本發(fā)明屬于抗腫瘤藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及3-(4,5-取代氨基嘧啶)苯基衍生物及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
在傳統(tǒng)的癌癥治療過程中，化療為主要的治療手段；化療藥物非特異性地阻斷細(xì)胞分裂從而使細(xì)胞死亡，它們在殺死腫瘤細(xì)胞的同時，也大大破壞了人體正常細(xì)胞的生長，帶來許多不良反應(yīng)。很多人因?yàn)閾?dān)憂化療的嚴(yán)重副作用而使心情悲觀甚至放棄治療，再加上化療藥物的耐藥性，使非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的化療不容樂觀，而延長化療的周期只增加了毒副作用，并沒有增加療效。同時非小細(xì)胞肺癌的癌細(xì)胞對化療、常規(guī)化療不敏感，總緩解率也只有25％左右；由于這些原因的限制，非小細(xì)胞肺癌患者五年生存率低于20％。
在50％-80％的NSCLC病人中，他們的表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)都過度表達(dá)，從而引起癌變。靶向EGFR藥物主要有兩類：一類是作用于受體胞內(nèi)區(qū)的小分子酪氨酸激酶抑制劑(TKI)；另一類是作用于受體胞外區(qū)的單克隆抗體(MAb)。已經(jīng)應(yīng)用于臨床的第一代EGFR抑制劑如易瑞沙、埃羅替尼、拉帕替尼等，它們對于NSCLC肺癌的治療取得了很大的成功，提高了非小細(xì)胞肺癌患者五年的生存率。同時，與化療相比，它們的優(yōu)勢在于不會產(chǎn)生骨髓抑制，惡心和神經(jīng)毒性等副作用；但它們在單獨(dú)治療時藥效較低，且有非常明顯的皮疹和腹瀉等副作用，而且在使用一年后，患者對藥物出現(xiàn)耐藥性。研究認(rèn)為EGFR基因T790M位點(diǎn)的突變是此類藥物耐藥的主要誘因，有臨床案例數(shù)據(jù)顯示，大約有50％的患者獲得性耐藥都源于T790M位點(diǎn)的突變所致。進(jìn)一步研究證實(shí)，由于EGFR基因T790M突變，即編碼的蘇氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榧琢虬彼?，從而造成了空間位阻阻礙了抑制劑與ATP結(jié)合區(qū)結(jié)合最終導(dǎo)致了抑制劑活性喪失。目前也有研究顯示T790M位點(diǎn)的突變不是直接影響抑制劑與EGFR的親和性，而是突變導(dǎo)致EGFR與ATP的親和性大大增加，使得抑制劑與EGFR的親和性相對的大大降低了(抑制劑與ATP是競爭性結(jié)合)。第二代抑制劑如阿法替尼、Dacomitinib，它們優(yōu)于第一代的特征在于對EGFR的識別性增加，可以辨別腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞，這樣副作用就會減 少。但這些分子對EGFR的T790M突變體的選擇性差，造成藥物臨床耐受劑量較低，在其最大耐受劑量(MTD)下，藥物無法在體內(nèi)達(dá)到其有效濃度而使得對多數(shù)耐藥病人無效。
總之，目前的EGFR-TKI仍不能解決藥物耐藥性所引起的臨床需求，而且現(xiàn)有的藥物多是以喹唑啉或者喹啉胺類為基本母核的EGFR可逆或不可逆抑制劑，其對野生型細(xì)胞的選擇性差帶來的毒副作用也是不可避免的。因此，臨床上迫切需要新類型，尤其是新穎骨架的化合物來解決耐藥性、選擇性差等問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一類3-(4,5-取代氨基嘧啶)苯基衍生物。
本發(fā)明的另一目的是提供一類上述化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的可以通過以下措施達(dá)到：
本發(fā)明的3-(4,5-取代氨基嘧啶)苯基衍生物為具有式(I)結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，
其中，
R1選自
X為-CH2、O或-NR4，
R4為氫或C1～4烷基，
n為1、2或3，
R2選自如下基團(tuán)：
R3選自氫、鹵素、C1～4烷基、C1～4氧代烷基、C1～4鹵代烷基或氰基。
在一種優(yōu)選方案中，X為-CH2、-N-CH3或-N-C2H5，n為1或2。
在一種更優(yōu)選方案中，X為-CH2或-N-CH3，n為2。
在一種優(yōu)選方案中，R3為氫、鹵素或C1～4鹵代烷基。
在一種更優(yōu)選方案中，R3為氫、氟、氯、溴、-CH3或-C2H5。
在一種優(yōu)選方案中，R2選自如下基團(tuán)：
本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中一些具體化合物選自：
具有通式(I)的化合物制備路線如下所示：
上述制備路線的具體步驟如下：
步驟1：以二甲醚(DME)為溶劑，化合物II與2,4-二氯嘧啶在三氯化鋁等路易斯酸的存在下，通過親核取代反應(yīng)得到III。
步驟2：中間體III與4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺在對甲苯磺酸作用下得到IV。
步驟3：以1,4-二氧六環(huán)為溶劑，中間體IV和有機(jī)胺R2在DIPEA的作用下反應(yīng)得到中間體V。
步驟4：以甲醇或乙醇作為溶劑，以Pd/C為還原劑，將中間體V還原為中間體VI。
步驟5：以THF/H2O為溶劑，中間體VI與氯丙酰氯反應(yīng)得到中間產(chǎn)物，不分離，直接加氫氧化鈉繼續(xù)反應(yīng)得到最終產(chǎn)品化合物I。
本發(fā)明還提供一種藥物組合物，其包括上述的具有式(I)結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及藥學(xué)上可接受的輔料。
本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可應(yīng)用于制備治療癌癥藥物方面。本發(fā)明的化合物或其鹽可通過某些突變形式的表皮生長因子受體(例如L858R激活突變體、Exon19缺失激活突變體和T790M抗性突變體)而用于疾病或病況的治療或預(yù)防?？梢杂行б种贫喾N腫瘤細(xì)胞的生長，并對EGFR、Her2家族其它蛋白酶產(chǎn)生抑制作用，可用于制備抗腫瘤藥物。本發(fā)明還涉及包含所述化合物及其鹽特別是有用的這些化合物和鹽的多晶型的藥物組合物、可用于制造所述化合物的中間體以及利用所述化合物及其鹽治療各種腫瘤疾病。
本發(fā)明的一個方面提供式(Ⅰ)的化合物，其抑制一種或多種EGFR的激活或抗性突變，例如L858R激活突變體、Exon19缺失EGFR激活突變體、T790M抗性突變體。有利地，這種化合物可用于對基于EGFR抑制劑的現(xiàn)有療法已產(chǎn)生或者有風(fēng)險產(chǎn)生一定程度的抗性的患者的癌癥治療。
在本發(fā)明的一個方面，提供式(Ⅰ)化合物，其對激活或抗性突變體形式的EGFR顯示比野生型的EGFR更高的抑制。由于與野生型的EGFR抑制相關(guān)的毒性降低，因而預(yù)期這種化合物可能更適于用作治療劑，尤其適用于癌癥治療。
下列是本說明書中所使用術(shù)語的定義。除非另外指出，本文提供的基團(tuán)或術(shù)語的最初定義單獨(dú)或作為其它基團(tuán)的一部分應(yīng)用于本說明書中。
