劑如1,2-二氯乙烷、THF、1,4-二氧六環(huán)、DMF、DMSO、甲醇、乙醇、異丙醇、水等溶劑中或上述溶劑組合的混合溶劑中，所述的反應(yīng)條件包括反應(yīng)溫度，優(yōu)選的是反應(yīng)溫度為-10-100℃；

所述的脫保護(hù)基反應(yīng)是指E式或Z式氟代烯烴且分子內(nèi)的酯氧基為R-或S-構(gòu)型的酯7經(jīng)水解反應(yīng)獲得的相應(yīng)中間體酸，再經(jīng)脫保護(hù)基反應(yīng)制備相應(yīng)的含羧基的有機(jī)胺化合物，所述的脫保護(hù)基反應(yīng)是指相應(yīng)中間體酸用二級胺類化合物作有機(jī)堿如：二乙基胺、嗎啉、哌啶等，在有機(jī)溶劑如二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、THF、1,4-二氧六環(huán)、DMF、DMSO、甲醇、乙醇或異丙醇等溶劑中，控制反應(yīng)溫度如-10-100℃，可以將中間體中氨基保護(hù)基選擇性地脫除，制備相應(yīng)含羧基的胺類化合物；

所述的分子內(nèi)縮合關(guān)環(huán)反應(yīng)是指E式或Z式氟代烯烴且分子內(nèi)的酯氧基為R-或S-構(gòu)型的酯7經(jīng)水解反應(yīng)、脫保護(hù)基反應(yīng)制備的相應(yīng)含羧基的有機(jī)胺化合物，再經(jīng)分子內(nèi)縮合關(guān)環(huán)反應(yīng)制備相應(yīng)構(gòu)型的氟代烯烴取代的大環(huán)化合物8，所述的分子內(nèi)縮合關(guān)環(huán)反應(yīng)是指經(jīng)水解反應(yīng)、脫保護(hù)基反應(yīng)制得的含羧基的有機(jī)胺化合物在縮合劑存在下，所述的縮合劑如HATU、HOAT、HOBt、DIPEA或者前三者的任意組合，在合適的有機(jī)溶劑如：二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、THF、1,4-二氧六環(huán)、DMF、DMSO或乙腈等溶劑中，控制反應(yīng)溫度如-10-100℃，可以制備相應(yīng)構(gòu)型的氟代烯烴類的大環(huán)化合物8；

第八步：相應(yīng)構(gòu)型的氟代烯烴類的大環(huán)化合物8經(jīng)巰基保護(hù)基的脫除反應(yīng)、?；磻?yīng)制備Largazole的氟代烯烴類似物9：其中，

所述的巰基保護(hù)基的脫除反應(yīng)是指E式或Z式氟代烯烴且分子內(nèi)的酯氧基為R-或S-構(gòu)型的大環(huán)化合物8，在有機(jī)溶劑如二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、THF、1,4-二氧六環(huán)、DMF、DMSO或乙腈等溶劑中，在優(yōu)選的反應(yīng)溫度范圍內(nèi)如-10-100℃，經(jīng)三異丙基硅烷和三氟乙酸單獨(dú)或協(xié)同作用下，發(fā)生巰基保護(hù)基的脫除，獲 得游離的硫醇中間體；

所述的?；磻?yīng)是指E式或Z式氟代烯烴且分子內(nèi)的酯氧基為R-或S-構(gòu)型的大環(huán)化合物8，經(jīng)巰基保護(hù)基的脫除反應(yīng)制得游離的硫醇中間體，在有機(jī)溶劑如二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、THF、1,4-二氧六環(huán)、DMF、DMSO或乙腈等溶劑中，在優(yōu)選的反應(yīng)溫度范圍內(nèi)如-10-100℃，在堿的作用下，與?；噭┌l(fā)生?；磻?yīng)合成Largazole的氟代烯烴類似物，所述的堿包括無機(jī)堿或有機(jī)堿，如NaHCO3、KHCO3、K2CO3、Na2CO3、Cs2CO3，或三乙胺、二異丙基乙基胺、吡啶、DMAP等，所述的?；瘎┲傅氖荂1-10的烷基酰氯、芳基酰氯、C1-10烷氧基碳酰氯、C1-10烷胺基碳酰氯、芳基酰氯、芳基氧基碳酰氯、芳基胺基碳酰氯或二烷氧基磷酰氯。

