本發(fā)明屬于化學(xué)合成領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及奧貝膽酸晶型Ⅱ及其制備方法和用途。

背景技術(shù)：

奧貝膽酸(OCA，式I所示化合物)是由美國Intercept制藥公司研發(fā)的一種高活性的法尼醇X受體(FXR)激動劑，是二十年來首個研發(fā)用于治療原發(fā)性膽汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病的藥物。2014年美國Intercept制藥公司宣布奧貝膽酸治療非酒精性脂肪肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)的Ⅲ期臨床實驗達(dá)到主要臨床終點，治療原發(fā)性膽汁性肝硬化的研究目前處于三期臨床。

然而，目前純度高、單雜少、穩(wěn)定、均一的奧貝膽酸晶型，仍有待研究。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決相關(guān)技術(shù)中的技術(shù)問題之一，或至少在一定程度提供一種有用的商業(yè)選擇。為此，本發(fā)明的一個目的在于提出一種純度高、單雜少、穩(wěn)定、均一的奧貝膽酸新晶型。

在本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提出了一種奧貝膽酸晶型Ⅱ。根據(jù)本發(fā)明的實施例，在所述奧貝膽酸晶型Ⅱ的X射線粉末衍射圖中，2θ在4.9°±0.2°、5.3±0.2°、6.3°±0.2°、7.2°±0.2°、7.7°±0.2°、8.9°±0.2°、9.9°±0.2°、10.6°±0.2°、11.0°±0.2°、12.4°±0.2°、12.6°±0.2°、14.9°±0.2°、15.3°±0.2°、15.9°±0.2°、16.5°±0.2°、16.7°±0.2°、18.0°±0.2°、19.0°±0.2°、20.6°±0.2°、21.0°±0.2°和24.7°±0.2°處具有特征峰。發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的奧貝膽酸晶型Ⅱ純度高、單雜少、含有至少99.5％重量的奧貝膽酸，并且穩(wěn)定、均一，能夠有效用于預(yù)防或治療原發(fā)性膽汁 性肝硬化或非酒精性脂肪性肝病。

需要說明的是，X-射線粉末衍射研究已廣泛用于闡明分子結(jié)構(gòu)、結(jié)晶和多晶型現(xiàn)象，用裝有3KW X-射線發(fā)生器(CuKα1放射)和NaI(Ti)閃射檢測器的Philips APD 3720型粉末衍射儀記錄粉末X-射線(XRD)，從3～45°(2θ)進(jìn)行測定即可。其中，測定中使樣品保持在環(huán)境溫度。

另外，根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述奧貝膽酸晶型Ⅱ還可以具有如下附加的技術(shù)特征：

根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述奧貝膽酸晶型Ⅱ具有如圖4所示的X射線粉末衍射圖譜。

根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述奧貝膽酸晶型Ⅱ樣品在DSC(TGA)(STA449F3同步熱分析儀—德國耐馳儀器制造有限公司)圖中顯示其在96.4℃左右有吸熱峰。

根據(jù)本發(fā)明的實施例，上述奧貝膽酸的Ⅱ晶型含有至少99.5％重量的式I所示的奧貝膽酸，由此可以進(jìn)一步提高奧貝膽酸Ⅱ晶型的純度。

在本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提出了前面所述的本發(fā)明的奧貝膽酸晶型Ⅱ在制備藥物中的用途，所述藥物用于預(yù)防或治療原發(fā)性膽汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病。由此，藥物治療效果更好。

在本發(fā)明的第三方面，本發(fā)明提出了一種制備上述實施例的奧貝膽酸晶型Ⅱ的方法，該方法包括以下步驟：(1)將3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸粗品與第一有機(jī)溶劑混合，并加熱溶解，以便獲得含有3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸和第一有機(jī)溶劑的第一混合物；(2)向所述第一混合物中加入晶種，并降溫進(jìn)行析晶，以便獲得含3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸第二混合物，過濾，并將濾餅用所述第一有機(jī)溶劑洗滌，收集固體，以便獲得3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸固體；(3)向收集的固體中加入第二有機(jī)溶劑，并加熱攪拌，得到3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸和第二有機(jī)溶劑的第三混合物；(4)將所述第三混合物進(jìn)行降溫析晶，以便獲得含有3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸晶體的第四混合物；(5)將所述第四混合物過濾，用所述第二有機(jī)溶劑將濾餅進(jìn)行洗滌，然后進(jìn)行真空干燥，以便獲得所述奧貝膽酸晶型Ⅱ。