術(shù)語“烷基”是指直鏈或支鏈烷烴基，包含1-12個碳原子，尤其指1-4個碳原子。典型的“烷基”包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基等等。
“取代烷基”是指烷基中的一個或多個位置被取代，尤其是1-4個取代基，可在任何位置上取代。典型的取代包括但不限于一個或多個以下基團(tuán)：鹵素(例如，單鹵素取代基或多鹵素取代基)、三氟甲基、三氟甲氧基、環(huán)烷基、ORa、S(＝O)Ra、S(＝O)2Ra、S(＝O)2ORa,、NRbRc、S(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORa、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、 NRdC(＝O)ORa、NRaC(＝O)NRbRc、NRaS(＝O)2NRbRc、NRdC(＝O)Ra。其中在此出現(xiàn)的Ra、Rd可以獨(dú)立表示氫、1-4個碳原子的烷基、3-8個碳原子的環(huán)烷基、雜環(huán)；Rb和Rc可以獨(dú)立表示氫、1-4個碳原子的烷基、3-8個碳原子的環(huán)烷基、雜環(huán)，或者說Rb和Rc與N原子一起可以形成雜環(huán)；上述典型的取代基，如烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)可以任選取代。
術(shù)語“R2末端雜原子一起形成取代的單環(huán)、螺環(huán)或橋環(huán)”，是指R2通過碳原子、氮原子、氧原子或者硫原子的組合連接成為飽和或部分飽和的單環(huán)、螺環(huán)或橋環(huán)等。
本發(fā)明中的化合物可能形成的鹽也是屬于本發(fā)明的范圍。除非另有說明，本發(fā)明中的化合物被理解為包括其鹽類。在此使用的術(shù)語“鹽”，指用無機(jī)或有機(jī)酸和堿形成酸式或堿式的鹽。此外，當(dāng)本發(fā)明中的化合物含一個堿性片段時，它包括但不限于吡啶或咪唑，含一個酸性片段時，包括但不限于羧酸，可能形成的兩性離子(“內(nèi)鹽”)包含在術(shù)語“鹽”含的范圍內(nèi)。藥學(xué)上可接受的(即無毒，生理可接受的)鹽是首選，雖然其他鹽類也有用，例如可以用在制備過程中的分離或純化步驟。本發(fā)明的化合物可能形成鹽，例如，通式(I)的化合物與一定量如等當(dāng)量的酸或堿反應(yīng)，在介質(zhì)中鹽析出來，或在水溶液中冷凍干燥得來。本發(fā)明中的化合物含有的堿性片段，包括但不限于胺或吡啶或咪唑環(huán)，可能會和有機(jī)或無機(jī)酸形成鹽?？梢猿甥}的典型的酸包括醋酸鹽(如用醋酸或三鹵代醋酸，如三氟乙酸)、己二酸鹽、藻朊酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二甘醇酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙烷磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、羥基乙磺酸鹽(如，2-羥基乙磺酸鹽)、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、萘磺酸鹽(如，2-萘磺酸鹽)、煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、苯丙酸鹽(如3-苯丙酸鹽)、磷酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽，水楊酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽(如與硫酸形成的)、磺酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對甲苯磺酸鹽、十二烷酸鹽等等。
本發(fā)明的化合物含有的酸性片段，包括但不限于羧酸，可能會和各種有機(jī)或無機(jī)堿形成鹽。典型的堿形成的鹽包括銨鹽、堿金屬鹽如鈉、鋰、鉀鹽，堿土金屬鹽如鈣、鎂鹽，和有機(jī)堿形成的鹽(如有機(jī)胺形成有機(jī)胺鹽)，如芐星、二環(huán)已基胺、海巴胺(與N,N-二(去氫樅基)乙二胺形成的鹽)、N-甲基-D-葡糖胺、N-甲基-D-葡糖酰胺、叔丁基胺，以及和氨基酸如精氨酸、賴氨酸等等形成的鹽。堿性含氮基團(tuán)可以與鹵化物季銨鹽，如小分子烷基鹵化物(如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物及碘化物)，二烷基硫酸鹽(如，硫酸二甲酯、二乙酯，二丁酯和二戊酯)，長鏈鹵化物(如癸基、十二烷基、十 四烷基和十四烷基的氯化物、溴化物及碘化物)，芳烷基鹵化物(如芐基和苯基溴化物)等等。
本發(fā)明中的化合物、鹽或溶劑化物，可能存在的互變異構(gòu)形式(例如酰胺和亞胺醚)。所有這些互變異構(gòu)體都是本發(fā)明的一部分。
所有化合物的立體異構(gòu)體(例如，那些由于對各種取代可能存在的不對稱碳原子)，包括其對映體形式和非對映形式，都屬于本發(fā)明的設(shè)想范圍。本發(fā)明中的化合物獨(dú)立的立體異構(gòu)體可能不與其他異構(gòu)體同時存在(例如，作為一個純的或者實(shí)質(zhì)上是純的光學(xué)異構(gòu)體具有特殊的活性)，或者也可能是混合物，如消旋體，或與所有其他立體異構(gòu)體或其中的一部分形成的混合物。本發(fā)明的手性中心有S或R兩種構(gòu)型，由理論與應(yīng)用化學(xué)國際聯(lián)合會(IUPAC)1974年建議定義。外消旋形式可通過物理方法解決，例如分步結(jié)晶，或通過衍生為非對映異構(gòu)體分離結(jié)晶，或通過手性柱色譜法分離。單個的光學(xué)異構(gòu)體可通過合適的方法由外消旋體得到，包括但不限于傳統(tǒng)的方法，例如與光學(xué)活性酸成鹽后再結(jié)晶。
本發(fā)明的化合物所有的構(gòu)型異構(gòu)體都在涵蓋的范圍之內(nèi)，無論是混合物、純的或非常純的形式。在本發(fā)明化合物的定義包含順式(Z)和反式(E)兩種烯烴異構(gòu)體，以及碳環(huán)和雜環(huán)的順式和反式異構(gòu)體。
本發(fā)明中的化合物，依次通過制備、分離純化獲得的該化合物其重量含量等于或大于90％，例如，等于或大于95％，等于或大于99％(“非常純”的化合物)，在正文描述列出。此處這種“非常純”本發(fā)明的化合物也作為本發(fā)明的一部分。
在整個說明書中，基團(tuán)和取代基可以被選擇以提供穩(wěn)定的片段和化合物。
特定官能團(tuán)和化學(xué)術(shù)語定義都詳細(xì)介紹如下。對本發(fā)明來說，化學(xué)元素與Periodic Table of the Elements,CAS version,Handbook of Chemistry and Physics,75th Ed.中定義的一致。特定官能團(tuán)的定義也在其中描述。此外，有機(jī)化學(xué)的基本原則以及特定官能團(tuán)和反應(yīng)性在“Organic Chemistry”，Thomas Sorrell,University Science Books,Sausalito:1999也有說明，其全部內(nèi)容納入?yún)⒖嘉墨I(xiàn)之列。