本發(fā)明的上文所述中，涉及了有關(guān)官能團(tuán)、化學(xué)試劑或溶劑代號，參照國際通用命名規(guī)則或通用習(xí)慣，有關(guān)官能團(tuán)、化學(xué)試劑或溶劑代號定義如下：

Ac：Acetyl；

Bn：Benzyl；

Boc：tert-Butoxycarbonyl；

Cbz：Benzyloxycarbonyl；

DABALH：Diisobutylaluminium hydride；

DCE：Dichloromethane；

DCM：Dichloromethane；

DIPEA：Diisopropylethyamine；

DME：1,2-Ethanedioldimethylether；

DMAP：4-Dimethylamino pyridine；

DMF：N,N-Dimethylformamide；

DMP：Dess-Martin periodinane；

DMSO：Dimethylsulfoxide；

DPPA：Diphenylphosphonic azide；

DMPU：1,3-Dimethyl-3,4,5,6-tetrahydro-2(1H)-pyrimidinone；

EA：Ethyl Acetate；

EDCI：Dimethylaminopropyl-N’-enthylcarbodiimide hydrochloride；

Fmoc-Cl：9-Fluorenylmethylchloroformate；

Fmoc：9-Fluorenylmethylformyl；

HATU：2-(7-Aza-1H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium

Hexafluorophosphate；

HOAT：1-Hydroxy-7-azabenzotriazole；

HOBT：1-Hydroxybenzotriazole；

LDA：Lithium diisopropylamide；

MeCN：Acetonitrile；

NaHMDS：Sodiumbis(trimethylsilyl)amide；

Py：Pridine；

THF：Tetrahydrofuran；

TIPS：Triisopropylsilane；

TFA：Trifluoroacetic acid；

TMSOTf：Trimethylsilyltrifluoromethanesulfonate；

Tol：Toluene。

本發(fā)明還提供了所述的化合物和一種以上的輔藥組成的藥物成分，其中藥物成分中含有通式所述的化合物，進(jìn)一步，藥物成分用于抑制哺乳動(dòng)物細(xì)胞增殖，即給患有腫瘤的哺乳動(dòng)物服用治療有效劑量的通式所述的藥物，其中哺乳動(dòng)物患有的腫瘤包括實(shí)體瘤，癌，淋巴瘤，霍奇金病，腫瘤疾病，新生瘤疾病等。

本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，其含有治療有效劑量的本發(fā)明通式化合物或其鹽和藥學(xué)載體，及其在制備抗腫瘤藥物中的用途；換言之，本發(fā)明提供了含有效劑量的上述化合物的組合物，本發(fā)明的中通式(I)所示化合物的鹽可以是游離形式和酸式加成鹽或羧酸鹽的形式；其中，酸式加成鹽的例子包括無機(jī)酸鹽如：硫酸鹽、硝酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、磷酸鹽等，或者有機(jī)酸鹽如酒石酸鹽、乙酸鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、乳酸鹽等。

附圖說明

圖1為現(xiàn)有技術(shù)的HDACs抑制劑結(jié)構(gòu)式，其中，

主要有以下幾種類型:1.短鏈脂肪酸類，包括丁酸、苯丁酸和異戊酸及其鹽類；2.羥肟酸類，包括trichostatin A(TSA)和伏利諾他(SAHA)及其衍生物CBHA和MM232等；3.不含環(huán)氧酮基的環(huán)四肽類結(jié)構(gòu)，包括FR90I228,apicidin和包含環(huán)氧酮基的環(huán)四肽類結(jié)構(gòu)，包括trapoxin B等；4.酰胺類，包括MS-275,CI-994和cso55等。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例用于進(jìn)一步描述本發(fā)明，但這些實(shí)施例并非限制本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例1 17R-Z構(gòu)型的Largazole氟代類似物的合成

第一步 制備化合物2：

100ml干燥的反應(yīng)瓶中加入化合物三苯甲硫醇(1.28g,4.62mmol)和20ml的無水二氯甲烷，室溫?cái)嚢枞芙猓尤肴野?0.9ml,6.50mmol)，隨后滴加丙烯醛(0.43ml,6.50mmol)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1h(TLC跟蹤)。停止攪拌，旋干溶劑，得白色粗品，不做進(jìn)一步純化，直接用于化合物2的制備。R_f＝0.13(PE:EA＝40:1).¹H-NMR(400MHz,CDCl3):δ9.56(brs,1H),7.23–7.43(m,15H),2.47(t,J＝7.0Hz,2H),2.37(t,J＝6.7Hz,2H).

