本發(fā)明是關(guān)于一種提升粒線體活性的植物萃取物，特別是一種含有植物多酚的植物萃取物。

背景技術(shù)：

粒線體(線粒體，mitochondrion)，是一種存在于大多數(shù)真核細(xì)胞中且由兩層膜包被的胞器，直徑在0.5到10微米左右。大多數(shù)真核細(xì)胞或多或少都擁有粒線體，但它們各自擁有的粒線體在大小、數(shù)量及外觀等方面上都有所不同。這種胞器擁有自身的遺傳物質(zhì)和遺傳體系，但因其基因組大小有限，所以粒線體是一種半自主胞器。粒線體是細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行氧化、磷酸化和合成三磷酸腺苷(ATP)的主要場所，為細(xì)胞的活動(dòng)提供了化學(xué)能量，所以有「細(xì)胞的發(fā)電站」(the powerhouse of the cell)之稱。除了供能外，粒線體還參與諸如細(xì)胞分化、細(xì)胞信息傳遞和細(xì)胞凋亡等過程，并擁有調(diào)控細(xì)胞生長和細(xì)胞周期的能力。

正常細(xì)胞含數(shù)個(gè)至千余個(gè)粒線體，而研究證實(shí)，老人細(xì)胞內(nèi)的粒線體含量有明顯減少。此外，粒線體在轉(zhuǎn)換能量的過程中需動(dòng)用電子傳遞。因此如果沒有正確捕捉到電子，逸出的電子會(huì)與氧分子結(jié)合成超氧自由基，很容易破壞堿基而造 成粒線體DNA突變，進(jìn)而累積一些疾病。

由于粒線體為細(xì)胞的能量工廠，且與許多疾病有密切的關(guān)系，因此如何保護(hù)粒線體不受到破壞，并使其維持正常功能，在目前臨床醫(yī)學(xué)上視為非常重要的研發(fā)方向。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明提供一種植物萃取物用于制備提升粒線體活性的用途，其中所述植物萃取物為植物多酚。

在本發(fā)明的一實(shí)施例中，其中所述提升粒線體活性是指能有效提升粒線體的基礎(chǔ)能量、提升粒線體制造ATP的能力、提升粒線體的極限能量、提升粒線體的預(yù)存能量及提升單位粒線體能量。

在本發(fā)明的實(shí)施例中，其中所述提升粒線體活性是指減少粒線體自由基的泄漏。

在本發(fā)明的實(shí)施例中，其中所述植物多酚為綠茶多酚。

在本發(fā)明的實(shí)施例中，其中所述綠茶多酚的濃度為25～125μg/ml。

在本發(fā)明的較佳實(shí)施例中，其中所述綠茶多酚的濃度為50μg/ml。

本發(fā)明另提供一種植物萃取物用于制備保護(hù)粒線體活性的用途，其中所述植物萃取物為植物多酚。

在本發(fā)明的實(shí)施例中，其中所述植物多酚為綠茶多酚。

在本發(fā)明的實(shí)施例中，其中所述綠茶多酚的濃度為25～125μg/ml。

本發(fā)明進(jìn)一步提供一種植物萃取物用于制備增加干細(xì)胞增生的用途，其中所述植物萃取物為植物多酚。

在本發(fā)明的較佳實(shí)施例中，其中所述植物多酚包含蘋果多酚、綠茶多酚 或紅酒多酚。

附圖說明

圖1顯示不同濃度的綠茶多酚對粒線體的基礎(chǔ)能量影響。

圖2顯示不同濃度的綠茶多酚對粒線體的自由基泄漏影響。

圖3顯示不同濃度的綠茶多酚對粒線體制造ATP能力的影響。

圖4顯示不同濃度的綠茶多酚對粒線體的極限能量影響。

圖5顯示不同濃度的綠茶多酚對粒線體的預(yù)存能量影響。

圖6顯示不同濃度的綠茶多酚對粒線體的單位粒線體產(chǎn)生的能量影響。

圖7A為不同濃度的紅酒多酚對脂肪間葉干細(xì)胞增生的影響結(jié)果圖；

圖7B為不同濃度的綠茶多酚對脂肪間葉干細(xì)胞增生的影響結(jié)果圖；

圖7C為不同濃度的蘋果多酚對脂肪間葉干細(xì)胞增生的影響結(jié)果圖；

具體實(shí)施方式

本發(fā)明中所述植物多酚是指綠茶多酚、蘋果多酚或紅茶多酚等。

本發(fā)明中所述“紅酒多酚”是指紅酒中的多酚化合物，包含多種化學(xué)物質(zhì)，如酚酸類、黃酮醇(dihydroflavonols)、白藜蘆醇、花青素、單寧等。