如果要設(shè)計(jì)一個本發(fā)明的化合物特定的對映體的合成，它可以不對稱合成制備，或用手性輔劑衍生化，將所產(chǎn)生的非對映混合物分離，再除去手性輔劑而得到純的對映體。另外，如果分子中含有一個堿性官能團(tuán)，如氨基酸，或酸性官能團(tuán)，如羧基，可以用合適的光學(xué)活性的酸或堿的與之形成非對映異構(gòu)體鹽，再通過分離結(jié)晶或色譜等常規(guī)手段分離，然后就得到了純的對映體。
如本文所述，本發(fā)明中的化合物可與任何數(shù)量取代基或官能團(tuán)取而擴(kuò)大其包涵范圍。通常，術(shù)語“取代”不論在術(shù)語“可選”前面或后面出現(xiàn)，在本發(fā)明配方中包括取代基的通式，是指用指定結(jié)構(gòu)取代基，代替氫自由基。當(dāng)特定結(jié)構(gòu)中的多個在位置被多個特定的取代基取代時，取代基每一個位置可以是相同或不同。本文中所使用的術(shù)語“取代”包括所有允許有機(jī)化合物取代。從廣義上講，允許的取代基包括非環(huán)狀的、環(huán)狀的、支鏈的非支鏈的、碳環(huán)的和雜環(huán)的，芳環(huán)的和非芳環(huán)的有機(jī)化合物。在本發(fā)明中，如雜原子氮可以有氫取代基或任何允許的上文所述的有機(jī)化合物來補(bǔ)充其價態(tài)。此外，本發(fā)明是無意以任何方式限制允許取代有機(jī)化合物。本發(fā)明認(rèn)為取代基和可變基團(tuán)的組合在以穩(wěn)定化合物形式在疾病的治療上是很好的，例如傳染病或增生性疾病。此處術(shù)語“穩(wěn)定”是指具有穩(wěn)定的化合物，在足夠長的時間內(nèi)檢測足以維持化合物結(jié)構(gòu)的完整性，最好是在足夠長的時間內(nèi)都在效，本文在此用于上述目的。
本發(fā)明還公開了所述通式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明所述通式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其前藥分子可以用于治療或控制非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、肺腺癌、肺鱗癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮膚癌、上皮細(xì)胞癌、胃腸間質(zhì)瘤、白血病、組織細(xì)胞性淋巴癌、鼻咽癌等過度增值性疾病。
本發(fā)明通式(I)的化合物可以與已知的治療或改進(jìn)相似病狀的其他藥物聯(lián)用。聯(lián)合給藥時，原來藥物的給藥方式和劑量保持不變，而同時或隨后服用式(I)的化合物。當(dāng)式(I)化合物與其它一種或幾種藥物同時服用時，優(yōu)選使用同時含有一種或幾種已知藥物和式(I)化合物的藥用組合物。藥物聯(lián)用也包括在重疊的時間段服用式(I)化合物與其它一種或幾種已知藥物。當(dāng)式(I)化合物與其它一種或幾種藥物進(jìn)行藥物聯(lián)用時，式(I)化合物或已知藥物的劑量可能比它們單獨(dú)用藥時的劑量低?？梢耘c式(I)化合物進(jìn)行藥物聯(lián)用的藥物或活性成分包括但不局限于以下物質(zhì)：
雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)劑、視網(wǎng)膜受體調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞毒素/細(xì)胞抑制劑、抗增殖劑、蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、HIV蛋白激酶抑制劑、逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、血管生成抑制劑、細(xì)胞增殖及生存信號抑制劑、干擾細(xì)胞周期關(guān)卡的藥物和細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑，細(xì)胞毒類藥物、酪氨酸蛋白抑制劑、EGFR抑制劑、VEGFR抑制劑、絲氨酸/蘇氨酸蛋白抑制劑、Bcr-Abl抑制劑，c-Kit抑制劑、Met抑制劑、Raf抑制劑、MEK抑制劑、MMP抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、組氨酸去乙?；敢种苿?、蛋白體酶 抑制劑、CDK抑制劑、Bcl-2家族蛋白抑制劑、MDM2家族蛋白抑制劑、IAP家族蛋白抑制劑、STAT家族蛋白抑制劑、PI3K抑制劑、ATK抑制劑、整聯(lián)蛋白阻滯劑、干擾素、白介素-12、COX-2抑制劑、P53、P53激活劑、VEGF抗體和EGF抗體等。
在一個實(shí)施方案中，可以與式(I)化合物進(jìn)行藥物聯(lián)用的藥物或活性成分包括但不局限于以下物質(zhì)：阿地白介素、阿侖膦酸、干擾素、阿曲諾英、別嘌醇、別嘌醇鈉、帕洛諾司瓊鹽酸鹽、六甲蜜胺、氨基格魯米特、安磷汀、安柔比星、安丫啶、阿納托唑、多拉司瓊、aranesp、arglabin、三氧化二砷、阿諾新、5-氮胞苷、硫唑嘌呤、卡介苗或tice卡介苗、貝他定、醋酸倍他米松、倍他米松磷酸鈉抑制劑、貝沙羅汀、硫酸博來霉素、溴尿甘、硼替佐米、卡菲左米、白消安、降鈣素、阿來佐單抗注射劑、卡培他濱、卡鉑、康士得、cefesone、西莫白介素、柔紅霉素、苯丁酸氮芥、順鉑、克拉屈濱、氯屈磷酸、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、達(dá)卡巴嗪、放線菌素D、柔紅霉素脂質(zhì)體、地塞米松、磷酸地塞米松、戊酸雌二醇、地尼白介素2、狄波美、地洛瑞林、地拉佐生、乙烯雌酚、大扶康、多西他奇、去氧氟尿苷、阿霉素、屈大麻酚、欽-166-殼聚糖復(fù)合物、eligrand、拉布立酶、鹽酸表柔比星、阿瑞吡坦、表阿霉素、阿法依伯汀、紅細(xì)胞生成素、依鉑、左旋咪唑片、雌二醇抑制劑、17-立酶雌二醇、雌莫司汀磷酸鈉、雌炔醇、氨磷汀、羥磷酸、凡畢復(fù)、依托泊甙、法倔唑、他莫西芬制劑、非格司亭、非那司提、非雷司替、氟尿苷、氟康唑、氟達(dá)拉濱、5-氟脫氧尿嘧啶核苷一磷酸鹽、5-氟尿嘧啶、氟甲睪酮、氟他胺、福麥斯坦、1-嘧啶、阿糖呋喃糖胞噻啶-5呋喃硬質(zhì)酰磷酸酯、福莫司汀、氟維司瓊、丙種球蛋白、吉西他濱、吉妥單抗、甲磺酸伊馬替尼、卡氮芥糯米紙膠囊、戈舍林瑞、鹽酸拉格尼西隴、組胺瑞林、和美新、氫化可的松、赤型-羥基壬基腺嘌呤、羥基脲、替坦異貝莫單抗、伊達(dá)比星、異環(huán)磷酰胺、干擾素α、干擾素α干擾、干擾素α干擾素、干擾素α干擾素、干擾素α干擾素、干擾素α干擾素、干擾素干、干擾素γ干擾素、白細(xì)胞介素-2，內(nèi)含子A、易瑞沙、依立替康、凱特瑞、硫酸香菇多糖、來曲唑、甲酰四氫葉酸、亮丙瑞林、亮丙瑞林醋酸鹽、左旋四咪唑、左旋亞葉酸鈣鹽、左甲狀腺素鈉、左甲狀腺素鈉制劑、洛莫司汀、氯尼達(dá)明、屈大麻酚、氮芥、甲鈷胺、甲羥孕酮醋酸酯、醋酸甲地孕酮、美法侖，酯化雌激素、6-巰基嘌呤、美司鈉、氨甲喋呤、氨基乙酰丙酸甲酯、來替福新、美滿霉素、絲裂霉素C、米托坦、米托蔥醌、曲洛司坦、檸檬酸阿霉素脂質(zhì)體、奈達(dá)鉑、聚乙二醇化非格司亭、奧普瑞白介素、neupogen、尼魯米特、三苯氧胺、NSC-631570、重組人白細(xì)胞介素1-組、奧曲肽、鹽酸奧丹西隆、去氫氫化可的松口服溶液劑、奧沙利鉑、紫杉醇、潑尼松磷酸鈉制劑、培門冬酶、派羅欣、噴司他丁、溶鏈菌制劑、鹽酸匹魯卡品、毗柔比 星、普卡霉素、卟吩姆鈉、潑尼莫司汀、司替潑尼松龍、潑尼松、倍美力、丙卡巴臍、重組人類紅細(xì)胞生成素、雷提曲賽、利比、依替磷酸錸-186、美羅華、力度伸-美、羅莫肽、鹽酸毛果蕓香堿片劑、奧曲肽、沙莫司亭、司莫司汀、西佐喃、索布佐生、唬鈉甲強(qiáng)龍、帕福斯酸、干細(xì)胞治療、鏈佐星、氯化鍶-89、左旋甲狀腺素鈉、他莫昔芬、坦舒洛辛、他索那明、tastolactone、泰索帝、替西硫津、替莫唑胺、替尼泊苷、丙酸睪酮、硫鳥嘌呤、噻替哌、促甲狀腺激素、替魯磷酸、拓?fù)涮婵?