第二步 制備化合物3：

100ml干燥的反應(yīng)瓶中加入PPh₃(3.15g,12.0mmol)、二溴氟乙酸乙酯(0.83ml,6.0mmol)和30ml無水THF，室溫下攪拌溶解，快速滴入1.0M的二乙基鋅的己烷溶液(12.0ml,12.0mmol)，混合物攪拌10min后，快速加入溶有化合物2(1.0g,3.0mmol)，反應(yīng)過夜。加入10ml的無水乙醇淬滅，析出固體，攪拌10min后，減壓濃縮，加入100ml無水乙醚，室溫?cái)嚢?0min，經(jīng)硅藻土助濾，乙醚沖洗，濾液濃縮，殘留物硅膠柱層析(洗脫條件：PE/EA＝40：1)，得白色固體，其中E式結(jié)構(gòu)0.325g,收率26％；Z式結(jié)構(gòu)0.730g，收率58％。Z式結(jié)構(gòu)：

R_f＝0.35(PE/EA＝40:1).¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.40(m,6H),7.25(m,6H),7.18(m,3H),5.75(dt,J＝20.9,7.9Hz,1H),4.23(q,J＝7.1Hz,2H),2.56(m,2H),2.26(t,J＝7.2Hz,2H),1.29(t,J＝7.1Hz,3H).¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃):δ160.58(d,²J_C-F＝34.5Hz),147.91(d,¹J_C-F＝252Hz),144.65,129.48,127.81,126.60,121.24(d,²J_C-F＝19.6Hz),66.71,61.28,31.30,24.55(d,³J_C-F＝5.1Hz),14.00. ¹⁹F-NMR(376MHz,CDCl₃):δ-121.29(d,22.6Hz).ESI-MS(M/Z):443.6[M+Na]⁺.HRMS-ESI(M/Z):[M+Na]⁺Calcd.for C₂₆H₂₅FO₂SNa:443.1452,found:443.1452.E式結(jié)構(gòu)：

R_f＝0.27(PE/EA＝40:1).¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.41(m,6H),7.28(m,6H),7.22(m,3H),5.97(dt,J＝32.8,7.2Hz,1H),4.25(q,J＝7.1Hz,2H),2.25(m,4H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H).¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃):δ155.83(d,²J_C-F＝34.5Hz),143.62(d,¹J_C-F＝256.5Hz),139.93,124.82,123.19,121.99,113.57(d,²J_C-F F＝11.4Hz),62.15,56.85,25.79,18.90,9.39.¹⁹F-NMR(376MHz,CDCl₃):δ-128.95(d,J＝32.8Hz).ESI-MS(M/Z):443.6[M+Na]⁺.HRMS-ESI(M/Z):[M+Na]⁺Calcd.for C₂₆H₂₅FO₂SNa:443.1452,found:443.1454.

第三步 制備化合物4：

500ml干燥的反應(yīng)瓶中加入化合物Z-3(4.028g,9.60mmol)，氬氣保護(hù)下加入100ml的無水甲苯，攪拌溶解。冷卻至-78℃，滴加1.5M的二異丁基氫化鋁(22.0ml,33.5mmol)，滴加完畢后，保持該溫度反應(yīng)1h，小心加入50ml甲醇淬滅，恢復(fù)至室溫，加入100ml的飽和酒石酸鈉鉀，室溫?cái)嚢柽^夜。靜置分液，水相用EA提取(100ml×2)，合并有機(jī)相，飽和氯化鈉洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱層析(洗脫條件：PE/DCM/EA＝35：5：1)，得化合物Z-4，為白色固體2.74g，收率76％.R_f＝0.35(PE/DCM/EA＝35:5:1). ¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ9.13(d,J＝18.2Hz,1H),7.43(m,6H),7.27(m,9H),5.75(dt,J＝32.1,7.2Hz,1H),2.35(m,4H).¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d6):δ183.49(d,J＝24.9Hz),156.48(d,J＝261Hz),146.88,144.53,129.54,128.71(d,J＝10.2Hz),127.99(d,J＝10.1Hz),127.29,126.86,67.09,30.22,24.01. ¹⁹F-NMR(376MHz,CDCl₃):δ-132.15(dd,J＝32.1,18.2Hz).ESI-MS(M/Z):399.6[M+Na]⁺.HRMS-ESI(M/Z):[M+Na]⁺Calcd.for C₂₄H₂₁FOSNa:399.1189, found:399.1192.

