本發(fā)明屬于化學(xué)合成領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及制備無定型奧貝膽酸的方法。

背景技術(shù)：

奧貝膽酸(OCA，式I所示化合物)是由美國Intercept制藥公司研發(fā)的一種高活性的法尼醇X受體(FXR)激動劑，是二十年來首個研發(fā)用于治療原發(fā)性膽汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病的藥物。2014年美國Intercept制藥公司宣布奧貝膽酸治療非酒精性脂肪肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)的Ⅲ期臨床實(shí)驗(yàn)達(dá)到主要臨床終點(diǎn)，治療原發(fā)性膽汁性肝硬化的研究目前處于三期臨床。

然而，目前制備奧貝膽酸產(chǎn)品的方法，仍有待改進(jìn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決上述技術(shù)問題之一或至少提供一種有用的商業(yè)選擇。為此，本發(fā)明的一個目的在于提出了一種制備無定型奧貝膽酸的方法，該方法反應(yīng)條件溫和，工藝簡單，能高效得到高純度、分散好的粉末狀奧貝膽酸無定型產(chǎn)品，所得的無定型奧貝膽酸可以有效用于預(yù)防或治療原發(fā)性膽汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病。

根據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種制備無定型奧貝膽酸的方法，該方法包括：(1)將奧貝膽酸原料與堿性溶液接觸，以便獲得含有奧貝膽酸的第一混合物；(2)配置酸性溶液并使所述酸性溶液保持預(yù)定溫度；(3)將所述第一混合物滴加至所述酸性溶液中，以便獲得第二混合物；(4)將所述第二混合物進(jìn)行降溫沉淀，分離固體，并對所分離的固體進(jìn)行真空干燥，以便獲得所述無定型奧貝膽酸。

發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，該方法反應(yīng)條件溫和，工藝簡單，能高效得到高純度、分散好的 粉末狀奧貝膽酸無定型產(chǎn)品，所得的無定型奧貝膽酸可有效用于預(yù)防或治療原發(fā)性膽汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病。

另外，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述制備無定型奧貝膽酸的方法還可以具有如下附加的技術(shù)特征：

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述奧貝膽酸原料為奧貝膽酸晶型Ⅱ。由此可以獲得本發(fā)明所述的高純度、分散好的無定型奧貝膽酸。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，在所述奧貝膽酸晶型Ⅱ的X射線粉末衍射圖中，其2θ在4.9°±0.2°、5.3±0.2°、6.3°±0.2°、7.2°±0.2°、7.7°±0.2°、8.9°±0.2°、9.9°±0.2°、10.6°±0.2°、11.0°±0.2°、12.4°±0.2°、12.6°±0.2°、14.9°±0.2°、15.3°±0.2°、15.9°±0.2°、16.5°±0.2°、16.7°±0.2°、18.0°±0.2°、19.0°±0.2°、20.6°±0.2°、21.0°±0.2°和24.7°±0.2°處具有特征峰。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，奧貝膽酸晶型Ⅱ具有如圖1所示的X射線粉末衍射圖譜。

需要說明的是，X-射線粉末衍射研究已廣泛用于闡明分子結(jié)構(gòu)、結(jié)晶和多晶型現(xiàn)象，用裝有3KW X-射線發(fā)生器(CuKα1放射)和NaI(Ti)閃射檢測器的Philips APD 3720型粉末衍射儀記錄粉末X-射線(XRD)，從3～45°(2θ)進(jìn)行測定即可。其中，測定中樣品保持在環(huán)境溫度。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，所述奧貝膽酸晶型Ⅱ樣品在DSC(TGA)(STA449F3同步熱分析儀—德國耐馳儀器制造有限公司)圖中顯示其96.4℃左右吸熱峰。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述堿性溶液為選自氫氧化鈉溶液和氫氧化鉀溶液中的至少一種，優(yōu)選為氫氧化鈉溶液。由此，可以與奧貝膽酸形成鈉鹽充分完全地溶解到水相體系中。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述堿性溶液的濃度為1.0～2.0重量％，優(yōu)選為1.2～1.5重量％。由此可以完全成鹽且不至于濃度過高引起副反應(yīng)。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，在步驟(1)中，于20～30℃，優(yōu)選25～30℃的溫度下將所述奧貝膽酸原料與所述堿性溶液接觸。由此，可以使體系充分溶解以及方便后續(xù)溫度控制。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，按照1:10～1.5:10的重量比，將所述奧貝膽酸原料與所述堿性溶液接觸。由此，可以使體系充分溶解。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述酸性溶液無機(jī)酸水溶液，優(yōu)選濃鹽酸、硫酸、磷酸的水溶液中的至少一種，更優(yōu)選濃鹽酸水溶液。由此，可以使含有奧貝膽酸的第一混合物充分溶解混合。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述酸性溶液的濃度為0.5～1.5重量％，優(yōu)選為0.5～0.8重量％。由此可以充分中和成酸析出固體。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，在步驟(2)中，所述預(yù)定溫度為30～50℃，優(yōu)選40～50℃。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，在步驟(3)中，于40～60℃，優(yōu)選40～50℃的溫度下將所述 第一混合物滴加至所述酸性溶液中。由此，可以使反應(yīng)充分，同時可以使體系分散充分。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，按照7:20～15:20的質(zhì)量比，將所述第一混合物滴加至所述酸性溶液中。由此，可以使反應(yīng)充分。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，在步驟(4)中，將所述第二混合物降溫至10～30℃，優(yōu)選20～30℃，以便實(shí)現(xiàn)沉淀析晶。由此可以有效提高收率和控制析出晶體的純度。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，在步驟(4)中，于40～60℃，優(yōu)選40～50℃的溫度下進(jìn)行所述真空干燥。由此，可以有效干燥，同時不影響產(chǎn)物純度和性狀。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，申請人經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，采用本發(fā)明的上述方法不僅可以高效地制備得到無定型奧貝膽酸，并且能獲得高純度、分散好的粉末狀態(tài)無定型奧貝膽酸。