、托瑞米芬、托西莫單抗、曲妥珠單抗、曲奧舒凡、維A酸、甲胺碟呤片劑、三甲基密胺、三甲曲沙、乙酸曲普瑞林、雙羥萘酸曲普瑞林、優(yōu)福啶、尿苷、戊柔比星、維司力農(nóng)、長春堿、長春新堿、長春酰胺、長春瑞濱、維魯利秦、右旋丙亞胺、凈司他丁斯酯、樞復(fù)寧、紫杉醇蛋白穩(wěn)定制劑、aco lbifene/干擾素γ擾素、affinitak、氨基碟呤、阿佐昔芬、asoprisnil、阿他美坦、BAY43-9006、阿瓦斯丁、CCI-779、CDC-501、西樂葆、西妥昔單抗、克拉那托、環(huán)丙孕酮醋酸酯、地西他濱、DN-101/阿霉素-MTC、dSLIM、度他雄胺、edotecarin、依氟鳥氨酸、依喜替康、芬維A胺、組胺二鹽酸鹽、組胺瑞林水凝膠植入物、鈥-166DOTMP、伊班磷酸，干擾素γ、內(nèi)含子PEG、ixabepilone、匙孔形血藍(lán)蛋白、L-651582、蘭樂肽、拉索昔芬、libra、lonafamib、米潑昔芬、米諾屈酸酯、MS-209、脂質(zhì)體MEP-PE、MX-6、那法瑞林、奈莫柔比星、新伐司他、諾拉曲特、奧利默森、onco-TCS、osidem、紫杉醇聚谷氨酸酯、帛米酸鈉、PN-401、OS-21、夸西洋、R-1549、雷洛昔芬、豹蛙酶、13-順維A酸、沙鉑、西奧骨化醇、T-138067、tarceva、二十二碳六烯酸紫杉醇、胸腺素α、嘎唑呋林、tipifarnib、替拉孔明、TLK-286、托瑞米芬、反式MID-lo7R、伐司樸達(dá)、伐普肽、vatalanob、維替泊芬、長春氟寧、Z-100和唑來磷酸或他們的組合。
本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包括所述式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其前藥分子，以及溶劑化物或藥學(xué)上可接受的載體。該藥物組合物用于治療或控制非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、肺腺癌、肺鱗癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮膚癌、上皮細(xì)胞癌、胃腸間質(zhì)瘤、白血病、組織細(xì)胞性淋巴癌、鼻咽癌等過度增值性疾病。
這里所用的短語“藥學(xué)上可接受的輔料或載體”是指藥學(xué)接受的材料、成份或介質(zhì)，如液體或固體填料、稀釋劑、輔料、溶劑或封裝材料，包括從一個器官或身體的某部分到另一個器官或身體的某部分?jǐn)y帶或運(yùn)輸主要藥學(xué)試劑。每個載體必須是“可以接受”，能兼容其他形式的藥物成份而對病人不造成傷害。一些可作為藥學(xué)上可以接受的載體的例子包括：糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖糖；淀粉，如小麥淀粉和馬鈴薯淀粉淀粉；纖維素及其 衍生物，如鈉羧甲基纖維素、乙基纖維素、醋酸纖維素，粉狀西黃蓍膠、麥芽、明膠、滑石粉；輔料，如可可黃油和栓劑蠟；油，如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和豆油；甘醇，如丁二醇；多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑，如氫氧化鎂和氫氧化鋁；海藻酸；無熱原水；生理鹽水；林格氏液；乙醇；磷酸鹽緩沖液，以及其他無毒的應(yīng)用在藥物制劑的可兼容物質(zhì)。
潤濕劑，乳化劑和潤滑劑，如十二烷基硫酸鈉、硬脂酸鎂、聚乙烯氧化物與聚丁烯氧化物的共聚物，以及著色劑、脫模劑、涂層劑、甜味劑、香料和薰香劑、防腐劑和抗氧化劑也可存在于所述藥物組合物中。
本發(fā)明的藥物配方包括那些合適的口腔、鼻腔、外用(包括口腔和舌下)、直腸、陰道和靜脈治療。該配方可以方便地成為單元劑型，并可由藥學(xué)上任何已知的方法制備。活性成份的劑量可以與一個載體材料相結(jié)合產(chǎn)生單一的劑型，會因受體的治療方式、特定服用模式的不同而不同。有效成份的劑量可與載體材料相結(jié)合產(chǎn)生單一的劑型，一般將作為該化合物產(chǎn)生治療的劑量。一般來說，100％之外，這一劑量的活性成份介于約1％-99％之間，最好是從約5％-70％左右，最優(yōu)是約10％-30％左右。
本發(fā)明中制備這些配方或化學(xué)成份的方法包括化合物進(jìn)入并結(jié)合一個或多個載體和輔劑成份的步驟。在一般情況下，配方制備成均勻且能密切地與本發(fā)明中的載體結(jié)合，如液體載體、固體細(xì)末載體、或兩者兼而有之。然后，如有必要塑造成產(chǎn)品。
本發(fā)明的適合口服的制劑可以有以下的形式，如膠囊、扁囊劑、丸劑、片劑、含片(通常是蔗糖和金合歡或西黃蓍膠，有一定的味道)、粉劑、顆粒劑，或作為一個溶液或懸浮在水中的非水性液體，或作為油包水或水包油的乳狀液體，或作為酏劑或糖漿，或粒狀(使用諸如明膠和甘油，蔗糖和金合歡的惰性基質(zhì))和/或漱口水之類，每個都包含本發(fā)明化合物作為活性成份的一個預(yù)定劑量。本發(fā)明化合物也可作為大藥丸，膏劑或粘貼膏藥。
在發(fā)明的口服固體制劑(膠囊、片劑、丸劑、糖衣丸、粉末、顆粒等)，其有效成份與一個或多個藥學(xué)上可接受的載體混合，如檸檬酸鈉或磷酸氫鈣，和/或任何以下內(nèi)容：填料或填充劑，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇；和/或硅酸，例如粘合劑、羧甲基纖維素鈉、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮，蔗糖和/或阿拉伯樹膠，保濕劑，如甘油；崩解劑，如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸鹽、碳酸鈉、乙醇和淀粉鈉；解緩凝劑，如石蠟，吸收促進(jìn)劑，如季銨鹽化合物；潤濕劑，如十六醇，甘油單硬脂酸酯和聚環(huán)氧乙烷，聚氧化共聚物；吸收劑，如高嶺土粘土，膨潤土，潤滑劑，如滑石 粉，硬脂酸鈣，硬脂酸鎂，固體聚乙二醇，十二烷基硫酸鈉及其混合物和著色劑。在膠囊、片劑、丸劑的情況下，藥物組合可能還包括緩釋劑。相似的固體類型成份可使用輔料成為軟填充和硬填充膠囊，如乳糖或牛奶糖，以及超高分子量聚乙烯乙二醇之類的填充物。
片劑可以選擇一個或多個輔助成份壓縮或成型。壓縮片劑可用粘結(jié)劑制備(如明膠或羥基丁基甲基纖維素)，潤滑油，惰性稀釋劑，保鮮劑，崩解劑(如乙醇或淀粉鈉交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)，表面活性或分散劑。模型片劑可能通過粉末狀化合物與惰性液體稀釋液的混合物，在一個合適的注塑機(jī)上的注塑而成。