第四步 制備化合物5：

250ml干燥的反應(yīng)瓶中加入化合物Z-4(1.12g,4.46mmol)，氬氣保護(hù)下加入無水二氯甲烷50ml，攪拌溶解。冰鹽浴下下滴加四氯化鈦(0.82ml,7.43mmol),攪拌反應(yīng)0.5h，成橘黃色懸濁液。冷卻至-40℃，滴加DIPEA(1.23ml,7.43mmol),并在該溫度下反應(yīng)2h；降至-90℃，緩慢滴加溶有化合物67(1.44g,3.71mmol)的無水二氯甲烷溶液約20ml，并保持該溫度反應(yīng)3h，加入20ml的飽和氯化銨溶液淬滅，恢復(fù)至室溫。加入20ml水，靜置分液，水相用二氯甲烷提取(20ml×3)，合并有機(jī)相，飽和氯化鈉洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱層析(洗脫條件：PE/EA＝8：1)，得兩個(gè)黃色Z-異構(gòu)體化合物R-5(1.027g,收率44％)和化合物S-5(0.956g,收率40％)。

化合物R-5：

R_f＝0.19(PE/EA＝4:1).¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.29(m,20H),5.33(m,1H),4.86(dd,J＝36.8,7.1Hz,1H),4.63(brs,1H),3.67(m,1H),3.47(dd,J＝17.9,8.8Hz,1H),3.36(dd,J＝11.2,7.2Hz,1H),3.21(m,1H),3.03(m,1H),2.95(d,J＝4.1Hz,1H),2.87(d,J＝11.6Hz,1H),2.19(m,4H).¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃):δ201.27,172.02,158.60(d,¹J_C-F＝257.2Hz),144.87,136.32,129.60,129.45,128.97,127.88,127.34,126.63,104.96(d,³J_C-F＝12.9Hz),68.32,66.63,42.81,36.79,32.18,31.52,22.72.¹⁹F-NMR(376MHz,CDCl₃):δ-129.15(dd,J＝32.1,18.2Hz).ESI-MS(M/Z):650.4[M+Na]⁺.HRMS-ESI(M/Z):[M+Na]⁺Calcd.for C₃₆H₃₄FNO₂S₃Na:650.1628,found:650.1621.

化合物S-5：

R_f＝0.3(PE/EA＝4：1).¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.30(m,20H),5.37(m,1H),4.85(dt,J＝37.2,7.0Hz,1H),4.56(brs,1H),3.75(dd,J＝17.5,9.2Hz,1H),3.41(m,2H),3.21(m,2H),3.03(dd,J＝13.2,10.4Hz,1H), 2.89(d,J＝11.6Hz,1H),2.19(m,4H).