本發(fā)明附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實(shí)踐了解到。

附圖說明

本發(fā)明的上述或附加的方面和優(yōu)點(diǎn)從結(jié)合下面附圖對實(shí)施例的描述中將變得明顯和容易理解，其中：

圖1為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1的奧貝膽酸晶型Ⅱ的X射線粉末衍射圖；

圖2為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例4的無定型奧貝膽酸的HPLC高效液相圖譜；

圖3為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例4的酸無定型奧貝膽的X射線粉末衍射圖。

具體實(shí)施方式

下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例，需要說明的是下面描述的實(shí)施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。另外，如果沒有明確說明，在下面的實(shí)施例中所采用的所有試劑均為市場上可以購得的，或者可以按照文本或已知的方法合成的，對于沒有列出的反應(yīng)條件，也均為本領(lǐng)域技術(shù)人員容易獲得的。

實(shí)施例1制備奧貝膽酸晶型Ⅱ

按照下述步驟制備奧貝膽酸晶型Ⅱ：

取40.0g 3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸，加入120ml乙酸丁酯，加熱至50℃攪拌溶解，降溫至10℃冷卻析晶2h，過濾，濾餅用50ml乙酸丁酯洗滌，得到濕品3α,7α-二羥基-6α-烷基-5β-膽烷酸。取上述制備的濕品，加入200ml體積正庚烷，加熱至50℃攪拌12h。降溫至10℃析晶5h，過濾，濾餅用5ml正庚烷洗滌。然后在55℃條件下真空干燥4h。最終得到30.0g奧貝膽酸晶型Ⅱ化合物。經(jīng)XRD分析判斷為晶型Ⅱ。其中，奧貝膽酸晶型Ⅱ 的X射線粉末衍射圖如圖1所示。

晶型Ⅱ的X射線粉末衍射圖中，其2θ在4.9°±0.2°、5.3±0.2°、6.3°±0.2°、7.2°±0.2°、7.7°±0.2°、8.9°±0.2°、9.9°±0.2°、10.6°±0.2°、11.0°±0.2°、12.4°±0.2°、12.6°±0.2°、14.9°±0.2°、15.3°±0.2°、15.9°±0.2°、16.5°±0.2°、16.7°±0.2°、18.0°±0.2°、19.0°±0.2°、20.6°±0.2°、21.0°±0.2°和24.7°±0.2°處具有特征峰。

實(shí)施例2無定型奧貝膽酸的合成

根據(jù)本發(fā)明的制備無定型奧貝膽酸的方法，按照以下步驟合成無定型奧貝膽酸：

(1)奧貝膽酸堿性溶液的制備

稱取12.0g純化水和0.35g 50％氫氧化鈉水溶液充分混合，攪拌下加入0.82g實(shí)施例1制備獲得的奧貝膽酸晶型Ⅱ，略升溫，繼續(xù)攪拌溶解，控制溫度在25℃，以便獲得含有奧貝膽酸的第一混合物。

(2)酸性溶液的制備

室溫下向潔凈反應(yīng)釜中加入36.5g純化水，再加入0.5g 37％的濃鹽酸，攪拌均勻，升溫并控制溫度為40℃，以便獲得鹽酸水溶液。

(3)無定型奧貝膽酸的制備

攪拌下，將步驟(1)的含有奧貝膽酸的第一混合物快速滴加到步驟(2)制備好的鹽酸水溶液中，加入過程中充分?jǐn)嚢?，控制體系溫度為40℃，析出大量白色固體。繼續(xù)保溫攪拌2h后降溫至20℃左右，過濾洗滌，得到濾餅，然后將濾餅在真空干燥箱中40℃干燥20h，得到0.74g分散較好的粉末狀奧貝膽酸，收率91.4％。