活性成分可以用上述的輔料微膠囊化。片劑以及本發(fā)明的其他固體制劑的藥物組合，如糖衣丸，膠囊劑，丸劑，顆粒劑，可以選擇地用涂層和外殼制備或塑形，如腸溶涂層，以及已知的其他制藥形式的涂層。也可能提供緩慢或控制釋放的活性成份的制劑，例如，羥基丁基甲基纖維素在不同的情況下提供所需的釋放曲線，其他聚合物基質(zhì)，脂質(zhì)體和/或微纖維素。他們可能可以消毒，例如，通過一個過濾細(xì)菌擋過濾器，或合并殺菌試劑和無菌的固體成份，它們可溶于無菌水中，或一些無菌可注射介質(zhì)中。這些成份也可能含有乳濁劑的成份，或者緩慢釋放的活性物質(zhì)的成份，或優(yōu)先在胃腸道的某些部分形成一種延遲的方式。嵌入成份可以使用的物質(zhì)包括聚合物和蠟?；钚猿煞忠部梢圆捎靡粋€或多個輔料制備成微膠囊形式。
對本發(fā)明的化合物口服液劑型包括藥學(xué)上可接受的乳液，微乳液，溶液，懸浮液，糖漿和酏劑。除了活性成分，劑型的液體可能含有藥學(xué)上常用的惰性稀釋劑，例如水或其他溶劑，溶解試劑和乳化劑，如乙醇，異丁醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苯甲醇，苯甲酸芐酯，丁烯乙二醇，1,3-丁二醇，油(特別是棉籽油，花生油，玉米胚芽油，橄欖油，蓖麻油，芝麻油)，甘油，四氫呋喃醇，聚乙二醇和脂肪酸酯類山梨醇及其混合物。此外，環(huán)糊精，如羥丁基-beta-環(huán)糊精，也可用于溶解的化合物。
除了惰性稀釋劑，口服成份還可以包括如潤濕劑，乳化和懸浮劑，甜味劑，香精，色素，保鮮劑和防腐劑。
除了活性化合物，懸浮液可能含有懸浮劑，例如異硬脂酸乙酯，聚氧乙烯山梨醇和山梨醇酯，微晶纖維素，鋁金屬氫氧化物，膨潤土，瓊脂和西黃蓍膠及其混合物。
本發(fā)明治療直腸或陰道藥物組合物配方可以是栓劑，它可以由一個或多個發(fā)明的化合物混合與一個或多個合適的無刺激性賦形劑或載體，例如，可可脂，聚乙二醇或水楊酸，并在室溫下是固體，但體溫的液體，因此，將融化在直腸或陰道腔和釋放活性藥劑的發(fā)明。
本發(fā)明的配方是適于治療陰道類疾病，包括含有藥學(xué)中已知載體如子宮套，棉球，膏 劑，凝膠，膏狀，泡沫或噴霧制劑。
對于本發(fā)明化合物的局部或透皮給藥劑型包括粉劑，噴霧劑，軟膏，油膏，面霜，乳液，凝膠，溶液，膏藥和吸入劑。在活性化合物無菌條件下與藥學(xué)接受的載體，及任何防腐劑，緩沖劑，或可能需要混合。
除了本發(fā)明中的活性化合物外，藥膏，油膏，軟膏和凝膠中可能包含如動物和植物脂肪的輔料，油，蠟，石蠟，淀粉，西黃蓍膠，纖維素衍生物，聚乙二醇，有機(jī)硅，有機(jī)膨潤土活性化合物，硅酸，滑石粉，氧化鋅，或它們的混合物。
除了本發(fā)明中的活性化合物外，粉末和噴劑可以包含的輔料如乳糖，滑石，硅酸，氫氧化鋁，鈣硅酸鹽和聚酰胺粉或這些物質(zhì)的混合物。噴劑可能添加常用的，如氟氯烴和揮發(fā)性無取代的碳?xì)浠衔铮缍⊥楹投∠?/p>
本發(fā)明中化合物的貼劑對藥物在身體中可控制的分布有額外的好處。這種劑型可通過溶解或分散在緩沖介質(zhì)中的藥劑而形成。吸收促進(jìn)劑也可用于增加對皮膚本發(fā)明中的藥劑的通量。這種變化率可以通過任何一方提供的速率控制膜或分散在聚合物基體或凝膠化合物得到控制。
眼科制劑，眼藥膏，粉末，溶液等等，也屬于本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
本發(fā)明合適的一個或多個化合物的藥物組合在腸外治療中包括與一個或多個藥學(xué)上可接受的無菌生理水溶液或非水溶液，分散劑，懸浮劑或乳液，或無菌粉末。它們可能重組為無菌注射或優(yōu)先使用的分散劑，可能含有抗氧化劑，緩沖器，抑菌劑，能使制劑與預(yù)期接受人的血液或懸浮劑或增稠劑等滲溶合。
在某些情況下，為了延長藥效，可以延緩藥物從皮下或肌肉注射的吸收。這可以通過一個具有結(jié)晶或無定形物質(zhì)的不良的水溶解度的懸濁液來完成。對藥物的吸收率則取決于其溶解速率，同時可能要取決于晶粒尺寸和晶型。另外，延遲一個腸外治療劑型的吸收是通過溶解或懸浮在油介質(zhì)中藥物來實(shí)現(xiàn)的。其中儲藏式注射策略包括使用聚乙烯氧化物‐聚丁烯氧化物，其中使用的介質(zhì)在室溫是流動，在體溫時凝固。
儲藏式注射劑型是由主體化合物在生物可降解的聚合物，如聚膠酯‐聚乙醇酸膠酯下形成微膠囊而制成的。根據(jù)藥物與聚合物的比例，和特殊的聚合物的性質(zhì)，藥物釋放率是可以控制的。其他生物降解聚合物聚的例子包括多聚原酸酯和多聚酸酐。儲藏式注射劑型還可以通過將藥物包埋在脂質(zhì)體或微乳液而制備，這與人體組織是相容的。
當(dāng)本發(fā)明的化合物作為藥劑給人類和動物進(jìn)行治療時，它們可以本身或作為藥物組合物而給藥。例如，包含0.1％-99.5％(優(yōu)選是0.5％-90％)的活性成分和藥學(xué)上可接受的 載體。
本發(fā)明中的化合物和藥物組合物可以應(yīng)用于組合療法，即化合物和藥物組合物可同時前或后，一個或多個所需的藥物使用的治療或醫(yī)療程序。這種應(yīng)用在組合規(guī)則的特定的組合療法(治療或程序)將考慮到實(shí)現(xiàn)所需的治療兼容性和/或程序和理想的治療效果。此療法的應(yīng)用對相同的疾病可實(shí)現(xiàn)所需要的效果(例如，本發(fā)明的化合物可能與另一個抗HCV試劑同時起作用)，或者有可能達(dá)到不同的效果(如控制任何不良影響)。
本發(fā)明的化合物可通過靜脈注射，肌肉注射，腹腔注射，皮下注射，外用，口服，或其他可接受的辦法來治療疾病。這些化合物可用于治療關(guān)節(jié)炎的條件哺乳動物(例如，人類，家畜和家養(yǎng)動物)，鳥類，蜥蜴，和任何可以兼容這些化合物其他生物。
本發(fā)明還提供了藥品包裝或套件，包括一個或多個的包裝，其中含有對本發(fā)明中一個或多個成分的藥物組合?？蛇x的此類包裝以公告的形式由政府機(jī)構(gòu)規(guī)范生產(chǎn)，以生產(chǎn)法規(guī)中許可的公開方法使用或銷售藥品或生物制品，使用或銷售對人的治療制劑。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：
1、本發(fā)明涉及的通式(I)化合物或其藥學(xué)上接受的鹽，可以選擇性地抑制EGFR(T790M，L858R)雙突變型以及EGFR(L858R)單突變型的激酶活性。該類化合物是一類新穎的能夠克服現(xiàn)有EGFR-TKI的耐藥性并具有選擇性的蛋白酶抑制劑。
2、本發(fā)明涉及的通式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，可以抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長，并對EGFR，Her家族其它蛋白酶產(chǎn)生抑制作用，可用于有效抑制制備抗腫瘤藥物，并可以克服現(xiàn)有藥物吉非替尼、厄洛替尼等誘發(fā)的耐藥。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的，本申請所涉及的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽可用于制備治療人類及其他哺乳動物的腫瘤等過渡增殖性疾病。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明的一些方面和實(shí)施方案可以通過以下的具體實(shí)施例加以進(jìn)一步說明。本發(fā)明中涵蓋的化合物可以通過已知的傳統(tǒng)技術(shù)合成。這些化合物可以從方便可用的起始原料便利地合成。以下是本發(fā)明合成的化合物一般合成方案。此處公開的這些方案是描述性的，并不表示限制本領(lǐng)域的技術(shù)人員使用其它可能的方法合成化合物。各種方法都是本領(lǐng)域中的常規(guī)技術(shù)。另外，不同的合成步驟可以應(yīng)用在不同的方案中合成目標(biāo)化合物。在此引用的所有文獻(xiàn)都以參考文獻(xiàn)的方式并入本文之中。