第五步 制備化合物R-6：

50ml干燥的反應(yīng)瓶中加入如上反應(yīng)式所述的化合物取代的噻唑胺(0.603g,1.636mmol)、DMAP(0.520g,4.253mmol)和20ml的無水二氯甲烷，室溫下攪拌混勻5min。滴加溶有化合物R-5(1.027g,1.636mmol)的無水二氯甲烷溶液約10ml，室溫下攪拌反應(yīng)1h(TLC跟蹤)。停止攪拌，濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱層析(洗脫條件：PE/EA＝1:2)，得白色固體0.759g，收率65％。R_f＝0.26(PE/EA＝1：1).¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.89(s,1H),4.79(m,2H),4.68(m,2H),4.49(brs,1H),3.87(d,J＝11.4Hz,1H),3.79(s,3H),3.27(d,J＝11.4Hz,1H),2.56(m,2H),2.15(m,5H),1.63(s,3H).¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d6):δ173.62,171.49,167.63,162.78,158.92(d,J＝257.4Hz),148.20,144.83,129.58,127.91,126.67,122.56,104.67(d,J＝12.3Hz),84.49,67.09,66.87,66.62,53.01,41.54,40.80,39.72,31.49,24.02,22.70(d,J＝3.5Hz). ¹⁹F-NMR(376MHz,CDCl₃):δ-124.95(dd,J＝36.2,20.3Hz).ESI-MS(M/Z):712.4[M+Na]⁺.HRMS-ESI(M/Z):[M+Na]⁺Calcd.for C₃₆H₃₆FN₃O₄S₃Na:712.1744,found:712.1748.

第六步 制備化合物R-7：

50ml干燥的反應(yīng)瓶中加入Fmoc-Val-OH(0.165g,0.487mmol)、催化量的DMAP (0.005g,0.041mmol)和15ml的無水二氯甲烷，攪拌溶解，降至0℃，滴加2,4,6-三氯苯甲酰氯(0.089ml,0.568mmol)和DIPEA(0.110ml,0.650mmol)，保持該溫度反應(yīng)1h。滴加溶有化合物R-6(0.280g,0.406mmol)的無水THF溶液5ml，恢復(fù)至室溫反應(yīng)6h,停止攪拌，濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱層析(洗脫條件：PE/EA＝1：1)，得白色固體0.266g，收率65％(86％brsm)。R_f＝0.26(PE/EA＝1：1).¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.89(s,1H),7.75(d,J＝7.2Hz,2H),7.57(d,J＝3.6Hz,2H),7.38(m,8H),7.34–7.24(m,8H),7.20(t,J＝7.1Hz,3H),6.64(brs,1H),5.67–5.79(m,1H),5.25(brs,1H),4.92(dt,J＝35.9,7.0Hz,1H),4.68(m,2H),4.37(m,2H),4.20(t,J＝6.9Hz,1H),4.16(dd,J＝7.6,5.8Hz,1H),3.85(d,J＝11.3Hz,1H),3.78(s,3H),3.24(d,J＝11.3Hz,1H),2.70(m,2H),2.01–2.24(m,5H),1.63(s,3H),0.88(t,J＝6.5Hz,3H),0.83(d,J＝6.6Hz,3H).¹³C-NMR(150MHz,DMSO-d6):δ173.62,170.92,168.24,167.81,162.77,156.29,153.75,148.35,144.78,143.79(d,J＝19.3Hz),141.33,129.58,127.91,127.82(d,J＝24.5Hz),127.12,126.68,125.08,122.33,120.00,109.63(d,J＝12.0Hz),84.56,69.62(d,J＝28.5Hz),67.08,66.71,59.17,52.91,47.19,41.53,41.09,38.02,31.59,31.10(d,J＝10.2Hz),23.98,22.89,22.66,18.81,17.71. ¹⁹F-NMR(376MHz,CDCl₃):δ-125.77(dd,J＝35.4,21.1Hz).ESI-MS(M/Z):1011.2[M+H]⁺.HRMS-ESI(M/Z):[M+Na]⁺Calcd.for C₅₆H₅₅FN₄O₇S₃Na:1033.3109,found:1033.3102.