實(shí)施例3無定型奧貝膽酸的合成

根據(jù)本發(fā)明的制備無定型奧貝膽酸的方法，按照以下步驟合成無定型奧貝膽酸：

(1)奧貝膽酸堿性溶液的制備

稱取130.0g純化水和3.5g 50％氫氧化鈉水溶液充分混合，攪拌下加入15.0g實(shí)施例1制備獲得的奧貝膽酸晶型Ⅱ，略升溫，繼續(xù)攪拌溶解，控制溫度在27℃，以便獲得含有奧貝膽酸的第一混合物。

(2)酸性溶液的制備

室溫下向潔凈反應(yīng)釜中加入300.0g純化水，再加入5.0g 37％的濃鹽酸，攪拌均勻，升溫并控制溫度為45℃，以便獲得鹽酸水溶液。

(3)無定型奧貝膽酸的制備

攪拌下，將步驟(1)的含有奧貝膽酸的第一混合物快速滴加到步驟(2)制備好的鹽 酸水溶液中，加入過程中充分?jǐn)嚢?，控制體系溫度為45℃，析出大量白色固體。繼續(xù)保溫攪拌2h后降溫至20℃左右，過濾洗滌，得到濾餅，然后將濾餅在真空干燥箱中45℃干燥20h，得到13.8g分散較好的粉末狀奧貝膽酸，收率91.3％。

實(shí)施例4無定型奧貝膽酸的合成

根據(jù)本發(fā)明的制備無定型奧貝膽酸的方法，按照以下步驟合成無定型奧貝膽酸：

(1)奧貝膽酸堿性液的制備

稱取7.43kg純化水和0.17kg 50％氫氧化鈉水溶液充分混合，攪拌下加入0.76kg實(shí)施例1制備獲得的奧貝膽酸晶型Ⅱ，略升溫，繼續(xù)攪拌溶解，控制溫度在30℃，以便獲得含有奧貝膽酸的第一混合物。

(2)酸性溶液的制備

室溫下向潔凈反應(yīng)釜中加入11.4kg純化水，再加入0.25kg 37％的濃鹽酸，攪拌均勻，升溫并控制溫度為50℃左右，以便獲得鹽酸水溶液。

(3)無定型奧貝膽酸的制備

攪拌下，將步驟(1)的含有奧貝膽酸的第一混合物快速滴加到步驟(2)制備好的鹽酸水溶液中，加入過程中充分?jǐn)嚢?，控制體系溫度50℃，析出大量白色固體。繼續(xù)保溫攪拌1h后降溫至25℃左右，過濾洗滌，得到濾餅，然后將濾餅在真空干燥箱中50℃干燥20h，得到0.70kg分散較好的粉末狀奧貝膽酸，收率92.1％。經(jīng)HPLC檢測，純度為99.9％，HPLC高效液相圖譜如圖2所示。經(jīng)XRD分析判斷晶型為無定型，奧貝膽酸無定型的X射線粉末衍射圖如圖3所示。

對比例1

參照實(shí)施例2的方法，按照以下步驟合成無定型奧貝膽酸：

(1)奧貝膽酸堿性溶液的制備

室溫下稱取12.0g純化水和0.35g 50％氫氧化鈉水溶液充分混合，攪拌下加入0.82g實(shí)施例1制備獲得的奧貝膽酸晶型Ⅱ，繼續(xù)攪拌溶解，以便獲得含有奧貝膽酸的堿性溶液。

(2)酸性溶液的制備

室溫下向潔凈反應(yīng)釜中加入36.5g純化水，再加入0.5g 37％的濃鹽酸，攪拌均勻，控制溫度為常溫，以便獲得鹽酸水溶液。

(3)無定型奧貝膽酸的制備

攪拌下，將步驟(1)獲得的含有奧貝膽酸的堿性溶液快速滴加到步驟(2)制備好的鹽酸水溶液中，加入過程中充分?jǐn)嚢?，體系溫度控制在30℃～35℃，析出大量白色固體。繼續(xù)保溫攪拌2h后降溫至20℃左右，過濾洗滌，得到濾餅在真空干燥箱中45℃干燥12h， 得到0.66g塊狀固體，即固體奧貝膽酸，其性狀差，分散不好，容易結(jié)塊，且此固體奧貝膽酸收率僅80.9％。

此外，對比多次試驗(yàn)顯示，本發(fā)明通過控制每步的優(yōu)化反應(yīng)溫度和相關(guān)實(shí)驗(yàn)條件能高效制得高純度、分散好的粉末狀無定型奧貝膽酸產(chǎn)品。

在本說明書的描述中，參考術(shù)語“一個實(shí)施例”、“一些實(shí)施例”、“示例”、“具體示例”或“一些示例”等的描述意指結(jié)合該實(shí)施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)包含于本發(fā)明的至少一個實(shí)施例或示例中。在本說明書中，對上述術(shù)語的示意性表述不一定指的是相同的實(shí)施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)可以在任何的一個或多個實(shí)施例或示例中以合適的方式結(jié)合。

盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，可以理解的是，上述實(shí)施例是示例性的，不能理解為對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨的情況下在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對上述實(shí)施例進(jìn)行變化、修改、替換和變型。