下面有代表性的例子旨在幫助闡述本發(fā)明，而不是有意也不應(yīng)該被解釋為限制本發(fā)明的范圍。事實(shí)上，除了那些出現(xiàn)和描述于此的以外，本發(fā)明中文件的全部內(nèi)容，包括依據(jù) 此處引用的科技文獻(xiàn)和專利的例子，以及由此產(chǎn)生的各種修飾和許多進(jìn)一步變化對本專業(yè)內(nèi)一般技術(shù)人員都是清晰明白的。還應(yīng)當(dāng)明白，這些參考文獻(xiàn)的引用有助于陳述本文內(nèi)容。下面的例子包含了重要的補(bǔ)充信息、范例和指導(dǎo)，可適應(yīng)于本發(fā)明中各種變化及類似情況。
實(shí)施例1
合成路線如下：
化合物FHND004‐03‐1
取150mL封管，分別加入二甲胺(40％in water)(8.87g，78.76mmol)，THF(80mL)，然后將1‐二苯甲基‐3‐甲烷磺酸氮雜環(huán)丁烷(25g，78.76mmol)回流攪拌8h，TLC監(jiān)測無原料剩余，減壓蒸餾除去溶劑得到(FHND004‐03‐1)為無色液體10g。
化合物FHND004‐03‐2
取250mL單口燒瓶，加入(FHND004‐03‐1)(10g，37.54mmol)，Pd/C(1.05g，7.5mmol)，MeOH(100mL)，抽真空換氫氣3次，室溫下攪拌過夜，TLC監(jiān)測已無原料剩余，過濾除掉Pd/C，減壓蒸餾除去溶劑得到黃綠色固體，柱層析純化，洗脫劑(DCM：MeOH：NH3H2O＝10:1:0.1)洗脫，得到黃色液體產(chǎn)物(FHND004‐03‐2)3.5g。
化合物FHND004‐03‐4
取120mL封管，加入(FHND004‐03‐3)(2g，4.77mmol)，N,N‐二甲基氮雜環(huán)丁烷‐3‐胺(716.64mg，7.15mmol)，DIPEA(1.23g，9.54mmol)，DMA(5mL)。然后 封管140℃反應(yīng)6h，TLC監(jiān)測無原料剩余，將反應(yīng)液冷卻至室溫，加入20mL水，析出固體，過濾，然后加入將濾餅加入2mL甲醇打漿洗滌，過濾、烘干得到紅色固體產(chǎn)物(FHND004‐03‐4)1.76g。
化合物FHND004‐03‐5
取250mL單口燒瓶，加入(FHND004‐03‐4)(1.76g，3.52mmol)，Pd/C(372.47mg，0.35mmol)，MeOH(30mL)，抽真空換氫氣3次，室溫下攪拌過夜，TLC監(jiān)測已無原料剩余，過濾除掉Pd/C，減壓蒸餾除去溶劑得到黃綠色固體，柱層析純化，洗脫劑(DCM：MeOH：NH3H2O＝20:1:0.1)洗脫，得到黃綠色固體產(chǎn)物(FHND004‐03‐5)1.5g。
化合物FHND004‐03
取20mL單口燒瓶，加入(FHND004‐03‐5)(1g，2.13mmol)，THF(20mL)和水(2.0mL)，然后將3‐氯丙酰氯(270.45mg，2.13mmol)在0℃下慢慢滴加到反應(yīng)液中，并在室溫下繼續(xù)攪拌30mins，TLC監(jiān)測無原料剩余，然后加入NaOH(340.8mg，8.52mmol)，升溫到65℃攪拌過夜，HPLC監(jiān)測無原料剩余，減壓蒸餾除去溶劑，柱層析純化，洗脫劑(DCM：MeOH：NH3H2O＝40:1:0.1)洗脫得到淡黃色固體產(chǎn)品(FHND004‐03)500mg。
HNMR:9.01(1H,s)8.57(1H,s)8.33‐8.34(1H,d)7.89‐7.91(1H,d)7.48(1H,s)7.37(1H,s)7.14‐7.16(1H,t)7.11‐7.13(1H,d)6.98‐7.00(1H,d)6.30‐6.43(3H,m)5.75‐5.78(1H,d)4.30‐4.33(2H,t)3.98‐4.02(2H,t)3.90(3H,s)3.50‐3.53(2H,t)3.02‐3.04(2H,t)2.90‐2.94(1H,m)2.59‐2.61(2H,d)2.24‐2.28(8H,m)。
實(shí)施例2
合成路線如下：
化合物FHND004‐04‐1
取50mL單口燒瓶，分別加入TEA(3.99g，39.47mmol)，DCM(20mL)，1‐二苯甲基‐3‐羥甲基‐氮雜環(huán)丁烷(5g，19.73mmol)然后將MsCl(4.52g,39.47mmol)在0℃下慢慢滴加到反應(yīng)液中，并在室溫下繼續(xù)攪拌2h，TLC監(jiān)測無原料剩余，減壓蒸餾除去溶劑得到(FHND004‐04‐1)為無色液體8g。
化合物FHND004‐04‐2
取50mL封管，加入(FHND004‐04‐1)(8g，24.14mmol)，二甲胺(40％in water)(10.88g，96.55mmol)，THF(10mL)，回流攪拌6h，TLC監(jiān)測已無原料剩余，減壓蒸餾除去溶劑得到黃綠色液體，柱層析純化，洗脫劑(DCM：MeOH：NH3H2O＝10:1:0.1)洗脫，得到黃色液體產(chǎn)物(FHND004‐04‐2)6g。
化合物FHND004‐04‐3
取50mL單口燒瓶，加入(FHND004‐04‐2)(6g，21.4mmol)，(3.03g，2.14mmol)，MeOH(80mL)，抽真空換氫氣3次，室溫下攪拌過夜，TLC監(jiān)測已無原料剩余，過濾除掉Pd(OH)2/C，減壓蒸餾除去溶劑得到黃綠色固體，柱層析純化，洗脫劑(DCM：MeOH：NH3H2O＝5:1:0.1)洗脫，得到淡黃色液體產(chǎn)物(FHND004‐04‐3)2.2g。
化合物FHND004‐04‐5
取120mL封管，加入(FHND004‐04‐4)(2g，4.77mmol)，F(xiàn)HND004‐04‐3(816.79mg，7.15mmol)，DIPEA(1.23g，9.54mmol)，DMA(5mL)。然后封管140℃反應(yīng)6h，TLC監(jiān)測無原料剩余，將反應(yīng)液冷卻至室溫，加入20mL水，析出固體，過濾，然后加入將濾餅加入2mL甲醇打漿洗滌，過濾、烘干得到紅色固體產(chǎn)物(FHND004‐04‐5)1.9g。
化合物FHND004‐04‐6
取50mL單口燒瓶，加入(FHND004‐04‐5)(1.9g，3.7mmol)，Pd/C(300mg，0.37mmol)，MeOH(50mL)，抽真空換氫氣3次，室溫下攪拌過夜，TLC監(jiān)測已無原料剩余，過濾除掉Pd/C，減壓蒸餾除去溶劑得到黃綠色固體，柱層析純化，洗脫劑(DCM：MeOH：NH3H2O＝10:1:0.1)洗脫，得到黃色液體產(chǎn)物(FHND004‐04‐5)1.1g。
化合物FHND004‐04
取20mL單口燒瓶，加入(FHND004‐04‐5)(1.1g，2.27mmol)，THF(30mL)和水(3.0mL)，然后將3‐氯丙酰氯(288.22mg，2.27mmol)在0℃下慢慢滴加到反應(yīng)液中，并在室溫下繼續(xù)攪拌30mins，TLC監(jiān)測無原料剩余，然后加入NaOH(363.93mg，9.1mmol)，升溫到65℃攪拌過夜，HPLC監(jiān)測無原料剩余，減壓蒸餾除去溶劑，柱層析純化，洗脫劑(DCM：MeOH：NH3H2O＝40:1:0.1)洗脫得到淡黃色固體產(chǎn)品600mg。