第七步 制備化合物R-8：

50ml干燥的反應(yīng)瓶中加入化合物R-7(0.204g,0.202mmol)和15ml的THF/H₂O＝4：1的體系，攪拌溶解，降至0℃，滴加0.81ml的0.50M的LiOH,保持該溫度反應(yīng)2h,TLC顯示原料未有明顯消失，補(bǔ)加1.0M的LiOH的溶液0.40ml，0.5h后原料消失(TLC檢測)。加入5ml的1.0M的HCl溶液酸化，EA提取(20ml×3),飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，殘留物硅膠柱層析(洗脫條件：EA:MEOH:AcOH＝20:1:1),得白色固體0.186g,將其溶于15ml 的無水二氯甲烷中，室溫?cái)嚢柘拢尤攵惏?1.50ml,14.561mmol)，30℃下反應(yīng)5h(TLC跟蹤)，旋干溶劑，加入10ml無水甲苯，再次旋干，反復(fù)兩次，以除去多余的二異胺。將其與HATU(0.146g,0.385mmol)和HOAT(0.053g,0.389mmol)，于氬氣保護(hù)下溶于200ml的無水二氯甲烷中，滴加DIPEA(0.13ml,0.786mmol)，室溫下反應(yīng)30h。停止攪拌，濃縮，殘留物過硅膠短柱(洗脫條件：先PE/EA＝2：1，后EA沖洗)，得固化油狀物34mg，三步總收率31％。R_f＝0.15(PE/EA＝2:3).¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.76(s,1H),7.29(m,15H),7.13(d,J＝9.2Hz,1H),6.41(d,J＝7.6Hz,1H),5.60(dd,J＝20.2,10.5Hz,1H),5.29(dd,J＝17.5,9.7Hz,1H),5.00(m,1H),4.62(d,J＝7.6Hz,1H),4.20(d,J＝18.1Hz,1H),4.04(d,J＝11.0Hz,1H),3.28(d,J＝11.3Hz,1H),3.12(m,1H),2.70(d,J＝16.6Hz,1H),2.15(m,5H),1.85(s,3H),0.68(d,J＝6.4Hz,3H),0.49(d,J＝6.6Hz,3H). ¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d6):δ173.60,168.94,168.76,167.89,164.58,155.25(d,256Hz),147.49,129.58,127.91,126.65,124.33,109.26(d,J＝12.4Hz),84.39,69.95(d,J＝29.6Hz),57.58,43.32,41.13,38.63,37.49,34.23,31.12,29.72,24.13,22.88,18.84,16.57,14.22.¹⁹F-NMR(376MHz,CDCl₃):δ-124.95(dd,J＝36.2,20.3Hz).ESI-MS(M/Z):779.4[M+Na]⁺.HRMS-ESI(M/Z):[M+Na]⁺Calcd.for C₄₀H₄₁FN₄O₄S₃Na:779.2166,found:779.2171.

第8步 制備化合物R-9：

25ml干燥的反應(yīng)瓶中加入化合物R-8(39mg,0.052mmol)，氬氣保護(hù)下5ml的無水二氯甲烷，攪拌溶解。0℃下滴加入三異丙基硅烷(21ul,0.103mmol),緊跟著滴加入三氟乙酸(0.23ml,3.091mmol)。升至室溫反應(yīng)1h，旋干溶劑，粗品快速硅膠柱層析(EA)，得無色透明油狀硫醇化合物18mg，收率67％。R_f＝0.42(PE/EA＝2：3).¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.78(s,1H),7.14(d,J＝9.5Hz,1H),6.51(d,J＝7.3Hz,1H),5.67(dd,J＝20.2,11.0Hz,1H),5.32(dd,J＝17.5,9.7Hz,2H),5.15(dt,J＝36.5,7.5Hz,1H),4.65(dd,J＝9.4,3.2Hz,1H),4.26(dd,J＝17.5,2.8Hz,1H),4.05(d,J＝11.4Hz,1H),3.30(d,1H),3.17(m,2H),2.76(d,J＝ 16.4Hz,1H),2.56(m,3H),2.42(m,2H),2.15(m,5H),1.87(s,3H),0.69(d,J＝6.9Hz,3H),0.50(d,J＝6.8Hz,3H).