本發(fā)明中所述“綠茶多酚”是指存在茶葉中的多酚化合物，包括但不限于：表兒茶素(epicatechin，EC)、表沒食子兒茶素(epigallocatechin，EGC)、表兒茶素沒食子酸酯(epicatechin gallate，ECG)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin gallate，EGCg)等。

本發(fā)明中所述“蘋果多酚”是蘋果中所含多元酚類物質(zhì)的通稱，包含有綠原酸、兒茶素、表兒茶素、蘋果縮合丹寧、根皮甙、根皮素、花青素等，其中蘋果縮合丹寧約占多元酚總含量的一半。

本發(fā)明的植物萃取物可通過口服、鼻吸入、經(jīng)皮等方式給予個(gè)體使用。此外，本發(fā)明植物萃取物的劑量可依不同個(gè)體所需，做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。

實(shí)施例

1.細(xì)胞制備

利用兩段式的細(xì)胞培養(yǎng)法，制造出平整的單層細(xì)胞。

(1).將培養(yǎng)皿中每個(gè)孔(well)所需的細(xì)胞懸浮于100μl培養(yǎng)基之中，一般而言每個(gè)well所需要使用的細(xì)胞約略介于兩萬至六萬個(gè)細(xì)胞之間。

(2).將制備好的細(xì)胞懸浮液加入well之中，加入培養(yǎng)基時(shí)建議將微量吸管(pipetor)的頂端抵于底部小孔的孔壁上，緩慢將培養(yǎng)基加入孔中以達(dá)到最佳的效果，注意的是于「背景校正Well」中只可以加入培養(yǎng)基，不需要加入任何的細(xì)胞。

(3).將細(xì)胞培養(yǎng)盤置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到細(xì)胞已經(jīng)貼附于培養(yǎng)盤的底部。一般而言較容易貼附的細(xì)胞大約需要一到兩個(gè)小時(shí)，一些較不容易貼附的細(xì)胞可能需要六個(gè)小時(shí)左右。

(4).待細(xì)胞貼附之后，再于每個(gè)孔中加入適量的培養(yǎng)基，一般而言以隔夜培養(yǎng)來說建議加入約150μl左右的培養(yǎng)基即可，注意加入培養(yǎng)基的時(shí)候請貼于容器璧緩緩的加入以避免擾動(dòng)已經(jīng)貼附于底部的細(xì)胞。

(5).將加入培養(yǎng)基之后的細(xì)胞培養(yǎng)盤置于二氧化碳培養(yǎng)箱隔夜培養(yǎng)。

2.細(xì)胞培養(yǎng)基

實(shí)驗(yàn)的過程之中，會(huì)需要準(zhǔn)備兩種不同類型的培養(yǎng)基，第一種是讓細(xì)胞生長的培養(yǎng)基，第二種則是分析時(shí)使用的培養(yǎng)基。

生長用培養(yǎng)基與一般用于細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基相同，而分析時(shí)使用的培養(yǎng)基則會(huì)除去一般培養(yǎng)基之中具有pH緩沖能力的分子，以期可以觀察到pH值的變化。除了pH緩沖之外，亦需要注意培養(yǎng)基之中所含有的養(yǎng)分分子是否切合實(shí)驗(yàn)的需求。因此原則上需要除去包含有4-羥乙基哌嗪乙磺酸 (HEPES，4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid)、碳酸氫鈉(Sodium bicarbonate)、以及各類的血清、BSA等分子，加入所需的養(yǎng)分之后，將pH值確實(shí)的調(diào)整至pH 7.4。另外需注意的是實(shí)驗(yàn)中所添加的各類養(yǎng)分本身也具有緩沖pH值的能力，如果需要計(jì)算其精確的氫離子產(chǎn)量(PPR,proton production rate)，則需要計(jì)算其緩沖力。

3.實(shí)驗(yàn)流程

于96孔盤的培養(yǎng)皿中，每孔加入8000顆脂肪間葉干細(xì)胞及培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)24小時(shí)后，將培養(yǎng)基置換成含有本發(fā)明的植物萃取物的培養(yǎng)基，再培養(yǎng)24小時(shí)，接著，將培養(yǎng)基置換成200mM的H₂O₂處理30分鐘，用以破壞粒線體的形狀構(gòu)造等，最后使用海馬生物能量測定儀偵測粒線體的基礎(chǔ)能量、自由基泄漏情況、制造ATP的能力、極限能量、預(yù)存能量及單位粒線體產(chǎn)生的能量，其中未加入本發(fā)明植物萃取物且未經(jīng)H₂O₂處理的細(xì)胞作為控制組，而經(jīng)H₂O₂處理但沒有加入本發(fā)明植物萃取物的細(xì)胞為對照組。