HNMR：9.20(1H,s)8.69(1H,s)8.34‐8.35(1H,d)7.87‐7.89(1H,d)7.57(1H,s)7.53(1H,s)7.13‐7.19(2H,m)6.98‐7.00(1H,d)6.38‐6.45(3H,m)5.77‐5.79(1H,d)4.32‐4.35(2H,t)3.87‐3.91(5H,m)3.61‐3.65(2H,t)3.12‐3.15(1H,m)3.02‐3.05(2H,t)2.18‐2.29(10H,m)。
實(shí)施例3
合成路線如下：
化合物FHND004‐05‐2
取120mL封管，加入(FHND004‐05‐1)(2.0g，4.77mmol)，1‐甲基哌嗪(477.16mg，4.77mmol)，DIPEA(0.92g，7.16mmol)，DMA(10mL)。然后封管140℃反應(yīng)6h，TLC監(jiān)測無原料剩余，將反應(yīng)液冷卻至室溫，加入20mL水，析出固體，過濾，然后加入將濾餅加入2mL甲醇打漿洗滌，過濾、烘干得到紅色固體產(chǎn)物(FHND004‐05‐2)1.9g。
化合物FHND004‐05‐3
取50mL單口燒瓶，加入(FHND004‐05‐2)(1.9g，3.80mmol)，Pd/C(404.75mg，0.38mmol)，MeOH(20mL)，抽真空換氫氣3次，室溫下攪拌過夜，TLC監(jiān)測已無原料剩余，過濾除掉Pd/C，減壓蒸餾除去溶劑得到黃綠色固體，柱層析純化，洗脫劑(DCM：MeOH：NH3H2O＝10:1:0.1)洗脫，得到棕黃色固體產(chǎn)物(FHND004‐05‐3)1.1g。
化合物FHND004‐05
取20mL單口燒瓶，加入(FHND004‐05‐3)(500mg，1.06mmol)，THF(30mL)和水(3.0mL)，然后將3‐氯丙酰氯(135.20mg，1.06mmol)在0℃下慢慢滴加到反應(yīng)液中，并在室溫下繼續(xù)攪拌30mins，TLC監(jiān)測無原料剩余，然后加入NaOH(170.37mg，4.24mmol)，升溫到65℃攪拌過夜，HPLC監(jiān)測無原料剩余，減壓蒸餾除去溶劑，柱層析純化，洗脫劑(DCM：MeOH：NH3H2O＝40:1:0.1)洗脫得到淡黃色固體產(chǎn)品FHND004‐05200mg。
HNMR:9.85(s,1H),9.06(s,1H),8.76(s,1H),8.39‐8.40(d,1H),7.84‐7.86(d,1H),7.71(s,1H)7.20‐7.22(1H,d)7.16‐7.18(1H,d)6.97‐6.99(1H,d)6.81(1H,s)6.33‐6.44(2H,m)5.78‐5.81(1H,d)4.37‐4.39(2H,t)3.90(3H,s)3.04‐3.07(2H,t)2.92‐2.95(2H,t)2.62(4H,m)2.27‐2.33(2H,m)。
實(shí)施例4
合成路線如下：
化合物FHND004‐06‐2
取120mL封管，加入(FHND004‐06‐1)(2.0g，4.77mmol)，2‐哌嗪酮(477.95mg，4.77mmol)，DIPEA(0.92g，7.16mmol)，DMA(10mL)。然后封管140℃反應(yīng)6h，TLC監(jiān)測無原料剩余，將反應(yīng)液冷卻至室溫，加入20mL水，析出固體，過濾，然后加入將濾餅加入2mL甲醇打漿洗滌，過濾、烘干得到紅色固體產(chǎn)物(FHND004‐06‐2)1.9g。
化合物FHND004‐06‐3
取50mL單口燒瓶，加入(FHND004‐06‐2)(1.9g，3.80mmol)，Pd/C(404.78mg，0.38mmol)，MeOH(20mL)，抽真空換氫氣3次，室溫下攪拌過夜，TLC監(jiān)測已無原料剩余，過濾除掉Pd/C，減壓蒸餾除去溶劑得到黃綠色固體，柱層析純化，洗脫劑(DCM：MeOH：NH3H2O＝10:1:0.1)洗脫，得到棕黃色固體產(chǎn)物(FHND004‐06‐3)1.1g。
化合物FHND004‐06
取20mL單口燒瓶，加入(FHND004‐06‐2)(1.1g，2.34mmol)，THF(30mL)和水(3.0mL)，然后將3‐氯丙酰氯(297.45mg，2.34mmol)在0℃下慢慢滴加到反應(yīng)液中，并在室溫下繼續(xù)攪拌30mins，TLC監(jiān)測無原料剩余，然后加入NaOH(374.83mg，9.37mmol)，升溫到65℃攪拌過夜，HPLC監(jiān)測無原料剩余，減壓蒸餾除去溶劑，柱層析純化，洗脫劑(DCM：MeOH：NH3H2O＝40:1:0.1)洗脫得到淡黃色固體產(chǎn)品(FHND004‐06)600mg。
HNMR：9.84(1H,s)9.01(1H,s)8.42(1H,s)8.38‐8.40(1H,d)7.84‐7.86(1H,d)7.17‐7.24(2H,m)7.0‐7.02(1H,d)6.74(1H,s)6.33‐6.47(2H,m)6.26(1H,s)5.52‐5.54(1H,d)5.32(1H,s)4.36‐4.38(2H,t)3.92(3H,s)3.65(2H,s)3.52‐3.54(2H,t)3.13‐3.15(2H,t)3.04‐3.07(2H,t)2.29‐2.31(2H,m).
實(shí)施例5
合成路線如下：
化合物FHND004‐07‐2
取120mL封管，加入(FHND004‐07‐1)(2.0g，4.77mmol)，N‐甲基‐N‐(2‐(甲氨基)乙基)‐乙酰胺(144.01mg，4.77mmol)，DIPEA(0.92g，7.16mmol)，DMA(10mL)。然后封管140℃反應(yīng)6h，TLC監(jiān)測無原料剩余，將反應(yīng)液冷卻至室溫，加入20mL水，析出固體，過濾，然后加入將濾餅加入2mL甲醇打漿洗滌，過濾、烘干得到紅色固體產(chǎn)物(FHND004‐07‐2)2.1g。
化合物FHND004‐07‐2
取50mL單口燒瓶，加入(FHND004‐07‐1)(2.1g，3.97mmol)，Pd/C(422mg，0.40mmol)，MeOH(20mL)，抽真空換氫氣3次，室溫下攪拌過夜，TLC監(jiān)測已無原料剩余，過濾除掉Pd/C，減壓蒸餾除去溶劑得到黃綠色固體，柱層析純化，洗脫劑(DCM：MeOH：NH3H2O＝10:1:0.1)洗脫，得到棕黃色固體產(chǎn)物(FHND004‐07‐3)1.3mg。
化合物FHND004‐07
取20mL單口燒瓶，加入(FHND004‐07‐3)(1.3g，2.60mmol)，THF(30mL)和水(3.0mL)，然后將3‐氯丙酰氯(235.51mg，2.60mmol)在0℃下慢慢滴加到反應(yīng)液中，并在室溫下繼續(xù)攪拌30mins，TLC監(jiān)測無原料剩余，然后加入NaOH(416mg，10.4mmol)， 升溫到65℃攪拌過夜，HPLC監(jiān)測無原料剩余，減壓蒸餾除去溶劑，柱層析純化，洗脫劑(DCM：MeOH：NH3H2O＝40:1:0.1)洗脫得到淡黃色固體產(chǎn)品(FHND004‐07)500mg。
HNMR：9.87‐9.92(1H,d)9.08(1H,s)8.79(1H,s)8.38‐8.40(1H,d)7.84‐7.86(1H,d)7.72‐7.75(1H,d)7.16‐7.20(2H,t)6.97‐6.99(1H,d)6.77(1H,s)6.46‐6.54(2H,m)5.77‐5.80(1H,t)5.32(1H,s)4.37‐4.40(2H,t)3.92(3H,s)3.52‐3.54(2H,t)3.04‐3.08(4H,m)2.91(3H,s)2.70(3H,s)2.27‐2.30(2H,m)2.09(3H,s)。
實(shí)施例6
合成路線如下：
化合物FHND004‐08‐1