根據(jù)本發(fā)明的實施例，本發(fā)明的制備奧貝膽酸晶型Ⅱ的方法，制備工藝簡潔，反應(yīng)條件溫和，產(chǎn)品收率高，生產(chǎn)效率稿，生產(chǎn)成本低，安全環(huán)保，有利于奧貝膽酸晶型產(chǎn)品的工業(yè)化大生產(chǎn)。

另外，根據(jù)本發(fā)明上述實施例的方法還可以具有如下附加的技術(shù)特征：

根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述第一有機(jī)溶劑為選自甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、丙酮、叔丁基甲醚、甲基四氫呋喃、乙酸丁酯、乙酸丙酯的至少一種，優(yōu)選乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸丙酯的至少一種。由此，3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸粗品可以充分溶解。

根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述第二有機(jī)溶劑為選自丙酮、甲基叔丁基醚、正己烷、正庚烷的至少一種，最優(yōu)選正庚烷。由此，可以充分打漿，分散固體，同時除去第一溶劑影響。

根據(jù)本發(fā)明的實施例，在步驟(1)中，將3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸粗品與所述第一有機(jī)溶劑混合按照1/2.5～1/5質(zhì)量體積比，優(yōu)選1/3～1/4質(zhì)量體積比混合。由此，可以充分溶解3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸粗品，并充分分散打漿。

根據(jù)本發(fā)明的實施例，在步驟(3)中，按照1/4～1/6質(zhì)量體積比，優(yōu)選1/4～1/5質(zhì)量體積比，向收集的固體中加入所述第二有機(jī)溶劑。由此，可以充分溶解收集的固體，并充分分散打漿。

根據(jù)本發(fā)明的實施例，在步驟(1)中，升溫至30～100℃，優(yōu)選45～60℃，以進(jìn)行所述加熱溶解。由此，可以充分溶解3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸粗品，并充分分散打漿。

根據(jù)本發(fā)明的實施例，在步驟(3)中，升溫至30～100℃，優(yōu)選45～60℃，以進(jìn)行所述加熱溶解。由此，可以充分溶解收集的固體，并充分分散打漿。

根據(jù)本發(fā)明的實施例，在步驟(4)中，降溫至0～40℃，優(yōu)選0～20℃，更優(yōu)選0～10℃，以進(jìn)行所述降溫析晶。由此，可以高收率、高純度地獲得產(chǎn)物。

根據(jù)本發(fā)明的實施例，于40～70℃，優(yōu)選50～60℃的溫度下進(jìn)行所述真空干燥。由此可以有效干燥和除去溶劑殘留，同時有不會出現(xiàn)高溫熔化轉(zhuǎn)晶。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的奧貝膽酸晶型Ⅱ及其制備方法具有下列有點的至少之一：

1、本發(fā)明制備獲得了一種新的奧貝膽酸晶型，并且經(jīng)過XRD數(shù)據(jù)顯示其為沒有文獻(xiàn)報道過的新晶型化合物，該化合物能夠穩(wěn)定存在，并且可以作為制備無定型奧貝膽酸產(chǎn)品的前體。

2、本發(fā)明的奧貝膽酸晶型Ⅱ，純度高、單雜少、穩(wěn)定、均一。

3、本發(fā)明的制備奧貝膽酸晶型Ⅱ的方法，制備工藝簡潔，反應(yīng)條件溫和，產(chǎn)品收率高，安全環(huán)保，有利于奧貝膽酸晶型產(chǎn)品的工業(yè)化大生產(chǎn)。所得晶體能以高純度從體系中析出，可以有效地去除反應(yīng)過程中的雜質(zhì)，提高了生產(chǎn)效率，降低了生產(chǎn)成本。