4.植物萃取物對于提升粒線體的基礎(chǔ)能量的測試

參考圖1，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知，相對于控制組，經(jīng)H₂O₂處理的細(xì)胞(即對照組)，其粒線體基礎(chǔ)能量明顯下降，而在實(shí)驗(yàn)組中，加入不同濃度(包括1.25μg/ml、25μg/ml和50μg/ml)的綠茶多酚，均能效提升細(xì)胞內(nèi)粒線體的基礎(chǔ)能量，且加入50μg/ml綠茶多酚的實(shí)驗(yàn)組，與對照組相比，更提升了1.54倍粒腺體的基礎(chǔ)能量。

5.植物萃取物對于細(xì)胞內(nèi)自由基泄漏的測試

參考圖2，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知，相對于控制組，經(jīng)H₂O₂處理的細(xì)胞(即對照組)，其粒線體自由基泄漏的情形明顯增加，而在實(shí)驗(yàn)組中，加入50μg/ml 綠茶多酚的實(shí)驗(yàn)組能有效降低粒線體自由基泄漏情形，且與對照組相比，更減少了39％自由基泄漏的情形。

6.植物萃取物對于提升粒線體制造ATP能力的測試

參考圖3，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知，相對于控制組，經(jīng)H₂O₂處理的細(xì)胞(即對照組)，其粒線體產(chǎn)生ATP的能力明顯下降，而在實(shí)驗(yàn)組中，加入不同濃度(包括1.25μg/ml、25μg/ml和50μg/ml)的綠茶多酚，均能有效提升粒線體制造ATP的能力，且加入50μg/ml綠茶多酚的實(shí)驗(yàn)組，與對照組相比，更提升了1.8倍的制造ATP的能力。

7.植物萃取物對于提升粒線體的極限能量的測試

參考圖4，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知，相對于控制組，經(jīng)H₂O₂處理的細(xì)胞(即對照組)，其粒線體的極限能量明顯下降，而在實(shí)驗(yàn)組中，加入不同濃度(包括1.25μg/ml、25μg/ml和50μg/ml)的綠茶多酚，均能有效提升粒線體的極限能量，且加入50μg/ml綠茶多酚的實(shí)驗(yàn)組，與對照組相比，更提升了1.75倍的粒線體的極限能量。

8.植物萃取物對于提升粒線體用于應(yīng)付壓力的預(yù)存能量的測試

參考圖5，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知，相對于控制組，經(jīng)H₂O₂處理的細(xì)胞(即對照組)，其粒線體的預(yù)存能量明顯下降，而在實(shí)驗(yàn)組中，加入不同濃度(包括1.25μg/ml、25μg/ml和50μg/ml)的綠茶多酚，均能有效提升粒線體的預(yù)存能量，且加入50μg/ml綠茶多酚的實(shí)驗(yàn)組，與對照組相比，更提升了7.7倍的預(yù)存能量。

9.植物萃取物對于提升單位粒線體能量的測試

參考圖6，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知，相對于控制組，經(jīng)H₂O₂處理的細(xì)胞(即對照組)，其粒線體的單位粒線體能量明顯減少，而在實(shí)驗(yàn)組中，加入不同濃 度(包括1.25μg/ml、25μg/ml和50μg/ml)的綠茶多酚，均能有效提升粒線體的單位粒線體能量，且加入50μg/ml綠茶多酚的實(shí)驗(yàn)組，與對照組相比，更提升了1.2倍的單位粒線體能量。

10.植物萃取物對脂肪間葉干細(xì)胞增生的影響

參考圖7A-C，與未添加多酚類的培養(yǎng)基相比，以不同濃度的紅酒多酚(圖7A)、綠茶多酚(圖7B)或蘋果多酚(圖7C)處理后，皆能促進(jìn)脂肪間葉干細(xì)胞增生。

本領(lǐng)域技術(shù)人員，將可輕易由本發(fā)明所揭露的內(nèi)容中了解到本發(fā)明的特征，且在不偏離本發(fā)明的精神與范圍下，當(dāng)可在此進(jìn)行各種改變、取代以及修正，使其能適應(yīng)各種條件及用途。因此，其他實(shí)施例亦落于本發(fā)明權(quán)利要求書所要求保護(hù)的范圍之內(nèi)。