將上述所得硫醇溶于10ml的無水二氯甲烷中，0℃下滴加入Et₃N(10ul,0.070mmol)和辛酰氯(30ul,0.175mmol)，恢復(fù)至室溫。在室溫下攪拌反應(yīng)4h,加入2ml甲醇淬滅反應(yīng)，濃縮，加入50ml的乙酸乙酯溶解，飽和碳酸氫鈉洗(10ml×1)，水洗(10ml×1),飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，殘留物硅膠柱層析(洗脫條件：EA)，得R-9白色無定型固體13mg,收率61％.R_f＝0.42(DCM/EA＝3:1).¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.78(s,1H),7.13(d,J＝9.5Hz,1H),6.42(d,J＝7.8Hz,1H),5.65(m,1H),5.32(dd,J＝17.5,9.8Hz,1H),5.10(dt,J＝7.2,2Hz,1H),4.65(dd,J＝9.3,2.9Hz,1H),4.26(dd,J＝17.5,2.8Hz,1H),4.05(d,J＝11.3Hz,1H),3.28(d,J＝11.3Hz,1H),3.16(dd,J＝16.4,11.4Hz,1H),2.90(t,J＝7.1Hz,2H),2.74(d,J＝14.8Hz,1H),2.54(t,J＝7.5Hz,2H),2.37(m,2H),2.13(m,1H),1.88(s,3H),1.65(m,2H),1.28(m,8H),0.88(m,3H),0.68(d,J＝6.7Hz,3H),0.49(d,J＝6.7Hz,3H). ¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃):δ199.35(s),173.64,168.96,168.84,167.90,164.62,155.25(d,256Hz),147.49,124.41,108.71(d,J＝12.6Hz),84.40,69.95(d,J＝29.6Hz),57.54,44.17,43.35,41.17,37.47,34.33,31.63,28.92,27.9,25.64,24.13,23.86,22.61,18.86,16.51,14.09.¹⁹F-NMR(376MHz,CDCl₃):δ-124.76(dd,J＝35.9,20.9Hz).ESI-MS(M/Z):663.3[M+Na]⁺.HRMS-ESI(M/Z):[M+Na]⁺Calcd.for C₄₀H₄₁FN₄O₄S₃Na:663.2115,found:663.2139.。

實(shí)施例2 合成17S-Z構(gòu)型的Largazole氟代類似物

按實(shí)施例1的方法和實(shí)驗(yàn)步驟制備合成17S-Z構(gòu)型的Largazole氟代類似物，其中，在第五步中，用相反構(gòu)型的手性輔基原料制備相應(yīng)構(gòu)型的手性醇S-5，或在第五步中分離純化的S-5異構(gòu)體，其他實(shí)驗(yàn)方法相同；所制得的17S-Z構(gòu)型的Largazole氟代類似物:HRMS-ESI(M/Z):[M+Na]⁺Calcd.for C₄₀H₄₁FN₄O₄S₃Na:663.2115,found:663.2139。

實(shí)施例3

本發(fā)明所述部分化合物用SRB法對EBC-1(人肺癌細(xì)胞株，c-Met基因擴(kuò)增)、EBC-1/SR(人肺癌細(xì)胞株，c-Met基因擴(kuò)增，SGX-523耐藥株)和NCI-H3122(人肺癌細(xì)胞株，EML4-ALK(variant1))，分別考察其對細(xì)胞增殖(72小時(shí))能力的影響，并與和臨床使用的藥物SAHA作比較。

其包括步驟：處于對數(shù)生長期的細(xì)胞按合適密度接種至96孔培養(yǎng)板，每孔90μL，培養(yǎng)過夜后，加入不同濃度的藥物作用72h，每個(gè)濃度設(shè)三復(fù)孔，并設(shè)相應(yīng)濃度的溶媒對照及無細(xì)胞調(diào)零孔。作用結(jié)束后，貼壁細(xì)胞傾去培養(yǎng)液，加入10％(w/v)三氯乙酸(100μL/孔)于4℃固定1h，隨后用蒸餾水沖洗五次，室溫干燥后，每孔加入SRB溶液(Sigma，St.Louis，MO，U.S.A)(4mg/mL，溶于1％冰乙酸)100μL，室溫下孵育染色15min后，用1％冰乙酸沖洗五次洗去未結(jié)合的SRB，室溫干燥后，每孔加入10mM Tris溶液100μL，SpectraMax 190酶標(biāo)儀測定560nm波長下的光密度(OD值)；

結(jié)果顯示，本發(fā)明所述的化合物具有比臨床使用的藥物SAHA具有更強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用；待測化合物對EBC-1細(xì)胞增殖的IC50值如表1所示，對EBC-1/SR細(xì)胞增殖的IC50值如表2所示，化合物對NCI-H3122細(xì)胞增殖的IC50值如表3所示。

表1.化合物對EBC-1細(xì)胞的增殖抑制作用

表2.化合物對EBC-1/SR細(xì)胞的增殖抑制率(％)

表3.化合物對NCI-H3122細(xì)胞的增殖抑制率(％)