4、本發(fā)明的奧貝膽酸晶型Ⅱ可以有效用于預(yù)防或治療原發(fā)性膽汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病。

本發(fā)明附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯， 或通過本發(fā)明的實踐了解到。

附圖說明

本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點從結(jié)合下面附圖對實施例的描述中將變得明顯和容易理解，其中：

圖1為根據(jù)本發(fā)明實施例1的奧貝膽酸晶型Ⅱ的高效液相圖譜；

圖2為根據(jù)本發(fā)明實施例1的奧貝膽酸晶型Ⅱ的DSC-TGA圖；

圖3為根據(jù)本發(fā)明實施例1的奧貝膽酸晶型Ⅱ的NMR氫譜；以及

圖4為根據(jù)本發(fā)明實施例1的奧貝膽酸晶型Ⅱ的X射線粉末衍射圖。

具體實施方式

下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實施例，需要說明的是下面描述的實施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。另外，如果沒有明確說明，在下面的實施例中所采用的所有試劑均為市場上可以購得的，或者可以按照文本或已知的方法合成的，對于沒有列出的反應(yīng)條件，也均為本領(lǐng)域技術(shù)人員容易獲得的。

一般方法

在下列實施例中，制備奧貝膽酸的一般方法主要包括以下步驟：

稱取3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸粗品，加入有機(jī)溶劑加熱溶解，加入晶種降溫析晶，過濾得到固體；

向固體加入另一有機(jī)溶劑，升溫攪拌，降溫析晶，過濾，濾餅洗滌，控制溫度干燥得到奧貝膽酸Ⅱ晶型。

實施例1奧貝膽酸晶型Ⅱ的制備

根據(jù)本發(fā)明的制備奧貝膽酸晶型Ⅱ的方法，按照以下步驟制備奧貝膽酸晶型Ⅱ：

(1)：3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸濕品的制備

取4.0g 3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸，加入16ml乙酸丁酯，加熱至50℃攪拌溶解，降溫至10℃冷卻析晶2h，過濾，濾餅用5ml乙酸丁酯洗滌，得到濕品3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸。

(2)：奧貝膽酸晶型Ⅱ的制備

取上述制備的濕品，加入16ml正庚烷，加熱至50℃攪拌12h。降溫至10℃析晶5h，過濾，濾餅用5ml正庚烷洗滌。然后在55℃條件下真空干燥4h。最終得到3.0g產(chǎn)物。HPLC分析純度為99.8％(高效液相圖譜如圖1所示)。經(jīng)DSC-TGA圖譜分析(結(jié)果如圖2所示)可知，該產(chǎn)物在96.4℃左右融化。

該產(chǎn)物的NMR氫譜如圖3所示，且¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ0.61(s,1H),0.81-0.93(m,9H),2.12-2.23(m,2H),3.13(m,1H),3.50(brs,1H),4.06-4.07(d,1H),4.3(d,1H),11.97(s,1H)，。

進(jìn)一步，經(jīng)XRD分析，所制得的產(chǎn)物在約4.9°±0.2°、5.3±0.2°、6.3°±0.2°、7.2°±0.2°、7.7°±0.2°、8.9°±0.2°、9.9°±0.2°、10.6°±0.2°、11.0°±0.2°、12.4°±0.2°、12.6°±0.2°、14.9°±0.2°、15.3°±0.2°、15.9°±0.2°、16.5°±0.2°、16.7°±0.2°、18.0°±0.2°、19.0°±0.2°、20.6°±0.2°、21.0°±0.2°和24.7°±0.2°(2θ)處有關(guān)鍵的吸收峰，確為奧貝膽酸晶型Ⅱ，其X射線粉末衍射圖如圖4所示。