取120mL封管，加入(FHND004‐08‐1)(2.0g，4.77mmol)，N‐甲基‐2‐羥基乙胺(358.17mg，4.77mmol)，DIPEA(923.0mg，7.16mmol)，DMA(10mL)。然后封管140℃反應(yīng)6h，TLC監(jiān)測無原料剩余，將反應(yīng)液冷卻至室溫，加入20mL水，析出固體，過濾，然后加入將濾餅加入2mL甲醇打漿洗滌，過濾、烘干得到紅色固體產(chǎn)物 (FHND004‐08‐1)2.1g。
化合物FHND004‐08‐3
取50mL單口燒瓶，加入(FHND004‐08‐2)(2.1g，4.43mmol)，Pd/C(471.44mg，4.43mmol)，MeOH(20mL)，抽真空換氫氣3次，室溫下攪拌過夜，TLC監(jiān)測已無原料剩余，過濾除掉Pd/C，減壓蒸餾除去溶劑得到黃綠色固體，柱層析純化，洗脫劑(DCM：MeOH：NH3H2O＝10:1:0.1)洗脫，得到棕黃色液體產(chǎn)物(FHND004‐08‐2)1.3g。
化合物FHND004‐08
取20mL單口燒瓶，加入(FHND004‐08‐2)(1.3g，2.92mmol)，THF(30mL)和水(3.0mL)，然后將3‐氯丙酰氯(264.29mg，2.92mmol)在0℃下慢慢滴加到反應(yīng)液中，并在室溫下繼續(xù)攪拌30mins，TLC監(jiān)測無原料剩余，然后加入NaOH(467.2g，11.68mmol)，升溫到65℃攪拌過夜，HPLC監(jiān)測無原料剩余，減壓蒸餾除去溶劑，柱層析純化，洗脫劑(DCM：MeOH：NH3H2O＝40:1:0.1)洗脫得到淡黃色固體產(chǎn)品(FHND004‐08)920mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.85(s,2H),9.06(s,1H),8.76(s,1H),8.39(d,J＝5.3Hz,1H),7.85(d,J＝8.1Hz,1H),7.71(s,1H),7.25–7.14(m,2H),7.00(d,J＝7.1Hz,1H),6.81(s,1H),6.46(dd,J＝16.9,1.8Hz,1H),6.36(dd,J＝16.8,9.8Hz,1H),5.79(dd,J＝9.8,1.7Hz,1H),4.43–4.33(m,2H),3.90(s,3H),3.05(t,J＝6.0Hz,2H),2.94(t,J＝4.6Hz,4H),2.42(s,3H),2.36–2.24(m,2H).
實(shí)施例7
合成路線如下：
化合物FHND004‐09‐1
取250mL單口燒瓶，分別加入二苯甲基保護(hù)的N,N‐二甲基‐吡咯‐3‐基甲胺(10g，33.96mmol)，甲醇(100mL)，然后在室溫下分批加入Pd(OH)2/C(2.37g，1.7mmol)，抽空氣換氫氣，反復(fù)三次，然后混合液在35℃下攪拌過夜，TLC監(jiān)測反應(yīng)液中已無原料剩余。冷卻至室溫后，用砂芯漏斗濾掉Pd(OH)2/C,減壓蒸餾除去濾液，硅膠柱層析純化得到4g產(chǎn)物(FHND004‐09‐1)，為無色油狀液體，收率為92％。
化合物FHND004‐09‐3
取100mL茄型瓶，分別加入FHND004‐09‐2(1.3g，3.1mmol)，F(xiàn)HND004‐09‐1(400mg，3.1mmol)，DIPEA(799.69mg，6.2mmol)和DMA(20ml)。反應(yīng)液在140℃下攪拌6h，TLC監(jiān)測已無原料剩余，當(dāng)反應(yīng)液冷卻至室溫后，然后用60mL水稀釋，緩慢攪拌2h后析出固體。布氏漏斗過濾得到固體，50mL乙醇洗滌，烘干得到1.5g產(chǎn)物(FHND004‐09‐3)為黃色固體，收率為93.17％。
化合物FHND004‐09‐4
取100mL圓底燒瓶，加入FHND004‐09‐3(1.5g,2.84mmol),甲醇(100mL)，然后在室溫下分批加入Pd/C(302.23mg，0.28mmol)，抽空氣換氫氣，反復(fù)三次，然后混合液在35℃下攪拌過夜，TLC監(jiān)測反應(yīng)液中已無原料剩余。冷卻至室溫后，用砂芯漏斗濾掉Pd/C,減壓蒸餾除去溶劑，硅膠柱層析純化得到1.2g產(chǎn)物為淡黃色油狀液體FHND004‐09‐4，收率為84.93％。
化合物FHND004‐09
取50mL單口燒瓶，加入(FHND004‐09‐4)(600mg，1.21mmol)，THF(30mL)和水(3.0mL)，然后將3‐氯丙酰氯(153.09mg，1.21mmol)在0℃下慢慢滴加到反應(yīng)液中，并在室溫下繼續(xù)攪拌30mins，TLC監(jiān)測無原料剩余，然后加入NaOH(193.6mg，4.84 mmol)，升溫到65℃攪拌過夜，HPLC監(jiān)測無原料剩余，減壓蒸餾除去溶劑，柱層析純化，洗脫劑(DCM：MeOH：NH3H2O＝40:1:0.1)洗脫得到230mg淡黃色固體產(chǎn)品，收率為34.46％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.68(s,1H),8.99(s,1H),8.38(d,J＝5.4Hz,2H),7.86(d,J＝7.9Hz,1H),7.66(s,1H),7.18(dd,J＝8.6,6.6Hz,2H),7.00(d,J＝7.1Hz,1H),6.77(s,1H),6.41(dd,J＝28.8,12.5Hz,2H),5.77(d,J＝10.2Hz,1H),4.47–4.33(m,2H),3.91(s,3H),3.14(dd,J＝15.6,7.9Hz,2H),3.10–2.97(m,3H),2.96–2.82(m,1H),2.65–2.49(m,1H),2.40(dt,J＝12.1,9.9Hz,2H),2.34–2.26(m,8H),2.25–2.12(m,1H),1.68(dd,J＝13.1,6.9Hz,1H).
實(shí)施例8：實(shí)施例1-7制備的化合物的生物活性測試
此類化合物對EGFR野生型、EGFR(T790M，L858R)雙突變型以及EGFR(L858R)單突變型的激酶活性IC50測試。上述激酶采購于英濰捷基(上海)貿(mào)易有限公司。
采用均相時間分辨熒光(HTRF)的方法建立EGFR野生型、EGFR(T790M，L858R)雙突變型以及EGFR(L858R)單突變型的激酶活性檢測方法，測定化合物的抑制活性。配置8uL的反應(yīng)液，包括1×enzymatic buffer(Cisbio,HTRF KinEASETM-TK)，5mM MgCl2，1mM MnCl2，1mM DTT，1μM TK substrate-biotin(Cisbio,HTRF KinEASETM-TK)10μM ATP，梯度濃度的化合物以及0.04ng/μL EGFR或者0.02ng/μL的EGFR(T790M，L858R)或EGFR(L858R)。化合物反應(yīng)濃度為1000nM起3倍稀釋9個濃度。反應(yīng)體系中DMSO濃度為2％。酶和化合物預(yù)孵育15分鐘，然后加入ATP和底物開始反應(yīng)。所有酶催化反應(yīng)都在25℃下進(jìn)行60分鐘。酶催化反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液中加入4uL TK antibody-cryptate和4uL streptavidin-XL665(反應(yīng)濃度為62.5nM)，繼續(xù)在25℃孵育60分鐘。孵育結(jié)束后在CLARIOstar(BMG LABTECH)上檢測HTRF熒光值，并使用GraphPad Prism 5.0計(jì)算IC50。
表1，體外酶學(xué)活性測試數(shù)據(jù)(IC50，nM)