由此，確定制備得到3.0g奧貝膽酸晶型Ⅱ化合物。

實施例2奧貝膽酸晶型Ⅱ的制備

根據(jù)本發(fā)明的制備奧貝膽酸晶型Ⅱ的方法，按照以下步驟制備奧貝膽酸晶型Ⅱ：

(1)：3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸濕品的制備

取4.0g 3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸，加入13.4ml乙酸丁酯，加熱至50℃攪拌溶解，降溫至10℃冷卻析晶2h，過濾，濾餅用5ml乙酸丁酯洗滌，得到濕品3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸。

(2)：奧貝膽酸晶型Ⅱ的制備

取上述制備的濕品，加入18ml正庚烷，加熱至50℃攪拌12h。降溫至10℃析晶5h，過濾，濾餅用5ml正庚烷洗滌。然后在55℃條件下真空干燥4h。最終得到3.2g產(chǎn)物。HPLC分析純度為99.8％

實施例3奧貝膽酸晶型Ⅱ的制備

根據(jù)本發(fā)明的制備奧貝膽酸晶型Ⅱ的方法，按照以下步驟制備奧貝膽酸晶型Ⅱ：

(1)：3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸濕品的制備

取100g 3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸，加入300ml乙酸丁酯，加熱至50℃攪拌溶解。降溫至10℃冷卻析晶2h。過濾，濾餅用20ml乙酸丁酯洗滌，得到濕品3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸。

(2)：奧貝膽酸晶型Ⅱ的制備

取上述制備的濕品，加入500ml正庚烷，加熱至50℃攪拌12h。降溫至10℃析晶5h，過濾，濾餅用60ml正庚烷洗滌。然后在55℃條件下真空干燥4h。最終得到83.0g產(chǎn)物。經(jīng)HPLC、DSC-TGA圖譜、NMR氫譜、XRD(X射線粉末衍射圖)分析確認(rèn)，所得產(chǎn)物即為奧貝膽酸晶型Ⅱ化合物.

對比例1

參照實施例1的方法，按照以下步驟制備奧貝膽酸：

取4.0g 3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸，加入16ml乙酸丁酯，加熱至50℃攪拌溶解，降溫至10℃冷卻析晶2h，過濾，濾餅用5ml乙酸丁酯洗滌，得到濕品3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸。

取上述制備的濕品，加入16ml體積乙酸乙酯，加熱至50℃攪拌12h。降溫至10℃析晶5h，過濾，濾餅用5ml乙酸乙酯洗滌。然后在55℃條件下真空干燥4h。得到奧貝膽酸熔融狀態(tài)化合物2.8g，殘留溶劑高達(dá)12％左右，無法充分干燥。

對比例2

參照實施例1的方法，按照以下步驟制備奧貝膽酸：

取4.0g 3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸，加入16ml乙酸丁酯，加熱至50℃攪拌溶解，降溫至10℃冷卻析晶2h，過濾，濾餅用5ml乙酸丁酯洗滌，得到濕品3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸。

取上述制備的濕品，加入16ml體積乙酸丁酯，加熱至50℃攪拌12h。降溫至10℃析晶5h，過濾，濾餅分別用5ml乙酸丁酯洗滌。然后在80℃條件下真空干燥4h。得到奧貝膽酸熔融狀態(tài)化合物2.5g。

將對比例1、對比例2與實施例1進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，對比例獲得的奧貝膽酸樣品不易干燥，溶劑難除，并且真空干燥時溫度過高樣品易于變成熔融狀態(tài)，而實施例1所示的本發(fā)明的方法沒有這些缺點，且能夠高效獲得純度高、單雜小、穩(wěn)定、均一的奧貝膽酸Ⅱ晶型化合物。

在本說明書的描述中，參考術(shù)語“一個實施例”、“一些實施例”、“示例”、“具體示例”或“一些示例”等的描述意指結(jié)合該實施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點包含于本發(fā)明的至少一個實施例或示例中。在本說明書中，對上述術(shù)語的示意性表述不一定指的是相同的實施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點可以在任何的一個或多個實施例或示例中以合適的方式結(jié)合。

盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實施例，可以理解的是，上述實施例是示例性的，不能理解為對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨的情況下在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對上述實施例進(jìn)行變化、修改、替換和變型。